单克隆抗体在动物衣原体病血清诊断上的应用

采用淋巴细胞杂交瘤技术,研制出的抗衣原体单克隆抗体,应用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法,对本地区所采得的231份猪血清,128份羊血清,90份牛血清进行检测,结果：猪血清阳性检出率为30．7％,羊为25．8％,牛为32．2％;选猪、羊、牛血清各50份,用已建立的检测衣原体抗体ELISA方法与的间接血凝试验（IHA）进行比较,猪血清ELISA阳性检出率为30％,IHA为26％,ELISA比IHA试验高出4个百分点。牛血清ELISA阳性检出率为32％,IHA为24％,ELISA比IHA试验高出8个百分点。羊血清ELISA阳性检出率为26％,IHA为22％,ELISA比IHA高出4个百分点。     

衣原体单克隆抗体在牛羊血清诊断上的应用

采用淋巴细胞亲交瘤技术，研制出的抗衣原体单克隆抗体，应用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）方法，对本地区所采集的１２８份羊血清、９０份牛血清进行检测，结果，羊血清阳性检出率为２５．８％，牛血清阳性检出率为３２．２％，选择５０份羊血清、５０份牛血清用已建立的检测衣原体抗体ＥＬＩＳＡ与间接血凝试验（ＩＨＡ）进行比较，牛血清ＥＬＩＳＡ阳性检出率为３２．０％，ＩＨＡ为２４．０％，ＥＬＩＳＡ比ＩＨＡ试验高出８个百分点；羊血清ＥＬＩＳＡ阳性检出率为２６．０％，ＩＨＡ为２２．０％，ＥＬＩＳＡ比ＩＨＡ高出４个百分点。     

动物衣原体病的单克隆抗体诊断研究

鹦鹉热衣原体是感染人和多种畜禽的病原体 ,主要引起牛、羊、猪流产和家禽产蛋率下降 ,是一种接触性传染病。关于本病的诊断方法 ,国内、外学者进行了较多研究 ,取得了很多的进展。较成熟的诊断方法有 :补体结合试验、ＩＨＡ、间接包涵体荧光试验 (ＩＩＦＡ)等 ,如能将ＭｃＡｂ检测技术引入该病的诊断 ,必将提高诊断技术的特异性、敏感性和简便性。作者把制备的抗衣原体特异性ＭｃＡｂ用于诊断 ,以ＥＬＩＳＡ法检测猪血清、羊血清、牛血清中衣原体抗体 ,结果表明其具有ＭｃＡｂ的特异性和酶联免疫吸附试验的灵敏性 ,现报告如下。1　材料和方…     

抗奶牛衣原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

将奶牛衣原体抗原免疫的 Ｂ Ａ Ｌ Ｂ／ｃ 小鼠脾细胞与 Ｓ Ｐ２／ Ｏ 细胞在聚乙二醇作用下融合, 用间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 试验筛选, 以有限稀释法克隆３ 次, 得到６ 株分泌抗奶牛衣原体单克隆抗体（ Ｍｃ Ａｂ） , 选择抗体分泌较高的 Ｇ２ 、 Ｆ２３ 、 Ａ 株进行详细的研究, 结果表明, 其核内染色体数为９０３５ 、９２１４ 、９４４２ ; 抗体属性为 Ｉｇ Ｇ２ａ 、 Ｉｇ Ｇ１ 、 Ｉｇ Ｍ, 用交叉 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法对３ 株 Ｍｃ Ａｂ 作特异性分析, 该 Ｍｃ Ａｂ 只与奶牛衣原体抗原, 猪衣原体抗原、羊衣原体抗原发生反应,而不与沙眼衣原体抗原、伪狂犬病抗原、布鲁氏杆菌抗原发生反应。     

衣原体单克隆抗体在羊血清诊断上的应用

采用淋巴细胞杂交瘤技术,研制出的抗衣原体单克隆抗体,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,对本地区所采用的698份羊血清进行检测,羊血清阳性检出率为22．06％,选择50份羊血清用已建立的检测衣原体抗体ELISA方法与传统的间接血凝试验(IHA)进行比较,其敏感性高。羊血清ELISA阳性检出率为26％,IHA为22％,前者比IHA高出4个百分点。     

抗奶牛衣原体单克隆抗杂交瘤细胞朱的建立

将奶牛衣原体抗原免疫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞在聚乙二醇作用下融合,用间接ＥＬＩＳＡ试验筛选,以有限稀释法克隆３次,得到６株分泌抗奶牛衣原体单克隆抗体,选择抗体分泌较高的Ｃ３、Ｆ＾２３、Ａ株进行详细的研究。     

鸽衣原体病的诊断

禽衣原体病又称鸟疫，病原为鹦鹉衣原体，禽类中以鹦鹉、鸽子较为易感，此外，斑鸠、雉、鹧鸪、火鸡、某些鸭类、鹊和山雀及各种雀形目的禽鸟也较敏感。该病可经接触传染，也可通过呼吸道和消化道的途径侵入易感鸟而引起感染。临床上以结膜炎、肠炎、肺炎为主要症状。治疗可选用金霉素、土霉素或红霉素。     

猪衣原体病的诊断

对湖北省2个猪场的母猪发生流产和返情的疾病进行诊断,采集母猪血样和组织样,对衣原体病、猪瘟等采用IHA、ELISA、PCR等方法进行实验室检验,衣原体IHA抗体、ELISA抗体分别为84.6％(22/26)、88.5％(23/26),PCR检测阳性率为69.2％(18/26).根据实验室检验结果,结合临床症状分析,诊断为猪衣原体感染,经采取综合防控措施,疫情得到了有效控制.     

福建龙岩地区部分猪场衣原体病的血清流行病学调查

对采自福建龙岩地区15个猪场的2313份血清用间接血凝试验进行猪衣原体的抗体检测。结果表明,衣原体在龙岩地区的感染率27.71%,各猪场之间的感染率有所差异,抗体阳性率在16.67%～58.62%之间,不同种群之间衣原体差异极显著（P〈0.01）,且感染有随胎次增加的趋势。其中成年公猪群最高53.03%,其次为成年母猪群45.92%,不同育肥群之间无显著差异（P〉0.05）,不同品种之间衣原体感染也存在差异,一元纯种猪群与二元杂交猪群之间差异显著（P〈0.05）。     

应用夹心阻断ELISA测定血清中抗狂犬病抗体的研究

本研究建立的检测狂犬病抗体的夹心阻断ELISA,直接利用未经提纯的病毒悬液代替提纯的抗原,并仅用一种酶标抗体,测定了9种动物的血清.本方法敏感度的95%可信限为0.0013～0.0071IU/mL,比小鼠中和试验和微量免疫酶试验均敏感.按阻断50%判定血清ELISA的阴阳性,9种动物的1134份血清中有91份阳性,其中发病点的牛、猪、犬、家鼠血清的阳性率均在10%以上.根据对一定量的抗原阻断率相同时,抗体浓度一致的原理,测定了7种动物的185份血清效价,结果狂犬病抗体浓度在0.01IU/mL以上的为63份.利用夹心阻断ELISA和小鼠中和试验测定了7种动物的23份血清,阳性份数分别为12和11.两种方法均证明家鼠血清中有狂犬病抗体.本研究表明,测定狂犬病抗体的夹心阻断ELISA,简便、敏感、快速,可用于流行病学调查.     

BSA对牛结核抗体ELISA检测的影响

分别研究了封闭液、血清稀释液及酶标二抗稀释液中BSA成分对牛结核抗体ELISA检测的影响.结果显示,酶标二抗稀释液中BSA的存在使ELISA检测值普遍偏低,且BSA的含量越高,检测值越低;为了提高ELISA检测值,使其达到理想检测效果,必须提高酶标二抗的使用浓度.BSA中可能存在的牛血清抗体杂质对酶标二抗起到了"中和"作用,降低了酶标二抗与目标抗体结合的实际浓度,使检测结果普遍偏低.     

间接ELISA法对禽霍乱抗体的动态监测

将40只50日龄健康禽霍乱非免疫鸡随机分为四组,每组10只。用禽霍乱蜂胶佐剂灭活疫苗对各组鸡进行不同水平的免疫,同时设非免疫对照组。各组鸡间隔5-7天采血,以间接ELISA法测定血清P／N值,并确定临界值。将P／N值在2.1-4.7的13只试验鸡以一个最小致死量（相当于10个菌／ml）进行攻毒试验,同时设攻毒对照,在1周内3只对照鸡均表现感染发病并死亡,而试验鸡均健活,从而初步证明所确定的临界值是合理的。     

应用单克隆抗体酶联免疫斑点试验检测抗传染性喉气管炎抗体

本文提出以硝酸纤维膜作为固相载体,辣根过氧化物酶标记的抗传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）,邻苯二胺为底物,检测ＩＬＴＶ抗体的免疫斑点试验方法（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）。该方法较常规方法敏感,特异、省时。该方法的建立为鸡群疫病监测,免疫鸡群抗体水平的检测提供了新的可靠方法。     

牛病毒性腹泻病毒血清抗体检测

采用Svanova公司牛病毒性腹泻病毒血清抗体ELISA抗体检测试剂盒对采自新疆10个不同地区的875份牛血清进行了牛病毒性腹泻病毒血清抗体检测,共检出抗体阳性血清759份,最高阳性率为100％,最低为55.0％,平均为86.7％.检测结果表明该病已在新疆普遍存在,感染没有明确的地域分布规律.根据ELISA检测结果,从...     

间接ELISA检测抗氨苄青霉素抗体方法的建立

通过对最佳抗原包被浓度及包被条件、最佳血清工作浓度、封闭剂、待测血清、酶标二抗的最佳工作浓度及作用时间等反应体系的筛选和确定,利用人工制备的完全抗原及其免疫血清建立了检测抗氨苄青霉素(AMPI)抗体的间接ELISA 方法。结果表明,AMPI BSA抗原最佳包被浓度为1μg/mL,AMPI HSA抗原最佳包被浓度为2μg/mL;包被条件为37 ℃4 h 后4 ℃过夜;抗AMPI HSA血清和抗AMPI BSA 血清最佳工作浓度分别为1∶25 600 和1∶51 200;封闭剂、待测血清、酶标二抗的最佳作用时间均为30 min。血清检测结果表明抗AMPI HSA的抗体水平最高,抗AMPI BSA 的抗体水平稍低于抗AMPI HSA 的抗体,而抗AMPI KLH的最低。     

单克隆抗体捕获ELISA检测鸡多杀性巴氏杆菌IgM抗体

应用抗鸡ＩｇＭ单克隆抗体建立了检测鸡抗多杀性巴氏杆菌（Ｐ．ｍ．）血清中特异性ＩｇＭ抗体的单克隆抗体捕获ＥＬＩＳＡ,其敏感性、特异性、重复性优于间接ＥＬＩＳＡ。用于检测鸡抗Ｐ．ｍ．的特异性ＩｇＭ抗体发现：鸡在注射免疫Ｐ．ｍ．灭活苗后第４天即可检测到ＩｇＭ抗体,并且上升较快,峰值在第２周为１：５１２０;鸡在口服免疫Ｐ．ｍ．弱毒活苗后ＩｇＭ抗体上升缓慢,峰值在第４周左右,滴度较低为１：３２０;鸡在由不同途径感染不同的Ｐ．ｍ．强毒后第８天时,ＩｇＭ抗体滴度都明显上升。同时应用间接ＥＬＩＳＡ检测ＩｇＧ抗体滴度进行比较。本项研究对建立检测鸡抗其它病原微生物特异性ＩｇＭ抗体方法具有借鉴意义。     

氨苯磺胺多克隆抗体的制备

采用重氮化法将氨苯磺胺与人血清白蛋白偶联形成免疫原，免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。通过紫外扫描分析，免疫原中药物分子与蛋白质分子的偶联比为32：1，改良辛酸-饱和硫酸铵法纯化抗体，多克隆抗体效价达1：10^5，间接ELISA建立的氨苯磺胺检测的线性范围为1ng／mL～100μ/mL，70％抑制率可检测最低浓度为0．09μ/mL，以抗体与氨苯磺胺的反应率为100％，抗体与其他7种磺胺药交叉反应率很低。结果表明，制备的氨苯磺胺多克隆抗体具有很高的特异性，可用于动物性食品中氨苯磺胺残留的检测。