LINC00511靶向miR-497-5p调控胃癌细胞增殖、迁移和侵袭及机制研究

目的:探讨LINC00511对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:将pcDNA、pcDNA-LINC00511、si-NC、si-LINC00511、miR-NC、miR-497-5p分别转染至MGC-803细胞中,分别记为pcDNA组、pcDNA-LINC00511组、si-NC组、si-LINC00511组、miR-NC组、miR-497-5p组;将si-LINC00511质粒分别与anti-miR-NC、anti-miR-497-5p共转染至MGC-803细胞中,分别记为si-LINC00511+anti-miR-NC组、si-LINC00511+anti-miR-497-5p组。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-497-5p和LINC00511表达水平;蛋白质印迹（Western Blot）法检测细胞周期素D1（cyclin D1,CyclinD1）、p21、基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2,MMP2）、基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase 9,MMP9）蛋白表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因实验检测LINC00511和miR-497-5p的靶向关系。结果:与正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,胃癌细胞MGC-803、MKN-45、AGS中miR-497-5p表达水平显著降低,LINC00511表达水平显著升高。LINC00511靶向调控miR-497-5p的表达。抑制LINC00511表达和miR-497-5p过表达可降低细胞活性和迁移、侵袭数量,降低CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达水平,提高p21蛋白表达水平。干扰miR-497-5p表达逆转了抑制LINC00511表达对胃癌MGC-803细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:抑制LINC00511表达可抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与miR-497-5p表达有关,将为胃癌的治疗提供新思路和新靶点。     

miR-93-5p靶向CCNG2基因对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的:研究miR-93-5p对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响，并探讨其机制。方法:运用qRT-PCR、Western blot检测甲状腺癌细胞SW579、人正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1中miR-93-5p、CCNG2的表达；将anti-miR-93-5p组（转染anti-miR-93-5p）、anti-miR-NC组（转染anti-miR-NC）、pcDNA组（转染pcDNA）、pcDNA-CCNG2组（转染pcDNA-CCNG2）、anti-miR-93-5p+si-con组（共转染anti-miR-93-5p和si-con）、anti-miR-93-5p+si-CCNG2组（共转染anti-miR-93-5p和si-CCNG2），均用脂质体法转染至SW579细胞；MTT法检测各组细胞的增殖；流式细胞术检测各组细胞的凋亡；双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果:与人正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1相比，甲状腺癌细胞SW579中miR-93-5p表达显著升高，CCNG2表达显著降低（P<0.05）；抑制miR-93-5p、过表达CCNG2均可抑制SW579细胞增殖，促进凋亡；miR-93-5p可直接抑制SW579细胞中CCNG2的表达，敲减CCNG2可逆转抑制miR-93-5p对SW579细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。结论:抑制miR-93-5p可抑制甲状腺癌细胞的增殖，促进凋亡，其机制可能与靶向负调控CCNG2有关，将可为分化型甲状腺癌的预防和治疗提供新靶点。     

miR-875-5p通过靶向USF2抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨miR-875-5p对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法:采用qPCR法检测胃癌细胞BGC-823、HGC-27、MGC-803、SGC-7901、AGS、MKN-45和胃黏膜上皮细胞GES-1中miR-875-5p的表达水平。利用脂质体转染技术,分别将miR-875-5p模拟物/抑制剂(mimic/inhibitor)及其阴性对照质粒(miR-NC/Anti-miR-NC)转染至AGS细胞/MKN-45细胞,构建过表达/抑制miR-875-5p的细胞模型,空白对照组(Control组)不转染。通过CCK-8、克隆形成、Transwell等实验分别检测miR-875-5p表达变化对细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭的影响。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-875-5p与上游刺激因子2(USF2)的靶向关系,WB实验验证miR-875-5p对USF2的调控作用并检测USF2蛋白的表达。构建MKN-45细胞裸鼠移植瘤模型,验证miR-875-5p过表达对MKN-45细胞成瘤能力的影响。结果:miR-875-5p在6种胃癌细胞中表达水平显著低于胃黏膜上皮细胞GES-1(均P<0.01)。与Control组和miR-NC组相比,miR-875-5p mimic组AGS细胞的增殖、克隆形成率、迁移和侵袭细胞数,以及USF2蛋白的表达均显著降低(P<0.05或P<0.01);miR-875-5p inhibitor组MKN-45细胞的增殖、克隆形成率、迁移和侵袭细胞数,以及USF2蛋白的表达均显著提高(P<0.05或P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证明,miR-875-5p能够直接靶向USF2基因。体内成瘤实验结果表明,过表达miR-875-5p显著抑制MKN-45细胞移植瘤的生长(均P<0.01)。结论:miR-875-5p通过靶向USF2抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

lncRNA FOXD2-AS1 通过调控miR-185-5p/CCND2 分子轴诱导胃癌细胞MGC-803 对阿帕替尼的耐药性

目的:探讨lncRNA FOXD2-AS1（FOXD2-AS1）通过调控miR-185-5p/CCND2 分子轴参与胃癌细胞对阿帕替尼耐药性的分子机制。方法：收集无锡市第五医院2016 年4 月至2017 年12 月间收治的资料完整的25 例胃癌患者癌组织和相应癌旁组织标本,采用qRT-PCR 检测FOXD2-AS1、miR-185-5p 和CCND2 在胃癌组织或细胞系中的表达水平;采用CCK-8、Transwell 和AnnexinV-FITC/PI 双染流式术检测胃癌细胞对阿帕替尼药物的敏感性;采用双荧光素酶报告基因验证FOXD2-AS1、miR-185-5p 和CCND2 的靶向关系,并通过Western blotting 和qRT-PCR 检测其调控关系。结果：FOXD2-AS1 在胃癌组织和阿帕替尼耐药细胞株中高表达;同时,过表达FOXD2-AS1 可促进胃癌MGC-803/AP细胞对阿帕替尼的耐药性。双荧光素酶报告基因证实FOXD2-AS1 靶向作用miR-185-5p 并下调其表达水平。miR-185-5p 通过抑制胃癌MGC-803/AP 细胞增殖、侵袭和促进凋亡进而下调FOXD2-AS1 对胃癌细胞阿帕替尼耐药性的促进作用。miR-185-5p 可靶向负调控CCND2 的表达,FOXD2-AS1 通过下调miR-185-5p 对CCND2 的抑制作用进而促进胃癌MGC-803/AP细胞增殖、侵袭和抑制凋亡,从而上调胃癌细胞对阿帕替尼的耐药性。结论：FOXD2-AS1 通过调控miR-185-5p/CCND2 分子轴诱导胃癌细胞对阿帕替尼的耐药性。     

lncRNA PSMA3-AS1调节miR-142-3p/HMGA2轴对卵巢癌恶性进展的影响

目的:探讨lncRNA PSMA3-AS1通过调节miR-142-3p/HMGA2轴对卵巢癌恶性进展的影响及其机制。方法:选择2019年3月至2022年7月期间在本院确诊的53例卵巢癌患者作为研究对象,收集患者卵巢癌组织及癌旁组织。体外培养人正常卵巢细胞HOSEpiC和卵巢癌细胞系SKOV3、OVCAR3、A2780、COV362,RT-qPCR检测卵巢癌细胞中lncRNA PSMA3-AS1表达,筛选最佳干预细胞系。双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA PSMA3-AS1、HMGA2与miR-142-3p的靶向关系;将SKOV3细胞分为si-NC组、si-PSMA3-AS1组、si-PSMA3-AS1+anti-miR-NC组、si-PSMA3-AS1+anti-miR-142-3p组、miR-NC组、miR-142-3p mimics组、miR-142-3p mimics+pcDNA组、miR-142-3p mimics+HMGA2组,检测细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭;Western blot检测Ki67、Cyclin D1、Bcl-2、cleaved caspase 3、HMGA...     

miR-26a/b调控p53/MDM2通路对胃癌细胞凋亡的影响

目的 探讨miR-26a/b调控p53/MDM2通路对胃癌细胞凋亡的影响。方法 实时荧光定量PCR检测胃癌细胞系MGC803、MKN-45和MKN-28中miR-26a/b的表达水平,荧光素酶报告系统分析miR-26a/b与MDM2 3’非翻译区（3’UTR）的结合情况;将化学合成miR-26a/b前体分子mimics和无关序列转染胃癌细胞MKN-45,化学合成miR-26a/b inhibitor转染胃上皮细胞GES-1后,Western blotting检测MDM2、p53及其下游分子p21和Bcl-2的表达,MTT法检测转染24、48、72 和96 h的细胞增殖情况;通过Annexin Ⅴ/PI双染检测miR-26a/b对MKN-45细胞凋亡情况。结果 与永生化胃上皮细胞GES-1相比,miR-26a/b在肿瘤细胞系MGC803、MKN-45和MKN-28中的表达均下调,在MKN-45中表达水平最低;荧光素酶活性检测显示,miR-26a/b过表达抑制MDM2 3’UTR报告载体（Wild）的荧光素酶活性,而对3’UTR突变型报告载体（Mutation）荧光素酶活性无明显影响。miR-26a/b抑制MKN-45细胞中MDM2表达并增强p53及下游分子表达,而在GES-1细胞中抑制miR-26a/b可以增强MDM2表达,降低p53及下游分子表达。MTT结果显示,miR-26a/b抑制MKN-45细胞的增殖,miR-26a/b inhibitor则明显促进GES-1细胞的增殖。通过AnnexinⅤ/PI检测细胞凋亡发现,miR-26a/b过表达的MKN-45细胞的凋亡率高于对照细胞（P＜0.01）。结论 miR-26a/b 能与MDM2 3’UTR 特异结合,调控p53/MDM2通路影响胃癌细胞的增殖及凋亡。     

miR-221-5p 通过靶向调控 ALDH1A2 对胃癌细胞生物学 行为的影响

目的 探讨 miR-221-5p 与醛脱氢酶 1 家族成员 A2(ALDH1A2)的靶向关系及其对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮 间质转化(EMT)的影响。 方法 收集 2020 年 7 月至 2022 年 7 月于岳池县人民医院接受根治性胃癌切除术的 50 例胃癌患者的 胃癌组织及其癌旁正常组织标本,体外培养的细胞株包括人正常胃黏膜上皮细胞系 GES-1 和人胃癌细胞系 BGC-803、AGS、 SGC-7901、BGC-823、HGC-27。 实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测组织和细胞中 miR-221-5p、ALDH1A2 mRNA 的 表达,Pearson 相关分析胃癌组织中二者的相关性,分析 miR-221-5p 表达与患者临床病理参数的关系;生物信息学预测和双 荧光素酶实验验证 miR-221-5p 对 ALDH1A2 的靶向调控作用;将 HGC-27 细胞分为对照组、抑制物-NC 组、miR-221-5p 抑制 物组、模拟物 NC 组、miR-221-5p 模拟物组、miR-221-5p 模拟物+pcDNA3. 1 组和 miR-221-5p 模拟物+pcDNA3. 1-ALDH1A2 组,转染相应的质粒;分别采用 MTT 法、克隆形成实验、Transwell 小室实验、划痕实验、流式细胞术检测细胞的增殖、侵袭、迁 移、凋亡及细胞周期分布情况;蛋白质印迹法分析细胞中 EMT 相关蛋白表达情况。 结果 miR-221-5p 在胃癌组织和细胞中显 著高表达,ALDH1A2 mRNA 表达显著下调,二者在胃癌组织中呈明显负相关(P<0. 05);miR-221-5p 表达与胃癌患者的 TNM 分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移有明显相关性(P<0. 05);miR-221-5p 靶向抑制 ALDH1A2 表达;与 anti-miR-NC 组相比, anti-miR-221-5p 组细胞的 OD 值、划痕愈合率、N-cadherin、Vimentin 蛋白、miR-221-5p 表达水平、S 期细胞比例明显下降, E-cadherin、α-catenin、ALDH1A2 蛋白表达水平、G0 / G1 期细胞比例明显升高,单克隆形成、侵袭数目明显减少(P<0. 05);与 miR-NC 组相比,miR-221-5p 组细胞获得与上述相反的结果;上调 ALDH1A2 表达能够逆转 miR-221-5p 对 HGC-27 细胞恶 性生物学行为的影响。 结论 miR-221-5p 过表达可能通过靶向下调 ALDH1A2 表达促进胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭、EMT 和 细胞周期进程,抑制细胞凋亡。     

lncRNA MEG3通过调控miR-21表达增加肺癌细胞放射敏感性

目的 探讨长链非编码RNA (lncRNA) MEG3对肺癌细胞H1299的放射敏感性调控机制。方法 运用qRT-PCR法检测具有放射抗性的H1299细胞中MEG3、miR-21-5p的表达。将过表达对照组(转染pcDNA3.1)、过表达MEG3组(转染pcDNA3.1-MEG3)、抑制miR-NC组(转染anti-miR-NC)、抑制miR-21-5p组(转染anti-miR-21-5p)、过表达MEG3+过表达miR-NC组(转染pcDNA3.1-MEG3和miR-NC)、过表达MEG3+过表达miR-21-5p组(转染pcDNA3.1-MEG3和miR-21-5p mimics)均用脂质体法转染。克隆形成实验检测细胞存活分数,流式细胞术检测细胞凋亡,双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中MEG3与miR-21-5p的结合力。结果 与正常肺上皮细胞相比,H1299细胞中MEG3表达明显降低,miR-21-5p表达明显升高;过表达MEG3或抑制miR-21-5p均可促进H1299细胞凋亡,增强放射敏感性;MEG3可靶向调控miR-21-5p的表达。过表达miR-21-5p可逆转MEG3对H1299细胞放射增强作用。结论 lncRNA MEG3可增强H1299细胞放射敏感性,其机制也许可能与靶向miR-21-5p有关。     

miR-1271-5p在胃癌组织的表达及对胃癌AGS细胞生物学行为的影响

目的 探讨miR-1271-5p在胃癌组织和细胞中的表达及其对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法 收集2011年6月至2014年6月广西医科大学附属肿瘤医院90例手术切除胃癌组织及相应癌旁组织。采用qRT-PCR法检测胃癌组织及相应癌旁组织，人胃癌细胞系（SGC-7901、MGC-803、AGS）和人正常胃黏膜上皮细胞系GES1中miR-1271-5p的表达情况。利用瞬时转染法将miR-1271-5p mimics（过表达miR-1271-5p组）和miR-NC（阴性对照组）分别转染胃癌AGS细胞，建立过表达miR-1271-5p的胃癌AGS细胞系，然后采用CCK-8法检测转染后的胃癌AGS细胞增殖能力，平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力，Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果 miR-1271-5p在胃癌组织和胃癌细胞（SGC-7901、MGC-803、AGS）中的表达均低于相应癌旁组织及人正常胃黏膜上皮GES1细胞（均P<0.01）。与阴性对照组相比，过表达miR-1271-5p组胃癌AGS细胞增殖活力降低（P<0.01），细胞集落形成数减少（P<0.01），迁移和侵袭细胞数量亦减少（P<0.01）。结论 miR-1271-5p在胃癌组织和细胞中低表达，上调miR-1271-5p可抑制胃癌AGS细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-509-5p通过靶向HMGA2调控非小细胞肺癌H1299细胞增殖、迁移和侵袭及其机制探讨

目的:探讨miR-509-5p通过靶向HMGA2对非小细胞肺癌H1299细胞增殖、迁移和侵袭的调控作用及其机制。方法:体外培养人正常肺细胞株CCD-19LU和肺腺癌细胞株A549、H1299,采用qRT-PCR检测miR-509-5p的表达;转染miR-509-5p mimics构建miR-509-5p过表达的H1299细胞后,采用MTT和克隆形成实验检测细胞的增殖能力,Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力,Western blot检测TWIST1、β-catenin和AXIN1蛋白的表达。通过生物信息学分析预测HMGA2可能是miR-509-5p的靶点,并采用双荧光素酶报告基因系统和Western blot检测miR-509-5p和HMGA2的靶向关系。转染干扰质粒载体pLL2G-shHMGA2构建HMGA2沉默的H1299细胞,采用MTT实验、克隆形成实验和Transwell小室实验检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力,Western blot检测TWIST1、β-catenin和AXIN1蛋白的表达。结果:与CCD-19LU细胞相比,A549和H1299细胞中miR-509-5p表达明显降低（P<0.05）,且在H1299细胞中低于在A549细胞中的表达（P<0.05）。与miR-NC组相比,miR-509-5p组细胞的增殖、迁移和侵袭能力均明显减弱（P<0.05）,TWIST1和β-catenin蛋白的表达明显降低（P<0.05）,而AXIN1蛋白的表达明显升高（P<0.05）;野生型miR-509-5p组细胞的荧光素酶活性明显低于miR-NC组（P<0.05）,而野生型anti-miR-509-5p组细胞的荧光素酶活性明显明显高于anti-miR-NC组（P<0.05）;miR-509-5p过表达可抑制HMGA2表达,反之则促进其表达。沉默HMGA2表达后,H1299细胞的变化趋势与miR-509-5p过表达的结果相一致。结论:miR-509-5p可通过靶向HMGA2调控非小细胞肺癌H1299细胞的增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

miR-325-3p靶向CLDN1基因调控胃癌上皮间质转化和侵袭转移

目的 探讨miR-325-3p靶向CLDN1基因对胃癌上皮间质转化和侵袭转移的影响。方法 选取人胃黏膜上皮细胞株GES-1以及人胃癌细胞株HGC27、SGC-7901、MKN-45和MGC-803,并检测细胞中miR-325-3p和CLDN1的表达。双荧光素酶报告实验验证miR-325-3p和CLDN1的靶向关系,干预胃癌细胞中miR-325-3p和CLDN1的表达,qRT-PCR和Western blot检测细胞中N-cadherin、Vimentin和MMP2的表达,CCK-8检测细胞增殖活力,Transwell和流式细胞仪分别检测细胞侵袭和凋亡能力。结果 相对于GES-1细胞,MGC-803细胞中miR-325-3p表达降低而CLDN1表达增高（均P<0.05）,双荧光素酶报告实验证实CLDN1为miR-325-3p的靶基因。过表达miR-325-3p能够抑制胃癌细胞的增殖、侵袭和上皮间质转化,促进胃癌细胞凋亡,抑制miR-325-3p则能够促进胃癌细胞的增殖、侵袭和上皮间质转化,抑制胃癌细胞凋亡（均P<0.05）。而过表达CLDN1则能够逆转miR-325-3p过表达对胃癌细胞生物学行为的影响。结论 miR-325-3p能够靶向抑制CLDN1进而抑制胃癌细胞的侵袭转移和上皮间质转化,促进胃癌细胞凋亡,miR-325-3p有望成为治疗胃癌的新靶点。     

LncRNA NR2F2-AS1 induces epithelial-mesenchymal transition of non-small cell lung cancer by modulating BVR/ATF-2 pathway via regulating miR-545-5p/c-Met axis

Non-small cell lung cancer (NSCLC) is one type of the most common cancers, which results in the major death worldwide. This study focuses on the understanding of the molecular mechanism of lncRNA NR2F2-AS1 and its regulation on epithelial-mesenchymal transition (EMT) in the development of NSCLC. Expressions of lncRNA NR2F2-AS1, miR-545-5p, c-Met, biliverdin reductase (BVR), ATF-2 and EMT-related markers in NSCLC tissues and cells were measured by western blotting and RT-qPCR assays. The impact of lncRNA NR2F2-AS1 and miR-545-5p on the cell proliferation, migration, invasion and EMT were analyzed by CCK-8, colony formation, wound healing and transwell assays. The interactions among lncRNA NR2F2-AS1, miR-545-5p and c-Met predicted by bioinformatic analysis were evaluated through dual luciferase reporter assay and fluorescence in situ hybridization (FISH). After generating tumor xenografts, immunohistochemistry was utilized to measure the expression of Ki-67 and EMT-related proteins in vivo. Our results showed that lncRNA NR2F2-AS1, c-Met, BVR and ATF-2 were overexpressed while miR-545-5p was silenced in NSCLC tissues and cells. Silencing of lncRNA NR2F2-AS1 or upregulating miR-545-5p significantly inhibited the cell proliferation, migration, invasion and EMT process. The EMT process could be inhibited by suppressing c-Met/BVR/ATF-2 axis. The tumor xenograft experiments demonstrated that the tumor growth and EMT process were significantly inhibited by silencing lncRNA NR2F2-AS1 or overexpression of miR-545-5p in vivo. LncRNA NR2F2-AS1 promoted the NSCLC development through suppressing miR-545-5p to activate EMT process through c-Met/BVR/ATF-2 axis. Our study indicated that lncRNA NR2F2-AS1 and miR-545-5p could be used as potential therapeutic targets to improve NSCLC treatment.     

胃癌细胞外泌体lncRNA LOXL1-AS1诱导M2型巨噬细胞极化功能及机制研究

目的:探究胃癌细胞外泌体lncRNA LOXL1-AS1对巨噬细胞分化的影响及机制。方法:差速离心法提取胃癌细胞株MGC-803、SGC-7901、MKN-45和人胃黏膜细胞GES-1所分泌的外泌体（分别记为MGC-803 exo、SGC-7901 exo、MKN-45 exo和GES-1 exo）,人单核细胞系TH-1加入PMA诱导其分化为M0型巨噬细胞,将10 μg/mL 的GES-1 exo、MGC-803 exo、SGC-7901 exo、MKN-45 exo以及等体积的PBS分别与M0型巨噬细胞共孵育48 h后,qRT-PCR检测各组细胞中TNF-α、CCR7、Arg-1、CD206、MRC-1、lncRNA LOXL1-AS1表达,流式细胞术检测各组细胞CD206和CD14表达,Western blot检测各组细胞ERK和STAT3磷酸化水平。在MKN-45细胞中分别转染lncRNA LOXL1-AS1过表达质粒（lncRNA LOXL1-AS1）和空白质粒（Vector）后提取各组细胞分泌的外泌体（记为lncRNA LOXL1-AS1 exo和Vector exo）,将10 μg/mL的lncRNA LOXL1-AS1 exo和Vector exo分别与M0型巨噬细胞共孵育,检测孵育后各组细胞TNF-α、CCR7、Arg-1、CD206、MRC-1、lncRNA LOXL1-AS1表达以及ERK和STAT3磷酸化水平。结果:本文所提取的外泌体符合其结构和生物学特征。相比于PBS组,MGC-803 exo、SGC-7901 exo、MKN-45 exo组细胞TNF-α、CCR7表达显著下调（P＜0.01）,Arg-1、CD206、MRC-1、lncRNA LOXL1-AS1表达均显著上调（P＜0.01）,CD206+CD14+细胞所占比例显著增加（P＜0.001）,ERK和STAT3磷酸化水平显著增加（P＜0.001）。相比于Vector exo组,lncRNA LOXL1-AS1 exo组中lncRNA LOXL1-AS1表达显著上调（P＜0.001）。相比于Vector exo组细胞,lncRNA LOXL1-AS1 exo组巨噬细胞中Arg-1、CD206、MRC-1、lncRNA LOXL1-AS1表达均显著上调（P＜0.001）,CD206+CD14+细胞所占比例显著增加（P＜0.001）,ERK和STAT3磷酸化水平显著增加（P＜0.001）。结论:胃癌细胞外泌体中lncRNA LOXL1-AS1可显著促进巨噬细胞的M2型极化,其机制可能与激活ERK/STAT3信号通路相关。     

长链非编码RNA MAFG-AS1通过靶向miR-143-3p/AKT2轴促进胃癌的进展

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)MAFG-AS1在胃癌(gastric cancer,GC)的发生和发展中的生物学功能及可能的作用机制。方法:分别用GEPIA(Gene Expression Profiling Interactive Analysis)和Kaplan-Meier Plotter数据库分析MAFG-AS1在GC组织中的表达水平,及与GC患者预后的关系。采用实时荧光定量PCR法检测胃黏膜正常上皮GES-1细胞和人GC细胞系BGC-823、SGC-7901和MGC-803中MAFG-AS1的表达水平。采用脂质体转染法将MAFG-AS1过表达重组质粒转入MGC-803细胞,分别采用CCK-8法和EdU染色法检测MAFG-AS1过表达对MGC-803细胞增殖的影响,Transwell小室实验检测对MGC-803细胞迁移的影响。利用StarBase数据库预测MAFG-AS1和微RNA(microRNA,miRNA,miR)-143-3p之间,miR-143-3p和AKT2(AK mouse plus Transforming or Thymoma 2)基因之间的靶向关系,并分别采用双荧光素酶报告基因实验进行验证。采用实时荧光定量PCR法检测MAFG-AS1、miR-143-3p和AKT2 mRNA在癌及癌旁组织中的表达水平,分别应用Pearson对MAFG-AS1和miR-143-3p之间,miR-143-3p和AKT2 mRNA之间,MAFG-AS1和AKT2 mRNA之间表达水平的相关性进行分析。采用脂质体转染法将miR-143-3p-模拟物(miR-143-3p-mimics)或特异性针对AKT2基因的siRNA(siAKT2)转入MAFG-AS1过表达的MGC-803细胞中,采用蛋白印迹法检测对AKT2蛋白表达水平的影响,再分别采用CCK-8法和EdU染色法检测对MGC-803细胞增殖的影响,Transwell小室实验检测对MGC-803细胞迁移的影响。结果:MAFG-AS1在GC组织和细胞中高表达(P值均<0.001),其高表达水平与患者总生存期、首次进展生存期以及后进展生存期呈负相关(P值均<0.05)。MAFG-AS1与miR-143-3p表达呈负相关(P<0.05),与AKT2 mRNA表达呈正相关(P<0.05)。过表达MAFG-AS1可促进细胞增殖和迁移(P值均<0.001),而上调miR-143-3p表达可削弱此作用(P值均<0.05)。结论:MAFG-AS1通过调控miR-143-3p/AKT2轴在GC的进展中发挥促进作用。     

circ_0023642 通过调控miR-508-3p/ERBB4 分子轴促进胃癌GMC-803细胞的恶性生物学行为

[摘要] 目的：探讨circ_0023642 通过调控miR-508-3p/ERBB4 分子轴对胃癌GMC-803 细胞增殖和转移的影响及其作用机制。方法：选取2015 年5 月至2018 年3 月南通市第二人民医院手术切除的31 例胃癌患者癌组织及配对的癌旁组织标本和胃癌细胞系,使用qPCR检测胃癌组织、癌旁组织和细胞系中circ_0023642 和miR-508-3p 的表达情况;WB实验检测MGC-803 细胞中ERBB4、E-cadherin、N-cadherin 和Vimentin 的表达;CCK-8 和Transwell 实验检测调控circ_0023642 和miR-508-3p 的表达对MGC-803 细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;双荧光素酶报告基因验证miR-508-3p 是否能够结合circ_0023642 和ERBB4 的3'' UTR。结果：circ_0023642 在胃癌组织和细胞系中的表达水平分别显著高于癌旁组织和正常胃黏膜细胞（P<0.05 或P<0.01）,且在MGC-803 细胞中表达水平最高。敲降circ_0023642 后MGC-803 细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）受到明显抑制（均P<0.05 或P<0.01）;circ_0023642 与ERBB4 均可以靶向结合miR-508-3p 的作用位点,并进一步实验证实circ_0023642 通过海绵吸附miR-508-3p 促进MGC-803 细胞增殖、迁移、侵袭和EMT（P<0.05 或P<0.01）。结论：circ_0023642 通过与ERBB4 竞争性结合miR-508-3p 的作用位点,进而促进胃癌MGC-803 细胞增殖和转移,其可作为胃癌临床诊断的标志物。