系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞趋化因子受体4、5 mRNA的表达

目的探讨趋化因子受体CCR4及CCR5在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达,与疾病的相关性.方法收集93例确诊的SLE患者和30名正常对照,通过外周血单个核细胞(PBMC),提取RNA.应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测研究对象CCR4、CCR5 mRNA表达水平.结果趋化因子受体CCR4 mRNA在SLE患者PBMC中的表达水平,患者组(1.57±0.70)与正常对照组(0.19±0.18)比较,两者差异有显著性(t=3.012,P=0.003);活动期(2.03±1.04)非活动期(0.26±0.19)及对照组比较,两者差异有显著性;非活动期与对照组比较,差异无显著性(P＞0.05).趋化因子受体CCR5 mRNA在PBMC中表达水平,患者组(0.56±0.44)与对照组(0.37±0.14)比较,两者差异有显著性(t=3.262,P=0.002);活动期(0.53±0.51)与非活动期(0.59±0.34)比较,差异无显著性(P＞0.05);活动期与对照组比较(t=2.039,P=0.045)及非活动期与对照组比较(t=3.461,P=0.001),两者差异有显著性.SLE患者组CCR4及CCR5 mRNA水平与疾病活动度评分关系CCR4 mRNA水平与SLEDAI(r=0.376,t=3.851,P=0.000)呈正相关.CCR5 mRNA水平与疾病的活动性(SLEDAI)(r=0.062,t=-0,589,P=0.557)不相关.结论CCR4 mRNA表达水平在患者组比对照组表达增高,活动期比对照组表达水平增高,与疾病的活动性(SLEDAI)呈正相关.CCR5 mRNA表达在患者组比对照组增高,差异有显著性,与SLEDAI不相关.     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞环氧合酶同工酶mRNA的表达

目的　探讨原生型环氧合酶 (COX 1)和诱生型环氧合酶 (COX 2 )在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞 (PBMC)中的表达水平及其在SLE发病机制中的作用及其意义。方法　应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测了 34例活动期SLE患者和 30名正常人PBMC中COX 1和COX 2mRNA的表达水平。结果　活动期SLE患者COX 1和COX 2的阳性表达率与正常对照组相比差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;活动期SLE患者PBMC中COX 2mRNA的平均表达水平 (0 6 6±0 2 7)明显高于正常对照组 (0 43± 0 16 ) ,差异有非常显著性 (P <0 0 1) ;活动期SLE组COX 1的平均表达水平与正常对照组处于同一表达水平 ,差异性无统计学意义 (P >0 0 5 )。结论　活动期SLE患者外周血单个核细胞中COX 2mRNA的表达增加 ,通过诱导前列腺素 (PGs)的产生参与SLE的发病过程。为特异性COX 2抑制剂应用于SLE的治疗提供了理论依据。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞微小RNA-206表达水平

目的检测系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclearcell,PBMC)微小RNA-206(microRNA-206,miRNA-206)表达水平,探讨其在SLE发病机制中的作用。方法选择2012年12月至2013年11月在沭阳县人民医院确诊的SLE患者,SLE活动性判断采用SLE疾病活动指数(systemic lupus erythematosus diease activity index,SLEDAI);将所纳入SLE患者分为非活动组(SLEDAI≤9分)和活动组(SLEDAI9分)。采集SLE患者及健康对照者外周血标本,分离PBMC。用实时荧光定量聚合酶链反应检测PBMC中miRNA-206及锌指样转录因子4(Kruppel-like factor 4,KLF4)和孤儿核受体γt(orphan nuclear receptorγt,RORγt)mRNA相对表达量。统计学处理采用t检验和Spearman相关分析。结果共纳入27例SLE患者(非活动组12例,活动组15例)和20名健康对照者。SLE患者PBMC中miRNA-206表达水平显著低于健康对照组,差异有统计学意义[(0.066±0.021)vs.(0.143±0.059),P0.01];SLE活动组(0.034±0.015)显著低于非活动组(0.125±0.038)与健康对照组,差异均有统计学意义(均P0.01)。SLE患者KLF4和RORγt mRNA表达水平显著高于健康对照组[(0.637±0.186)vs.(0.104±0.028),P0.01;(0.575±0.263)vs.(0.065±0.014),P0.01]。SLE活动组KLF4 mRNA(0.973±0.231)显著高于非活动组(0.131±0.056)与健康对照组,且RORγt mRNA(0.968±0.316)显著高于非活动组(0.094±0.019)与健康对照组,差异均有统计学意义(均P0.01)。直线相关分析显示,miRNA-206与SLEDAI呈负相关(r=-0.654,P0.01),KLF4 mRNA与SLEDAI呈正相关(r=0.673,P0.01),RORγt mRNA与SLEDAI呈正相关(r=0.719,P0.01);SLE患者miRNA-206与KLF4、RORγt mRNA相对表达量均呈负相关(r=-0.627,P0.01;r=-0.853,P0.01),KLF4与RORγt mRNA呈正相关(r=0.684,P0.01)。结论:SLE患者PBMC中miRNA-206表达水平下降,KLF4和RORγt mRNA表达水平升高,并与疾病活动性密切相关,提示miRNA-206可能在SLE发生发展中起重要作用。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞抗凋亡基因Hax-1的验证及其mRNA表达

目的探讨抗凋亡基因Hax-1在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达水平及其在SLE发病中的作用及意义。方法运用GLGI技术对SLE患者CD4~ T细胞Long SAGE文库中单一匹配标签T4Y7进行鉴定和序列分析,进一步应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测34例活动期SLE患者和25名正常人PBMC中Hax-1 mRNA的表达水平。结果活动期SLE组Hax-1 mRNA的表达水平明显高于正常对照组,两者间差异有统计学意义(Z=-4．556,P＜0．01)；中度及重度活动期SLE患者PBMC中Hax-1 mRNA表达水平显著高于轻度活动组,两者间差异均具有统计学意义(P＜0．01)。结论活动期SLE患者PBMC中Hax-1 mRNA的表达较正常人明显增加,且与SEE的疾病活动性呈一定的线性相关关系。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞白细胞介素-10受体水平的研究

目的探讨IL-10受体(IL-10R)在系统性红斑狼疮(SLE)发病机制中的作用及其临床意义。方法应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测89例SLE患者和30名正常人外周血单个核细胞(PBMC)中IL-10RmRNA的表达水平;用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中IL-10水平。结果①活动期SLE患者和非活动期SLE患者及正常人IL-10受体表达阳性率为100%。②PBMC中,IL-10RmRNA表达水平:活动期SLE患者(1组)为0.87±0.29,非活动期SLE患者(2组)为0.72±0.21,正常人(3组)为0.68±0.14。1组和2组间比较差异有统计学意义(P<0.05),1组和3组间比较差异有统计学意义(P<0.05),2组和3组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。③血清中IL-10水平:1组和2组间比较差异无统计学意义(P>0.05),1组显著高于3组(P<0.05),2组显著高于3组(P<0.05)。活动期SLE患者和非活动期SLE患者血清中的IL-10水平与PBMC上的IL-10R的表达水平呈正相关(r=0.888,r=0.787,P<0.05)。结论IL-10及其受体的异常表达可能在SLE疾病活动和发展过程中起重要作用。检测SLE患者PBMC中IL-10受体的表达水平可作为疾病的活动性指标之一。     

系统性红斑狼疮外周血B淋巴细胞激活及TOLL样受体9表达

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)外周血单个核细胞(PBMCs)中B淋巴细胞的激活状态及TOLL样受体9(TLR9)表达水平。方法用流式细胞术测定25例SLE患者PBMC中CD19 B细胞及CD19 CD38 B细胞的比例。用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量方法检测38例SLE患者PBMCs中TLR9mRNA的表达水平。分析TLR9mRNA的表达水平与SLE活动性指数(SLEDAI)的相关性。结果SLE患者PBMCs中CD19 B细胞和CD19 CD38 B细胞的百分数均高于正常对照组(P<0.01)。活动期SLE患者PBMCs的TLR9mRNA表达低于缓解组(P<0.01)及正常对照(P<0.01),缓解期和正常对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。TLR9mRNA的表达与SLEDAI评分呈负相关。结论SLE患者PBMC中激活B细胞增多。活动期SLE患者PBMC的TLR9的表达水平降低,与SLEDAI呈负相关。TLR9可能参与SLE的病理发病过程。     

系统性红斑狼疮患者外周血多形核粒细胞磷脂酶A2 5-脂氧化酶和白三烯C4合成酶mRNA的表达

目的探讨磷脂酶A2(cPLA2)、5-脂氧化酶(5-LO)和白三烯C4合成酶(LTC4-S)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血多形核粒细胞(PMNs)中的表达水平,及其在SLE发病机制中的作用及意义.方法应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测了28例活动期SLE患者和25名正常人PMNs中cPLA2、5-LO和LTC4-S mRNA的表达水平.结果活动期SLE患者cPLA2、5-LO和LTC4-S的阳性表达率与正常对照组相比差异无统计学意义;但活动期SLE患者PMNs中的5-LO mRNA的平均表达水平(0.89±0.26)明显高于正常对照组(0.64±0.14),LTC4-S mRNA的平均表达水平(0.68±0.38)也明显高于正常对照组(0.40±0.14),两者差异均有统计学意义(P＜0.01);活动期SLE组cPLA2的平均表达水平(0.63±0.27)与正常对照组(0.50±0.19)处于同一表达水平,差异无统计学意义.结论活动期SLE患者PMNs中5-LO和LTC4-S mRNA的表达增加,通过诱导半胱氨酸白三烯(CysLTs)的产生参与SLE的发病过程,为特异性5-LO抑制剂或CysLTs受体拮抗剂应用于SLE的治疗提供了理论依据.     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞CD28 mRNA的表达

目的　探讨CD28在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达水平及其意义。方法　应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测了34例活动期SLE患者和30名正常人PBMC中CD28mRNA的表达水平。结果　活动期SLE患者CD28的阳性表达率为20.6%,明显低于正常人对照组(70.0%),差异非常显著(P＜0.001);活动期SLE组CD28的平均表达水平(0.19±0.21)亦明显低于正常对照组(0.43±0.11),差异显著(P＜0.05)。结论　CD28的异常表达可能在SLE发病机制中起作用,CD28mRNA的低水平表达可能与外周血CD28＋T细胞凋亡增加或迁移到炎症部位有关。     

FOXO1和FOXO3a在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中的表达及其与疾病活动性的关系

目的 探讨转录因子FOXO1和FOXO3a在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达水平及其与SLE疾病活动性的关系.方法 选择SLE活动性、SLE非活动性患者和正常对照,运用反转录一聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测SLE患者和健康对照组PBMC中FOXO1和FOXO3a mRNA及蛋白的表达水平.结果 活动性SLE患者PBMC中FOXO1 mRNA和蛋白的表达水平明显低于SLE非活动性患者和正常对照(P<0.05),非活动性SLE患者FOXO1 mRNA和蛋白的表达水平明显低于正常对照(P<0.05).FOX03a mRNA和蛋白的表达水平在3组间差异无统计学意义.FOXO1 mRNA水平与狼疮活动指数(SLEDAI)呈显著负相关(r=-0.651,P<0.05).结论 SLE患者PBMC中FOXO1 mRNA和蛋白的表达水平显著低于健康对照,随着SLE患者病情的好转,FOXO1 mRNA和蛋白的表达水平逐渐增高.FOXO1与SLE疾病的活动性呈负相关.FOXO3a与SLE疾病的活动性无关.     

系统性红斑狼疮患者CpG基序甲基化状态与淋巴细胞功能相关抗原-1表达的研究

目的 研究系统性红斑狼疮患者(SLE)CpG基序甲基化状态和淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)mRNA的表达水平,并探讨两者的关系.方法 提取26例SLE患者与17名健康人外周血淋巴细胞,分别用5-甲基胞嘧啶抗体与流式细胞仪检测CpG基序甲基化状态和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析LFA-1 mRNA表达水平.结果 SLE患者的CpG基序甲基化水平(10.0±1.2)低于健康对照组(11.9±1.0,P<0.05),并与SLE疾病活动指数(SLEDAI)旱负相关(r=-0.62,P<0.05);SLE患者IJFA-1 mRNA表达(0.55±0.11)明显高于健康对照组(0.25±0.08,P<0.05),并与SLEDAI呈正相关(r=0.54,P<0.05);SLE患者CpG基序甲基化水平与LFA-1 mRNA表达呈负相关(r=-0.57,P<0.05).结论 SLE患者存在CpG基序低甲基化状态,并与LFA-1高表达相关联,表观遗传学在SLE发病机制中具有重要作用.     

系统性红斑狼疮患者外周血T淋巴细胞Foxp3的表达和转化生长因子-β1水平与病情的相关性

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血调节性T淋巴细胞Foxp3 mRNA和转化生长因子(TGF)-β1的水平与SLE病情活动的关系.方法 对SLE患者采用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测外周血单个核细胞Foxp3 mRNA的表达.对病情活动组患者进行随访,在疾病稳定期再次检测Foxp3 mRNA水平并用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测疾病缓解前后血浆TGF-β1的浓度.结果 病情活动组Foxp3 mRNA水平明显低于非活动组(P<0.01)和健康对照组(P<0.01).在疾病稳定期Foxp3 mRNA水平和血浆TGF-β1浓度较活动期明显升高.结论 Foxp3表达及TGF-β1浓度与SLE疾病活动呈负相关,提示调节性T淋巴细胞在SLE发病中有重要作用.     

外周血单个核细胞巨噬细胞移动抑制因子表达及其与狼疮活动

目的 观察系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)巨噬细胞移动抑制因子(MIF)mRNA表达及血MIF水平的变化,并分析其与SLE疾病活动性、血清免疫学指标的相关关系。方法 采用逆转录-PCR技术及ELISA方法分别测定34例活动期和21例静止期SLE患者的PBMC中MIF mRNA表达及血清MIF浓度,并以18例正常人作对照,观察SLE患者血MIF的改变及其与疾病活动性、血清免疫学指标的相关关系。结果 SLE患者PBMC中MIF mRNA表达及血MIF水平较正常人显著升高(P<0.01),且活动期患者增高更为明显,显著高于静止期患者(P<0.01)。SLE患者血MIF水平及PBMC中MIF mRNA表达与疾病活动指数、抗ds-DNA抗体、血补体C3、C4及IgG水平明显相关,但与抗核抗体无关。结论 SLE患者血MIF mRNA表达及血MIF水平显著增高,其变化可反映SLE患者疾病的活动性。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞骨调素表达及临床意义

目的 探讨骨调素在系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）患者中的表达及临床意义。方法 用流式细胞仪和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ杂交方法分别检测ＳＬＥ患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）ＯＰＮ蛋白和ｍｔｎＡ的表达。结果 活动期和稳定期ＳＬＥ患者ＰＢＭＣ ＯＰＮ蛋白和ｍＲＮＡ的表达均高于正常人（Ｐ〈０．０１）,ＳＬＥ患者ＯＰＮ蛋白主要在淋巴细胞表达,而活动期患者ＰＢＭＣ ＯＰＮ蛋白及ｍＲＮＡ的表达高于稳定期患者（Ｐ〈０     

Abnormal expression of chemokine receptors on T-cells from patients with systemic lupus erythematosus

The expression of chemokine receptors on T-cells and chemokine levels in the blood was studied in 23 patients with SLE (ACR criteria), seven patients with rheumatoid arthritis (RA) and in 15 healthy controls using flow cytometry, RT-PCR and ELISA. The cell surface expression of the chemokine receptors CXCR5 and CCR6 was decreased in SLE patients compared with controls (P = 0.051 and P = 0.002, respectively). The decrease of CXCR5 was confined to SLE patients with inactive disease (SLEDAI < 6) compared with active disease (SLEDAI > 6) and controls. CXCR2 and CCR1 were increased in patients with active SLE compared with patients with inactive disease (P = 0.001 and P = 0.01, respectively) and with controls (P = 0.02 and P = 0.053, respectively). The levels of the chemokines MIP-1alpha MCP-1, SDF-1alpha, IP-10 and RANTES were significantly elevated in SLE patients compared with controls. Patients with renal involvement had increased surface expression of CXCR3 and CCR3 (P = 0.04 in both) and a lower level of soluble IP-10 compared with patients without renal disease (P = 0.025) and compared with controls (P = 0.001). The ratio between CCR5 and CCR3 was significantly increased in RA patients compared with SLE patients and controls supporting a Th1 overweight in RA. In conclusion, patients with SLE showed abnormal T-cell expression of several chemokine receptors and levels of soluble chemokines in their plasma/serum.     

类风湿关节炎患者外周血高迁移率族蛋白1表达

目的通过检测类风湿关节炎（RA）患者外周血单个核细胞（PBMC）、血浆中高迁移率族蛋白1（HMGB1）表达,为寻找治疗RA的新靶点提供依据。方法采集38例活动期RA患者、24例相对稳定期RA患者和20例健康对照者外周血。RT．PCR检测PBMC HMGB1mRNA表达,Western blot检测PBMC、血浆HMGB1蛋白表达。结果与相对稳定期RA患者、健康对照者相比,活动期RA患者PBMC HMGB1mRNA表达水平差异无统计学意义（F=1．23,P〉0．05）,而HMGB1蛋白表达水平下降（F=70．91,P〈0．01）,血浆HMGB1水平显著增高（P〈0．001）。相对稳定期RA患者与健康对照者之间差异无统计学意义（P〉0．05）。活动期RA患者血浆HMGB1水平与ESR（r．=0．478。P〈0．001）、C-反应蛋白（rs=0．574,P〈0．05）呈正相关。结论HMGB1与RA发病密切相关,并可能成为新的治疗靶点。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞B细胞刺激因子的异常表达及其临床意义

目的研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞中B淋巴细胞刺激因子(Blys)的表达情况,并探讨Blys的转录水平与狼疮活动性和狼疮肾炎(LN)的关系,分析Blys在狼疮发病中的作用。方法应用半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测活动期组(26例)和缓解期组(22例)SLE患者外周血单个核细胞(PBMCs)BlysmRNA的表达水平,以健康志愿者(20例)作为对照;同时将BlysmRNA的表达水平与患者临床检验指标进行相关分析;采用流式细胞仪技术检测20例SLE患者和16例健康对照膜结合型Blys蛋白水平。结果SLE患者PBMCsB1ysmRNA的表达明显高于正常人(P<0.01),活动期患者的表达高于缓解期(P<0.05);BlysmRNA的表达与狼疮活动指数(SLEDAl)和蛋白尿呈正相关,与补体C3、C4水平呈负相关;抗dsDNA抗体阳性和尿蛋白阳性的SLE患者BlysmRNA的表达高于阴性患者(P<0.05);而且SLE患者PBMCs中Blys的平均荧光强度也显著增加(P<0.05)。结论SLE患者PBMC的膜Blys和BlysmRNA表达均增强,且与狼疮活动性及尿蛋白呈正相关,提示Blys可能参与SLE及狼疮肾炎的发病过程,且有望成为临床观察和疗效评价的新指标。     

IKB激酶在系统性红斑狼疮患者中表达及与干扰素-α产生的关系

目的 研究系统性红斑狼疮(SEE)患者外周血白细胞中IKB激酶(IKK-α)、干扰素(IFN)-αmRNA的表达,并检测血浆中IFN-α的水平,以探讨SLE患者中IKK-α在IFN-α产生中的作用.方法 SYBR green dye I实时定量聚合酶链反应(PCR)方法检测外周血白细胞IKK-α和IFN-α的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清IFN-α的水平.结果 ①SLE患者外周血IKK-α mRNA表达高于对照组(P<0.05);在活动组SLE患者中IKK-α mRNA的表达高于非活动组SLE患者(P<0.01).②SLE患者IFN-αmRNA的表达低于对照组(P<0.01),IFN-α mRNA的表达在非活动组SLE患者中低于活动组SLE患者(P<0.01).③SLE患者血清中IFN-α的水平高于对照组(P<0.01),其中,活动组SLE患者血浆IFN-α水平显著高于非活动组患者(P<0.05);SLE患者血浆中IFN-α浓度与抗双链DNA(dsDNA)抗体呈正相关(P=0.001),与补体C3水平呈负相关(P=0.005).④SLE患者IKK-α mRNA的表达与血浆中IFN-α的水平呈正相关(P=0.001).结论 SLE患者IKK-α mRNA的表达明显增高,且与血浆中IFN-α的水平呈正相关;而血浆中IFN-α的水平与SLE的发病及病情活动相关,提示IKK-α可能在SLE的发病中发挥重要的作用.     

系统性红斑狼疮患者程序性死亡配体-1表达的初步研究

目的检测系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)程序性死亡配体-1(PD-L1)的表达水平,探讨其在系统性红斑狼疮发病过程中的作用。方法密度梯度离心法分离系统性红斑狼疮患者和正常人PBMC,采用半定量RT-PCR检测PBMC的PD-L1mRNA表达。结果系统性红斑狼疮患者活动期组和稳定期组的PD-L1mRNA表达与对照组比较明显增高,差异有显著性(P均<0.05);但PD-L1mRNA表达在系统性红斑狼疮活动期组与稳定期组之间比较无显著性差异(P>0.05)。结论系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞PD-L1mRNA表达水平增加,程序性死亡配体-1可能在系统性红斑狼疮的发病机制中有一定的作用。