急性白血病患者P-糖蛋白的表达及功能分析

目的:研究P-糖蛋白(P-gp)在急性白血病(AL)患者中的表达及功能.方法:用免疫组化检测CD34、P-gp的表达,用流式细胞术检测P-gp的表达、功能.结果:CD34表达与P-gp表达、功能呈正相关(P=0.001,r=0.475;P=0.003,r=0.429),P-gp表达与功能呈正相关(P=0.031,r=0.341).初治急性早幼粒细胞白血病(APL)组中无P-gp表达 、P-gp功能 ,明显低于初治急性髓细胞白血病(AML)组(41.1%,35.3%,P＜0.05).初治急性淋巴细胞白血病(ALL)组中P-gp表达 28.6%,P-gp功能 28.6%,与初治AML组无差异(P＞0.05).初治AL组P-gp表达 25%,复发/难治组中P-gp表达 33.3%,两组无差异(P＞0.05);P-gp功能 22.7%,低于复发/难治组P-gp功能 66.7%(P＜0.05).＜50岁初治AL组P-gp表达 26.3%,与≥50岁初治AL组无差异(P＞0.05);P-gp功能 15.8%,低于≥50岁初治AL组(P＜0.05).结论:P-gp功能的检测对AL的化疗更有临床指导意义.     

WT1、PRAME和ERG基因在儿童急性白血病中的表达

目的 研究肾母细胞瘤基因(WT1)、黑色素瘤优先表达抗原(PRAME)和ETS相关基因(ERG)在儿童急性白血病(AL)中的表达特点,并分析其在白血病微小残留病灶(MRD)监测中的意义.方法 收集92份AL标本(84例患儿),其中初发标本28份,包括急性淋巴细胞白血病(ALL)标本18份,急性髓系白血病(AML)标本10份;AL完全缓解标本63份,包括ALL标本45份,AML标本18份;AL复发标本1份.采用Real-time PCR法检测AL患者骨髓中WTI、PRAME和ERG mRNA的相对表达量,并以同期住院的10例非恶性血液病患儿为对照.结果 AL初发组患儿的WT1、PRAME和ERG mRNA相对表达量均显著高于缓解组和对照组(P＜0.05),但缓解组和对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);AML初发组的PRAME mRNA相对表达量显著高于ALL初发组(P＜0.05).28例初发组WT1、PRAME和ERG mRNA的阳性表达率分别为82.4％、92.9％和64.3％,三者间比较差异有统计学意义(P＜0.05);三种基因联合检测的阳性率为100％.跟踪15例AL初发患者,诱导化疗缓解后三种基因的相对表达量均显著低于诱导化疗前(P＜0.05).1例复发患者初发时三种基因均呈阳性表达,缓解后转为阴性,复发时又变为阳性.结论 与非白血病患者相比,WTI、PRAME和ERG mRNA在AL初发患者的骨髓中高度表达,三种基因联合检测可提高阳性率.AL患者的WT1、PRAME、ERG mRNA表达水平与疾病状态相关,适用于MRD的监测.     

WT1基因在急性白血病患者骨髓细胞中的表达及其临床意义

目的研究WT1基因在急性白血病（AL）患者骨髓细胞中的表达及其临床意义。方法采用实时定量RT-PCR方法动态检测92例初治AL患者WT1基因的表达。结果初治AML各亚型中M5基因表达阳性率最高,为91.7%,其WT1基因中位表达水平最高,达1308.6,显著高于其他亚型,差异有统计学意义（P〈0.05）;初治ALL各亚型（L1,L2,L3）之间WT1基因表达阳性率及中位表达水平差异无统计学意义（P〉0.05）;AL患者中,WT1基因表达阳性组CR率显著低于阴性组,阳性组缓解后半年内复发率显著高于阴性组,差异均有统计学意义（均P〈0.05）;初治组、复发组及未缓解组AL患者骨髓细胞WT1基因中位表达水平明显高于完全缓解组和对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论WT1基因在AL患者骨髓细胞中表达水平可作为临床评估疾病的发生发展、判断预后及检测微小残留病（MRD）的指标。     

急性白血病细胞周期调节因子的表达及意义

目的 研究急性白血病患者骨髓细胞周期调控因子细胞S期激酶相关蛋白(Skp2)、P27、周期蛋白(cyclin) E 和Cyclin A1的表达及其临床意义.方法 将60例白血病患者分为初发组(n=41),复发组(n=9),完全缓解组(n=10),将非恶性血液病患者作为对照组(n=10).采用免疫细胞化学方法检测骨髓细胞Skp2、P27、Cyclin E 和Cyclin A1的表达,分析其表达与化疗疗效的关系.结果 急性白血病初发组及复发组Skp2、Cyclin E和Cyclin A1表达明显高于完全缓解组及对照组(P＜0.05),P27在初发组、完全缓解组及对照组的表达差异无统计学意义(P＞0.05),在复发组的表达较其他3组低(P＜0.05).急性白血病患者骨髓细胞Skp2、P27、Cyclin E和Cyclin A1阳性表达与患者年龄、性别、外周血乳酸脱氢酶水平无相关性(P＞0.05);Skp2与外周血白细胞计数呈正相关(P＜0.05);Skp2与完全缓解率呈负相关(P＜0.05),P27与其呈正相关(P＜0.05).Skp2和P27的比值比分别是0.076和6.842.结论 Skp2和P27可能是影响急性白血病化疗完全缓解率的独立预后因素.     

ABCA3在急性髓系白血病中的表达及其临床意义

目的 检测三磷酸腺苷结合盒转运体A3（ABCA3）基因在急性髓系白血病（AML）细胞中的表达,探讨ABCA3在AML耐药方面的作用及临床意义。 方法 ①应用半定量RT PCR检测33例初治、13例复发/难治成人AML患者及10例正常对照者骨髓单个核细胞ABCA3 mRNA的表达水平,并分析其在不同组间的表达规律;②将初治AML患者按化疗效果分为完全缓解组和未完全缓解组,比较两组间ABCA3的表达水平;③分析ABCA3与AML患者初诊白细胞数、免疫表型、FAB分型等临床特征之间的相关性。结果 ABCA3的表达水平：初治及复发/难治AML组均明显高于正常对照组（P均＜0.01）;复发/难治AML组高于初治组（P＜0.05）;完全缓解组低于未完全缓解组（P＜0.05）;慢性粒细胞白血病急变患者高于其他AML亚型（除M3外,P均＜0.05）。ABCA3的表达水平与AML患者初诊白细胞数、骨髓原始细胞百分数、免疫表型、性别及年龄无明显相关性。结论 ABCA3与AML患者的多药耐药及治疗、预后密切相关。     

AML病人MN1和PTEN基因表达及临床意义

目的探讨脑膜瘤1(MN1)基因和PTEN基因表达与急性髓系白血病(AML)病情发展及预后的关系。方法采用RT-PCR技术检测38例AML病人(初治组16例,缓解组12例,复发组10例)骨髓单个核细胞中MN1和PTEN mRNA的表达水平,另取非恶性血液病病人及正常人骨髓共13例作正常对照组。结果 MN1和PTEN mRNA在AML病人骨髓单个核细胞中阳性表达率分别为76.3%和60.5%。初治组MN1 mRNA表达水平较正常对照组显著升高,PTEN mRNA表达水平较正常对照组显著下降(F=2.385、2.054,q=2.305、2.867,P<0.01);缓解组MN1 mRNA表达水平下降,PTEN mRNA表达水平上升,与初治组比较差异均有统计学意义(q=2.121、2.756,P<0.05);在复发组中MN1 mRNA的表达水平复又升高,PTEN mRNA的表达水平复又下降,与正常对照组比较,差异均有统计学意义(q=2.361、2.723,P<0.05)。MN1和PTEN基因在AML中的表达水平呈负相关(r=-0.321,P<0.05)。结论 MN1和PTEN基因的表达与AML发病及预后密切相关,可作为AML发病、复发及预后判断的有意义指标。     

PTEN基因在正常核型AML中的表达

目的 研究PTEN在正常核型AML中的表达.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫印迹杂交法(Western blot)检测HL-60细胞株、15例正常核型AML患者及15例正常人骨髓单个核细胞中PTEN mRNA及其蛋白的表达.结果 PTEN mRNA在阴性对照HL-60细胞株不表达,在AML组阳性表达率(60％)低于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);初诊/复治AML组阳性表达率(46.7％)低于完全缓解AML组(66.7％),差异有统计学意义(P＜0.05).AML组PTEN蛋白水平阳性率(54.8％)低于正常对照组(80％),差异有统计学意义(P＜0.05);初诊/复治的AML组PTEN蛋白水平阳性率(44.4％)低于完全缓解的AML组(73.3％),差异有统计学意义(P＜0.05).AML各FAB亚型间表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PTEN基因在正常核型AML中存在异常表达,其转录与翻译水平无正相关,与其发病密切相关.     

急性白血病患者骨髓细胞中Cox-2和Bcl-2的表达

目的:探讨急性白血病患者骨髓细胞中Cox-2和Bcl-2的表达及意义.方法:应用免疫组织化学SP法检测45例初治急性白血病患者、24例完全缓解急性白血病患者及20例正常对照骨髓细胞中Cox-2、Bcl-2的表达.结果:初治组Cox-2和Bcl-2的表达率和阳性积分均高于完全缓解组和对照组(P均＜0.05),完全缓解组与对照组之间差异均无统计学意义(P＞0.05).骨髓细胞中Cox-2与Bcl-2的表达呈正相关(r=0.957,P＜0.05).结论:Cox-2和Bcl-2在急性白血病骨髓细胞的异常高表达可能与白血病发生发展有关.     

COX-2在急性白血病中的表达及意义

目的 探讨急性白血病患者骨髓细胞COX-2的表达水平及其作用机制、意义.方法 采用Western Blot方法检测了43例急性初治白血病患者及24例完全缓解期急性白血病患者骨髓细胞COX-2及Bcl-2的表达水平,以18例健康供者骨髓为阴性对照.结果 COX-2、Bcl-2在初治急性白血病组的表达率高于完全缓解组和对照组(P＜0.05),完全缓解组和对照组间差异无统计学意义(P＞0.05).COX-2阳性组LDH水平高于COX-2阴性组,差别有统计学意义(P＜0.001).结论 COX-2可能参与了急性细胞白血病的发病,且与预后相关.     

Evi1基因在急性髓系白血病中的表达及意义

目的　探讨急性髓系白血病 (AML)中Evi1基因的表达及意义。方法　应用半定量RT -PCR方法检测了HEL白血病细胞系 (Evi1阳性细胞株 )、94例AML(初治 49例 ,复发 2 3例 ,缓解 2 2例 )患者及 10名正常对照Evi1基因的表达。结果　① 10名正常人骨髓单个核细胞中无Evi1mRNA的表达 (阴性 ) ,HEL细胞系Evi1阳性。②AML患者Evi1基因总的阳性表达率为 18.1% (17/94) ,M5型未见表达 ,M1～M4各型的阳性率无差异 (P >0 .0 5)。AML初治、复发、完全缓解的Evi1基因阳性率分别为 2 6.5%、17.4%、4.5% ,各组间无明显差异 (P >0 0 5)。③AML初治患者中Evi1阳性表达者首次完全缓解 (CR1)后缓解持续时间短于Evi1阴性表达者 (P <0 0 1) ,早期病死率 (确诊后 3个月内死亡 )明显升高 (P <0 .0 1)。结论　Evi1基因在AML的发病中可能起一定作用 ,可作为判断AML预后不良的一个指标     

急性髓系白血病AML1/ETO融合基因检测及其临床意义

目的 了解急性髓系白血病中AML1／ETO融合基因表达情况及相关临床意义。方法 应用RT-PCR技术检测159例初发未治急性髓系白血病患者骨髓单个核细胞（MNC）AML1／ETO融合基因及R显带技术检测染色体,并对部分病人进行追踪检测及随访。结果 159例未经选择的初发急性髓系白血病病人中,31例（19．5％）有t（8;21）（q22;q22）易位,36例（22．6％）表达AML1／ETO融合基因,所有t（8;21）阳性的病人均存在AML1／ETO融合基因。AML1／ETO融合基因阳性病人缓解率为80．6％（29／36）,高于阴性病人（M,除外）的60．2％（56／93）;AML1／ETO阳性病人经治疗后转阴并持续阴性者预后好,而持续阳性者预后差,由阴性转阳性者可预示复发。14例持续缓解超过18个月的病人AML1／ETO融合基因仅1例为阳性。结论 （1）RT—PCR法检测AML1／ETO mRNA敏感、快速,定期检测可监测微小残留病变。（2）单次PCR法扩增AMLl／ETO融合基因优于巢式PCR法。     

WT1基因在急性髓细胞白血病患者中的表达及其意义

目的探讨WT1基因在急性髓细胞白血病(AML)患者中的表达及其与临床治疗和预后的关系.方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,检测59例AML患者WT1基因的表达.结果 AML患者WT1基因的表达阳性率初发者(73.2%)与复发患者(75.0%)无差异,但均高于缓解患者(10.0%).WT1基因表达阳性患者的首次化疗缓解率(45%)低于WT1基因表达阴性患者(78%);首次化疗缓解率WT1基因相对表达量≥1的患者(22.2%)低于表达量＜1的患者(57.1%).结论 WT1基因可能是AML患者的癌基因,与疾病的预后有一定关系,动态监测WTl基因的表达有助于临床判断预后和疗效.     

AML1/ETO阳性急性髓系白血病患者galectin-3的表达及临床意义

目的 探讨AML1/ETO阳性急性髓系白血病（AML1/ETO+ AML）患者半乳凝集素3（galectin-3,gal-3）表达及其临床意义。方法 采用实时定量RT-PCR（RQ-PCR）法检测53例AML1/ETO+ AML患者骨髓单个核细胞中gal-3 mRNA表达水平,ELISA法检测患者外周血gal-3蛋白水平,分析gal-3 mRNA表达与疾病预后的相关性。结果 ①gal-3 mRNA及蛋白在初诊AML1/ETO+ AML患者中呈高表达（ P<0.001）,初诊患者gal-3 mRNA与蛋白表达呈正相关（r=0.732, P<0.001）,疾病完全缓解期外周血gal-3蛋白表达量下降（ P<0.001）;②初诊时gal-3 mRNA表达水平越高,患者白细胞数量越低（ P=0.014）,CD34表达和附加染色体异常的比例越高（ P=0.001, P=0.026）;③gal-3 mRNA高表达组与低表达组在完全缓解（CR）、部分缓解（PR）、诱导期死亡（即早期死亡）率上无明显差异（ P＞0.05）,但两组患者在复发率上差异有统计学意义（ P=0.029）;④gal-3 mRNA高表达组患者中位总生存率（OS）及无病生存率（DFS）均较低表达组缩短（ P=0.007, P=0.015）,累积复发率增高（ P=0.045）,但累积死亡率无明显差异（ P＞0.05）。Cox风险比例模型提示gal-3 mRNA是影响AML1/ETO+ AML患者OS及DFS的独立指标。结论 骨髓gal-3 mRNA有可能成为AML1/ETO+ AML患者评估预后及指导治疗的重要参考指标。     

VNN1基因在急性髓系白血病中的表达及临床意义

目的 通过在线数据库挖掘分析VNN1基因在急性髓性白血病（acute myeloid leukemia，AML）中的表达并探讨其临床意义。 方法 使用癌症基因图谱（the cancer genome atlas，TCGA）、组织特异性基因表达库（the genotype-tissue expression，GTEx）和高通量基因表达数据集（gene expression omnibus，GEO）等数据库分析VNN1基因在AML患者和正常对照组中的表达水平; 通过下载TCGA、GEO数据集中AML患者的数据信息，进行VNN1基因表达水平与临床特征及总体生存期的相关性分析; 利用STRING数据库分析VNN1蛋白－蛋白互作网络，并进行GO基因富集和KEGG通路富集分析，通过单样本基因集富集分析(ssGSEA)来评估VNN1与免疫细胞浸润之间的相关性。 结果 与健康对照组（0.025±0.053）相比，VNN1在AML中显著高表达（3.306±1.991）（P＜0.001），且其表达水平与AML患者细胞遗传学风险、FLT3突变状态、NPM1突变状态存在密切关系（P＜0.05）；ROC曲线表明VNN1的表达水平可以准确区分正常人群和AML患者（曲线下面积为0.969）；生存分析结果显示VNN1低表达的AML患者中位生存期为27.4个月，而高表达组中位生存期只有10.1个月，差异有统计学意义( P＜0.001) 。单因素和多因素COX回归分析均表明高表达的VNN1是AML总体预后的独立危险因素（风险比分别为1.998,1.763）（P＜0.05）；STRING数据库显示与VNN1相互作用的蛋白有PANK1、PANK3、PANK2、VNN2、VNN3、SERPIN2、TAAR2、TAAR5、TAAR1、STX7。GO功能及KEGG信路通路的富集分析显示VNN1主要参与的生物学过程包括囊泡运输中的核心蛋白复合体相互作用、泛酸和辅酶A生物合成、补体和凝血级联反应过程、血小板活化等。 结论 通过对在线数据库进行挖掘分析发现，VNN1在AML中显著高表达且与患者总体生存期呈负相关，为进一步深入研究AML发病机制和靶向治疗提供了理论依据。     

CIG方案治疗急性髓系白血病疗效分析

目的观察阿糖胞苷(Ara-C)、去甲氧柔红霉素(IDA)和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)联合方案(CIG方案)治疗急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)的临床疗效及不良反应。方法初治、难治/复发和老年AML患者中36例采用CIG方案治疗,完成1个疗程后评估疗效,治疗失败患者则退出观察,有效者继续接受1个疗程治疗。随访分析患者总体生存期(overall survival,OS),评判CIG方案的疗效。结果 CIG组36例中完全缓解(completely remission,CR)20例(55.5%),部分缓解(partial remission,PR)9例(25%),未缓解(non remission,NR)7例,死亡1例,总有效率80.55%。其中第1个疗程达CR者14例,第2个疗程达CR者6例。CIG组中位OS 26个月。结论初治、难治/复发和老年AML患者治疗中,CIG方案是有效且不良反应低的治疗方法。     

定量监测AML1-ETO融合基因表达水平在急性髓系白血病治疗中的临床价值

目的 探讨急性髓系白血病治疗过程中AML1-ETO融合基因表达水平的变化规律.方法 采用基于TaqMan探针的RQ-PCR技术,以AML1-ETO融合基因为靶分子,定量监测15例急性髓系白血病患者初诊和随访时融合基因的表达水平,分析该基因表达水平的变化与临床特征的相关性.结果 患者初诊时,AML1-ETO融合基因的表达...     

急性白血病钙素基因甲基化的PCR检测

应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了１０例急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）和２２例急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）降钙素（ＣＴ）基因的甲基化程度。结果表明,７例ＡＬＬ与１６例ＡＭＬ的ＣＴ基因都发生了高度甲基化。临床完全缓解的３例ＡＭＬ和２例ＡＬＬ中有１例ＡＬＬ为阳性,另有１例阴性的ＡＭＬ于１个月后转为阳性,随后出现临床复发。提示急性白血病ＣＴ基因高度甲基化的ＰＣＲ检测,对ＡＬＬ与ＡＭＬ微小残留病有很重要的诊断价值,特别为缺乏恒定肿瘤细胞标志的ＡＭＬ提供了一个新的分子基因标志。     

伴EVI1高表达的中高危急性髓系白血病临床特点及早期治疗效果

目的：探讨EVI1基因阳性的急性髓系白血病（acute myeloid leukemia, AML）患者的临床生物学特点及其对早期化疗疗效的影响。方法： 选择2015年3月至2016年7月在北京大学血液病研究所诊治的361例AML患者病例资料进行回顾性分析,其中33例AML患者EVI1基因阳性,分析比较其临床特征和生物学特征,并比较中危及高危伴EVI1+AML患者的临床与生物学特征及诱导缓解率,分析获得完全缓解（complete remission, CR）的影响因素。32例健康供者进行EVI1/ABL基因水平检测,确定EVI1表达的异常界值。结果：以EVI1/ABL基因定量表达≥8.0%作为EVI1的阳性表达。在361例初发AML中,EVI1+AML患者共33例（9.1%）,其中男性16例,女性17例,中位年龄45（18~67）岁,中位随访期为6.6（0.7~13.2）个月。中危核型17例,包括正常核型9例,1例+8;高危核型14例,包括7例-7/7q-,4例t(v;11q23),3例inv(3)/t(3;3),2例未见分裂象。33例患者1个疗程完全缓解率为42.4%,总CR率为60.6%。按《美国国立综合癌症网络（National Comprehensive Cancer Network,NCCN ）指南》预后分层,分为中危组16例,高危组17例,无低危组患者。中危组与高危组1个疗程CR率分别为68.8%和17.6%（P=0.005）, 总CR率分别为81.3%和41.2%（P=0.032）,复发率为7.7%和14.3%。单因素分析,高危染色体核型对1个疗程CR率及总体CR率均有影响（P=0.004、0.029）。高危组患者病死率显著高于中危组（41.2% vs. 6.3%,P=0.039）, 且总生存（overall survival, OS）显著低于中危组（P=0.012）。结论: EVI1基因在AML中常伴中、高危核型表达,对于AML患者来说可能不是独立的预后因素,伴-7/7q-、t(v;11q23)及inv(3)/t(3;3)等高危染色体核型的预后差,其1个疗程CR率及总CR率、长期生存率低,病死率高,应尽早行异基因造血干细胞移植。     

分化抑制因子1基因在急性髓系白血病患者骨髓单个核细胞中的表达

目的: 探讨分化抑制因子1（inhibitor of differentiation 1,ID1）基因在急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）患者骨髓单个核细胞中的表达及其临床意义。方法: 应用实时定量PCR方法检测153例初诊AML患者骨髓单个核细胞ID1基因的转录本水平。结果： ID1基因的表达范围为0.000～3.536（中位为0.030）。以中位数值为界将AML患者分为高表达组和低表达组,两组AML患者性别、外周血小板计数以及常见基因突变无统计学差异（P>0.05）,外周血白细胞计数、外周血血红蛋白、FAB分型、WHO分型、核型分组及核型危险程度分组趋近统计学差异（P<0.10）。ID1高表达患者年龄以及骨髓原始细胞比例显著高于ID1低表达患者（P=0.033、0.035）。ID1高表达组患者经治疗后完全缓解率低于ID1低表达组（P<0.01）,且定量分析显示经1～2个疗程诱导化疗获得完全缓解的AML患者初诊时ID1表达水平显著低于未获得完全缓解的AML患者（P=0.001）。生存分析显示在全部患者、非M3患者或正常核型AML患者中,ID1高表达患者总体生存时间均明显短于ID1低表达患者（P=0.002、0.008和0.050）。 结论： ID1基因表达水平可作为AML患者化疗反应以及预后判断的分子标志。     

急性髓性白血病患者斯奇康治疗前后Th1/Th2细胞因子变化及临床意义

目的:观察急性髓性白血病(AML)患者Th1/Th2细胞因子变化及使用斯奇康后的变化。方法:用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定AML患者血中Th1细胞因子IL-2和INF-γ及Th2细胞因子IL-4和IL-10水平,并与健康对照人群的比较;AML患者在常规治疗的同时,用斯奇康肌肉注射0.3mg/次,2次/周,共18次,同法测定上述细胞因子水平,与治疗前比较。结果:AML患者与健康人群比较,Th1细胞因子IL-2和INF-γ均显著降低(P<0.01),而Th2细胞因子IL-4和IL-10显著增加(P<0.01);与斯奇康治疗前比较,治疗后Th1细胞因子IL-2和INF-γ均增加(P<0.05),而Th2细胞因子IL-4显著降低(P<0.01),IL-10亦有降低,但与治疗前比较差异无显著性(P=0.076)。结论:AML患者存在Th1功能低下而Th2功能相对亢进的免疫失衡状态,斯奇康有改善AML患者上述免疫失衡的功能。