3—磷酸甘油脱氢酶偶联法测定血清醛缩酶活性

探讨用３－磷酸甘油脱氢酶偶联法测定血清中醛缩酶（ＡＬＤ）活性的最佳反应条件。反应体系的终末浓度；ＴＥＡ１００ｍｍｏｌ／Ｌ，ＦＤＰ４ｍｍｏｌ／Ｌ，磷惭酸０．２２ｍｍｏｌ／Ｌ，ＮＡＤＨ０．２６ｍｍｏｌ／Ｌ，ＧＤＨ≥１０００Ｕ／Ｌ，ＴＰＩ≥１５００Ｕ／Ｌ，ＬＤ≥１０００Ｕ／《Ｌ。最适ＰＨ在７．８－８．０，Ｋｍ为７．２×１０＾－３ｍｍｏｌ／Ｌ批内ＣＶ；酶活性在７．３４Ｕ／Ｌ和６５．０９６Ｕ／Ｌ时，ＣＶ分别     

葡萄糖激酶法测定镁离子

建立用葡萄糖激酶法测定镁离子的方法，通过实验对反应条件进行了选择，并对本不进行评价。用双试剂两点法； 缓冲液为Ｔｒｉｓ－ＨＣＩ（ｐＨ８．５，０．１ｍｏｌ／Ｌ）；试剂Ｉ：含Ｄ－葡萄糖１５ｍｍｏｌ／Ｌ、ＡＴＰ２ｍｍｏｌ／Ｌ、ＮＡＤＰ＾＋０．７ｍｍｏｌ／Ｌ、Ｔｒｉｔｎ－Ｘ－１００ １．０ｇ／Ｌ；试剂Ⅱ：含葡萄糖激酶４ｋＵ／Ｌ、Ｇ６ＰＤＨ８ｋＵ／Ｌ。线性范围为０．２５～２．５ｍｍｏｌ／Ｌ，平均回收率为９９     

考马民斯亮蓝显以法测定精浆蛋白水解酶

用酪蛋白作底物，考马斯亮蓝显色，建立了精浆蛋白水解酶的测定方法。本法以０．０５ｍｍｏｌ／Ｌ ｐＨ７．６Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ作缓冲液，底物浓度为１ｍｇ／ｍｌ，线性范围在５３５￣４２８０Ｕ／Ｌ，批内ＣＶ为２．６％，批间ＣＶ３．３％。健康人精浆蛋白水解酶活力为１４２０￣２８７０Ｕ／Ｌ，不育患者（精液液化正常，ｎ＝４０）精浆蛋白水解酶活力为１３２６￣２６２８Ｕ／Ｌ，液化异常或粘稠度增高的不育患者精浆蛋白水解酶     

连续监测法测定血清中异柠檬酸脱氢酶

采用连续监测法测定以ＮＡＤＰ为辅酶的异柠檬酸脱氢酶（ＩＣＤ），并对酶促反应条件进行了研究。以Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ为缓冲体系，酶促反应最适ｐＨ为７．５，Ｍｎ＾２＋为２ｍｍｏｌ／Ｌ，在最佳条件下测定ＩＣＤ的线性范围为０￣８５Ｕ／Ｌ，批内变异系数２．０６％￣５．８５％，批间变异系数为３．７１％￣８．７２％，１００例健康人血清参考范围为２．０￣１１．２Ｕ／Ｌ，初步临床应用表明各类肝炎及肝癌均显著升高，ＩＣＤ／     

连续监测法测定胆红素氧化酶

为了建立连续监测法测定胆红素氧化酶活性的方法。该文以Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ为缓冲体系，酶促反应的最适ｐＨ为８．２，底物浓度为３４μｍｏｌ／Ｌ，胆红素的最大吸收波长在４４０ｎｍ，摩尔吸光系数为５．６３×１０＾４Ｌ．ｍｏｌ＾－１．ｃｍ＾－１；在最佳条件下测定ＢＯＤ的线性范围是０－８０Ｕ／Ｌ，批内ＣＶ〈３．８１％，批间ＣＶ〈４．６７％。     

3-磷酸甘油醛脱氢酶偶联法测定血清醛缩酶活性

建立血清醛缩酶活性的３－磷酸甘油醛脱氢酶偶联剂测定法。用底物１，６－二磷酸果糖妄动酶促反应，连续监测ＮＡＤＨ生成速率。反应条件：温度３７℃，ｐＨ８．３，各反应物的终末浓度：三乙醇胺５０ｍｍｏｌ／Ｌ，１，６－二磷酸果糖４．５ｍｍｏｌ／Ｌ，砷酸钠１０ｍｍｏｌ／Ｌ，氧化型辅酶１６ｍｍｏｌ／Ｌ，３－磷酸甘油醛脱氢酶２５００Ｕ／Ｌ，磷酸丙糖异构酶５００Ｕ／Ｌ，乳酸脱氢酶１５００Ｕ／Ｌ，血清与试剂容积比０．４     

两点法测定腺苷脱氨酶及临床初步应用

应用Ｔｒｉｎｄｅｒ反应建立了两点法测定体液中腺苷脱氨酶。该方法应用方便，测定快速，灵敏，准确。对酶反应最佳条件进行了实验探讨，底物Ｋｍ为０．２６ｍｍｏｌ／Ｌ，最佳ｐＨ７．４，延滞期５分钟，５－１５分钟测得酶活性基本一致。批内ＣＶ２．０３％，批间ＣＶ３．６８％。５５例健康人血清腺苷脱氨酶（ＡＤＡ）２１．３９±４．１７Ｕ／Ｌ（ｘ±ｓ），３５例结核性胸腹水ＡＤＡ活性为６５．８３±１８．９２Ｕ／Ｌ（ｘ±ｓ     

猪肾“轻型”GGT的提纯及动力学研究

为了制备ＧＧＴ测定的标准品，研究了猪肾“轻型”γ－谷氨酰移换酶（ＧＧＴ）的提取方法及动力学特性。这种“轻型”酶的比活性达３２０ｋＵ／ｇ蛋白，几乎不含其它杂酶类，每１００ＵＧＧＴ中仅含０．２６Ｕ的乳酸脱氢酶。聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳显示一条ＧＧＴ活性区带。其催化特性和人血清ＧＧＴ非常相似，最适ｐＨ为７．８，对供体底物Ｌ－γ－谷氨酰－３－羧基－４－硝基苯胺的米氏常数（ＫＤｍ）为０．９６ｍｍｏｌ／Ｌ，对受体底物甘氨酰甘氨酸的米氏常数（ＫＡｍ）为１２．７ｍｍｏｌ／Ｌ。     

高效液相色谱法测定香草扁桃酸、高香草酸、肌酐含量

目的建立高效液相色谱法同时测定尿中的香草扁桃酸（ＶＭＡ）、高香草酸（ＨＶＡ）和肌酐（Ｃｒ）含量的方法。方法以０．０２ｍｏｌ／ＬＫＨ２ＰＯ４缓冲液（ｐＨ５．７）为流动相；色谱柱采用ＹＷＧ－Ｃ１８柱；电化学和紫外检测器联合检测。尿样经适当稀释后直接进样测定，最后以ＶＭＡ和ＨＶＡ与Ｃｒ的比值表示含量。对１５例正常成人和１０例嗜铬细胞瘤患者进行了测定。结果方法的平均批内变异系数（ＣＶ）值ＶＭＡ／Ｃｒ为２．４％，ＨＶＡ／Ｃｒ为６．１％。正常成人的ＶＭＡ／Ｃｒ和ＨＶＡ／Ｃｒ分别为３．８４×１０－３±０．９１×１０－３（ｍｍｏｌ／ｍｍｏｌ）和３．３１×１０－３±１．１３×１０－３（ｍｍｏｌ／ｍｍｏｌ）；嗜铬细胞瘤患者的ＶＭＡ／Ｃｒ和ＨＶＡ／Ｃｒ分别为２８．７０×１０－３±２５．４６×１０－３和４．３８×１０－３±２．０８×１０－３（ｍｍｏｌ／ｍｍｏｌ）。结论方法能满足临床诊断嗜铬细胞瘤和神经母细胞瘤的需要     

两点法测定腺苷脱氨酶及临床初步应用

应用Ｔｒｉｎｄｅｒ反应建立了两点法测定体液中腺苷脱氨酶。该方法应用方便，测定快速、灵敏、准确。对酶反应最佳条件进行了实验探讨，底物Ｋｍ为０．２６ｍｍｏｌ／Ｌ，最佳ｐＨ７．４，延滞期５分钟，５～１５分钟测得酶活性基本一致。批内ＣＶ２．０３％，批间ＣＶ３．６８％。５５例健康人血清腺苷脱氨酶（ＡＤＡ）２１．３９±４．１７Ｕ／Ｌ（±ｓ），３５例结核性胸腹水ＡＤＡ活性为６５．８３±１８．９２Ｕ／Ｌ（±ｓ）。     

连续监测法测定血清山梨醇脱氢酶

以ＮＡＤ＋、山梨醇为底物，３７℃ｐＨ１０的甘氨酸／氢氧化钠为缓冲体系，建立血清山梨醇脱氢酶（ＳＤＨ）的连续监测法。ＮＡＤ＋、山梨醇和Ｚｎ２＋的最终浓度分别为０．４７、１９和１．９ｍｍｏｌ／Ｌ，ＫＮＡＤ＋、Ｋ山梨醇分别为０．０９和１．２ｍｍｏｌ／Ｌ。在此条件下，确定ＳＤＨ线性范围为０～１８０Ｕ／Ｌ，批内ＣＶ为３．９％，批间ＣＶ为５．２％，６０例健康成人血清ＳＤＨ正常参考值为０～３．１Ｕ／Ｌ。初步临床观察表明，急性肝损伤时该酶明显升高，肝外梗阻、心肌梗塞等非肝病患者血清ＳＤＨ一般不增高。     

改良法测定血清耐酒石酸盐酸性磷酸酶

作者介绍一种用于测定血清中由骨骼来源的耐酒石酸盐、对氟化物敏感的酸性磷酸酶（ＴｒＦｓＡＣＰ）活性的改良方法。 反应液 缓冲液 Ｉ（ｐＨ６．２），１５０ｍｍｏｌ／Ｌａ－吗－啉－乙烷磺酸，８０ｍｍｏｌ／溴化乙二甲胺，６０ｍｍｏｌ／Ｌ左旋酒石酸钠，５ｇ／Ｌ小牛血清；缓冲液Ⅱ由缓冲液 Ⅰ加入 ４５ｍｍｏｌ／Ｌ氟化钠。基质液（ＰＨ４．０），４５ｍｍｏｌ／Ｌ ２，６－二氯－４－乙酞苯磷酸盐（ＤＣＡＰＰ），５０ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ。从骨、红细胞及血小板提取ＡＣＰ用于实验。 血清标本 静脉抽取３００个健康日本受试者血…     

血清α-醋酸萘酯酶同工酶琼脂糖凝胶电泳法及临床应用

为简化α－醋酸萘酯酶同工酶检查技术，建立琼脂糖凝胶电泳法。１０ｇ／Ｌ琼脂糖－ＰＶＰ和ｐＨ７．４０．１ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液，泳池ｐＨ８．６，μ＝０．０６巴比妥缓冲液，滤纸刺槽加样，电压１５０Ｖ，电流２ｍＡ／ｃｍ电泳４０ｍｉｎ，搭桥填充染色。染色液由α－醋酸萘酯ｐＨ６．２０．１ｍｏｌ／ＬＰＢ液和固蓝Ｂ盐组成，３７℃染色２０ｍｉｎ，醋酸漂洗比色。结果对照组（ｎ＝３０）α－ＡＮＥ同工酶谱带３～４条（Ｅ１、Ｅ１ａ、Ｅ２、Ｅ３）着色强度Ｅ３＞Ｅ１＞Ｅ１ａ＞Ｅ２，ｘＥ３占８８％，Ｅ１～Ｅ２１２％左右，相对电泳位置Ｅ１：ｐｒｅＡｌ／Ａｌ，Ｅ１ａ：Ａｌ／α１，Ｅ２：ｐｒｅ－α２，Ｅ３：α２／β，Ｒｆ分别为０．５４５、０．５２７、０．４３６、０．３６４。Ｅ３区组成复杂，用ＮＡＮＡ酶水解和ＷＧＡ亲加试验证明它富含ＳＡ和ＧｌｃＮＡＣ的一组不均一的糖蛋白。谱形异常的典型病例有Ⅰ型在症糖尿病和部分肝癌患者，它除有正常谱带外，前者多Ｅ４和Ｅ５，其色度比（％）Ｅ４０．１１４，Ｅ５０．１９８，相对电泳位置在β和β与Ｐｒｅ－γ之间，Ｒｆ＝０．２５４，０．１８２。肝癌病人谱带也多１～２条（Ｅ５和Ｅ６）位于Ａ／ｐｒｅ－γ和ｐｒｅ－γ，     

选择性抑制法测定淀粉酶同工酶

本文报道用选择性抑制法结合酶偶联法测定淀粉酶（Ａｍ）同工酶。通过数学推导和实验，建立了结果计算公式和标准曲线。方法线性范围０－１１００Ｕ／Ｌ。批内，批间ＣＶ＜９．９％。参考范围：血清Ｐ－Ａｍ７－５５Ｕ／Ｌ，Ｓ－Ａｍ１．８－６８．３Ｕ／Ｌ；尿Ｐ－Ａｍ２．５－２２．６Ｕ／ｍｍｏｌＣｒ，Ｓ－Ａｍ２．２－３１．３Ｕ／ｍｍｏｌＣｒ。本法制备的抑制剂溶液稳定期长，保存，使用方便。     

尿液丙氨酸氨基肽酶连续监测法

建立了用丙氨酸对硝基苯胺（Ａｌａ－ｐＮＡ）为底物测定尿液丙氨酸氢基肽酶（ＡＡＰ）的连续监测法。此酶的最适ｐＨ８．０～８．３（２５℃），Ｋｍ值０．６０ｍｍｏｌ／Ｌ，Ａｌａ－ｐＮＡ的最终浓度６．０ｍｍｏｌ／Ｌ，批内，批间ＣＶ分别为４．２％，线性范围高达４００Ｕ／Ｌ。健康成人（ｎ＝７４）尿ＡＡＰ活性内１．９１～１４．４Ｕ／ｇ．ｃｒ。同时还对其重复性、尿中共存物质的干扰、尿ＡＡＰ的稳定性进行了初步观察。此     

聚乙二醇修饰酶法直接测定高密度脂蛋白胆固醇的评价

本文用德国Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ公司生产的高密度脂蛋白胆固醇试剂盒在Ｄｌｙｍｐｕｓ ＡＵ－５６０型生化仪上建立了直接法测定血清ＨＬＤ－Ｃ的程序，并对此方法作了初步评价。ＨＤＬ－Ｃ浓度在２．６ｍｍｏｌ／Ｌ范围内线性良好，ｒ＝０．９９９；两组低，中，高浓度的标本批内ＣＶ２．１％－３．３％，批间ＣＶ２．２％－３．６％，平均回收率为９７．５％，浓度为６．２ｍｍｏｌ／Ｌ甘油三酯，１０５．６μ     

血清山梨醇脱氢酶的连续监测法

建立了用Ｄ－果糖作为底物测定山梨醇脱氢酶活性的连续监测法。此酶是最适ｐＨ７．４（２５℃），Ｋｍ值７１．４３ｍｍｏｌ／Ｌ，Ｄ－果糖的终浓度３６３ｍｍｏｌ／Ｌ，批内、批间ＣＶ〈８．６５％，线性范围高达６０Ｕ／Ｌ。此方法适用于各种自动生化分析仪，可作为肝细胞损伤的特异性诊断指标。     

改良凝胶吸附法制备的凝血酶原复合物

采用ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ５０和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ凝胶从人血浆中吸附制备经Ｓ／Ｄ病毒灭活处理后的ＰＣＣ制品，ＤＥＡＥ洗脱液经Ｓ／Ｄ处理（０．３％磷酸三丁脂和１％Ｔｗｅｎ８０，６～８ｈ，２４℃）后，使所加入具有感染剂量（＞１０６）的标志病毒ＶＳＶ、Ｓｉｎｄｂｉｓ、ＨＩＶ均被有效灭活；ＰＣＣ制品中Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ因子的比活性（Ｕ／ｍｇ）分别为０．７９９±０．３４９、０．３４３±０．２５２、０．７４７±０．３４８、０．５８０±０．１９９（ｎ＝７），均比传统ＰＣＣ提高１．５～２．５倍（其中ＦⅨ∶Ｃ的比活性提高有显著性，ｔ＝３．１０５，Ｐ＜０．０１），同时也优于国内同类制品（ｔ＝２．３６０，Ｐ＜０．０５），对其杂蛋白（ＡＴ－Ⅲ、Ｆｎ、ＰＫＡ、Ｐｌｇ、ⅧＲ∶Ａｇ抗Ａ、抗Ｂ凝集素）的分析也反映出ＰＣＣ纯度有所提高。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ＩＥ、ＣＩＥ电泳图谱及ＨＰＬＣ层析图谱证实上述结果，ＰＣＣ中ＴＮＢＰ残留量≤１０μｇ／ｍｌ，Ｔｗｅｅｎ８０残留量≤１００μｇ／ｍｌ，均在安全范围内。     

血清结合胆红素的酶法测定

目的 建立用胆红素氧化酶（ＢＯＤ）作为催化剂，选择性地测定血清结合胆红素（ＣＢ）的新方法。方法 测定条件为：０．１ｍｏｌ／Ｌ甘氨酸缓冲液、ｐＨ１０．０，ＢＯＤ活性０．５～０．８Ｕ／反应管，反应时间２分钟。结果 线性至少可达到２２０μｍｏｌ／Ｌ；精密度为批内ＣＶ１．７１～３．９８％、批间ＣＶ８．０～９．７２％；正常参考值范围为０～３．１４μｍｏｌ／Ｌ；与偶氮法所测结果相关性较好。结论 本文所建立的Ｃ     

血清γ—GT活性固定时间测定法

γ－ＧＴ测定有利于筛选肝胆疾病，辅助诊断原发性肝癌，区别于阻塞性或肝细胞性黄疸；判断急性肝炎是否治愈；肯定慢性肝炎及肝硬化的活性期及预后。区别升高的ＡＫＴ是骨源性或肝源性等作用。本法根据ＩＦＣＣ推荐方法（１），自配试剂用固定时间法测定γ－ＧＴ活性，用酶活性在４３－１６５Ｕ／Ｌ血清测定，Ｃγ＝３．１０％，ＳＤ＝３．０２Ｕ／Ｌ。与美国ＢＥＣＫＭＡＮ试剂盒比较（４），γ＝０．９８７１相关密切，精密度和准