姜黄素对结肠癌SW-480细胞抗失巢凋亡的影响

目的:探讨姜黄素对结肠癌细胞抗失巢凋亡的影响。方法:采用不同浓度的姜黄素处理结肠癌SW-480细胞,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP切口末端标记法(TUNEL)法检测结肠癌细胞抗失巢凋亡,采用软琼脂集落形成试验检测细胞的生长增殖。结果:姜黄素能有效地抑制结肠癌SW-480细胞锚着不依赖性增殖,且呈浓度依赖性。结肠癌细胞经姜黄素处理后,可促进失巢凋亡且与时间和浓度相关。结论:姜黄素可有效地抑制结肠癌细胞锚着不依赖性增殖,其机制可能与促进失巢凋亡有关。     

藏药湿生扁蕾对人结肠癌细胞SW480增殖调控因子CyclinD_1、CDK4、PCNA和p21~(kip1)·mRNA表达的影响

目的:探讨藏药湿生扁蕾对人结肠癌细胞SW480增殖调控因子CyclinD1、CDK4、PCNA和p21kip1·mRNA表达的影响。方法:将SW480细胞接种于6孔培养板,24h后分别用不同浓度(0.25、0.50、1.00 mg/ml)的湿生扁蕾干预,继续培养24h,提取每组总RNA,以GAPDH基因为内参,采用RT-PCR法检测CyclinD1、CDK4、PCNA及p21kip1的mRNA表达水平。结果:PCNA、CyclinD1及CDK4的mRNA表达随湿生扁蕾浓度增加而减少,而p21kip1mRNA的表达随湿生扁蕾浓度增加而增加,并呈现明显的剂量依赖关系。结论:藏药湿生扁蕾干预SW480细胞的增殖与其抑制CyclinD1、CDK4、PCNA的表达和促进p21kip1的表达作用有关。     

川芎内酯抑制结肠癌细胞的生长和肿瘤干细胞样特性

【目的】 探讨川芎内酯对结肠癌细胞的抑制作用及其机制。【方法】 ①体外研究：选择SW620和SW480 2种结肠癌细胞株。应用不同浓度的川芎内酯处理细胞 24 h 后，用细胞计数试剂盒 8（CCK-8）检测细胞活力。选择浓度为 0、25、50、100 μmol/L的川芎内酯处理SW620和SW480细胞株，采用克隆形成实验检测增殖能力，采用流式细胞术检测癌细胞凋亡，采用蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A（p21）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 （Caspase-3）及裂解的Caspase-3（cleaved Caspase-3）的表达，采用流式细胞术检测线粒体膜电位的变化，按照试剂盒说明方法检测超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的含量，应用显微镜观察SW620和SW480干细胞成球情况，采用Aldefluor分析法检测乙醛脱氢酶（ALDH）活性，采用实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）法检测干细胞标记物Nanog、八聚体结合转录因子4（OCT4）和性别决定域Y蛋白2（SOX2）的表达。②体内研究：裸鼠皮下接种SW480细胞构建荷瘤模型，加药组给予川芎内酯5 mg/kg处理，每5 d检测瘤体积。30 d后，处死祼鼠取出肿瘤称质量，脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）染色检测肿瘤组织细胞凋亡，免疫组织化学法检测肿瘤组织中p21和SOX2的表达，按照试剂盒说明方法检测肿瘤组织MDA和SOD含量。【结果】 与川芎内酯0 μmol/L组比较，川芎内酯50 μmol/L对SW620细胞活力有明显抑制作用（P < 0.05），川芎内酯25 μmol/L对SW480细胞活力有明显抑制作用（P < 0.05）。川芎内酯明显降低结肠癌细胞存活率（P < 0.05），增加细胞凋亡率（P < 0.05），上调p21和cleaved Caspase-3的表达水平（P < 0.05），降低线粒体膜电位，增加SOD的含量（P < 0.05），减少MDA的含量（P < 0.05），减小结肠癌细胞成球直径的大小（P < 0.05），降低ALDH活性及Nanog、OCT4和SOX2的表达（P <0.05）。体内移植实验结果显示，川芎内酯减小肿瘤体积（P < 0.05），增加肿瘤组织中TUNEL阳性细胞数目（P < 0.05），减少p21和SOX2阳性细胞数（P < 0.05），增加SOD的含量（P < 0.05），减少MDA的含量（P < 0.05）。【结论】 川芎内酯在体内、体外均可抑制结肠癌细胞的生长，主要通过诱导氧化应激、破坏线粒体功能诱导细胞凋亡，抑制结肠癌干细胞特性阻止结肠癌发生转移。     

DADS对人结肠癌SW480细胞凋亡的影响

目的：探讨二烯丙基二硫（diallyl disulfide，DADS）诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的作用。方法：采用MTT、细胞计数法，观察不同浓度和作用时间DADS对SW480细胞的生长抑制作用；施用流式细胞术检测不同浓度DADS对SW480细胞的凋亡率。结果：MTT法显示，DADS能明显抑制SW480细胞生长增殖，呈浓度和时间依赖性，细胞生长增殖速度明显减慢。细胞计数表明，当DADS浓度增加时，SW480细胞群体倍增时间延长，与对照组比较，差异有显著性意义（P〈0．05）。流式细胞仪分析显示，随着DADS处理浓度增加，使SW480细胞凋亡率逐渐增高，差异有显著性意义（P〈0．05）。结论：DADS具有诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的作用。     

姜黄素联合5-氟尿嘧啶对结肠癌SW620细胞体外抑制的影响

目的探索姜黄素与5-氟尿嘧啶(5-FU)联用对结肠癌细胞SW620的体外抑制作用。方法应用MTT法检测5-FU和姜黄素单用或联合用药对SW620细胞增殖的影响;Compu Syn软件分析姜黄素增敏效果;流式细胞仪检测药物作用对SW620细胞凋亡的影响;Western blot法检测联合用药对SW620细胞caspase家族蛋白表达的影响。结果 5-FU对SW620细胞抑制作用较弱,处理48 h,IC50为(367. 20±16. 80)μmol/L,姜黄素预处理与5-FU联用协同增强对SW620细胞株的杀伤作用。姜黄素预处理与5-FU联用诱导SW620细胞凋亡,促进SW620细胞内凋亡相关蛋白(cleaved-PARP、cleaved-caspase3、cleaved-caspase6、cleaved-caspase9)的表达(P<0. 05,P<0. 01)。结论姜黄素预处理与5-FU联合应用可协同抑制结肠癌细胞的增殖,诱导凋亡,并上调SW620细胞内caspase家族的表达。     

苦豆子生物碱抗结肠腺癌细胞株SW620的作用筛选

目的：对苦豆子提取物中的总生物碱（TBSA）、苦参碱（MT）、氧化苦参碱（OMT）、槐果碱（SC）、槐定碱（SRI）等进行初步抗结肠癌的体外筛选实验。方法：应用MTT法测定各生物碱对SW620细胞株增殖活性的影响，药物终浓度从0～2mg／ml作用于细胞，检测其抑制SW620的剂量效应关系；应用光学显微镜、荧光显微镜进行细胞形态学观察，流式细胞仪检测生物碱对SW620细胞凋亡的作用，检测细胞凋亡率。结果：5种生物碱对结肠癌SW620细胞株具有不同程度的增殖抑制作用，其作用TBSA〈OMT〈SC〈MT〈SRI；深入研究表明苦参碱、槐定碱对结肠腺癌细胞株SW620有显著的生长抑制及促进凋亡作用，其作用呈时间-剂量依赖性；其中以槐定碱促进凋亡作用最为明显。结论：苦参碱和槐定碱对结肠腺癌细胞株SW620的增殖显著抑制并诱导细胞凋亡，为进一步开展抗结肠癌苦豆子生物碱有效成分的开发和研发中药治疗结肠癌的靶向新药提供实验依据。     

天花粉蛋白对结肠癌细胞株SW-1116凋亡影响的体外研究

目的：探讨天花粉蛋白（TCS）抗肿瘤的机制，为TCS在抗肿瘤方面的应用提供理论依据。方法：采用流程式细胞仪检测结肠癌细胞株SW—1116凋亡。结果：50，100，200μmol／LTCS能够诱导结肠癌细胞SW—1116凋亡，凋亡率与剂量呈正相关，SW-1116的凋亡随药物浓度及作用时间变化，细胞周期分布呈现G1期细胞比例逐渐增高，并出现典型的凋亡峰。结论：TCS能诱导结肠癌细胞凋亡，并明显抑制癌细胞增殖，具有抗肿瘤作用。     

白花败酱草提取物对人结直肠癌细胞SW480增殖和凋亡的影响

目的探讨白花败酱草提取物通过抑制Notch信号通路影响人结直肠癌细胞SW480增殖、凋亡机制的研究。方法噻唑蓝(MTT)法检测不同质量浓度的白花败酱草对人结直肠癌SW480细胞增殖的影响,流式细胞仪检测白花败酱草对SW480细胞凋亡的影响,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测其对凋亡相关蛋白剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的影响,荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测其对SW480细胞中Notch信号通路中Notch1及下游靶基因Hes-1 mRNA表达的影响。结果白花败酱草提取物能够抑制人结直肠癌SW480细胞的增殖,呈质量浓度和时间依赖效应,差异具有统计学意义(P0.05);流式细胞检测显示白花败酱草提取物干预SW480细胞后凋亡率升高,呈质量浓度依赖性(P0.05);白花败酱草提取物可促进SW480细胞中cleaved caspase-3和Bax的表达,抑制Notch1和Hes-1的表达,具有质量浓度依赖性(P0.05)。结论白花败酱草提取物能够抑制人结直肠癌SW480细胞的增殖,诱导SW480细胞凋亡,作用机制与其抑制Notch信号通路的激活有关。     

藤黄酸对人结肠癌SW480细胞增殖及VEGFR2表达的影响

目的:观察藤黄酸对人结肠癌SW480细胞增殖和血管内皮细胞受体2(VEGFR2)表达的影响,探讨其可能抗肿瘤的作用机制。方法:以不同浓度的藤黄酸干预体外培养的人结肠癌细胞株SW480,分别于24、36、48h后,应用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率,Western-blot分析VEGFR2蛋白的变化。结果:藤黄酸对结肠癌细胞株SW480生长增殖具有明显抑制作用,其效应呈浓度和时间依赖性。流式细胞仪分析显示SW480细胞呈G2/M期阻滞;SW480细胞的凋亡率随藤黄酸浓度增加逐步上升。用不同浓度的藤黄酸处理SW480细胞株24h,VEGFR2蛋白的表达随药物浓度的增加而减少(P<0.01)。结论:藤黄酸能够明显抑制人结肠癌细胞株SW480的增殖,诱导SW480细胞发生G2/M期阻滞,其作用机制可能与抑制VEGFR2表达有关。     

汉黄芩素调控胆绿素还原酶A对结肠癌细胞的抑制作用

目的探讨汉黄芩素对结肠癌HT29及SW620细胞的抑制作用及可能机制。方法取筛选出的结肠癌HT29及SW620细胞,分别予不同质量浓度汉黄芩素(0、20、40、80、160μg/mL)及5-FU(12.5μg/mL)干预后,采用MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测凋亡因子BAX、Bcl-2及EMT相关蛋白表达,Western blot、RT-PCR检测BLVRA蛋白及mRNA表达。结果汉黄芩素能抑制结肠癌HT29及SW620细胞的增殖,且呈时间及浓度依赖性(P0.01);促进细胞凋亡,抑制Bcl-2蛋白的表达,促进BAX蛋白的表达,抑制结肠癌细胞的迁移和侵袭能力,呈浓度依赖性(P0.01);汉黄芩素能够增加E-Cadherin的表达,降低Vimentin及snail蛋白的表达,抑制EMT进程,呈浓度依赖性(P0.05,P0.01);不同浓度汉黄芩素均能降低两种CRC细胞中BLVRA的蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论汉黄芩素能够抑制结肠癌HT29及SW620细胞的增殖及迁移和侵袭能力,促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤EMT进程,且随着药物浓度升高其抑制作用呈现出时间和浓度依赖性,这些作用可能是通过下调胆绿素还原酶A(BLVRA)的表达发生。     

牛蒡子苷元对结肠癌细胞增殖的影响及相关机制研究

目的：探讨牛蒡子苷元对结肠癌细胞系SW480增殖的影响及相关机制。方法：以结肠癌细胞系SW480为研究对象,通过MTT比色法检测牛蒡子苷元对SW480细胞生长速度和倍增时间的影响;通过软琼脂克隆形成实验观察牛蒡子苷元对SW480细胞软琼脂集落形成率的影响;应用RT—PCR技术探讨牛蒡子苷元对SW480细胞增殖的相关机制。结果：①不同浓度牛蒡子苷元处理的SW480细胞生长速度明显减慢,倍增时间显著延长,并且呈现一定的浓度和时间依赖性;②SW480亲本细胞和牛蒡子苷元（20mg／L）处理24h的SW480细胞的克隆形成率分别为24．933％和4．533％（P〈0．01）,与SW480亲本细胞相比,牛蒡子苷元（20mg／L）处理24小时的SW480细胞形成的克隆体积较小;（3）与SW480亲本细胞相比,20mg／L牛蒡子苷元处理的SW480细胞中,cyclinA基因表达没有明显变化,p21基因表达上调,而cyclinB、cyclinE基因表达下调。结论：①牛蒡子苷元可抑制SW480细胞的增殖能力。②诱导p21基因表达上调,cyclinB和cyclinE基因表达下调是牛蒡子苷元抑制SW480细胞增殖的可能机制。     

姜黄素与吉非替尼联合应用对胃癌SGC-7901细胞增殖及裸鼠移植瘤生长的影响

目的：探讨不同浓度的姜黄素与吉非替尼联合应用对体内胃癌裸鼠移植瘤及体外胃癌细胞SGC-7901生长的影响。方法：将胃癌细胞SGC-7901制成细胞悬液后接种于裸鼠皮下,制备胃癌裸鼠模型。将裸鼠模型随机分为生理盐水组及姜黄素与吉非替尼联合应用低剂量组、中剂量组、高剂量组,腹腔注射给药,每周一次。用药4次后,处死裸鼠,剥取肿瘤组织,称取质量,计算肿瘤抑制率。用免疫组织化学方法检测肿瘤组织中c-myc的表达。低剂量、中剂量、高剂量姜黄素与吉非替尼联合作用SGC-7901细胞,Western blot方法检测细胞内c-myc的表达,MTT检测细胞的增殖力,细胞黏附实验与transwell法检测细胞的侵袭能力,流式细胞术检测细胞的周期及凋亡率。结果：与生理盐水组比较,中剂量组及高剂量组的抑瘤率分别为（40.26±4.25）%、（44.81±5.74）%,两组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。免疫组织化学显示,中剂量、高剂量姜黄素与吉非替尼联合应用明显抑制c-myc的活化。中剂量、高剂量姜黄素与吉非替尼联合作用SGC-7901细胞后,c-myc表达量明显降低,细胞增殖及侵袭能力明显受到抑制,G0/G1期细胞数明显升高（P〈0.05）,S期细胞数明显降低（P〈0.05）,细胞凋亡率明显高于对照组（P〈0.05）。结论：一定剂量的姜黄素与吉非替尼联合可体内抑制胃癌裸鼠移植瘤的生长及体外抑制SGC-7901细胞的增殖、侵袭能力及促进细胞凋亡,其抑制胃癌生长的机制可能是通过降低c-myc蛋白的表达,从而影响c-myc参与调控的癌细胞增殖,转移过程。     

姜黄素对肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响

目的：研究姜黄素对肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响。方法：采用MTT法检测姜黄素对A549细胞存活率的影响。运用吖啶橙染色方法,观察细胞形态变化。利用TUNEL染色,检测DNA断裂情况。采用Western blot技术,检测P53蛋白表达变化。结果：姜黄素显著抑制A549细胞增殖。吖啶橙和TUNEL染色显示姜黄素可以诱导A549细胞凋亡。Western blot结果显示姜黄素提高了A549细胞中P53蛋白的表达。结论：姜黄素通过激活P53蛋白,抑制A549细胞增殖和诱导A549细胞凋亡。     

藏药湿生扁蕾对人结肠癌SW480细胞凋亡调控因子Bcl-2及Bax的mRNA表达的影响

目的：探讨藏药湿生扁蕾对SW480细胞凋亡调控因子Bcl-2mRNA及BaxmRNA表达的影响.方法：SW480细胞接种于6孔培养板中,24 h后分别以不同浓度（250、500、1000 μg/ml）的湿生扁蕾干预,继续培养24h后,提取每组总RNA,以GAPDH和β-actin基因为内参,采用RT-PCR法检测Bcl-2及Bax的mRNA表达水平.结果：Bcl-2 mRNA表达随湿生扁蕾浓度增加而减少,而Bax mRNA表达随湿生扁蕾浓度增加而增加,并呈现明显的剂量依赖关系.结论：藏药湿生扁蕾干预SW480细胞凋亡与其抑制Bcl-2的表达和促进Bax的表达有关.     

姜黄素对人骨肉瘤MG63细胞凋亡的影响

目的探讨姜黄素诱导人骨肉瘤细胞株MG63凋亡的机制。方法不同浓度(0、25、50和75μM)姜黄素作用MG63细胞24 h后,CCK8法检测细胞体外增殖,TUNEL染色法检测细胞凋亡,Western blotting检测AKT/Bax-Bcl-2/Caspase 3等内源性凋亡途径相关蛋白表达水平。结果 CCK8实验结果显示在0~75μM范围内,50μM以上浓度的姜黄素能显著抑制MG63增殖,诱导细胞凋亡、p-AKT蛋白水平明显降低,而Bax蛋白及剪切的Caspase 3蛋白水平则显著增高。结论姜黄素通过影响AKT/BaxBcl-2/Caspase 3途径诱导MG63细胞凋亡。     

藏药湿生扁蕾提取物对人结肠癌SW480细胞增殖和周期的影响

目的：探讨藏药湿生扁蕾提取物（GPM）对人结肠癌细胞SW480增殖和周期的作用机制。方法：采用MTT比色法测定GPM对SW480细胞体外细胞毒活性,采用流式细胞仪检测细胞周期变化。结果：GPM对结肠癌SW480细胞的增殖具有抑制作用,且这种抑制作用具有明显的量效关系;用GPM处理后,SW480细胞表现出明显的G1期周期阻滞。结论：GPM能够抑制人结肠癌细胞SW480细胞的生长,并可改变细胞周期分布。     

姜黄素联合光照对人胃腺癌BGC-823细胞凋亡作用的研究

目的：研究在光照条件下姜黄素诱导人胃腺癌BGC-823细胞凋亡的效应,探讨其作为光动力学治疗肿瘤新型光敏剂的可能性。方法：体外培养的胃腺癌BGC-823细胞加姜黄素后光照处理,MTT法测定细胞增殖能力,荧光显微镜和电镜观察细胞核及超微结构的改变,流式细胞术检测细胞周期分布变化。结果：姜黄素在光照条件下可显著抑制BGC-823细胞的增殖;经5μmol/L姜黄素联合光照处理24h细胞即呈现典型的凋亡形态;流式细胞术检测光照条件下姜黄素诱导BGC-823细胞周期阻滞于G0/G1期。结论：光照条件下姜黄素对人胃腺癌BGC-823细胞具有显著的凋亡诱导作用,可望进一步开发成光动力学治疗肿瘤的新型光敏剂。     

基于Hedgehog信号通路的熊果酸诱导结直肠癌SW480细胞凋亡的机制研究

目的研究熊果酸通过经典Hedgehog信号通路影响人结直肠癌SW480细胞增殖和凋亡的作用及其机制。方法通过显微镜观察熊果酸对SW480细胞形态的影响;采用MTT比色法检测熊果酸对细胞活力的影响;细胞划痕实验检测熊果酸对细胞迁移的影响;Hoechest/PI染色法观察熊果酸对细胞凋亡的影响;荧光探针法检测熊果酸对细胞线粒体膜电位的影响;Caspase活性检测试剂盒检测熊果酸对细胞凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-9的影响;蛋白免疫印迹法检测Hedgehog信号通路相关蛋白SHh、Gli1、Ptch1、Smo、c-Myc、Su Fu及细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达水平。结果 SW480细胞经熊果酸给药后形态发生改变;细胞迁移能力显著下降;线粒体膜电位降低;细胞核出现致密浓染;Caspase-3、Caspase-9活性升高;SW480细胞发生凋亡;Hedgehog信号通路相关蛋白Su Fu的表达水平升高,SHh、Gli1、Ptch1、Smo、c-Myc的表达水平下降;细胞凋亡相关蛋白Bax的表达水平升高,Bcl-2的表达水平下降。结论熊果酸对SW480细胞的生长、增殖具有抑制作用,通过抑制Hedgehog信号通路的激活促进SW480细胞凋亡。     

Survivin靶向siRNA抑制结直肠癌细胞增殖作用的研究

目的分析Survivin靶向siRNA抑制结直肠癌细胞增殖的作用。方法将结直肠癌Lovo细胞株进行培养及转染,采用Western blot法、RT-PCR法对Survivin的表达进行检测,应用MTT法对siRNA抑制细胞增殖的作用进行检测。结果 Survivin靶向小干扰RNA抑制结直肠癌SW480细胞株mRNA的构成比为37.1%,抑制结直肠癌SW480细胞株蛋白表达的构成比为45.3%,12 h对结直肠癌SW480细胞的抑制率为23.8%,24 h对结直肠癌SW480细胞的抑制率为30.2%,36 h对结直肠癌SW480细胞的抑制率为35.2%,48 h对结直肠癌SW480细胞的抑制率为38.5%,72 h对结直肠癌SW480细胞的抑制率为39.6%,均显著高于阴性对照组(P均<0.05)。结论 Survivin靶向siRNA抑制结直肠癌细胞增殖的作用显著。