致敏供者淋巴细胞输注对受者免疫功能重建及移植物抗宿主病发生率的影响

目的探讨非清髓异基因外周血造血干细胞移植后致敏供者淋巴细胞输注(DLI)对受者免疫重建及移植物抗宿主病(GVHD)发生率的影响。方法以C57BL/6小鼠(H-2b)为受鼠, BALB/c小鼠(H-2d)为供鼠,建立异基因外周血造血干细胞移植模型(实验组),移植当天受者接受60Coγ射线全身照射,移植后第2天腹腔注射环磷酰胺200 mg/kg。以不行造血干细胞移植,仅行γ射线全身照射和环磷酰胺腹腔注射的正常C57BL/6小鼠为对照。实验组存活小鼠在移植后第28天分别接受致敏供鼠淋巴细胞输注(n=8)、未致敏供鼠淋巴细胞输注(n=8),另有6只不输注供鼠淋巴细胞。移植后检测受者异基因嵌合率,观察GVHD的发生情况以及T淋巴细胞亚群变化,并行供受者间以及供受者与第三方小鼠(昆明鼠)间的单向混合淋巴细胞反应。结果实验组受鼠SRY基因均为阳性,嵌合率为(30.881±3.962)%。DLI后,接受未致敏DLI者均出现不同程度的GVHD,死亡3只(7.5%,3/8),而接受致敏DLI者无明显GVHD及死亡者。移植后45 d,接受致敏DLI者的CD8 T淋巴细胞明显高于正常C57BL/6小鼠(P<0.05),而接受未致敏DLI者的CD8 T淋巴细胞与正常对照的差异无统计学意义(P>0.05),至移植后60 d,接受DLI者的T淋巴细胞亚群接近正常(P>0.05);对照组T淋巴细胞亚群持续低于正常对照(P<0.05)。实验组小鼠淋巴细胞对供者淋巴细胞刺激的反应性均下降(P<0.01),以接受致敏DLI者最明显,而对昆明鼠淋巴细胞刺激的反应性维持正常水平。结论造血干细胞移植后输注致敏供者的淋巴细胞能促进受者的免疫功能重建,并可减少GVHD的发生。     

非清髓性造血干细胞移植后移植物抗宿主病的临床观察

目的 观察非清髓性造血干细胞移植（NST）后移植物抗宿主病（GVHD）的发生情况。方法 将18例患者分为3组：A组为6例重型再生障碍性贫血（SAA）成人患者，行无关供者脐血造血干细胞移植；B组为5例SAA患者，行同胞供者骨髓联合外周血造血干细胞移植；C组为7例肿瘤性血液病患者，其中3例行同胞供者骨髓移植，4例行外周血造血干细胞移植。均采用以抗胸腺细胞球蛋白或抗淋巴细胞球蛋白为基础的预处理方案。A组和B组应用环孢素A（CsA）和甲泼尼龙预防GVHD，C组应用CsA和甲氨蝶呤预防GVHD。C组形成混合性嵌合体后行供者淋巴细胞输注（DLI）。结果 A组有4例形成并维持混合性嵌合体状态，1例死于真菌性败血症，1例自动出院。移植后早期，B组有3例供者型嵌合体占94％以上，并在短期内转变并维持完全供者嵌合体状态，获得无病存活，其中1例在移植后8个月发生慢性GVHD；另2例行供者千细胞输注后，1例6个月后死于继发性纵隔淋巴瘤，1例造血功能恢复。C组患者早期均形成混合性嵌合体，获得血液学部分缓解，患者DLI前无急性GVHD发生，1例于2次DLI后死于严重感染，1例失访；另5例分别经过4、3、7、5、4次DLI，全部转为完全供者型嵌合体，并获得血液学完全缓解，4例并发慢性GVHD，2例并发急性GVHD。结论 对于SAA患者，NST的临床效果较好，GVHD的发生率较低；而对于肿瘤性血液病，NST后患者的早期死亡率低，急性GVHD发生率下降，但慢性GVHD和感染的发生率较高。     

环孢素A联合供者骨髓细胞输注延长大鼠移植心脏存活时间

目的：探讨环孢素A（CsA）联合供者骨髓细胞（DBMC）输注对同种大鼠移植心脏存活时间的影响。方法：制作Lewis大鼠到BN大鼠的异位（腹部）心脏移植模型，并按对受者处理的不同分为四组，对照组不进行特别处理，CsA组术后连续7d给予CsA5mg·kg^-1·d^-1，联合处理组分别于术中及术后第6天输注1×10^8个DBMC，术后连续7d给予CsA5nag·kg^-1·d^-1，DBMC组分别于术中及术后第6天输注1×10^8个DBMC；另设BN大鼠间的心脏移植作为对照（BN对照组）。观察移植心脏的存活时间，观测术后第6天血清白细胞介素2（IL-2）、移植心脏组织中肿瘤坏死因子（TNF-α）mRNA表达以及组织学改变，流式细胞仪检测术后第6、12、18天时受者外周血有核细胞中的供者来源细胞、CD3^＋ CD25^＋细胞、CD4^＋ CD25^＋细胞的百分比以及共刺激分子CD86表达、CD4^＋ CD45RC^＋／CD4^＋ CD45RC^-等。结果：联合处理组移植心脏存活时间为（21．6±3．2）d，明显长于对照组和DBMC组（P〈0．05），其血清IL广2为（313±95）pg／ml，心肌组织中TNF-α mRNA的表达量为0．12±0．10，均明显低于对照组和DBMC组（P〈0．05），排斥反应程度轻于其它3个移植组。联合处理组大鼠外周血有核细胞上CD86表达受到明显抑制；术后6、12d，联合处理组的CD4^＋ CD45RC^＋／CD4^＋ CD45RC^-比值低于对照组和DBMC组，CD3^＋ CD25^＋细胞百分比也低于对照组和DBMC组；接受DBMC输注者外周血中供者来源的有核细胞明显多于未接受DBMC者。结论：短疗程CsA联合DBMC输注能减轻大鼠心脏移植急性排斥反应程度，延长移植心脏存活时间。     

巴利昔单抗在骨髓移植中防治急性移植物抗宿主病和免疫功能重建中的作用

目的 探讨抗CD25单克隆抗体（巴利昔单抗）在单倍体未去除T细胞的骨髓移植中防治重度急性移植物抗宿主病（aGVHD）的作用以及对免疫重建的影响。方法 1999年2月至2004年3月，对87例白血病患者进行了HLA单倍体未去T细胞的亲缘骨髓移植，其中2000年9月以前移植的15例受者预处理没有使用巴利昔单抗（对照组），2000年11月以后的72例预处理中加用巴利昔单抗（单抗组）。用流式细胞分析仪对受者移植术后1、3、6、9、12、18、24个月的外周血淋巴细胞亚群进行动态测定，对两组的结果进行比较。结果 移植后单抗组和对照组Ⅱ～Ⅳ度aGVHD的发生率分别为12．5％和33．3％（P=0.045）；与aGVHD相关的死亡率分别为6．9％和20％，两组差异有统计学意义。单抗组中9例临床诊断为Ⅱ～Ⅳ度aGVHD的患者因激素耐药再次使用巴利昔单抗治疗，缓解6例（66．7％），部分缓解2例，无效1例。移植后两组CD4^＋ T细胞的恢复均迟缓。单抗组CD4^＋ T细胞＞200个／μ1的时间为移植后6个月，在移植后18个月绝对数恢复正常。CD3^＋、CD8^＋和CDl9^＋ B细胞在9～12个月恢复正常水平，两组淋巴细胞亚群的恢复情况差异无统计学意义。结论 使用抗CD25单克隆抗体预防和治疗受者严重的aGVHD有一定疗效；受者白血病的复发率和移植后的感染率无明显增加；对骨髓移植后淋巴细胞亚群数量的重建无明显的影响。     

骨髓输注联合阻断共刺激通路延长大鼠皮肤移植物的存活时间

目的 探讨骨髓输注联合阻断共刺激通路对大鼠移植皮肤存活的影响及可能机制.方法 以Lewis大鼠为受者,皮肤移植前经尾静脉输注供者(BN大鼠)骨髓细胞2×108 个,并于骨髓输注当天、输注后第2、4、6及8天腹腔注射抗CD25单克隆抗体,同时按照分组要求腹腔注射细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4融合蛋白(CTLA4Ig组)、抗CD154单克隆抗体(抗CD154单抗组)以及CTLA4Ig和抗CD154单克隆抗体(联合处理组),于骨髓输注后第8天移植BN大鼠的皮肤.另以仅行皮肤移植者为对照(对照组).观察各组移植物抗宿主病(GVHD)的发生情况、外周血中供者细胞嵌合率、T淋巴细胞凋亡率及移植皮肤的存活时间.结果 各组均未观察到GVHD的发生.骨髓输注后第7天即可在CTLA4Ig组、抗CD154单抗组及联合处理组观察到嵌合现象,至第21天时,嵌合率仍维持于一定水平,联合处理组明显高于其它三组(P＜0.01).骨髓输注后第7及21天,CTLA4Ig组、抗CD154单抗组及联合处理组间两两比较,T淋巴细胞凋亡率的差异无统计学意义,但均显著高于对照组(P＜0.05,P＜0.01).CTLA4Ig组、抗CD154单抗组及联合处理组移植皮肤的存活时间显著长于对照组(P＜0.01),联合处理组移植皮肤存活时间为(16.7±3.1)d,明显长于CTLA4Ig组和抗CD154单抗组(P＜0.05).结论 骨髓输注联合阻断共刺激通路能够延长移植皮肤存活时间,其机理可能与诱导嵌合和T淋巴细胞凋亡有关.     

阻断T细胞生长因子信号通路治疗移植物抗宿主病

目的探讨通过抗γ公共链单克隆抗体封闭T细胞生长因子受体治疗小鼠移植物抗宿主病(GVHD)的效果。方法通过混合淋巴细胞培养观察抗γ公共链抗体在体外对T细胞的抑制作用。经静脉输注C57BL／6(H-2b)脾细胞给F1代小鼠(C57BL／6×Balb／cH-2b/d),建立移植物抗宿主病模型。对GVHD模型小鼠短期内给予抗γ公共链抗体,一共3次,并观察其治疗效果。结果抗γ公共链抗体可抑制T细胞增殖,使凋亡细胞数增加及M期细胞数下降。输注同种脾细胞能成功建立急性GVHD模型,主要引起肝脏损伤的病理改变。单次注射抗γ公共链抗体可使GVHD小鼠肝内浸润的淋巴细胞发生凋亡;短期内连续3次注射抗γ公共链抗体可使丙氨酸转氨酶、天冬氮酸转氨酶明显低于对照组(P<0．05),但肝内仍然可观察到淋巴细胞浸润。结论体外阻断T细胞生长因子受体途径可以完全清除反应性T细胞,亦适用于GVHD治疗;但短期治疗不能完全清除反应性T细胞。     

非小细胞肺癌患者围术期细胞免疫功能的变化及免疫治疗

目的观察围术期非小细胞肺癌患者细胞免疫功能的变化及应用胸腺肽α1后对机体免疫功能的影响,为临床应用免疫增强剂联合手术治疗非小细胞肺癌患者提供依据。方法将97例行肺叶或右全肺切除术的非小细胞肺癌患者分为两组,组1：围术期给予胸腺肽α1治疗;组2：围术期未给予胸腺肽α1治疗;对照组：另选择19例同期非肺癌而采取手术治疗的肺部疾病患者作为对照。采用间接免疫荧光法（IFCA）测定3组围术期T细胞亚群的百分率变化。结果术后第1d组1 CD4^＋T、CD4^＋T／CD8^＋T高于组2（CD4^＋T 36．92％±2．10％ vs．31．18％±7．64％;CD4^＋T／CD8^＋T 1．31±0．36 vs．1．09±0．32;P〈0．05）,术后第3d组1 CD4^＋T和CD4^＋T／CD8^＋T高于组2（CD4^＋T 45．66％±3．77％ vs．34．70％±8．42％;CD4^＋T／CD8^＋T 1．42±0．11 vs．1．14±0．20;P〈0．05）;术后第9d CD4^＋T、CD4^＋T／CD8^＋T高于组2（CD4^＋T 47．28％±1．96％ vs．39．12％±3．10％;CD4^＋T／CD8^＋T 1．46±0．14 vs．1．22±0．36;P〈0．05）;术后第16d组1 CD4^＋T、CD4^＋T／CD8^＋T与组2和对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论非小细胞肺癌患者的免疫功能低下,应用胸腺肽α1后细胞免疫功能较快恢复至正常状态,对非小细胞肺癌患者早期采用手术、化疗／放疗的综合治疗有助于提高治疗效果。     

免疫微生态肠内营养在合并糖尿病的胃肠道肿瘤患者中的应用

目的探讨由益生菌、谷氨酰氨、深海鱼油和短肽肠内营养组成的免疫微生态肠内营养制剂对合并糖尿病的胃肠道肿瘤患者术后恢复的影响。方法将2007年1月至2010年10月期间山东省聊城市人民医院收治的67例合并糖尿病的胃肠道肿瘤患者,按随机数字表法分为治疗组（33例．添加益生菌、谷氨酰胺和深海鱼油的免疫微生态肠内营养制剂）和对照组（34例,普通肠内营养）。分别于术前、术后3d和术后7d检测空腹血糖、空腹胰岛素（FINS）、胰岛素抵抗指数（InHOMA．IR）、T淋巴细胞亚群水平（CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD4／CD8）及自然杀伤（NK）细胞计数,并观察院内感染发生率、肠功能恢复时间和住院时间。结果术后7d,治疗组空腹胰岛素和InHOMA．IR明显低于对照组,分别为（8．4±3．7）mU／L比（13．7±5．4）mU／L（P〈0．05）和1．1±0．2比1．7±0．4（P〈0．05）;治疗组CD4＋[（45．2±5．4）％]、CD4／CD8（2．1±0．3）及NK细胞计数[（19．5±6．6）％]明显高于对照组[（38．1±2．9）％、1．6±0．2及（15．4±5．6）％,均P〈0．05]。两组患者院内感染发生率[6．1％（2／33）比17．6％（6／34）,P〉0．05]和肠功能恢复时间[（69．3±9．5）h比（70．1±11．6）h,P〉0．05]的差异无统计学意义,但住院时间治疗组明显短于对照组[（17±3．8）d比（21±4．2）d,P〈0．05]。结论对合并糖尿病的胃肠道肿瘤患者。应用免疫微生态肠内营养能降低胰岛素抵抗,改善免疫状态,促进患者术后恢复。     

乌司他丁对肝癌患者高强度聚焦超声治疗后细胞免疫功能的影响

目的 探讨乌司他丁对肝癌患者高强度聚焦超声（HIFU）治疗后细胞免疫功能的影响。方法 择期行HIFU治疗的肝癌患者20例，ASAⅡ或Ⅲ级，随机分为2组（n=10）：对照组（C组）和乌司他丁组（U组）。U组于麻醉诱导后缓慢静脉注射乌司他丁20万U，C组输注等量生理盐水。于HIFU治疗前即刻（T1）、治疗结束即刻（T2）及治疗结束后24h（T3）采取肘静脉血样2ml，使用流式细胞仪检测CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞和NK细胞百分率。结果 与T1比较，C组T2、T3时CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞百分率差异无统计学意义（P〉0．05），T2时CD4^＋，CD8^＋比值增高，T2、T3时NK细胞百分率增高（P〈0．05），U组T2、T3时CD3^＋T淋巴细胞百分率差异无统计学意义（P〉0．05），T2时CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞百分率增高（P〈0．05），T2、T3时CD4^＋／CD8^＋比值、NK细胞百分率增高（P〈0．01）；与C组比较，T2、T3时U组NK细胞百分率增高（P〈0．05）。结论 乌司他丁可有效提高HIFU治疗肝癌患者的细胞免疫功能。     

地佐辛联合芬太尼在乳腺癌术后自控静脉镇痛中的应用价值

目的探讨地佐辛联合芬太尼在乳腺癌术后自控静脉镇痛中的意义。方法选择美国麻醉协会分级I一Ⅲ级行乳腺癌手术治疗的患者126例,均采用气管插管复合静脉麻醉,术后行自控静脉镇痛。患者按均衡随机分组的方法分为对照组和研究组,对照组（63例）术后仅行芬太尼静脉镇痛,研究组（63例）术后采用地佐辛联合芬太尼静脉镇痛。观察两组患者术后12、24及48h的疼痛评分、镇静评分和舒适度评分。并比较两组患者术后自控静脉镇痛的不良反应发病率。分别于术前1天和术后第1大、第7天观察患者T细胞亚群和IL-2水平的变化。结果在各时间点,研究组视觉模拟评分明显低于对照组,镇静效果评分明显高于时照组（P〈0．05）。两组舒适度评分差异无统计学意义（P〉0．05）。对照组和研究组不良反应发病率差异无统计学意义（P〉0．05）。术前1天、术后第1天,研究组与对照组CD4＋、CD8＋T细胞、CD4＋／CD8＋、IL-2比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。术后第7天,对照组CD4＋、CD4＋／CD8＋、IL-2分别为（45．68±5．82）％、（1．45±0．25）、（1．51±0．37）μg/L,研究组CD4＋、CD4＋／CD8＋、IL-2分别为（52．35±6．34）％、（1．82±0．31）、（1．75±0．48）μg/L,与对照组比较,研究组CD4＋、CD4＋／CD8＋、IL-2明显升高（P〈0．05）;而对照组和研究组CD8＋T细胞比例分别为（26．25±3．37）％、（21．23±2．78）％,二者之间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论地佐辛联合芬太尼用于乳腺癌术后自控静脉镇痛可以提高静脉镇痛的效果,减少静脉镇痛的不良反应,对患者术后免疫功能的改善也有积极的作用。     

索拉非尼联合树突状细胞与细胞因子诱导的杀伤细胞对肝癌生长与侵袭转移的作用

目的探讨索拉非尼联合树突状细胞（DC）与细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）对肝癌生长与侵袭转移的作用。方法采集健康自愿者外周血50mL,体外培养健康成人细胞因子诱导的DC和CIK。160只雄性ICR小鼠建立H22肝癌细胞小鼠原位肝癌模型,采用随机数字表法分为4组：（1）生理盐水组：仅经胃灌注与索拉非尼组同等的生理盐水;（2）索拉非尼组：经胃灌注索拉非尼100μg/g,1次/d;（3）DC—CIK细胞组：经腹腔注射DC—CIK共培养细胞,1×10^7／只,1次／3d;（4）索拉非尼联合DC—CIK细胞组：经胃灌注索拉非尼,同时腹腔注射DC—CIK共培养细胞,剂量同前。每组40只,治疗3周。各组取20只处死,获取外周血和肝脏肿瘤组织。采用ELISA法检测AFP水平,HE染色检测肿瘤坏死程度,免疫组织化学染色分别检测肿瘤组织Ki-67和CD34表达。各组余下20只小鼠,观察生存时间。多组比较采用单因素方差分析,组问比较采用LSD检验。结果DC和CIK诱导、培养成功。生理盐水组、索拉非尼组、DC—CIK组和索拉非尼联合DC—CIK组AFP分别为（0．675±0．177）ng／L、（0．379±0．052）ng／L、（0．415±0．028）ng／L和（0．288±0．012）ng／L,4组比较,差异有统计学意义（F=0．415,P〈0．05）。生理盐水组肝内和腹腔转移数目分别为（21．2±1．3）个和（29．7±7．6）个,索拉非尼组分别为（16．4±1．6）个和（17．4±1．8）个,DC—CIK组分别为（20．2±1．7）个和（26．4±1．7）个,索拉非尼联合DC—CIK组分别为（15．2±1．3）个和（15．2±1．3）个,4组比较,差异有统计学意义（F=2．137,3．271,（P〈0．05）。生理盐水组、索拉非尼组、DC—CIK组和索拉非尼联合DC—CIK组抑瘤率分别为0、21％±3％、9％4-3％和24％±5％,4组比较,差异有统计学意义（F=3．715,P〈0．05）。生理盐水组、索拉非尼组、DC—CIK组和索拉非尼联合DC—CIK组生存时间分别为（18．2±2．5）d、（21．6±2．1）d、（24．3±2．8）d和（25．4±1．4）d,4组比较,差异有统计学意义（F=6．247,P〈0．05）。结论索拉非尼联合DC与CIK免疫治疗能够显著延长肝癌荷瘤小鼠生存时间,抑制肝肿瘤生长和转移。     

乌司他丁对烫伤大鼠高迁移率族蛋白B1表达及CD4＋CD25＋调节性T细胞的影响

目的：研究乌司他丁对烫伤大鼠脾脏高迁移率族蛋白B1（HMGBl）的表达以及淋巴细胞免疫功能的影响。方法：96只Wistar大鼠随机分为假烫组、烫伤组和烫伤＋乌司他丁治疗组（n=32）。后两组大鼠制作30％TBSAⅢ度烫伤模型,伤后即刻腹腔注射林格液或乌司他丁＋林格液抗休克,创面涂碘伏抗炎。假烫组于37℃水浴中12S行假烫。各组分别于伤后1、3、5、7d腹主动脉无菌采血,并分离获取大鼠脾脏组织。Westernblot检测大鼠脾组织HMGBl的表达,流式细胞术检测血液中CD4＋CD25＋调节性T细胞（CD4＋CD25＋Treg）的变化。结果：与假烫组比较,烫伤组大鼠脾组织HMGBl水平在伤后1～7d显著升高（P〈O．01）,伤后3d时表达量最高,分别为0．66±0．10、0．22±0．05（t=10．91,P〈0．01）;乌司他丁治疗后1～7dHMGB1水平有不同程度的降低,其中伤后5d表达量最低,分别为0．32±0．07、0．63±0．07（t=9．61,P〈0．01）。与假烫组比较,烫伤组CD4＋CD25＋Treg表达在伤后逐渐上升,伤后3d时达到峰值（5．42±0．56）％;乌司他丁治疗后,CD4＋CD25＋Treg于伤后3、5、7d显著低于烫伤组（P〈O．01）,伤后5d时最低（2．23±0．21）％。结论：严重烫伤后大鼠脾脏HMGB1水平的持续升高对其调节性T细胞的异常具有显著的影响;乌司他丁作为一种抗炎药物能够降低伤后HMGB1的表达,改善烫伤大鼠的免疫功能。     

术中腹腔灌注化疗及术后营养支持对进展期胃癌术后肠黏膜屏障功能及免疫功能的影响

目的探讨术中腹腔灌注化疗（HIIC）及术后营养支持对进展期胃癌患者肠黏膜通透性和免疫功能的影响。方法将2007年12月至2008年12月间江苏省肿瘤医院胃肿瘤诊疗中心收治的65例进展期胃癌,患者按随机数字表法随机分为EN组（术后早期肠内营养,20例）、HIIC加EN组（HIIC加术后早期肠内营养．22例）和HIIC加PN组（HIIC加术后肠外营养,23例）。分别于术前1d及术后3、7、12d,应用高效液相色谱检测其尿L／M比值,应用流式细胞术检测外周血CD4＋、CD8＋和自然杀伤（NK）细胞比例及CD4／CD8细胞比值。结果术前1d,EN组、HIIC加EN组和HIIC加PN组患者L／M值分别为0．0280＋0．0183、0．0305＋0．0208和0．0298±0．0229;术后3d,3N患者L／M值均明显升高（0．1235±0．0611、0．1648±0．0571和0．1702±0．0628）,与术前比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）,其中HIIC加EN组和HIIC加PN组明显高于EN组（P〈0．05）;之后,3组L／M值均开始回落．至术后12d,EN组（0．0278±0．0217）和HIIC加EN组（0．0336±0．0235）L／M值已回落至术前水平（均P〉0．05）。而HIIC加PN组（0．0616±0．0430）仍明显高于术前水平及其他两组（均P〈0．05）。与术前1d相比,术后12dEN组和HIIC加EN组患者CD4＋细胞比例、CD4／CD8比值均明显升高（均P〈0．05）;且HIIC加EN组和HIIC加PN组CD4＋细胞比例显著低于EN组（均P〈0．05）。结论HIIC会加重进展期胃癌患者术后肠黏膜通透性的损伤,并一定程度地抑制细胞免疫功能：而术后早期肠内营养支持能够改善HIIC引起的肠黏膜通透性损害。     

雷公藤内酯醇在小鼠同种异体胰岛移植中的抗排斥作用

目的探讨雷公藤内酯醇（triptolide,TPT）在小鼠同种异体胰岛移植中的抗排斥作用及其机理。方法采用BALB/c小鼠作为供体,进行胰岛分离,以链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）诱导的C57BL/6糖尿病小鼠作为受体,行左肾被膜下胰岛移植。将移植后糖尿病小鼠随机（随机数字表法）分为3组,每组8只。于胰岛移植术后前5 d分别给予腹腔注射1%吐温80溶剂（对照组）、TPT 50μg/kg（L-TPT组）和100μg/kg（H-TPT组）,之后隔天注射1次,至术后第14天结束。术后监测受体血糖水平变化;并于术后第10天每组随机（随机数字表法）选取3只小鼠,切取左侧肾脏行病理学检查,流式细胞术检测脾淋巴细胞中CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞比例。结果对照组、L-TPT组和H-TPT组移植胰岛的中位存活时间分别为12.6 d（9～16 d）、21.4 d（14～27 d）和27.6 d（19～34 d）;脾淋巴细胞中CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞比例分别为（5.2±0.6）%、（12.0±1.3）%和（15.7±1.8）%。与对照组相比,L-TPT组和H-TPT组小鼠移植胰岛的中位存活时间明显延长（P〈0.05）,CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞比例显著增高（P〈0.05）。结论 TPT通过上调移植受体CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞比例,减轻了胰岛移植后的排斥反应,显著延长了移植胰岛的存活时间,其免疫抑制作用呈剂量依赖性。     

胃癌CD133阳性细胞亚群肿瘤起始细胞样特性的检测

目的 探讨人胃癌细胞CD133＋亚群的分选及其特性的鉴定.方法 对50例胃癌原发灶和癌旁胃黏膜组织标本行免疫组织化学染色及Western blot检测CD133蛋白的表达.采用流式细胞仪检测不同分化胃癌细胞系CD133所占百分比,免疫磁珠法分选CD133＋细胞亚群,悬浮培养并观察其生长特性,并检测CD133阳性细胞裸鼠皮下接种致瘤能力.单细胞克隆观察单个CD133＋细胞生长特性,半定量反转录聚合酶链反应法鉴定相关干细胞标记的表达.结果 CD133蛋白多定位于胃癌原发灶黏膜及黏膜下层的肿瘤细胞膜表面,其相对表达量高于癌旁胃黏膜组织（P＜0.05）.不同分化程度的人胃癌细胞系KATO-Ⅲ、SGC-7901、AGS及MKN-45中CD 133＋亚群所占相对百分比为（28±2）％、（17±2）％、（6±2）％及（4±2）％.人胃癌细胞系KATO-Ⅲ分选后阳性组中CD133＋亚群比例分别为（91±3）％;培养1周后,达到（95±2）％,并不断增殖形成细胞球.而且其增殖能力强于阴性细胞[群体倍增时间分别为（21±3）h和（40±8）h,P＜0.05].CD133阳性组和未分选组细胞裸鼠皮下接种时成瘤率分别为100％和80％;而CD133阴性组不成瘤,CD133阳性组移植瘤平均体积及重量均大于未分选组（P＜0.05,P＜0.05）.单克隆形成实验示单个CD133＋细胞可形成新的细胞克隆.半定量RT-PCR检测示其表达干细胞标记物Oct-4、Nanog、Sox-2、Musashi-1及EGFR.结论 体外可成功分离、纯化和扩增人胃癌细胞CD133＋亚群,其具有自我更新、增殖能力及较强的致瘤能力,并表达部分干细胞相关基因.     

NOD小鼠未成熟树突状细胞体外诱导淋巴细胞生成并扩增调节性T细胞的研究

目的 探索非肥胖糖尿病(non-obese diabetic,NOD)小鼠未成熟树突状细胞(immature dendritic cell,imDC)诱导并扩增调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)的优化方案.方法 分离、培养NOD小鼠骨髓来源的imDC和淋巴细胞,并进行混合淋巴细胞培养,分别加...     

早期肠内营养对食管癌患者术后免疫功能和临床结局的影响

目的探讨早期肠内营养（EEN）对食管癌术后患者机体免疫功能和临床结局的影响。方法选取2011年3月至2012年7月在哈尔滨医科大学附属第四医院胸外科行根治性手术治疗的食管癌患者,采用信封法随机分为术后早期肠内营养组（EEN组,30例）和术后按传统治疗方案给予全肠外营养组（TPN组,30例）,两组均行营养支持7d。两组患者分别于术前1d和术后第1、3、7天检测免疫学指标：CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD4＋CD8＋比值;营养指标：血清白蛋白（ALB）和前清蛋白（PA）水平。并记录术后首次排气时间、术后住院时间、住院总费用及术后并发症。结果EEN组和TPN组患者术后首次排气时间[（66．5±7．3）h比（75．1±6．8）h,P=0．000],住院时间[（7．8±1．1）d比（9．3±1．3）d,P=0．000]和住院总费用[（3．62±0．38）万元比（3．97±0．40）万元,P=0．001]比较,差异均有统计学意义。两组术后并发症发生率的差异无统计学意义[13．3％（4／30）比20．0％（6／30）,P=-0．488]。术后第3和第7天EEN组患者CD3’、CD4’、CD4＋／CD8＋、ALB和PA均明显高于TPN组（均P〈0．05）：而CD8＋水平显著下降,与TPN组相比,差异亦有统计学意义（尸〈0．05）。结论早期肠内营养用于食管癌术后患者可促进胃肠道功能早期恢复,改善患者的营养状态,降低对免疫功能影响,加速患者的康复。     

消癌平注射液联合化疗对中晚期肺癌患者CD4＋CD25＋FOXP3＋调节型T细胞的影响

目的探讨消癌平注射液联合化疗对中晚期肺癌患者CD4＋CD25＋FOXP3＋调节型T细胞的影响。方法 71例Ⅲ～Ⅳ期非小细胞肺癌患者随机分为治疗组与对照组,治疗组36例采用化疗联合消癌平注射液;对照组35例单独采用化疗,两组化疗均采用GP方案。完成2周期后,通过流式细胞仪测定两组患者治疗前后外周血中CD4＋CD25＋FOXP3＋调节型T细胞比例。结果治疗后治疗组患者CD4＋FOXP3＋T细胞占CD4＋T细胞及CD4＋CD25＋T细胞的比例分别为（6.2±2.4）%和（27.6±6.0）%,而对照组分别为（8.2±0.5）%和（32.1±7.6）%,两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。CD4＋T细胞占总淋巴细胞的比例,治疗组较对照组明显提高（P〈0.05）。结论消癌平注射液是一种较为理想的免疫增强剂,联合化疗可明显改善非小细胞肺癌患者的细胞免疫功能。     

Low‐dose methotrexate may preserve a stronger antileukemic effect than that of cyclosporine after modified donor lymphocyte infusion in unmanipulated haploidentical HSCT

To compare the impacts of low‐dose methotrexate (MTX) with cyclosporine (CSA) on graft‐versus‐host disease (GVHD) and graft‐versus‐leukemia (GVL) effect after haploidentical modified donor lymphocyte infusion (DLI). Fifty‐five consecutive patients who had relapsed acute leukemia after haploidentical hematopoietic stem cell transplantation (HSCT) and received modified DLI were retrospectively studied. Forty‐one patients received CSA and 14 received low‐dose MTX after DLI to prevent DLI‐associated GVHD. The incidence of acute GVHD and grade 2–4 acute GVHD in MTX group showed a trend toward being higher than in CSA group (61.0% vs. 37.3%, p = 0.198 and 61.0% vs. 35.5%, p = 0.155). However, no significant difference in the incidence of grade 3–4 acute GVHD between two groups (p = 0.982) was observed. Moreover, compared with CSA, patients treated with MTX had lower re‐relapse rate (38.1% vs. 80.8%, p = 0.029), better disease‐free survival (DFS) (51.9% vs. 15.6%, p = 0.06), and higher absolute lymphocyte counts at 30, 45, 60, and 90 d after modified DLI (p < 0.05). This study suggested that after haploidentical modified DLI, low‐dose MTX is at least as effective as CSA in the prevention of DLI‐associated GVHD and probably allowed stronger GVL effect than CSA. This phenomenon was probably due to a direct antitumor effect and a better reconstitution of lymphocytes after modified DLI induced by low‐dose MTX.