NADPH氧化酶介导血管紧张素Ⅱ诱导的腹膜间皮细胞转分化及细胞外基质积聚

目的 探讨NADPH氧化酶在血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的腹膜间皮细胞转分化以及细胞外基质积聚中的作用。 方法 体外培养SD大鼠原代腹膜间皮细胞，静止24 h后，随机分为以下4组：正常对照组，AngⅡ（10^-7 mol/L）组，AngⅡ+ Los(洛沙坦,10 μmol/L)组及AngⅡ+DPI（NADPH氧化酶活性抑制剂，10 μmol/L）组。应用荧光染料（DCF）及激光共聚焦显微镜检测细胞内活性氧（ROS）的产生。RT-PCR检测NADPH氧化酶亚单位p47phox以及纤溶酶原激活物抑制剂（PAI）1、α平滑肌肌动蛋白（SMA）、E钙黏蛋白（cadherin） mRNA的表达。Western印迹检测p47phox、α-SMA的蛋白表达。 结果 （1）外源性AngⅡ可显著增加大鼠腹膜间皮细胞ROS的产生，刺激15 min后，ROS 的表达较对照组上升了(3.64±0.53)倍。DPI和洛沙坦可显著抑制AngⅡ刺激后ROS的产生（P < 0.05）。（2）AngⅡ刺激腹膜间皮细胞后， NADPH氧化酶亚单位p47phox mRNA和蛋白的表达均呈上升趋势。洛沙坦和DPI可阻断由AngⅡ诱导的p47phox表达上调（P < 0.05）。（3） AngⅡ诱导α-SMA表达的上调以及 E-cadherin mRNA的下调, 洛沙坦和DPI可部分逆转AngⅡ的这种作用。（4）AngⅡ刺激8 h后可明显上调PAI-1的mRNA表达，为正常对照组的（3.06±0.77）倍。 洛沙坦和DPI可明显阻断PAI-1的表达上调（P < 0.05）。 结论 NADPH氧化酶依赖产生的ROS介导了AngⅡ诱导的腹膜间皮细胞转分化及细胞外基质积聚。阻断AngⅡ的作用及抑制NADPH氧化酶的表达和活性可作为防治腹膜纤维化的潜在治疗靶点。     

夹竹桃麻素对高草酸尿症大鼠肾脏氧化应激损伤的保护作用

目的 观察NADPH氧化酶特异抑制剂夹竹桃麻素（apocynin）对高草酸尿症大鼠肾脏氧化应激（OS）损伤的保护作用。 方法 自由饮用含有0.8%乙二醇的水4周建立高草酸尿症SD大鼠模型。大鼠按随机数字表法分为4个组：空白组、高草酸尿症组、apocynin干预组、apocynin对照组。后两组给予apocynin（0.2 g&#8226;kg-1&#8226;d-1）灌胃,对照组给予正常饮水。4周后检测大鼠肾脏OS 指标（尿H2O2和8-异前列腺素）,以及Ccr及肾脏/体质量比值。免疫组化观察NADPH氧化酶亚基p47phox在肾脏中的表达位置。RT-PCR和免疫印迹法分别检测肾组织NADPH氧化酶亚基p47phox、gp91phox、Nox-1 mRNA以及p47phox蛋白的表达水平。 结果 p47phox在各组肾脏中均有广泛的表达,包括肾皮质区、内髓区、外髓区等。与空白组比较,高草酸尿症组大鼠尿H2O2和8-异前列腺素水平显著升高,Ccr降低,肾脏/体质量比值增高（均P < 0.05）;肾脏p47phox、gp91phox和Nox-1 的mRNA表达均显著增加（均P ＜ 0.05）, p47phox蛋白表达也增多（P ＜ 0.01）。apocynin干预治疗可抑制肾脏p47phox、Nox-1 mRNA及p47phox蛋白的表达,但gp91phox mRNA表达未明显减少,而大鼠尿H2O2和8-异前列腺素水平下降,Ccr增加,肾脏/体质量比值减少,但仍高于对照组水平。 结论 NADPH氧化酶是高草酸尿症诱导大鼠肾脏OS损伤过程中活性氧形成的来源之一。使用apocynin抑制NADPH氧化酶活性可部分减轻肾脏的OS损伤程度,保护肾功能。     

福辛普利对糖尿病大鼠肾脏NADPH氧化酶p22phox亚基mRNA表达的影响

目的 观察福辛普利对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾脏还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶p22phox 亚基mRNA表达及细胞外基质（ECM）聚积的影响，并探讨其可能机制。 方法 STZ诱导的糖尿病大鼠模型，随机分为糖尿病非治疗组（DM组）和福辛普利治疗组（DM+Fosin组，福辛普利10 mg·kg-1·d-1），疗程12周。RT-PCR法检测肾脏NADPH氧化酶p22phox mRNA的表达；免疫组织化学方法检测肾脏纤连蛋白（FN）表达；白明胶酶谱法检测肾脏基质金属蛋白酶9（MMP-9）的活性；并检测Scr、尿蛋白排泄量和肾质量指数等指标。 结果 实验第4 周，DM+Fosin组大鼠肾脏NADPH氧化酶p22phox mRNA表达较DM组减少45％（P ＜ 0.05）。第8周时，DM+Fosin组的肾小球和肾小管间质FN表达较DM组分别降低52.5％和42.9％（均P ＜ 0.05）；肾脏MMP-9的活性升高29.6％（P ＜ 0.05）。实验第12周时，DM+Fosin组大鼠Scr水平、尿蛋白量（24 h）和肾质量指数较DM组分别降低35.9％、50.2％和17.2％（均P ＜ 0.05）。DM+Fosin组和DM组血糖的差异无统计学意义（P ＞ 0.05）。 结论 福辛普利可延缓糖尿病肾病的发生和发展，其机制可能与通过抑制NADPH氧化酶p22phox亚基mRNA的表达有关。     

先兆子痫大鼠循环、胎盘及肾脏局部血管紧张素Ⅱ及其1型受体的表达

目的 研究先兆子痫大鼠模型循环系统、胎盘及肾脏局部血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）及其1型受体（AT1）的表达。 方法 采用一氧化氮合酶抑制剂亚硝基左旋精氨酸甲酯（L-NAME）制备大鼠先兆子痫模型，分别比较先兆子痫大鼠、正常妊娠大鼠、未孕对照组大鼠动脉收缩压（SBP）、尿蛋白量(24 h)、肝肾功能，并对各组大鼠肾组织进行光镜检查。ELISA法和放射性免疫法分别测定各组大鼠血浆及肾脏局部匀浆液AngⅡ水平。Western印迹法检测大鼠胎盘局部AT1表达。免疫组化法及Western印迹法测定大鼠肾脏局部AT1的表达。 结果 在先兆子痫大鼠中，SBP及尿蛋白量(24 h)均较未孕对照组显著升高（P < 0.05）。先兆子痫大鼠血浆AngⅡ显著高于正常妊娠组[（0.706±0.086） ng/L比(0.540±0.085) ng/L，P < 0.05]；胎盘局部AT1表达比正常妊娠组升高46％（P < 0.05）；肾脏局部AngⅡ明显低于正常妊娠组[(65.543±40.634) ng/g比(165.543±33.078) ng/g，P < 0.05]；肾脏AT1表达减少，仅为正常妊娠组及未孕对照组的33％及59％（P < 0.05）。 结论 先兆子痫中，胎盘局部RAS表达增强，循环AngⅡ表达增高，肾脏局部RAS表达下调。     

血管紧张素Ⅱ通过TLR4-MyD88途径诱导大鼠肾小管上皮细胞炎性因子释放

目的 观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）刺激肾小管上皮细胞（NRK-52E）后肿瘤坏死因子α（TNF-α）和热休克蛋白47（HSP47）的表达,分析Toll样受体4（TLR4）信号通路的变化与上述因子的关联,探讨AngⅡ促进NRK-52E细胞炎性反应、纤维化的天然免疫机制。 方法 细胞同步化后,将其分为4组：对照组、AngⅡ（10-7 mmol/L）组、坎地沙坦（10-5 mmol/L）+AngⅡ组、TLR4阻断剂（20 mg/L）+AngⅡ组,培养6 h后RT-PCR法检测TLR4及转接信号髓分化因子88（MyD88）mRNA表达水平;12 h后免疫荧光法检测细胞表面TLR4蛋白表达;24 h后以ELISA法检测细胞上清液TNF-α及HSP47的浓度。 结果 与对照组相比,AngⅡ显著上调NRK-52E细胞 TLR4、MyD88 mRNA和TLR4蛋白表达（均P < 0.01）,并诱导细胞TNF-α和HSP47的释放（均P < 0.01）。与AngⅡ组相比,TLR4阻断剂和坎地沙坦干预均显著抑制 AngⅡ对细胞TLR4、MyD88的刺激效应（均P < 0.01）;坎地沙坦抑制AngⅡ诱导的细胞 TNF-α、HSP47的释放（均P < 0.01）,TLR4阻断剂对细胞 TNF-α、HSP47的下调呈剂量依赖性。 结论 AngⅡ对NRK-52E细胞天然免疫信号TLR4、MyD88具有激活效应,该信号激活可能是AngⅡ促进肾小管细胞炎性相关因子释放的重要机制之一。坎地沙坦抑制肾小管细胞炎性因子的体外效应也与其调节该信号通路有关。     

血管紧张素II通过PI3K/Akt/FOXO1信号通路诱导骨骼肌细胞萎缩

目的探讨血管紧张素II(Ang II)对骨骼肌细胞的调控作用及其作用机制。方法使用Ang II及其1型受体(AT1R)拮抗剂(ARB)奥美沙坦干预C2C12成肌细胞,分为Control、Ang II和Ang II+ARB三组。使用2%马血清诱导成肌细胞分化为肌管细胞。免疫荧光染色检测肌管细胞的平均面积改变,Western blot检测肌管细胞泛素连接酶、生肌调节因子(MRFs)和PI3K/Akt/FOXO1信号通路蛋白表达的变化。结果免疫荧光染色显示,Ang II干预后,肌管细胞的平均直径和面积减小(P0.001);使用奥美沙坦干预后,肌管细胞平均直径和面积明显增大(P 0.01)。Western blot显示,Ang II干预后,肌管细胞pPI3K/PI3K(P0.01),p-Akt/Akt (P 0.001)和p-FOXO1/FOXO1 (P 0.01)的比率降低; MURF1 (P 0.05)和MAFbx (P 0.001)蛋白表达明显升高,MHC(P0.01)和MyoD(P 0.05)蛋白表达明显降低;使用奥美沙坦处理后,能够减轻Ang II对肌管细胞的干预作用。结论 Ang II能够通过抑制PI3K/Akt/FOXO1信号通路的磷酸化,促进蛋白的降解,抑制蛋白的合成,诱导骨骼肌细胞萎缩。     

原发性IgA肾病患者肾脏局部血管紧张素Ⅱ表达与肾脏纤维化相关

目的 研究原发性IgA肾病患者肾脏局部肾素-血管紧张素系统（RAS）组分的表达及其相互调节,探讨肾内血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）表达与临床病理损伤指标间的关系。 方法 采用免疫组织化学方法评价肾脏局部RAS组分的表达。分析36例原发性IgA肾病患者肾脏局部RAS组分表达之间的相关性以及肾内AngⅡ表达与血压、估算肾小球滤过率（eGFR）、24 h尿蛋白量和Katafuchi肾脏病理评分之间的相关性。 结果 肾内肾素、血管紧张素原与AngⅡ表达呈正相关（r ＝ 0.43,P < 0.01;r ＝ 0.34,P < 0.05）。肾内AngⅡ表达与eGFR呈负相关（r ＝ -0.61,P < 0.01）,并与病理慢性积分及间质炎性细胞浸润积分呈正相关（ρ ＝ 0.39,P < 0.05;ρ ＝ 0.52,P < 0.05）。 结论 IgA肾病患者肾内AngⅡ表达与肾内肾素、血管紧张素原表达相关,并且肾内AngⅡ表达与肾脏纤维化程度相关。     

红细胞生成素对糖尿病大鼠肾脏保护作用的机制

目的 观察红细胞生成素（EPO）对糖尿病大鼠的肾脏保护作用,并探讨其发挥肾脏保护作用的可能机制。 方法 将实验大鼠随机分为正常对照组（NC组）、糖尿病模型组（DM组）和EPO治疗组（DE组）。药物干预8周后,处死大鼠,检测尿白蛋白排泄率（UAER）、血清肌酐（Scr）、血细胞比容（Hct）。肾组织切片行HE、PAS染色,观察大鼠肾脏病理改变。化学比色法检测肾脏丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性及总抗氧化能力（T-AOC）。免疫荧光及Western印迹法检测大鼠肾脏EPO受体（EPOR）的表达。免疫组织化学及Western印迹法检测大鼠肾脏NADPH氧化酶亚基（p47phox）、转化生长因子β1（TGF-β1）、纤连蛋白（FN）的表达。 结果 EPO可以减轻糖尿病大鼠肾脏病理及功能改变。各组大鼠肾脏均表达EPOR,但表达水平比较差异无统计学意义（P ＞ 0.05）。与NC组相比,DM组大鼠p47phox、TGF-β1、FN蛋白表达增强（均P ＜ 0.01）;GSH-Px、SOD活性及T-AOC下降（均P ＜ 0.01）;MDA含量增加（P ＜ 0.01）。与DM组相比,DE组大鼠p47phox、TGF-β1、FN蛋白表达减弱（均P ＜ 0.05）;GSH-Px、SOD活性及T-AOC升高（均P ＜ 0.01）;MDA含量降低（P ＜ 0.01）。 结论 EPO可通过抑制糖尿病大鼠肾脏氧化应激,降低TGF-β1、FN表达,减轻糖尿病大鼠肾脏病理改变,发挥肾脏保护作用。     

缬沙坦对腹主动脉缩窄大鼠肾脏的保护

目的 观察缬沙坦对腹主动脉缩窄（AAC）大鼠肾功能及肾间质纤维化的影响，并探讨其作用机制。方法 选择AAC术后的24只雄性SD大鼠，将其随机分为3组（对照组、低剂量缬沙坦组、高剂量缬沙坦组），另选8只作为假手术组。治疗10周后，测各组大鼠颈动脉压、尿微量白蛋白（mAlb）、内生肌酐清除率（Ccr）；使用Masson染色评估肾间质纤维化，放射免疫法检测血浆及肾脏血管紧张素（AngⅡ）的浓度，免疫组化法检测肾脏结缔组织生长因子（CTGF）的表达。结果与假手术组比较，对照组颈动脉压、。肾间质纤维化程度、尿mAlb、血浆及肾脏AngⅡ、CTGF表达水平均显著增高，而Ccr水平显著降低（P〈0．01）；与对照组比较，高剂量缬沙坦组颈动脉压、肾间质纤维化程度、尿mAlb、肾脏CTGF表达均明显下降，Ccr水平显著升高（P〈0．01），而低剂量缬沙坦组颈动脉压无明显变化，但其他指标明显优于对照组（P〈0．05或P〈0．01）。结论 缬沙坦可以有效地抑制AAC大鼠肾间质纤维化、改善肾功能，其作用机制可能与阻滞肾脏AngⅡ与AT1受体结合，CTGF的表达下调有关。     

氯沙坦对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠肾小管上皮细胞氧化应激反应的作用

目的 探讨血管紧张素I型受体阻断剂氯沙坦对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的大鼠肾小管上皮细胞氧化应激反应及转化生长因子β1(TGF-β1)产生的影响。 方法 以大鼠肾小管上皮细胞株（NRK-52E）为研究对象,分别给予氯沙坦（10-5 mol/L）和（或）NADPH氧化酶抑制剂联二亚苯碘锚（DPI,10-5 mol/L）预处理1 h后再加入AngⅡ（10-7 mol/L）刺激24 h,同时设立空白培养基作为对照组。实时定量PCR和Western印迹法分别检测4组细胞NADPH 氧化酶p22phox、p47phox、Nox-4 mRNA和蛋白水平及TGF-β1 mRNA水平。用2,7- 二氯荧光素双乙酸盐（H2DCF-DA）作为荧光探针,采用荧光分光光度仪检测细胞内活性氧（ROS）的水平。应用比色法测定细胞上清液中超氧化物歧化酶（SOD）水平。 结果 AngⅡ（10-7 mol/L）刺激细胞15 min后开始产生大量的ROS,至60 min达平台期。单纯AngⅡ刺激1 h后,NRK-52E细胞上清液中SOD水平显著低于对照组（27.31 μU/L 比48.29 μU/L,P < 0.01）;经氯沙坦预处理1 h后再加入AngⅡ刺激1 h细胞上清液中SOD水平升高至36.37 μU/L,与AngⅡ组差异有统计学意义（P < 0.01）。单纯AngⅡ刺激NRK-52E细胞24 h可显著上调NADPH氧化酶p22phox、p47phox和Nox-4 mRNA和蛋白水平,其mRNA水平分别为对照组的5.57倍、5.55倍和9.41倍（均P < 0.01）,蛋白水平分别为对照组的4.53倍、4.17倍和6.50倍（均P < 0.01）。经氯沙坦干预后,p22phox、p47phox和Nox-4 mRNA水平分别为对照组的2.71倍、2.18倍和5.23倍（均P < 0.01）,蛋白水平分别为对照组的3.20倍、2.30倍和4.30倍（均P < 0.01）。AngⅡ刺激细胞24 h后TGF-β1 mRNA表达也显著增多,为对照组的4.36倍（P < 0.01）,氯沙坦处理细胞后TGF-β1 mRNA水平为对照组的1.57倍。 结论 氯沙坦通过抑制NADPH氧化酶的表达和增加SOD的表达减少ROS的产生,并能通过减少ROS产生,抑制AngⅡ诱导的TGF-β1 mRNA水平增高。     

Reduction of renal ischemia reperfusion injury by hydrogen sulfide preconditioning through inhibiting oxidative stress

Objective To investigate the possible role of oxidative stress in the protection of hydrogen sulfide during renal ischemia reperfusion. Methods Male Wistar rats were randomly divided into 3 groups: sham operation (Sham) group, renal ischemia reperfusion (IR) group subject to occlusion of left renal pedicle for 45 min then reperfusion for 24 h, and sodium hydrosulfide (NaHS) preconditioning group with continuous infusion of NaHS (450 nmol/min) by left renal artery for 10 min before ischemia reperfusion. Renal injuries were evaluated by PAS staining. The protein levels of NADPH oxidase (NOX) 4, NOX2 were analyzed by Western blotting. The reactive oxygen species (ROS) level of renal tissue was determined by dihydroethidium (DHE) staining assay. Renal superoxide dismutase (SOD), malonic dialdehyde (MDA) and Scr, BUN were evaluated by chromatometry assay. Cell apoptosis were evaluated by TdT-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL) staining. Results Compared with Sham group, in IR group the renal NOX4 and NOX2 protein expressions, the existence of acute tubular necrosis and ROS expression were up-regulated (all P＜0.01); MDA, Scr, and BUN were increased and SOD was decreased significantly in IR-treated kidney (all P＜0.01); Moreover, more apoptotic cells presented in the risk zone of IR-treated kindey (P＜0.01). The effects induced by IR were inhibited by NaHS. Compared to that in IR group, NaHS precondition reversed IR-induced damages of renal function and renal tissue, increased SOD activity and decreased MDA expression (all P＜0.05), as well as reduced the expression of NOX4, NOX2 and ROS (all P＜0.05). Moreover, NaHS precondition reduced apoptosis after IR (P＜0.05). Conclusions NaHS alleviates renal ischemia reperfusion injury through inhibiting oxidative stress. Hydrogen sulfide can decrease ROS by inhibiting the activation of NOX, further inhibit the activation of NOD-like receptor, and alleviate kidney damage.     

慢性肾脏病患者尿血管紧张素原与肾脏肾素血管紧张素系统活性的相关性

目的 探讨慢性肾脏病（CKD）患者尿血管紧张素原（AGT）与肾损伤指标及肾脏局部肾素血管紧张素系统（RAS）活性的关系。 方法 用放射免疫法和酶联免疫吸附法（ELISA）测定血、尿RAS组分的浓度,并用免疫组织化学方法评价肾内肾素、AGT、血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）和血管紧张素Ⅱ受体的表达。分析129例CKD患者尿AGT与临床指标的相关性以及73例行肾组织活检的CKD患者尿AGT与肾脏局部RAS组分表达的相关性。 结果 129例CKD患者尿AGT （159.08±125.18）μg/g Cr,Scr（113.20±105.05） μmol/L,估算肾小球滤过率(eGFR)（58.52±27.15） ml·min-1·(1.73 m2)-1,尿蛋白量（2.03±2.65） g/24 h,尿AngⅡ（164.71±139.25） ng/g Cr,尿Ⅳ型胶原（447.60±800.66）μg/g Cr,尿钠（162.17±81.61） mmol/24 h。 经Pearson单因素相关分析,尿AGT与eGFR （r = -0.55,P < 0.01）、尿钠 （r = -0.20, P < 0.05）呈负相关;与Scr（r = 0.51,P < 0.01）、24 h尿蛋白量（r = 0.30,P < 0.01）、尿Ang Ⅱ（r = 0.20, P < 0.05）及尿Ⅳ型胶原（r = 0.47,P < 0.01）呈正相关。多元回归分析发现尿AGT与eGFR呈负相关（P < 0.01）,与Scr（P < 0.01）、24 h尿蛋白量（P < 0.05）、尿AngⅡ（P < 0.05）、尿Ⅳ型胶原（P < 0.01）呈正相关。73例CKD患者肾活检组织中,尿AGT与肾脏AGT（r = 0.45,P < 0.01）、AngⅡ（r = 0.52,P < 0.01）和AngⅡ 1型受体（r = 0.28,P < 0.05）免疫组化阳性面积呈正相关。 结论 尿AGT可能是反映CKD肾脏损伤尤其是慢性损伤程度的指标,可作为肾脏局部AngⅡ活性的无创评价指标。     

大鼠慢性牙周炎与慢性肾衰竭模型的建立及相关性研究

目的 用SD大鼠建立慢性牙周炎（CP）和慢性肾衰竭（CRF）动物模型,探讨两种疾病是否相关。 方法 将40只健康雄性SD大鼠随机分为4组,每组10只：正常对照组、CP组、CRF组和CP＋CRF组。于8周末处死动物,检查记录牙周指标,检测血清中血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、白细胞介素（IL）1β、肿瘤坏死因子（TNF）α的含量,观察牙周和肾脏组织病理学改变,进行统计学分析。 结果 成功建立了CP和CRF动物模型。CP＋CRF组Scr（120.54±21.29） μmol/L, BUN（34.20±14.44） mmol/L;CRF组Scr（93.63±18.82） μmol/L,BUN（17.77±4.15） mmol/L,两组间差异有统计学意义（P < 0.05）。肾脏病理显示,CP组肾组织出现炎性改变,CP＋CRF组肾脏炎细胞浸润,PAS、Masson染色评分与CRF组差异有统计学意义。牙周病理显示,CP组、CP＋CRF组出现明显牙周炎,CP＋CRF组附着丧失（AL）（173.60±16.75）μm,CP组AL（124.00±23.87） μm,两组差异有统计学意义（P < 0.05）。CP组、CRF组、CP＋CRF组血清IL-1β、TNF-α水平显著高于正常对照组 （P < 0.05）,CP＋CRF组IL-1β显著高于CP组、CRF组（P < 0.05）,CP＋CRF组TNF-α水平高于CP组、CRF组,且与CP组差异有统计学意义（P < 0.05）。2×2析因设计方差分析结果显示,CP与CRF对Scr、BUN、AL的数值具有交互作用（P < 0.05）,且两因素各自对上述指标的主效应显著（P < 0.05）;CP与CRF对IL-1β、TNF-α的数值不具有交互作用（P > 0.05）,但两因素各自对IL-1β、TNF-α的主效应显著（P < 0.05）。 结论 本模型可在SD大鼠同时显现牙周炎和慢性肾衰竭,CP可加重肾衰竭,两者间有相关性,CP可能通过炎性机制加重肾脏的损害。     

外源性硫化氢在大鼠肾脏缺血再灌注损伤中的保护作用

目的 观察不同剂量外源性硫化氢(H2S)供体硫氢化钠对大鼠肾脏缺血再灌注损伤( IRI)的保护作用.方法 健康雄性Wistar大鼠28只随机分为4组,即假手术组( Sham)、肾缺血再灌注(IR)组、硫氢化钠(NaHS)高剂量组、硫氢化钠低剂量组.大鼠右肾切除后,以NaHS作为硫化氢的供体,NaHS高、低剂量组分别经左肾动脉插管,按照1.5 μmol/min、300 nmol/min的剂量连续15 min给药,假手术组及IR组给予同体积生理盐水.停药5 min 后,NaHS组和IR组用无损伤微动脉夹夹闭左侧肾蒂45 min后解除阻断,建立大鼠急性IRI模型,假手术组不夹闭左肾动脉,其他操作同模型组.于肾脏恢复血流24h时留取血和肾组织标本,检测血清尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr);半定量分析肾脏病理损伤;检测肾组织H2S生成率;采用实时定量PCR法检测胱硫醚-β-合成酶(CBS)、胱硫醚-γ-裂解酶(CSE )mRNA表达.结果 与假手术组相比,IR组H2S生成率显著降低(P＜0.01);CBS、CSE mRNA表达显著下降(P＜0.01 );Scr、BUN显著升高(P＜0.01);肾脏病理表现为急性肾小管坏死,且最严重.与IR组相比,NaHS预处理组H2S生成率升高(P＜0.05);CBS、CSE mRNA表达升高(P＜0.01 );Scr、BUN降低(P＜0.01);病理损伤明显减轻.NaHS两个剂量组之间差异无统计学意义.结论 外源性H2S对大鼠IRI具有保护作用.     

雷公藤内酯醇对肾缺血再灌注大鼠凋亡诱导因子及细胞间黏附分子-1表达的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇(TP)对肾缺血再灌注(I/R)大鼠的肾保护作用,及对凋亡诱导因子、细胞间黏附分子-1的影响。方法:48只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、I/R模型组(I/R组)、TP高、中、低剂量干预组、泼尼松对照组(Pred组)。采用夹闭双侧肾动脉30 min,再灌注18 h的方法制作肾I/R大鼠模型。检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),原位末端标记法检测肾小管上皮细胞凋亡,观察肾病理改变,计算肾小管损伤(ATN)评分。Western印迹和RT-PCR分别检测AIF、ICAM-1蛋白和基因表达。结果:(1)I/R组血Scr、BUN、ATN评分及细胞凋亡指数较假手术组显著升高(P<0.01);与I/R组比较,TP各组以上指标均改善(P<0.01),pred组血Scr、BUN、ATN评分改善(P<0.01),但细胞凋亡指数无明显变化(P>0.05)。(2)I/R组大鼠肾组织AIF、ICAM-1较假手术组高表达(P<0.01);与I/R组比较,TP各组二者表达均减弱(P<0.01),pred组ICAM-1表达减弱(P<0.01)但AIF表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:TP对肾I/R大鼠具有肾保护作用,其部分机制可能与抑制肾小管上皮细胞过度凋亡及AIF、ICAM-1表达有关。     

尿毒清对阿霉素肾病大鼠肾纤维化的保护作用

目的 研究尿毒清对阿霉素肾病大鼠肾纤维化的保护作用及其可能机制。 方法 雄性SD大鼠48只,随机分为正常对照组、模型组、尿毒清组、贝那普利组,每组12只。采用左侧肾脏切除加尾静脉重复注射阿霉素的方法建立阿霉素肾病模型。术后1周尿毒清组给予尿毒清3 g&#8226;kg-1&#8226;d-1灌胃,贝那普利组予贝那普利4 mg&#8226;kg-1&#8226;d-1灌胃。用药4、8周后观察各组大鼠24 h尿蛋白量、血生化及光镜、电镜下肾脏病理变化,应用免疫组化方法测定肾组织骨调素（OPN）、纤连蛋白（FN）、胶原蛋白Ⅳ（COLⅣ）的表达。 结果 模型组大鼠24 h尿蛋白量、BUN、Scr、胆固醇（Cho）、三酰甘油（TG）水平及系膜肾小球系膜基质比（M/G）均显著高于正常对照组（P < 0.01）;血白蛋白（Alb）水平显著低于正常对照组（P < 0.01）;肾组织OPN、FN、COLIV的表达亦显著高于正常对照组（P < 0.01）。尿毒清组24 h尿蛋白量、BUN、Scr、Cho、TG水平及M/G均显著低于模型组（P < 0.01）;肾组织OPN、FN、COLIV表达亦显著低于模型组（P < 0.01）。 结论 尿毒清可减少蛋白尿的排泄,纠正脂代谢紊乱,改善肾功能,加强FN、COLIV的降解,抑制肾小球细胞外基质的过度积聚,从而减轻肾脏病理损害,发挥其肾脏保护作用。     

替米沙坦联合吡格列酮干预糖尿病肾病大鼠蛋白尿发生的机制

目的 观察替米沙坦联合吡格列酮对糖尿病肾病（DN）大鼠肾小球基底膜乙酰肝素酶（HPA）和足细胞podocin表达的影响，并探讨其可能机制。 方法 构建DN大鼠动物模型，将大鼠随机分为替米沙坦组（T组）、吡咯列酮组（B组）、替米沙坦+吡格列酮联合组（L组）、DN组（D组）及健康对照组（N组）。12 周后检测尿蛋白量（24 h）及血生化指标，用 RT-PCR和免疫组化检测HPA、podocin mRNA和蛋白的表达。 结果 灌胃12周后， L组尿蛋白量（24 h）显著低于T组、B组，差异有统计学意义（P ＜ 0.05）。与N组相比， T组、B组、L组、D组空腹血糖、相对肾质量、BUN、Scr均较高，差异有统计学意义（均P ＜ 0.05)。L组的Scr显著低于T组、B组，差异具有统计学意义（均P ＜ 0.05）。与N组相比，其余4组HPA蛋白表达较高， L组显著低于T组、B组；但其他4组podocin蛋白表达水平较低， L组显著高于T组、B组，差异均有统计学意义（均P ＜ 0.05）。与N组相比，其他4组HPA和podocin mRNA表达量较高，L组HPA mRNA表达显著低于T组、B组，podocin mRNA表达显著高于T组、B组，差异均有统计学意义（均P ＜ 0.05）。 结论 替米沙坦联合吡格列酮较单用药显著减轻DN大鼠早期蛋白尿，此作用可能通过下调DN肾小球基底膜HPA，上调足细胞podocin蛋白的表达实现。     

intermedin预处理对大鼠肾脏缺血再灌注损伤修复和再生过程的作用

目的 探讨intermedin （IMD）预处理对大鼠肾脏缺血再灌注（IR）损伤修复和再生过程的作用。 方法 将Wistar大鼠按随机数字表法分为4组：假手术组（sham）、IR组、转空质粒组和转IMD组。在切除右肾后,转IMD组用超声微泡造影剂介导的基因转染方法将IMD真核质粒转染到大鼠肾组织,用RT-PCR和Western印迹法检测转染效率。转染成功后,制作肾脏IR损伤模型,分别于再灌注后1 d、2 d、3 d、4 d、7 d和14 d 6个时间点各取6只大鼠,留取血清及肾组织标本,常规检测血清BUN和Scr;HE和PAS染色观察肾组织的病理变化;免疫组化法观察肾小管上皮细胞的增殖程度。 结果 （1）转IMD组比转空质粒组的IMD蛋白和mRNA表达均增多（均P < 0.05）,且转IMD组7 d时表达最多,与转IMD组4 d时差异无统计学意义;（2）与sham组相比,IR组1 d和2 d时Scr和BUN均显著增高（P < 0.05）;与IR组相比,转IMD组显著下降（P < 0.05）;转空质粒组与IR组相比差异无统计学意义（P > 0.05）。（3）IR组、转空质粒组和转IMD组大鼠的肾小管均受损,但转IMD组的损伤较轻,均以2 d时病理损伤最重。（4）sham组肾小管和肾小球内几乎没有增殖细胞核抗原（PCNA）阳性细胞的表达;IR组和转空质粒组的PCNA阳性数在IR损伤1 d时开始增加,7 d时最多;转IMD组的PCNA阳性细胞数在IR损伤1 d时开始增加,3 d时最多。与IR组1~4 d相比,转IMD组的PCNA阳性细胞数显著增加（P < 0.05）;与IR组7 d相比,转IMD组7 d的PCNA阳性细胞数显著减少（P < 0.05）。 结论 IMD预处理可以促进肾小管上皮细胞增殖,加速肾脏IR损伤修复和再生。     

芡实对糖尿病肾病大鼠肾组织Urotensin Ⅱ及胶原表达的影响

目的：观察芡实对糖尿病肾病大鼠肾组织中UrotensinⅡ及胶原表达的影响。方法：雄性SD大鼠60只,随机选取10只大鼠为正常对照组（N组）,其余50只采用一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ,45mg／kg）诱导DN模型,造模成功后随机分为糖尿病肾病组（DN）、芡实小剂量组（EL,1.5g·kg^-1·d^-1）、中剂量组（EM,3.0g·kg^-1·d^-1）、大剂量组（EH,6.0g·kg^-1·d^-1）及氯沙坦钾组（LP,30nag·kg^-1·d^-1）,每组10只,均采用灌胃给药,N组和DN组给予等量蒸馏水。各组大鼠连续给药12周后,检测大鼠生化指标;HE、Masson染色观察肾脏病理变化;采用免疫组化、western—blot法测定Uro-tensinⅡ及胶原Ⅰ、Ⅲ在肾组织中表达的变化。结果：（1）与N组相比,12周末DN组大鼠肾小球肥大,系膜基质增生,间质胶原沉积．血清BUN、Scr、24h尿蛋白定量明显增高（P＜0.05）,肾组织UrotensinⅡ及胶原Ⅰ、Ⅲ表达增加（P＜0.05）。（2）与DN组相比,EM、EH组大鼠病理改变减轻,BUN、Scr、24h尿蛋白定量显著下降（P＜0.05）,肾组织UrotensinⅡ及胶原Ⅰ、Ⅲ表达明显降低（P＜0.05）。结论：芡实可通过抑制UrotensinⅡ及胶原Ⅰ、Ⅲ在肾闻质的过度表达,进而改善肾功能,延缓糖尿病肾病大鼠肾间质纤维化的进程,从而发挥肾脏保护作用。