紫草素对人胎肾小球系膜细胞增殖、凋亡及细胞外基质的影响

目的：研究紫草素对人胎肾小球系膜细胞(MC)增殖、凋亡及细胞外基质的影响。方法：采用人胎肾细胞培养法、MTT法、流式细胞仪及免疫组化的方法。结果：紫草素0．05、0．10、0．50及1，00mmol／L浓度对培养24、48、72h人MC有明显抑制作用；紫草素明显抑制高糖诱发的人MC细胞凋亡；紫草素0．05、0．10、0．50μg/ml显著抑制系膜基质层粘连蛋白(LN)、纤维连接蛋白(FN)及胶原Ⅳ(CoⅣ)的生成。结论：紫草素具抑制人MC增殖、细胞外基质生成及细胞凋亡作用。     

槲皮素对系膜细胞增殖、凋亡及细胞周期影响的初步研究

目的观察槲皮素对系膜细胞增殖及凋亡的影响。方法用M IT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。结果在5~30μm o l/L浓度范围内槲皮素能时间、剂量依赖性地抑制系膜细胞增殖,可使G0~G1期细胞增多,S期细胞减少,而高浓度的槲皮素能诱导系膜细胞的凋亡。结论槲皮素可显著抑制系膜细胞增殖,使系膜细胞阻滞于G0~C1期;并且槲皮素有诱导系膜细胞凋亡的作用。     

LEF 对肾小球系膜细胞增殖及分泌细胞外基质的影响

目的: 探讨来氟米特对转化生长因子－β1刺激的大鼠肾小球系膜细胞( GMCs) 增殖及细胞外基质
( ECM) 分泌的影响。方法: 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分正常对照组,TGF－β1( 5 ng /mL) 刺激组,TGF－β1 +
LEF( LEF 浓度分别为5μmol /L、25μmol /L、50μmol /L、100μmol /L) 组,培养24h、48h 和72h 后,MTT 法观察各组
肾小球系膜细胞在不同时间点的增殖情况; ELISA 法测定各组培养细胞上清液中纤连蛋白的含量。结果: ( 1) 与
对照组相比,TGF－β1可刺激系膜细胞增殖,不同浓度的LEF 均可以抑制TGF－β1刺激的系膜细胞增殖( P＜0．05) ,48h 后抑制作
用稳定。( 2) TGF－β1刺激组细胞上清液中纤连蛋白含量明显高于对照组( P＜0．05) ,不同浓度的LEF 组纤连蛋白含量明显低于TGF－β1
组( P＜0．05) 。结论: 来氟米特可以抑制TGF－β1刺激的肾小球系膜细胞的增殖,减少细胞外基质的分泌,为其治疗慢性肾脏病提供理论依据。     

牛磺酸对系膜细胞增生及细胞外基质分泌的影响

目的　观察牛磺酸对系膜细胞增生及细胞外基质分泌的影响 ,以探讨其作用的可能机制。方法　用MTT法检测系膜细胞增生 ,流式细胞仪检测细胞周期 ,ELISA检测细胞外基质Ⅳ型胶原的生成。结果　牛磺酸可剂量依赖性地抑制系膜细胞增生 ,并影响细胞周期 ,使G0 /G1期细胞增多 ,S期细胞减少 ,并可明显减少Ⅳ型胶原的分泌 (P <0 .0 1)。结论　牛磺酸可显著抑制系膜细胞增生 ,使细胞周期阻滞于G0 ～G1期 ,该作用可能与其抑制细胞外基质Ⅳ型胶原的分泌有关     

牛磺酸抑制血小板衍生生长因子诱导的系膜细胞增殖及细胞外基质分泌

目的：观察牛磺酸对血小板衍生生长因子（PDGF）诱导的系膜细胞增殖及细胞外基质分泌的影响，并探讨其作用的可能机制。方法：体外传代培养的大鼠系膜细胞，经一定量的牛磺酸和（或）PDGF作用48h后，用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期，ELISA检测细胞外基质（Ⅳ型胶原及层粘连蛋白）含量，免疫细胞化学方法检测C－jun,C-fos的表达。结果：与对照组比较，10，20ng/ml PDGF可明显促进系膜细胞增殖，影响细胞周期，使G0－G1期细胞减少，S期细胞增加，并能明显促进细胞外基质的分泌及C-jun,C-fos的表达（P＜0．01），而20或40mmol/L牛磺酸作用于系膜细胞后，可明显抑制PDGF（20ng/ml)诱导的细胞增殖，细胞外基质分泌及C-jun,C-fos的表达。结论：牛磺酸对PDGF诱导的系膜细胞增殖及细胞外基质分泌有显著抑制作用，其机制可能与牛磺酸抑制C-jun,C-fos表达有关。     

罗格列酮对OX-LDL诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖及分泌细胞外基质的影响

目的观察罗格列酮对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的肾小球系膜细胞（RMC）增殖和细胞外基质（ECM）分泌的影响。方法采用RT-PCR法检测正常对照组、ox-LDL组、罗格列酮组、罗格列酮＋ox-LDL组RMC内的转化生长因子β1（TGFβ1）mRNA表达;同时采用MTT法检测各组RMC增殖水平,并予ELISA技术检测上清液中TGFβ1、层粘连蛋白（FN）、Ⅳ型胶原（ColⅣ）蛋白的含量。结果罗格列酮＋ox-LDL组RMC增殖水平较ox-LDL组降低,且RMC表达的TGFβ1 mRNA水平和分泌的TGFβ1、FN、ColⅣ蛋白水平均较ox-LDL组降低（均P〈0.05或0.01）。结论罗格列酮可通过抑制ox-LDL诱导的RMC增殖和ECM及TGFβ1的分泌,从而发挥抗肾纤维化作用。     

缓激肽对高糖环境下肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的影响

目的观察缓激肽(BK)对高糖浓度下肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的影响。方法采用体外培养的大鼠肾小球系膜细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测系膜细胞增殖,酶联免疫(ELISA)法测细胞外基质分泌。结果高糖(30.0 mmol/L)环境可促进肾小球系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原的分泌(P<0.05)。BK、ACEI(贝那普利)均抑制高糖环境下肾小球系膜细胞的增殖和Ⅳ型胶原的分泌(P<0.05)。结论高糖可促使肾小球系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原的分泌。ACEI抑制肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质分泌的作用机制可能与减少BK的降解有关。     

益气化瘀法对大鼠系膜细胞增殖及细胞外基质分泌的影响

目的:观察益气化瘀法对大鼠系膜细胞(GMCs)增殖及细胞外基质分泌的影响.方法:用MTT法检测细胞增生,ELISA法检测转化生长因子β-1(TGF-β1)和细胞外基质Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)、纤维连接蛋白(FN).结果:黄芪组、水蛭组和黄芪 水蛭组均可降低血清TGF-β1、Col-Ⅳ和FN的含量;其中以黄芪 水蛭组最明显,水蛭组次之,均强于黄芪组.结论:益气化瘀法可以抑制系膜细胞增殖及细胞外基质分泌.     

脂多糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖和分泌细胞外基质的研究

目的观察脂多糖（LPS）对大鼠肾小球系膜细胞（GMC）增殖及分泌细胞外基质（ECM）的作用。方法建立体外培养的大鼠GMC,鉴定后用于实验。实验分为两组：对照组和LPS诱导组。甲基噻唑基四唑（MTT）比色法测定24h和48h两个时点两组系膜细胞的增殖情况;ELISA法测定6h、12h和24h系膜细胞培养上清液中ECM蛋白含量;荧光半定量反转录PCR（RT-PCR）法检测ECM中层黏连蛋白（LN）β2 mRNA表达的变化。结果（1）LPS组和对照组GMC增殖情况间差别有显著性意义（P〈0.05）;（2）正常培养的大鼠GMC可分泌一定量的ECM,LPS组在各时点分泌ECM量与对照组间差别有显著性意义（P〈0.01）;（3）正常培养的大鼠GMC有微量LNβ2 mRNA表达,LPS组在各时点LNβ2 mRNA表达量与对照组间差别均有显著性意义（P〈0.01）。结论从蛋白和mRNA两个水平同时观察到ECM成分（如FN、LN和ColⅣ）的增加,说明在系膜增殖性肾炎中ECM明显增加并起主要作用。     

蜕皮甾酮对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞增殖及其细胞外基质含量的影响

目的：观察蜕皮甾酮对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞（MCs）增殖、细胞外基质的影响。方法：体外培养大鼠MCs细胞株,分低糖组、高糖组、高糖＋蜕皮甾酮组（EDS组）,分别作用12、24、48h,MTT法检测细胞增殖活力,ELISA法检测细胞上清中FN的含量。结果：与低糖组比较,高糖组12h、24h、48h MCs增殖显著增快（P〈0.01）,FN含量明显增加（P〈0.05）;与低糖组比较,EDS在浓度〉1×10-5mol/L时MCs增殖显著减慢（P〈0.01）;与高糖组比较,EDS 1×10-6mol/L组各时间点及1×10-7mol/L组24h、48h MCs增殖显著减慢（P〈0.05或P〈0.01）,EDS 1×10-6mol/L组各时间点FN含量均有降低（P〈0.05或P〈0.01）;EDS 1×10-10、1×10-8mol/L组各时间点FN含量差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：①蜕皮甾酮在浓度〉1×10-5mol/L时对MCs有明显的细胞毒性作用。②蜕皮甾酮可抑制高糖诱导的MCs增殖。③蜕皮甾酮能减少高糖培养大鼠MCs细胞外基质的增加。     

环孢素对体外培养人系膜细胞增殖、凋亡及细胞周期影响的研究

目的 观察环孢素A对系膜细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法 对体外培养的人肾小球系膜细胞分别加入0.01,0.1,1,2,5 μmol/L的环孢素A,药物作用24 h,48 h,72 h后用MTT法检测细胞增殖,药物作用48 h后采用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,同时每种方法均设立对照组(不加药物干预组).结果 ①环孢素A能时间、剂量依赖性地抑制系膜细胞增殖,以72 h抑制作用最为明显;不同药物浓度在作用24 h,48 h,72 h后,系膜细胞增殖与对照相比差异均具有统计学意义(P<0.05);②环孢素A可阻滞细胞周期,使G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,且随着药物浓度的增加,G0/G1期所占百分比逐渐增高,S期所占百分比逐渐降低,且其差异与对照相比具有统计学意义(P<0.05);③高浓度环孢素A可促进系膜细胞的凋亡.结论 环孢素A可显著抑制系膜细胞增殖,使系膜细胞阻滞于G0/G1期;并且环孢素A有诱导系膜细胞凋亡的作用.     

雷帕霉素对高糖诱导肾小球系膜细胞增生、肥大及细胞外基质合成的影响

目的:观察雷帕霉素对高糖诱导肾小球系膜细胞增生、肥大及细胞外基质合成的影响.方法:在高糖状态下培养系膜细胞,予以不同剂量雷帕霉素进行干预,采用MTT的方法观察细胞增生能力,并用流式细胞仪检测各组系膜细胞体积,以前向角散射光平均强度表示细胞大小,Western印迹法检测细胞中纤维连接蛋白(FN)及Ⅳ型胶原(ColⅣ)的表达变化.结果:同正常糖及甘露醇组比较,高糖可使肾小球系膜细胞增生且发生肥大,同时高糖环境下系膜细胞分泌的FN及ColⅣ显著增加(P＜0.05),而雷帕霉素能显著抑制高糖的上述作用(P＜0.05),且呈剂量依赖性.结论:雷帕霉素可以抑制高糖状态下系膜细胞的增生、肥大及细胞外基质的合成,且呈剂量依赖性,有望用于糖尿病肾病的防治.     

姜黄素及氧化低密度脂蛋白对系膜细胞增殖和凋亡的影响

系膜细胞(MCs)及系膜基质增生是肾小球肾炎及肾小球硬化过程中常见的病理变化,多数肾小球肾炎呈慢性进行性发展,最终进入终末期肾病阶段,依靠肾替代治疗维持生命。肾小球硬化过程中,MCs不仅是受害者,也是主动参与者,分泌多种细胞炎性因子及细胞外基质,促进肾小球硬化过程。氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)在肾病的     

延肾胶囊对残肾肾小球系膜细胞凋亡及其细胞外基质代谢的影响

目的探讨“延肾胶囊”对残肾肾小球系膜细胞凋亡及其细胞外基质代谢的影响。方法将Wistar大鼠120只随机分为6组，A组为假手术对照组；B组为5／6肾切除；C、D、E组分别为5／6肾切除 低、中、高剂量延肾胶囊；F组为5／6肾切除 肾衰宁。术后A、B两组给予等容积生理盐水灌胃。定量喂养。自由饮水。于术后15、90天测定各指标，每组每时相点观察10只大鼠。结果术后B组血浆血管紧张素Ⅱ浓度、肾小球系膜细胞增殖指数和凋亡指数、肾组织TGF-β1、Cot Ⅳ、Fas、FasL积分光密度等指标高于A组。C、D、E组血浆血管紧张素Ⅱ浓度、肾小球系膜细胞增殖指数、肾组织TGF-β1和Col Ⅳ积分光密度高于A组，但显著低于B组，随着延肾胶囊剂量增加，上述指标有逐渐降低的趋势；肾小球系膜细胞凋亡指数、Fas和FasL积分光密度显著高于A、B两组。随着延肾胶囊剂量增加。上述指标有逐渐升高的趋势。F组血浆血管紧张素Ⅱ浓度、肾小球系膜细胞增殖指数、肾组织TGF—β1和Col Ⅳ积分光密度低于B组，但高于D、E两组；肾组织Fas和FasL积分光密度显著高于A、B组。稍低于D、E两组；肾小球系膜细胞凋亡指数与B组无显著差异，显著低于C、D、E3组。结论“延肾胶囊”能显著抑制5／6肾切除大鼠残肾血管紧张素Ⅱ和TGF—β1的高表达，增加Fas和FasL的表达。抑制残肾肾小球系膜细胞过度增生，促进增生的系膜细胞凋亡。稳定残肾肾小球系膜细胞数量，减轻细胞外基质的堆积。呈剂量依赖性；“肾衰宁”能抑制系膜细胞增生，但不能促使增生的系膜细胞凋亡。     

大鼠系膜细胞醛固酮的合成及其对细胞外基质生成的影响

目的　证明肾脏系膜细胞能够自身合成醛固酮 ,并探讨醛固酮对系膜细胞细胞外基质生成的影响。方法　用RT PCR法检测大鼠系膜细胞醛固酮合成酶CYP11B2mRNA表达 ,PCR产物存化后直接测序 ;放免法测定系膜细胞培养上清液中醛固酮的浓度。用RT PCR半定量法比较 (3 磷酸甘油醛脱氢酶theenzymeglyceraldehyde 3 phosphatedehydrogenase ,GAPDH为内参照 )经 10 -10 ～ 10 -6mol/LAngⅡ或 7mmol/L、9mmol/LKCl干预 4 8h ,系膜细胞CYP11B2mRNA的表达量。大鼠系膜细胞醛固酮特异性受体 (mineralocorticoidreceptor,MR)和保护其配体特异性的 11β -羟类固醇脱氢酶 2 (11β -HSD2 )的mRNA和蛋白质表达分别用RT PCR法和细胞免疫化学法检测。以ELISA和Western印迹方法检测经 10 -7mol/L醛固酮干预 2 4h ,细胞培养上清液中层黏蛋白 (FN)和Ⅳ型胶原的浓度。结果　大鼠系膜细胞能表达CYP11B2mRNA ,且细胞培养上清液中检测到醛固酮 ,浓度为 1 0 6 5pg/ 10 6个细胞。 10 -8、10 -7mol/LAngⅡ (10 -8mol/L :2 15± 0 10 ,10 -7mol/L :1 16± 0 0 4vs非干预组 0 77± 0 0 3,P <0 0 0 1;)和 9mmol/L的KCl (1 2 7± 0 11vs非干预组 0 89± 0 12 ,P <0 0 5 )均能显著提高CYP11B2mRNA的表达。大鼠系膜细胞有MR和 11β -H     

益肾蠲湿合剂对肾小球系膜细胞分泌细胞外基质的调节作用

①目的观察自拟中药复方益肾蠲湿合剂对肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cell,GMC）分泌细胞外基质的抑制作用。②方法将1×10^-3、1×10^-2和1×10^-1mg/mL益肾蠲湿合剂的提取液作用于含10%血清DMEM培养的GMC,分别于24、48和72h后收集培养上清,采用Elisa法检测上清中透明质酸（hyaluronic acid,HA）、纤维连结蛋白（FN）及Ⅳ型胶原（ColⅣ）含量。③结果 10%血清促进了GMC分泌HA、FN和ColIV,但这种作用可明显被不同浓度的益肾蠲湿合剂所抑制,并且其抑制程度随药物浓度的增加而增加。④结论益肾蠲湿合剂可以抑制体外培养的GMC分泌HA、FN和ColIV,推测这种作用是其治疗慢性肾小球疾病的主要机制之一。     

D-葡萄糖对系膜细胞产生细胞外基质的时效与量效研究

目的探讨不同浓度葡萄糖在不同时间对系膜细胞产生细胞外基质（ECM）的影响。方法人系膜细胞分别在不同浓度D-葡萄糖（5．5、10、20、30mmol／L）条件下培养不同时间（6、12、24、48h）,ELISA法检测各组细胞上清液纤维连接蛋白（Fn）、Ⅳ型胶原（ColⅣ）含量。结果（1）10、20、30mmol／LD-葡萄糖条件下,培养6、12、24、48h均能引起细胞上清液中的Fn、Col Ⅳ显著升高（P〈0．05）,以24h最明显（P〈0．05）。（2）在相同的时间点上,随浓度增加,5．5、10、20、30mmol／LD-葡萄糖培养均能引起细胞上清液中的Fn、Col Ⅳ显著升高（P〈0．05）,以30mmol／LD-葡萄糖组最明显（P〈0．05）。结论葡萄糖可以时间和剂量依赖的方式刺激系膜细胞Fn、Col Ⅳ产生。     

延肾胶囊对残肾系膜细胞凋亡及其细胞外基质代谢的影响

目的探讨"延肾胶囊"对残肾肾小球系膜细胞凋亡及其细胞外基质代谢的影响.方法Wistar大鼠120只,随机分为6组,A组为假手术对照组,B组为5/6肾切除;C,D和E组分别为肾切除 低、中、高剂量延肾胶囊;F组为5/6肾切除 肾衰宁.术后A,B两组给予等容积生理盐水灌胃.定量喂养,自由饮水.于术后15,90天测定各指标,每组每时相点观察10只大鼠.结果术后B组血浆血管紧张素Ⅱ浓度、肾小球系膜细胞增殖指数和凋亡指数、肾组织TGF-β1,CoⅣ,Fas,FasL积分光密度等指标显著高于A组.C,D和E组血浆血管紧张素Ⅱ浓度、肾小球系膜细胞增殖指数、肾组织TGF-β1和CoⅣ积分光密度高于A组,但显著低于B组,随着延肾胶囊剂量增加,上述指标有逐渐降低的趋势;肾小球系膜细胞凋亡指数、Fas和FasL积分光密度等指标显著高于A,B两组,随着延肾胶囊剂量增加,上述指标有逐渐升高趋势.F组血浆血管紧张素Ⅱ浓度、肾小球系膜细胞增殖指数、肾组织TGF-β1和CoⅣ积分光密度,低于B组,但高于D,E两组;肾组织Fas和FasL积分光密度等指标显著高于A和B组,稍低于D、E两组,肾小球系膜细胞凋亡指数与B组无显著差异,显著低于C,D和E3组.结论"延肾胶囊"能显著抑制5/6肾切除大鼠残肾血管紧张素Ⅱ和TGF-β1的高表达,增加Fas和FasL的表达,抑制肾小球系膜细胞过度增生,促进增生的系膜细胞凋亡,稳定残肾小球系细胞数量,减轻细胞外基质的堆积,呈剂量依赖性;"肾衰宁"能抑制系膜细胞增生,但不能促使增生的系膜细胞凋亡.     

氟伐他汀对肾小球系膜细胞产生细胞外基质的影响

[目的]观察不同葡萄糖浓度环境、氟伐他汀对人系膜细胞表达FN、IV型胶原作用。[方法]培养人肾小球系膜细胞,分为正常葡萄糖组、高葡萄糖组及加氟伐他汀组,培养244、8 h收集细胞上清液,用酶联免疫法检测FN、IV型胶原。[结果]在高糖组24、48 h FN分别是(1.552±0.546)和(2.547 0±0.968)ng/mL,明显高于正常糖组244、8 h,FN:(0.777±0.076)和(1.180±0.091)ng/mL(P<0.01);在高糖组244、8 h IV型胶原分别是(64.577±5.543)和(80.140±6.605)ng/mL,明显高于正常糖组24、48 h IV型胶原:(42.468±5.615)和(46.368±5.714)ng/mL(P<0.01)。氟伐他汀可减少高糖浓度下细胞上清液中FN、Ⅳ型胶原的表达水平。在高糖组与氟伐他汀(1μmol/L,10μmol/L)作用24、48 h FN和IV型胶原分别是(0.955±0.102)(、0.858±0.081)ng/mL,(0.652±0.078)(、0.822±0.257)ng/mL(P<0.01)、(34.908±4.283)、(32.163±2.220)、(28.260±4.287)(、23.233±7.284)ng/mL(P<0.01)。[结论]氟伐他汀可抑制高糖刺激的系膜细胞表达FN、Ⅳ型胶原。     

ERK通路抑制剂对PDGF-BB诱导的大鼠系膜细胞细胞外基质合成的影响

目的:探讨ERK通路在血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导的大鼠肾小球系膜细胞细胞外基质(ECM)合成中的作用.方法:将体外培养大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)分为7组:对照组;PDGF-BB刺激组(终浓度分别为10、25和50 ng/ml);PDGF-BB和ERK通路抑制剂UO126共刺激组(PDGF-BB 25ng/ml UO126 5 μmol/ml,PDGF-BB 25 ng/ml UO126 10 μmol/ml);UO126 10 μmol/ml刺激组.应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)和纤连蛋白(FN)mRNA的相对表达量.结果:PDGF-BB能剂量依赖性的上调 PAI-1和FN mRNA的表达(P＜0.05),同时下调MMP-2 mRNA的表达(P＜0.05).U0126则呈剂量依赖性地抑制PDGF-BB诱导的肾小球系膜细胞PAI-1和FN mRNA的表达(P＜0.05),促进MMP-2 mRNA的表达(P＜0.05).结论:PDGF-BB可能通过ERK通路作用于大鼠肾小球系膜细胞,抑制细胞外基质的降解,促进其FN的合成,从而参与肾小球硬化的过程.