西妥昔单抗对非小细胞肺癌细胞的体外抑制作用

背景与目的 目前抗EGFR单抗--西妥昔单抗在肺癌的临床运用越来越广泛.本研究旨在探讨西 妥昔单抗对人肺癌细胞株(A549、H460、H1299、SPC-A-1)的体外作用.方法 我们选用浓度递增的西妥昔单抗 (1 nmol/mL-625 nmol/mL)作用于A549、SPC-A-1、H460、H1229四株细胞株,采用CCK8测定各组细胞增殖抑制情 况,选择A549、SPC-A-1细胞株用PI标记应后用流式细胞技术观察细胞凋亡情况,并采用免疫蛋白印迹法检测药物 处理后A549细胞EGFR信号转导通路关键酶的表达.结果 西妥昔单抗对A549、H460、H1299、SPC-A-1细胞的作用 均呈时间和浓度依赖性,作用后细胞的凋亡现象明显,同时细胞增殖均不同程度受到抑制;通过Western blot检测发 现p-AKT、p-EGFR、p-MAPK蛋白表达量较对照组明显下降.结论 西妥昔单抗在体外对肺癌细胞的增殖具有一定的 抑制作用,其作用可能与进一步下调了活化的EGFR信号转导通路关键酶的表达有关.     

泰索帝联合塞来昔布对肺腺癌细胞增殖的影响

目的探讨泰索帝、塞来昔布单药以及联合用药对非小细胞肺癌细胞株A549增殖及凋亡的影响。方法以人NSCLC细胞株A549作为研究对象,采用MTT,免疫组化以及FCM检测泰索帝和塞来昔布对非小细胞肺癌A549细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期和COX-2蛋白表达的影响。结果泰索帝在体外对NSCLC细胞株A549的生长抑制作用呈剂量、时间依赖性,48h最高65%,最低10%,联合塞来昔布(12.5μmol/l,25μmol/l)可以提高泰索帝的抑制率;经高剂量塞来昔布组(>50μmol/l)处理的细胞COX-2蛋白表达呈阴性,而低剂量组(12.5μmol/l,25μmol/l)以及联合用药组细胞COX-2蛋白表达呈阳性;塞来昔布(12.5μmol/l,25μmol/l)作用后,G0/G1期细胞比例增加,S、G2/M期比例下降,联合泰索帝可以提高细胞的凋亡率。结论泰索帝在体外对非小细胞肺癌细胞株的生长有明显的抑制作用,联合塞来昔布可以提高抑制率,诱导细胞凋亡,影响细胞周期的分布,但不是通过影响细胞内环氧化酶-2蛋白表达这一途径实现。     

塞来昔布对不同COX-2表达肿瘤细胞株放射增敏作用及其机制研究

目的探讨选择性环氧化酶抑制剂塞来昔布对不同COX-2蛋白表达水平人类肿瘤细胞株的放射增敏作用及其发生机制。方法选用人乳腺癌细胞系MCF-7(低COX-2蛋白表达)和肺癌细胞系A549(高COX-2蛋白表达)为研究对象。RT-PCR检测COX-2表达,MTT法及成克隆分析法测定塞来昔布对两种细胞系的细胞毒作用及放射增敏作用及流式细胞仪(FCM)检测细胞周期分布、细胞凋亡指数。结果塞来昔布作用于MCF-7细胞30h后的IC_(50)值为(43.7±1.12)μmol/L,作用于A549细胞24 h后的IC_(50)值为(37.5±0.80)μmol/L。塞来昔布联合射线作用于A549细胞,与单纯照射组比较显示了放射增敏作用(P<0.05),而在MCF-7细胞中则没有观察到这些现象。细胞周期检测发现,两种细胞各组都出现了不同的周期分布。塞来昔布组G_0 G_1期细胞比例增加,照射组的细胞则大多处于G_2 M期。不同浓度的塞来昔布10～80μmol/L作用6h后,均未观察到明显的凋亡现象,两种细胞照射组与照射加药组测得的凋亡均无差异。结论塞来昔布对MCF-7、A549细胞都有增殖抑制作用,并呈时问和剂量依赖性,其作用不完全呈COX-2依赖。塞来昔布能增加A549细胞放射敏感性,其机制可能与抑制COX-2蛋白、改变细胞周期分布有关。     

塞来昔布抑制人肺腺癌细胞的增殖和表皮生长因子受体的表达*

目的:探讨不同浓度的环氧化酶-2 抑制剂塞来昔布（Celecoxib ）在不同时间点对肺腺癌A549 细胞株增殖和表皮生长因子受体（EGFR）表达的影响。方法:人肺腺癌A549 细胞株培养于含10% 胎牛血清RPMI1640培养基中。实验细胞分组如下:A组,正常对照;B 组,Celecoxib（12.5 μ mol/L）;C 组Celecoxib（25μ mol/L）;D 组Celecoxib（50μ mol/L）,E 组Celecoxib（75μ mol/L）,均以RPMI1640培养液配置。使用不同浓度塞来昔布（12.5、25、50和75μ mol/L）处理肺癌A549 细胞24、48、72h 后,四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）测定细胞增殖抑制率;AnnexinⅤ/PI 染色法与Hoechst33258 染色法检测细胞凋亡率;流式细胞仪检测药物作用周期;Real-time RT-PCR 法检测EGFR mRNA 的表达情况。结果:塞来昔布明显抑制了A549 细胞的生长,呈时间、剂量依赖性。塞来昔布组细胞凋亡率明显高于正常对照组（P<0.01）,且呈剂量依赖性,S 期细胞比例明显减少（P<0.01）,G0/G1 期细胞比例明显增加（P<0.01）,提示塞来昔布能将大多数A549 细胞阻滞于G0/G1 期。塞来昔布组细胞EGFR mRNA 表达明显减弱（P<0.05）,且呈浓度依赖性,各浓度间差异具有统计学意义（P<0.05）。 结论:塞来昔布显著抑制A549 细胞生长,可能机制是通过促进凋亡、增强G0/G1 期阻滞、下调细胞中EGFR mRNA 的表达,从而为应用塞来昔布治疗肺腺癌,以及塞来昔布和表皮生长因子受体抑制剂联用提供了一定的实验依据。      

塞来昔布促进T细胞淋巴瘤对化疗药物的敏感性

目的:研究塞来昔布对T细胞淋巴瘤细胞化疗敏感性的影响,并探讨其作用机制.方法:MTF法检测不同浓度塞来昔布分别作用24、48和72 h,对T细胞淋巴瘤细胞株Jurkat和Hut78增殖活性的影响;MTT法检测化疗药物[顺铂(cis-platinum,DDP)、表柔比星(epirubicin,EPI)及长春新碱(vincristine,VCR)]联合塞来昔布对Jurkat和Hut78细胞增殖活性的影响;并计算IC50值;流式细胞术检测塞来昔布联合化疗药对Jurkat和Hut78细胞凋亡水平的影响;Real-time PCR及Westernblotting技术分别从mRNA及蛋白水平检测塞来昔布对Jurkat和Hut78细胞表达MDR1、MRP1、LRP及TopoⅡ的影响.结果:塞来昔布对T细胞淋巴瘤细胞株Jurkat和Hut78增殖活性具有一定抑制作用,且可明显增强化疗药物对Jurkat和Hut78细胞的杀伤作用;在塞来昔布作用下Jurkat和Hut78细胞的凋亡水平明显增加(P＜0.01);与塞来昔布共培养的Jurkat和Hut78细胞,TopoⅡmRNA和蛋白的表达水平均明显增加,而MDR1、MRP1、LRP mRNA及蛋白的表达水平均明显下降(P＜0.05).结论:塞来昔布可通过调控耐药相关基因的表达而增强T淋巴瘤细胞对化疗药物的敏感性,因此在T细胞淋巴瘤的临床治疗中具有良好应用前景.     

塞来昔布对宫颈癌细胞的化疗增敏作用

目的探讨特异性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对顺铂诱导宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡的作用及机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）,测定塞来昔布对顺铂诱导Hela细胞增殖活性的作用;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测Hela细胞中Bcl-2、Bax蛋白的表达情况。结果 5、10μmol/L的塞来昔布分别与顺铂联合应用,可增强顺铂对Hela细胞增殖抑制作用。塞来昔布（5μmol/L）能促进顺铂诱导Hela细胞的凋亡。塞来昔布作用于Hela细胞后,Bcl-2蛋白表达水平下调、Bax蛋白表达水平上调呈浓度依赖关系。结论塞来昔布能促进顺铂对Hela细胞增殖抑制和诱导凋亡作用,起化疗增敏作用,可能与其下调Bcl-2蛋白表达水平、上调Bax蛋白表达水平有关。     

塞来昔布对NB4细胞增殖、凋亡及VEGF表达的影响

目的 探讨塞来昔布对急性早幼粒细胞白血病细胞的抑制作用及可能机制.方法 不同浓度塞来昔布处理急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4,MTT法检测塞来昔布作用后细胞的增殖情况.采用流式细胞术测定NB4细胞周期分布及凋亡;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2表达以及RTPCR检测塞来昔布作用对VEGF、HIF-1α在mRNA水平的表达.结果 MTT显示塞来昔布对NB4细胞生长有明显抑制作用.20～80 μmol/L塞来昔布作用24 h,NB4细胞G0/G1期比例明显升高,而S期细胞比例下降(P＜0.05);塞来昔布处理组细胞凋亡率明显高于对照组,Western blot显示Bcl-2蛋白表达下调(P＜0.05);RT-PCR显示塞来昔布可抑制VEGF及HIF 1α的mRNA表达.结论 塞来昔布在体外可抑制急性早幼粒细胞白血病细胞增殖并诱导凋亡.     

塞来昔布诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡和自噬

目的:观察塞来昔布对人胃癌细胞株SGC-7901凋亡和自噬的影响,并探讨其凋亡的机制。方法:不同浓度塞来昔布处理SGC-7901细胞后,MTT法检测SGC-7901细胞的增殖,TUNEL法检测SGC-7901细胞的凋亡,透射电镜观察SGC-7901细胞超微结构的改变,流式细胞术检测SGC-7901细胞的凋亡率,实时定量荧光PCR法检测SGC-7901细胞中caspase-8和caspase-9 mRNA的表达。结果:塞来昔布时间(24、48、72 h)和剂量(50、75、100、125μmol/L)依赖性抑制SGC-7901细胞的增殖,125μmol/L塞来昔布作用SGC-7901 72 h细胞的增殖抑制率高达(85.6±4.51)%。塞来昔布可诱导SGC-7901细胞凋亡,透射电镜下观察到典型的凋亡小体和自噬体,细胞凋亡率从(2.2±1.32)%上升到(35.7±5.73)%(P<0.01)。塞来昔布作用后,SGC-7901细胞中caspase-8和caspase-9 mRNA表达明显增加,呈时间和剂量依赖性(P<0.05)。结论:塞来昔布通过激活依赖caspase-8的死亡受体途径和依赖caspase-9的线粒体途径诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡,同时诱发自噬性细胞死亡。     

塞来昔布对人脑微血管内皮细胞放射后凋亡及释放PGI2和TXA2影响

目的 探讨塞来昔布对人脑微血管内皮细胞(HBMECs)放射后释放PGI₂、TXA₂及凋亡影响。方法 细胞按空白、接受X射线、塞来昔布联合X射线分为对照组、单纯照射组、联合组,采用CCK-8、克隆形成实验测定塞来昔布对HBMECs毒性及放射敏感性影响。于照后6、12、24、48 h时间点进行实验。ELISA检测培养液6-keto-PGF_1α、TXB₂含量及计算TXB2/6-keto-PGF_1α比值,AnnexinV-FITC/PI双染法测定细胞凋亡率,蛋白印迹法检测蛋白表达情况。配对t检验差异。结果30 μmol/L塞来昔布浓度下联合组未见明显放射增敏效应(SER=0.96);与对照组相比,两组TXB2/6-keto-PGF_1α比值升高(P<0.05),凋亡率升高(P<0.05),Cox-2、P-JNK、Cleaved caspase-3表达增加;与单纯放射组比较,联合组TXB2/6-keto-PGF_1α比值降低(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05),Cox-2及P-JNK、Cleaved caspase-3表达降低。结论 塞来昔布能减少放射后HBMECs释放TXB₂,降低TXB2/6-keto-PGF_1α比值,抑制细胞凋亡,抗凋亡机制与抑制Cox-2及P-JNK、Cleaved caspase-3表达有关。     

环氧合酶-2抑制剂塞来昔布诱导人肝癌细胞凋亡及其机制

目的：探讨环氧合酶2（cyclooxygenase2,COX2）抑制剂塞来昔布（celecoxib）诱导人肝癌细胞系SMMC7721凋亡的作用及其可能机制。方法：以10、25、50、75、100 μmol/L的塞来昔布处理SMMC7721细胞,MTT法检测肿瘤细胞增殖,Hoechst 33342/PI 双染法检测细胞凋亡的形态特征,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期变化。RTPCR法检测Fas和Bcl2mRNA的表达,Western blotting检测细胞Fas和Bcl2 蛋白的表达。结果：塞来昔布以剂量依赖的方式抑制SMMC7721细胞增殖。塞来昔布作用后,SMMC7721细胞出现核染色质凝集、核膜破裂等凋亡细胞典型的形态特征。25、50和100 μmol /L塞来昔布诱导SMMC7721细胞的凋亡率分别为(16.32±2.32)%、(38.05±2.47)%、(71.17±3.19)%,并使细胞阻滞于G0/G1期。塞来昔布处理后,SMMC7721细胞Fas mRNA及蛋白表达明显增强（P<0.01）;Bcl2 mRNA表达无明显变化（P>005）,高浓度塞来昔布可下调Bcl2蛋白表达（P<0.01）。结论：塞来昔布能够抑制SMMC7721细胞增殖并诱导凋亡,其机制可能与影响凋亡相关基因表达有关。     

西妥昔单抗与NK、T混合淋巴细胞联合应用对肺癌细胞的抑制作用

目的：探讨西妥昔单抗与NK、T混合淋巴细胞联合应用对肺癌细胞的体外抑制作用.方法：体外诱导和扩增外周血淋巴细胞,流式细胞仪检测扩增后细胞表型.CCK-8法检测西妥昔单抗与NKTm细胞以不同时间点联合应用对A549细胞的抑制率,采用金氏公式计算增效Q值,评价合用的效应强度是否优于单用.结果：西妥昔单抗与NK、T混合淋巴细胞联合应用组的抑制率高于两者单独应用组（P＜0.01）,联合应用具有协同效应（Q＞1.15）,西妥昔单抗应用后18小时再给予NK、T混合淋巴细胞组的Q值最高（Q=1.31）.结论：西妥昔单抗与NK、T混合淋巴细胞联合应用对A549细胞的抑制具有协同效应.     

塞来昔布联合吉非替尼对HCC827细胞凋亡影响机制探讨

目的探讨Cox-2抑制剂塞来昔布联合吉非替尼对肺癌EGFR 19号外显子E746-A750缺失细胞株HCC827细胞凋亡的影响及其可能机制。方法 RPMI1640培养HCC827细胞,分为正常对照组、塞来昔布组、吉非替尼组、塞来昔布加吉非替尼组。塞来昔布与吉非替尼药物浓度均为5、10、20、40、80μmol/L。药物干预细胞48h后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测细胞中Cox-2和p-EGFR蛋白表达。结果 MTT结果显示,塞来昔布和吉非替尼单独用药时HCC827细胞的增殖受到明显的抑制,且随着药物浓度的增加,抑制作用逐步增强,药物剂量与细胞增殖抑制率呈正相关;塞来昔布与吉非替尼联合用药时对HCC827细胞呈现出更强的抑制作用,与单独用药相比差异有统计学意义,P<0.001;对照组细胞凋亡率为(0.26±0.09)%,塞来昔布组为(4.86±0.37)%,吉非替尼组为(8.53±0.78)%,塞来昔布+吉非替尼组为(23.28±1.63)%,组间比较差异有统计学意义,F=111.291,P<0.001,且两药联合时具有交互效应,F=90.440,P<0.001;蛋白质印记法结果显示,用药组较对照组Cox-2(F=185.351,P<0.001)和p-EGFR(F=61.328,P<0.001)蛋白水平均有不同程度的下调,其中两药联合组下调最为明显。结论塞来昔布与吉非替尼具有良好的协同作用,其机制可能与诱导凋亡、抑制EGFR的活化和下调Cox-2蛋白的表达有关,在治疗非小细胞肺癌中联合用药可能会具有较大的应用潜力。     

阻断表皮生长因子受体和环氧合酶-2信号途径对肺腺癌细胞的抗增殖作用

目的:探讨表皮生长因子受体抑制剂吉非替尼(gefitinib)联合新型环氧合酶2（cyclooxygenase2, COX2）抑制剂塞来昔布(celecoxib)对肺腺癌A549细胞株的抑制作用及其可能机制。方法:肺腺癌A549细胞培养于RPMI 1640 培养液中,实验分为正常对照组、吉非替尼5 μmol/L组、塞来昔布25 μmol/L组、吉非替尼5 μmol/L加塞来昔布25 μmol/L组。药物干预细胞48 h后,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,锥虫蓝拒染法检测药物对细胞生长的影响,Annexin V/PI法和Hoechst33258染色法检测细胞凋亡,流式细胞术检测药物作用周期,免疫荧光和Realtime PCR法检测EGFR、COX2蛋白的表达及EGFR mRNA的表达情况。结果:吉非替尼联合塞来昔布组相比单药组,A549 细胞明显出现大量颗粒和空泡,细胞变圆并开始脱落。吉非替尼与塞来昔布单药对A549细胞抑制作用具有时间和剂量依赖性,加药48 h时吉非替尼（5 μmol/L）联合塞来昔布（25 μmol/L）组抑制率为(58.2±4.6)%,明显高于单药组（P<0.01）。联合用药组A549细胞凋亡率明显高于单独用药组（33.9% vs 6.0%,8.8%）,其S期细胞明显减少、G0/G1期明显增加（P<0.01）;EGFR、COX2蛋白的表达明显减弱（P<005）,EGFR mRNA相对表达量（028±0.05）明显高于单独用药组（P<0.05）。结论:吉非替尼和塞来昔布联合对肺腺癌A549 细胞增殖的抑制具有明显协同作用,其可能机制是诱导凋亡、增强G0/G1期阻滞和进步下调活化的EGFR与COX2的表达。     

塞来昔布对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究特异性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对人鼻咽癌细胞株CNE-2是否具有抑制增殖、诱导凋亡的作用并初步探讨其作用机制。方法 用塞来昔布作用于体外培养的人鼻咽癌CNE-2细胞,采用四甲基偶氮陛蓝比色法（MTT）测定细胞增殖活力的改变;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot 检测细胞Bcl-2、Bax蛋白的表达情况。结果 MTT结果显示不同浓度塞来昔布（25～100μmol/L）均能抑制鼻咽癌CNE-2 细胞生长,呈浓度和时间依赖性。流式细胞术结果显示塞来昔布（25～75μmol/L）浓度范围内能诱导鼻咽癌CNE-2 细胞凋亡,呈浓度和时间依赖性。Western blot 结果显示塞来昔布作用于鼻咽癌CNE-2 细胞后,Bcl -2 蛋白表达水平下调和Bax蛋白表达上调呈浓度依赖方式。结论 塞来昔布具有抑制人鼻咽癌CNE-2细胞增殖和诱导其凋亡的作用,其机制可能与下调Bcl-2 蛋白表达,上调Bax蛋白表达有关。     

鼻咽癌PTEN和survivin基因与西妥昔单抗耐药的相关性研究

目的 探讨鼻咽癌PTEN 和survivin 基因与西妥昔单抗耐药的相关性。方法 以人鼻咽癌细胞株5-8F 细胞为研究对象,采用逐步增加剂量法诱导建立西妥昔单抗耐药细胞5-SF/Erbitux; MTT法检测西妥昔单抗对细胞的半数抑制浓度IC50,计算耐药指数（RI);计数法描绘生长曲线,计算倍增时间;流式细胞仪检测细胞周期;Western blot 法检测细胞PTEN、survivin 的表达;实时荧光定量PCR (QPCR）检测细胞PTEN、survivin 基因的表达量;测序方法检测细胞PTEN 基因第5、7、8 外显子是否突变。结果 建立西妥昔单抗耐药的人鼻咽癌细胞系5-8F / Erbitux,西妥昔单抗作用3 天和5 天的RI 分别为1.2 和1.1 , 5-8F与5-8F/Erbitux 细胞的倍增时间分别为26.63h 和142.30h ; 5-8F Erbitux 的G0／Gl期比例显著增高（P<0. 001) , S 期比例显著下降（P＜0.001) , G2/M 期比例下降,但差异不显著（P＞0.05) ; 5-SF / Erbitux 细胞PTEN 蛋白表达水平显著升高（P<0.001) , survivin 蛋白表达水平显著下降（P＜0.001) ; Survivin 基因表达量显著下降（P＝0.000) , PTEN 基因表达量有所升高,但差异不显著（P＝0.085）。通过比对,5-SF/Erbitux 细胞PTEN 基因第5、7、8 外显子未见突变。结论 西妥昔单抗可通过增强PTEN 的表达和降低survivin 的表达抑制鼻咽癌细胞增殖。鼻咽癌PTEN 缺失或突变以及survivin 过表达与西妥昔单抗耐药无关。     

EGFR-TKI联合COX-2抑制剂抑制肺腺癌A549细胞的增殖及其机制

目的:研究表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI)吉非替尼联合环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂塞来昔布对肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用及其可能机制。方法:实验设空白对照组、吉非替尼组、塞来昔布组、吉非替尼+塞来昔布组。倒置相差显微镜下观察A549细胞形态变化,MTT法检测A549细胞增殖,流式细胞术检测A549细胞周期及凋亡,Western blotting检测A549细胞中EGFR、p-EGFR、COX-2的表达。结果:吉非替尼和塞来昔布均可抑制A549细胞的增殖,可见细胞活性下降,G1期细胞阻滞及细胞凋亡增加;联合用药较单药组A549细胞活性下降更明显,G1期阻滞细胞增加,且细胞凋亡增加。吉非替尼或塞来昔布作用前后A549细胞EGFR表达无变化,但联合用药组p-EGFR及COX-2的表达较单药组显著下降。结论:吉非替尼联合塞来昔布可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖,其机制可能与抑制EGFR的活化及下调COX-2的表达有关。     

塞来昔布通过PI3K/Akt通路调控胃癌细胞凋亡

目的:探讨塞来昔布通过PI3K/Akt信号通路调控胃癌细胞凋亡的机制.方法:塞来昔布体外处理人胃癌细胞株SGC-7901后,透射电镜观察细胞超微结构的改变,实时荧光定量RT-PCR法和Western Blot法检测蛋白激酶B(Akt)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-8(Caspase-8)、Caspase-9的表达.结果:塞来昔布处理细胞后,透射电镜下观察到典型凋亡小体和自噬体;实验组Akt mRNA表达水平的改变无统计学意义,P-Akt蛋白的表达下调并呈时间和剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);Caspase-8 mRNA表达水平上调,呈时间和剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);Caspase-9 mRNA表达水平较对照组均上调,但125 μmol/L塞来昔布作用24 h组mRNA表达量与对照组相比差异无统计学意义,48 h和72 h组与对照相比差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).塞来昔布作用72 h后,75 μmol/L组Caspase-9 mRNA表达量与对照组相比差异无统计学意义,100 μmol/L和125 μmol/L组与对照相比差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);procaspase-8和procaspase-9蛋白被活化,表达量下调,呈时间和剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论:1)塞来昔布可能通过PI3K/Akt通路诱导细胞凋亡和细胞自噬两种程序性死亡方式导致细胞死亡.2)塞来昔布诱导胃癌细胞凋亡的分子机制为线粒体途径和死亡受体途径.     

塞来昔布联合IL-24武装的溶瘤腺病毒抗膀胱癌作用的体外研究

 目的：评估塞来昔布联合ZD55-IL-24对尿路上皮细胞癌T24的选择性杀伤效能。 方法：荧光显微镜观察ZD55-EGFP对细胞的转染效率。RT-PCR法测IL-24 mRNA在细胞中的表达。MTT法测塞来昔布联合 ZD55-IL-24对肿瘤细胞选择性抑制作用。流式细胞术检测细胞凋亡。 结果： ZD55-EGFP感染细胞后,在相同时间下T24中的荧光强度明显高于正常细胞。ZD55-IL-24转然后在相同时间下T24中IL-24mRNA表达量均高于HUVEC（t=-12.54,P<0.01）。ZD55-IL-24与塞来昔布联合用药对T24的抑制率最高（P<0.01）。T24细胞各组的抑制率也明显高于HUVEC组（F＝251.35,P<0.01）。联合用药组的细胞凋亡率也明显高于单用药组;T24细胞组凋亡率明显高于HUVEC组（P<0.001）。 结论：塞来昔布与ZD55-IL-24联合用药能最大程度地抑制T24细胞的增殖而对正常细胞影响轻微。这种抑制作用可能与细胞凋亡有关。     

塞来昔布联合奥曲肽对人胃癌多药耐药细胞生长的影响

背景与目的:环氧合酶-2(cyclooxygenase,COX-2)抑制剂塞来昔布及奥曲肽(octreotide)均对肿瘤细胞有抑制作用,本研究旨在探讨塞来昔布及其与奥曲肽联合对人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/ADR生长的影响。方法:塞来昔布组:塞来昔布浓度为1×10-4～1×10-8mol/L;奥曲肽组:奥曲肽浓度为1×10-5～1×10-9mol/L;合用组:塞来昔布在上述浓度范围内加1×10-6mol/L的奥曲肽;对照组:无血清RPMI-1640培养液。比较各实验组对SGC7901、SGC7901/ADR细胞生长的影响。采用3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法检测细胞的增殖;免疫细胞化学检测增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)的表达;DNA末端原位标记染色法(TUNEL法)及流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:塞来昔布较对照组明显降低SGC7901/ADR细胞的3H-TdR掺入,掺入值分别为(471.3±79.7)cpm及(917.5±130.8)cpm,塞来昔布与奥曲肽联合应用时,3H-TdR掺入值较单独用药(220.0±19.7)cpm下降53.3%。两药联合对SGC7901/ADR细胞DNA合成的抑制效应与塞郑文斌,等.塞来昔布联合奥曲肽来昔布的浓度呈显著正相关(r=0.996,P<0.001)。单用塞来昔布或联合用药都能明显降低SGC7901/ADR细胞PCNA的表达。单用塞来昔布时SGC7901/ADR细胞凋亡率为32.9%,当其与奥曲肽合用,凋亡率增加至5     

塞来昔布抑制人胃癌细胞株增殖及其机制的实验研究

目的:研究特异性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对人胃癌细胞株MKN-45是否有抑制增殖、诱导凋亡作用并初步探讨其作用机制.方法:采用四氮唑盐比色法(MTT法)观察细胞增殖活力改变;流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期变化; 透射电镜观察细胞超微结构的改变; DNA提取行琼脂糖凝胶电泳观察DNA的"梯状"条带;免疫组化观察bcl-2基因和bax基因表达情况.结果:MTT法显示随着塞来昔布浓度和作用时间增加,细胞抑制率上升.人胃癌细胞株MKN-45在25、50、75、100μmol/L塞来昔布浓度下,24小时细胞抑制率分别为(16.39±1.430%、(23.55±0.11)%、(62.78±1.42)%、(87.53±0.27)%,48小时细胞抑制率分别为 (30.40±0.68)%、(46.18±1.80)%、(89.77±0.21)%、(97.94±0.18)%,(P＜0.05);流式细胞仪测定塞来昔布组出现凋亡峰,50、100μmol/ml浓度的塞来昔布干预24小时后,人胃癌细胞株MKN-45凋亡率分别为(25.5±2.66)%、(57.23±2.19)%;透射电镜观察显示塞来昔布组细胞呈凋亡表现,核固缩、碎裂,染色质浓缩,边集;塞来昔布(50μmol/L、100μmol/L)组培养48小时后DNA琼脂糖凝胶电泳可见典型的梯状条带,而对照组细胞DNA 未见梯状条带;免疫细胞化学法显示经塞来昔布干预后,凋亡蛋白Bax表达增加,而Bcl-2 表达减少,并随时间和药物浓度变化而明显.结论:塞来昔布呈剂量、时间依赖性地抑制MKN-45细胞增殖,促进MKN-45细胞凋亡.其机制之一可能是通过减少Bcl-2的表达、增加Bax的表达,从而启动细胞凋亡途径.