SSR标记技术在甘蓝型油菜杂交种纯度鉴定中的应用

利用简化的SSR标记技术对甘蓝型油菜杂交种丰油701、丰油730和湘杂油4号的制种样进行纯度分析,并将丰油701收获样各单株的SSR分析结果与其育性表现进行了比对.结果筛选了38对SSR引物,其中引物Na10-D09在3个品种的不育系与恢复系间的扩增片段大小均存在差异.种植鉴定和SSR鉴定的纯度比较分析表明,SSR技术得到的纯度鉴定结果较种植鉴定的结果更为可靠.     

甘蓝型油菜黄籽品种SSR指纹图谱的构建

采用SSR标记技术构建5个甘蓝型油菜黄籽品种的指纹图谱,用于鉴别种子真伪.以19个甘蓝型油菜黄籽品种(系)为材料,从100对SSR引物中筛选出2对多态性最高的SSR引物进行PCR扩增.经非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测显示, 5个甘蓝型油菜黄籽品种都存在特异性带,成功构建出甘蓝型油菜黄籽品种的指纹图谱.表明SSR标记技术是种质鉴定的一种高效方法.     

甘蓝型油菜黄籽品种SSR指纹图谱的构建

采用SSR标记技术构建5个甘蓝型油菜黄籽品种的指纹图谱,用于鉴别种子真伪。以19个甘蓝型油菜黄籽品种(系)为材料,从100对SSR引物中筛选出2对多态性最高的SSR引物进行PCR扩增。经非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测显示,5个甘蓝型油菜黄籽品种都存在特异性带,成功构建出甘蓝型油菜黄籽品种的指纹图谱。表明SSR标记技术是种质鉴定的一种高效方法。     

甘蓝型油菜杂交种纯度的SSR分子标记鉴定

为更好地推广与应用甘蓝型油菜杂交种,利用成熟的分子标记技术SSR对甘蓝型油菜油研系列制种样进行纯度分析,筛选了2条条带清晰、易于统计的SSR引物,同时鉴定了大田生产F1杂种群体的纯度。结果表明,SSR鉴定的结果能准确反映种子的真实纯度,清晰可辨,可信度高。     

特早熟双低甘蓝型油菜杂交种的选育

采用优质早熟甘蓝型品种与特早熟白菜型油菜品种门源小油菜进行甘白种间杂交的方法,创造出了一批优质特早熟甘蓝型遗传资源,用这些资源作为亲本转育出了3个优质波里马细胞质雄性不育系和1个恢复系,在这些不育系和恢复系配置的杂种中E144表现最突出,它不仅能在海拔2800～3000m的白菜型产区正常成熟,而且芥酸含量小于1%、硫甙含量小于30μmol/g,产量比白菜型油菜主栽品种青油241高30%以上。     

优良玉米杂交种金玉818指纹图谱构建及其纯度鉴定

为构建优良杂交玉米新品种金玉818的指纹图谱,筛选适用于该品种真实性和纯度鉴定的SSR引物,利用SSR分子标记技术构建指纹图谱,筛选引物对金玉818种子进行纯度鉴定,并对鉴定结果进行验证。结果表明:在40对标准SSR引物中筛选出25对多态性好、清晰稳定的引物构建金玉818指纹图谱,筛选出15对适用于该品种真实性和纯度鉴定的引物,其中最佳引物是bnlg16lk8、umc1125y3、umc1429y7、phi053k2、umc1147y4和bnlg2305k4;利用phi053k2、bnlg16lk8和umc1429y7鉴定金玉818种子的纯度分别为92.5%、92%和93.5%,引物间鉴定结果吻合度高,结果可靠。     

新疆陆地棉SSR标记指纹图谱构建和杂种纯度鉴定研究

以新疆近50年来的50个陆地棉种质资源及品种为试材,从50对SSR引物中筛选出10对多态性好的引物,就可以建立新疆陆地棉品种的指纹图谱,每对引物可以检测到1～4个数目不等的多态性片段(allele), 10对引物共检测到27个多态性片段,平均为2.7个,片段大小介于85～300 bp.从10对引物中随机挑选了3对引物对当前新疆主栽品种进行了指纹图谱构建和杂交种纯度鉴定的实践验证.     

油菜杂交种合油杂2号纯度鉴定的SSR引物筛选

以陕西渭北旱塬最新审定的双低油菜品种合油杂2号以及亲本为试验材料,用SSR标记技术研究杂种与双亲之间的扩增谱带多态性以甄别真假杂种。结果发现,200对SSR引物先用亲本进行预选,有45对引物可以特异区分两亲本,进一步反复筛选,其中引物CB10524分别在杂交种和其双亲之间存在扩增条带的多态性,表现为杂交种条带均为父母本的互补型,很适合做杂交种纯度鉴定。用该引物对合油杂2号杂交种进行SSR纯度鉴定,所测纯度分别为93%,与田间实测纯度94.27%非常接近,表明开发的SSR标记技术在合油杂2号油菜杂交种子纯度室内快速检测中具有广阔的应用前景。     

SSR标记在油菜隐性核不育杂交种的纯度鉴定研究

[目的]利用SSR标记对油菜隐性核不育杂交种的纯度进行鉴定。[方法]以贵州省油菜科学研究所选育的甘蓝型油菜"油研系列"为材料,利用简化的SSR标记技术对制种样品进行纯度分析。[结果]筛选出了2对条带清晰、易于统计的SSR引物;大田生产F1杂种群体的纯度鉴定结果表明,SSR鉴定的结果清晰可辨,可信度高,能较准确地反映种子的真实纯度。[结论]该试验为SSR标记在油菜种子纯度鉴定中的进一步应用奠定了基础。     

用RAPD标记鉴定甘蓝型油菜杂种H9909的纯度

通过对杂交组合H9909两亲本的指纹图谱分析，初选出4个引物S374、S1334、S1365和UBC523用于杂种纯度鉴定。引物S1334和UBC523在两亲本中均扩增出特异带，引物S374和S1465能扩增出父本标记带。以两亲本和手工杂种F1为模板对上述4个引物再一次进行RAPD扩增，S1334并没有在F1的RAPD图谱产生理想的双亲型或偏父型标记带，UBC523在F1扩增得到的父本标记带和在母本中扩增的标记带大小相近，不易辨别；引物S374、S1365均能使F1扩增出父本的特异带，进一步确定引物S374和S1365可用于杂种鉴定。引物S374的RAPD标记将待鉴定100个单株中的5个不育单株标记为假杂种，与田间育性调查的结果完全一致。引物S1365的RAPD分析结果显示，除上述5个不育单株外，另外2个可育单株亦为假杂种，可能由外来花粉串粉或机械混杂引起。     

甘蓝型油菜杂交组合的灰色评判

用6个细胞质雄性不育系与5个恢复系配置30个杂交组合,对这些杂交组合的16个农艺性状进行了2 a重复鉴定。应用灰色关联分析法对这30个杂交组合进行综合评价,结果表明,在30个油菜杂交组合中,有8个一等组合,15个二等组合,7个三等组合;在亲本方面,以L451和L89作母本较好,以L161、秦油3号作父本较好,杂交后代均有不同程度的杂交优势,其中L89×L161的杂交优势最高,L161可作为亲和力较高的自交系。     

甘蓝型油菜和诸葛菜属间杂种的获得及其特性

采用人工授粉并结合子房培养的方法,进行了甘蓝型油菜和诸葛菜的正反属间杂交。授粉后5~10d,取子房培养于MS或B5培养基(添加6-BA、NAA、水解酪蛋白和活性碳),结果表明,子房培养有助于提高甘蓝型油菜和诸葛菜属间杂种获得频率。不同杂交组合,属间杂交可交配性不同。以诸葛菜为母本的所有杂交组合没有获得成功,但是在以甘蓝型油菜为母本的正交组合中获得了18株属间杂种,其中8株在形态上近似母本湘油15,10株来自于742与诸葛菜杂交组合,表现出完全的雄性不育,幼苗期叶色浅黄,生长发育缓慢,植株矮小,花瓣呈现乳白色,第一次分枝数少且分枝部位较高。形态学和微卫星标记分析表明,这些植株是真正的属间杂种。杂种后代植株(F2代或回交一代)表现多型性,多数植株的性状倾向母本甘蓝型油菜,可育;部分植株表现为双亲的中间型,部分可育;少数植株发育缓慢,不育。这些杂种植株可能是油菜遗传改良的宝贵资源。     

甘蓝型油菜中油杂8号种子纯度的SSR鉴定

细胞质雄性不育三系杂交种的纯度鉴定是油菜种子生产中重要的一环。选用173对SSR引物在中油杂8号的亲本间扩增,从中筛选到6对扩增效果好、条带清晰且差异片断在亲本间能够重复出现的引物,其中P051、P078和P203三对SSR引物在杂种F1中同时表现出父母本的特征条带。用这3对引物对32份中油杂8号的DNA进行鉴定,发现P078和P203的鉴定结果完全相同,因此采用其中的P078引物对经过田间种植鉴定的中油杂8号样品进行了鉴定。结果表明,SSR鉴定的结果与田间种植鉴定的结果非常接近,说明采用P078或P203都可以对中油杂8号进行快速准确的鉴定。     

SSR鉴定SC704玉米亲本及杂交种纯度的研究

从30对SSR随机引物中筛选确定了能够清楚、稳定、准确的鉴别SC704亲本和杂交种的2对引物。用引物之一phi053对人为混杂有SC704亲本的杂交种进行纯度鉴定,结果准确无误。探讨并建立了一套应用分子标记SSR技术鉴定SC704玉米亲本及杂交种纯度的方法。与田间种植鉴定相比较,SSR技术用于检验玉米品种的纯度是可靠可行的。     

恢复系和保持系RAPD分子标记与甘蓝型油菜杂种优势关系的研究

以6个甘蓝型油菜不育系及其同型保持系、5个恢复系及不育系同恢复系按NC (6×5)设计配成的30个杂交组合为材料,利用RAPD分子标记研究油菜遗传距离与杂种产量、杂种产量优势、特殊配合力的关系。结果表明:23个RAPD引物在6个保持系和5个恢复系间共扩增出89条多态性条带,据此计算出亲本间的相似系数为0.2706～0.6164。聚类分析将参试的6个保持系和5个恢复系分为4组,第1组包括6个保持系和1个恢复系C5,第2组包括C1和C42个恢复系,第3组包括1个恢复系C2,第4组包括1个恢复系C3,亲本分组结果与其地理来源关系不大;方差分析表明,组合间产量差异达极显著水平。特殊配合力与产量、产量杂种优势的相关关系达显著水平,但亲本遗传距离与杂种产量、产量杂种优势、特殊配合力的相关关系都未达显著水平,表明不能根据亲本RAPD遗传距离的大小预测杂种产量及产量杂种优势。     

甘蓝型油菜SSR、ISSR标记的遗传多样性及其与杂种表现的关系

 利用SSR、ISSR标记技术分析了3个甘蓝型油菜自交不亲和系及22个不同来源的父本品种的遗传多样性,及其与这些亲本按NCII法配制杂种的产量性状表现及杂种优势的关系。结果表明,基于遗传距离的UPGMA(非加权类平均法)聚类法可将25个亲本材料分为6组,SI-1300、SI-1320各为一组,来源于中国的2个父本品种为一组,SI-1310与来源于国外的其它品种分属另3组。这种分组结果与材料的来源及系谱关系基本一致。各组间亲本在产量性状、种子品质性状及物候期性状上存在明显差别。SSR、ISSR标记的遗传距离与杂     

Relationship Between Hybrid Performance and Genetic Diversity Based on SSRs and ISSRs in Brassica napus L.

To investigate the relationship between genetic distance (GD) and hybrid performance, twotypes of molecular markers, microsatellites (simple sequence repeats, SSRs) and intro-simple sequence repeats(ISSRs), were employed to detect the genetic diversity of 3 double low self-incompatible lines and 22 male pa-rental varieties of Brassica napus from different geographical origins. Hybrids were produced in a NC Ⅱ mat-ing design by hand-pollination. The result indicated that 25 parental varieties (lines) could be divided into sixgroups by Un-weighted Pair Group Mathematics Average (UPGMA) clustering based on GDs. SI-1300 and SI-1320 could be singly clustered into one group, respectively. Varieties from China could be separated into an-other group, SI-1310 and varieties from foreign countries could be separated into other three groups. Thegrouping was generally consistent with parental pedigrees and geographical origins. Significant differences inyield, quality and phenological period traits were observed among these parent groups. Although hybrid yield/plant showed significantly positive correlation with genetic distance based on SSR and ISSR markers, but thedetermination coefficient was iow. It appeared to be unsuitable for using the genetic distance based on SSR andISSR markers to predict heterosis and hybrid performance in Brassica napus.     

利用优化的SSR分子标记技术检测杂交水稻万优481纯度

[目的]通过降低试验药剂、减少PCR循环时间、提高琼脂糖利用指数等,建立经济、快速、低污染的杂交水稻纯度鉴定体系。[方法]将杂交水稻万优481、亲本万3A和万恢481在光照培养箱内温度发芽(30℃,长到5 cm左右),用CTAB法提取DNA;按优化的PCR体系和电泳方法,用亲本万3A和万恢481的DNA从24对引物中筛选出多态性好的引物P18,用引物P18对杂交水稻万优481样本进行纯度鉴定。[结果]利用优化的SSR分子标记技术准确鉴定出万优481的纯度为98.5%,与田间鉴定结果相符,凝胶电泳成像带谱清晰,同时,与常用方法相比,酶等试验药品使用量减少20%~25%,试验所用时间较常用方法减少了50%以上。[结论]利用优化的SSR分子标记技术体系鉴定杂交水稻种子纯度,经济、快速且鉴定的结果清晰、可靠,同时大大减少琼脂糖等试验残渣的产生,降低了对环境污染,值得推广、应用。     

甘蓝型油菜与黑芥种间杂种的细胞遗传学特征

为将黑芥（Brassica nigra ）抗病基因引入甘蓝型油菜（B ．napus ）,通过有性杂交合成甘蓝型油菜与黑芥的三倍体杂种,经基因组加倍获得相应的六倍体,并观察三倍体和六倍体花粉母细胞减数分裂行为。结果表明：三倍体表现为花粉完全不育,而六倍体雌配子育性得到较好恢复,雄配子育性较低（10％～20％）。三倍体减数分裂终变期染色体主要以单价体形式存在,每个细胞平均形成3．8～5．9个二价体,也有极少数三价体出现。六倍体减数分裂染色体主要形成二价体,并以较低频率形成单价体和四价体。六倍体减数分裂后期 I 均等分离的细胞仅占65％～85％。落后染色体、非四分孢子等异常减数分裂行为也有发生。