补充生物活性肽QRPR对巨噬细胞RAW264.7抵御脂多糖刺激的作用

目的研究补充生物活性肽QRPR(Gln-Arg-Pro-AH)对巨噬细胞RAW264.7抵御脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激的作用。方法用不同浓度的LPS刺激RAW264.7细胞不同时间,ELISA法测定细胞培养上清中细胞因子白介素-6(interleukin-6,IL-6)及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)的浓度,确定LPS刺激RAW264.7细胞的最适浓度和时间,建立RAW264.7细胞抵御LPS刺激模型。采用ELISA法测定QRPR肽对RAW264.7细胞抵御LPS刺激时IL-6和TNF-α表达量的影响。MTS法检测QRPR肽对RAW264.7细胞的毒性作用。结果100 ng/m L LPS诱导16 h为刺激RAW264.7细胞验证QRPR肽调节作用的最佳浓度和时间。QRPR肽可以抑制RAW264.7细胞受LPS刺激后IL-6和TNF-α的产生,QRPR肽浓度为250μmol/L时,其降低LPS刺激产生IL-6和TNF-α的能力最强。QRPR肽本身对RAW264.7细胞的生长既无促进作用,也无毒性和抑制作用。结论补充活性肽QRPR对巨噬细胞RAW264.7抵御LPS刺激具有积极的调节作用。     

一种毛叶杯轴花叶提取物的体外抗氧化和舒缓功效研究

探究了一种毛叶杯轴花（Tambourissa trichophylla）叶提取物的活性成分、抗氧化能力和舒缓功效。通过福林酚法对其总酚含量进行测定，并通过DPPH自由基清除实验对其抗氧化能力进行测试，采用透明质酸酶活性抑制实验及通过脂多糖（LPS）诱导小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7）产生的一氧化氮（NO）、白细胞介素6(IL-6)的表达量来评价其舒缓功效。结果显示，毛叶杯轴花叶提取物总酚含量高达54%；在浓度为25μg/mL时，DPPH自由基清除率达到81.18%；在浓度为5 mg/mL时，透明质酸酶抑制率达到69.04%；在浓度为0.05 mg/mL时，对LPS诱导RAW246.7细胞产生的NO和IL-6抑制率分别为15.70%、76.57%。以上说明，毛叶杯轴花叶提取物活性成分含量高，具有较强的抗氧化和舒缓功效，在化妆品的开发与应用中具有重要价值。     

hCAP-18/LL-37基因转染对RAW264.7细胞活化功能的影响

目的探讨抗菌肽hCAP-18/LL-37基因转染对巨噬细胞RAW264.7活化功能的影响。方法将重组质粒pcD-NA4/Myc-His-hCAP-18/LL-37瞬时转染RAW264.7细胞,MTT法检测细胞的增殖活性;中性红吞噬试验检测细胞的吞噬能力;RT-PCR法分析细胞活化相关分子CD80、CD86、TLR4及细胞因子IL-1β、TNF-αmRNA的转录。结果 hCAP-18/LL-37基因转染可促进经脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)处理的RAW264.7细胞的增殖活性与吞噬能力(P<0.05);可上调RAW264.7细胞CD80、CD86、TLR4、IL-1β、TNF-α基因mRNA的转录水平。结论 hCAP-18/LL-37基因转染可通过促进RAW264.7细胞增殖活性、吞噬能力及活化相关分子表达,调控巨噬细胞的活化功能。     

脂多糖诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞的活化凋亡作用

目的探讨脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞活化凋亡的作用。方法体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,分别用0.5、1.0、2.5μg/mlLPS刺激RAW264.7细胞24h,一氧化氮(NO)试剂盒检测细胞培养上清中NO水平;用1.0μg/mlLPS分别刺激细胞3d和6d,台盼蓝拒染法检测细胞增殖情况;用1.0μg/mlLPS刺激细胞6d,流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡情况。结果经LPS刺激后24h,RAW264.7细胞培养上清中NO含量明显增加,且具有剂量依赖性;LPS刺激3d和6d后,细胞的增殖均受到抑制,且呈时间依赖性;LPS刺激6d时,细胞周期被阻滞在S期,并出现明显的凋亡。结论LPS具有诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞活化凋亡的作用。     

凋亡细胞对巨噬细胞中白细胞介素-27表达的影响

目的探讨凋亡细胞对巨噬细胞中白细胞介素-27(Interleukin-27,IL-27)表达的影响。方法分别将小鼠巨噬细胞系RAW264.7(RAW细胞)和小鼠腹腔巨噬细胞分为6组:空白对照组、LPS刺激组、凋亡细胞刺激组、LPS+凋亡细胞刺激组、IFNγ+LPS刺激组及IFNγ+LPS+凋亡细胞刺激组。用IL-27 p28启动子荧光素酶报告基因瞬时转染RAW细胞,检测各组细胞中IL-27 p28启动子荧光素酶活性;RT-PCR法检测各组RAW细胞中IL-27 p28基因mRNA的转录水平,实时定量PCR法检测各组小鼠腹腔巨噬细胞中IL-27 p28基因mRNA的转录水平;Western blot法检测各组小鼠腹腔巨噬细胞中IL-27的表达水平。结果瞬时转染的RAW细胞中,IFNγ+LPS刺激组中IL-27 p28启动子荧光素酶活性明显高于空白对照组及IFNγ+LPS+凋亡细胞刺激组(P<0.05);RAW细胞与腹腔巨噬细胞中,LPS刺激组和IFNγ+LPS刺激组中IL-27 p28基因mRNA的转录水平明显高于空白对照组、LPS+凋亡细胞刺激组和IFNγ+LPS+凋亡细胞刺激组(P<0.05);LPS刺激组和IFNγ+LPS刺激组细胞中IL-27的表达水平明显高于LPS+凋亡细胞刺激组和IFNγ+LPS+凋亡细胞刺激组。结论巨噬细胞在摄取凋亡细胞后,IL-27 p28亚基的表达水平下降,从而导致IL-27的表达水平下降,为进一步研究其机制及临床应用奠定了理论基础。     

对羟基苯乙酮的舒缓和控油功效研究

体外细胞方法评价对羟基苯乙酮的舒缓功效和控油功效,为其在化妆品中的应用提供新的功效依据。研究采用LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7株和睾酮诱导的皮脂腺细胞SZ95株,测定对羟基苯乙酮对一氧化氮（NO）、TNF-α、IL-6和油脂合成的抑制作用。结果显示,对羟基苯乙酮可显著抑制LPS诱导的巨噬细胞NO、TNF-α和IL-6含量（p<0.01）,0.05 mg/mL的对羟基苯乙酮对油脂合成的抑制率为17.64%(p<0.001)。研究表明对羟基苯乙酮可降低细胞的炎症反应,抑制油脂的分泌,具有一定的舒缓和控油效果。     

大麻二酚的抗炎和抑菌活性研究

采用CCK-8法考察大麻二酚(CBD)对HaCat细胞和RAW264.7细胞相对细胞活性的影响。采用LPS诱导的HaCat细胞和RAW264.7细胞炎症模型考察CBD对炎症因子分泌的抑制作用。采用抑菌环和抑菌率等实验方法对CBD抑制厌氧菌痤疮丙酸杆菌(P.acnes)的效果进行测试。结果表明,CBD浓度低于20μmol/L时,其对正常/炎症HaCat细胞以及正常/炎症RAW264.7细胞均无细胞毒性,也不会促进相关细胞的增殖分化;CBD对炎症RAW264.7模型中TNF-α具有良好的抑制作用,10μmol/L浓度下与阳性对照地塞米松(DEX)效果相当,对两种炎症模型中IL-6均有显著抑制作用,20μmol/L浓度下对两种炎症模型中IL-1β均有显著抑制作用,浓度为10、20μmol/L时对两种炎症模型中IFN-γ均有显著抑制作用,表明其具有良好的抗炎活性;将CBD乳液作用于P.acnes,实验结果显示CBD浓度在20μmol/L及以上时对P.acnes有显著抑制作用。此外,抑菌率实验结果表明,CBD浓度为80μmol/L时对P.acnes的抑菌率高达99%,表明其具有良好的抑菌功效。     

JNK被抑制后LPS对皮肤成纤维细胞增殖的作用机制

目的抑制JNK通路后,分析LPS对皮肤成纤维细胞的作用。方法用400 ng/mL JNK磷酸化激动剂Anisomycin和20 ng/mL脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)同时作用于皮肤成纤维细胞,并设LPS单独作用组,MTT法检测作用0、24、48和72 h时的细胞生长率,Western blot法检测作用0、20、40、60 min时,细胞中ERK、JNK和P38的磷酸化情况。结果 Anisomycin和LPS同时作用皮肤成纤维细胞24 h开始,细胞生长率明显高于对应的LPS单独作用组(P 0. 05);磷酸化ERK、JNK、P38的表达未发生变化,而LPS单独作用细胞20和40 min,磷酸化JNK的表达逐渐降低(P 0. 05)。结论在LPS作用于皮肤成纤维细胞过程中,是通过JNK途径刺激皮肤成纤维细胞产生炎性反应,为进一步研究LPS作用于皮肤成纤维细胞的发病机制奠定了基础。     

不同浓度脂多糖对小鼠免疫功能及小肠组织形态的影响

目的探讨不同浓度脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对小鼠血液细胞因子水平及小肠组织形态的影响。方法将雄性ICR小鼠随机分为5组,对照组经腹腔注射生理盐水,4个试验组分别经腹腔注射2.5、5、10、20 mg/kg LPS,注射6 h后,经小鼠眼球采血,分离血清,ELISA法检测小鼠血清中炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-6和IL-8水平;同时采集小鼠十二指肠、空肠、回肠和盲肠组织样品,做组织切片后进行HE染色,测量小肠段绒毛高度(villus height,VH)和隐窝深度(crypt depth,CD)。结果试验组小鼠肠道碱性磷酸酶(intestinal alkaline phosphatase,IAP)及细胞因子水平在LPS浓度为5 mg/kg时达到高峰,随着LPS浓度的升高,细胞因子分泌受到抑制;与对照组相比,十二指肠、空肠和回肠组织VH值降低、VH/CD比值下降。结论小鼠在注射5 mg/kg LPS时,可诱导肠黏膜损伤,使得各细胞因子浓度达到最高,后续可作为炎症性肠炎模型适宜的诱导剂量。     

抗IL-17A单抗调控痛风自噬及痛风炎症的机制

目的 探讨抗IL-17A单抗（司库奇尤单抗,secukinumab）调节痛风自噬及痛风炎症的机制。方法 收集57份急性期痛风（acute gout,AG）、57份间隙期痛风（intermittent gout,IG）患者和82份健康志愿者外周静脉血,RT-qPCR法检测自噬相关基因（autophagy-related gene,ATG）ATG4B、ATG7、ATG16L1、Beclin-1和微管相关蛋白1轻链3B(microtubule-associated protein 1 light chain 3B,LC3B)mRNA转录水平。在健康志愿者外周静脉血中加入单钠尿酸盐（monosodium urate,MSU）晶体,建立急性痛风炎症模型,RT-qPCR和ELISA法检测在0、1、2、4、6、8 h及不同浓度（0、100、200、400μmol/L）司库奇尤单抗作用下IL-1β转录及蛋白表达水平。将健康志愿者外周血分为对照（未经MSU处理）、MSU(100μg/mL)、MSU+秋水仙碱（100μg/mL+30μg/mL）、MSU+司库奇尤单抗（100μg/mL+400μmol/L）...