牛乳中蜡样芽孢杆菌荧光定量PCR检测方法的建立及验证

目的建立一种快速检测牛乳中蜡样芽孢杆菌的荧光定量PCR方法,并进行验证。方法根据GenBank中登录的蜡样芽孢杆菌gyrB基因序列及荧光定量PCR要求,设计合适的特异性引物,提取菌体DNA,对目的基因进行扩增及克隆;以重组质粒为模板进行荧光定量PCR扩增,绘制标准曲线;以蜡样芽孢杆菌DNA为模板进行荧光定量PCR扩增,确定其扩增条件。对建立的方法进行特异性及灵敏性验证。结果建立的方法检测其他3种牛乳中常见致病菌(大肠埃希菌、志贺菌、沙门菌)未见特异性扩增,即无交叉反应;最低检出限为1×10~(-7) ng/μL。以掺入蜡样芽孢杆菌的牛乳为样品,可检测到牛乳中10. 4 CFU/mL的蜡样芽孢杆菌,优于国标方法(GB 4789. 14-2014)检测含有相同菌落数的蜡样芽孢杆菌(仅能检测到1. 04×10~2 CFU/mL)。结论建立的方法特异性强,灵敏性高,适用于快速、准确检测牛乳中的蜡样芽孢杆菌,为实验室快速检测致病菌提供了参考。     

一株产α-淀粉酶芽孢杆菌的分离与鉴定

利用淀粉选择性培养基从土壤中分离得到1株有明显水解圈的淀粉酶产生菌Y1,经形态学、16SrDNA鉴定其为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus);采用碘比色改良法测定Y1淀粉酶酶活,其酶活为140U/m L。     

枯草芽孢杆菌与水体中U(Ⅵ)的作用机制

通过静态吸附-解吸实验,研究了枯草芽孢杆菌对U(Ⅵ)的吸附热力学和动力学,U(Ⅵ)的解吸和菌体内P的释放过程,利用扫描电镜、能谱(SEM-EDS)和红外光谱(FTIR)分析了作用机理。结果表明:当pH=5时,在1 L 50 mg·L^-1的铀溶液中,投加枯草芽孢杆菌1.384 mg(干重,DW),2 h后,铀的去除率和吸附量分别为85.34%和308.31 mg·g^-1(DW)。随着作用时间从2 h延长至48 h,铀的解吸率从52.13%下降至36.25%,菌体内释放到溶液中的P浓度从 0.12 mg·L^-1增加到0.40 mg·L^-1。枯草芽孢杆菌对水体中U(Ⅵ)的吸附行为可以用Langmuir吸附等温模型和准二级动力学方程较好地描述。作用过程是放热,可自发进行。SEM-EDS表明枯草芽孢杆菌与水体中U(Ⅵ)作用后,菌体内部断裂呈短节状,铀沉积在细胞表面及周围,无明显晶体产物生成,FTIR图谱出现UO₂²⁺特征吸收峰,氨基、磷酸基团参与枯草芽孢杆菌与水体中U(Ⅵ)的作用。     

蜡样芽孢杆菌的破碎条件及对SOD活性的影响

利用超声波对蜡样芽孢杆菌进行破碎处理,并测定蛋白质含量和SOD活性,探索以释放出更多高活性的SOD为目的的蜡样芽孢杆菌最佳细胞破碎条件及其对SOD活性的影响。研究结果表明,最佳的蜡样芽孢杆菌的超声波破碎条件为破碎浓度为10%、破碎功率为600W、破碎时间为5s、破碎次数为90次、变幅杆插入菌悬液深度为4cm。在此条件下菌体释放到破碎液内的蛋白质含量为0.3557mg/mL,而酶活力可达到493.38U/mg湿菌。     

复合吸附剂吸附废水中的重金属离子的动力学研究

采用枯草芽孢杆菌活菌体、石英砂和由二者组成的复合吸附剂对废水中的Cu2+、Zn2+和Cd2+离子分别进行了吸附动力学测试,并采用以R itch ie速率方程为基础的3种吸附动力学方程对吸附动力学数据进行校验。吸附动力学数据均能基本吻合单层吸附模型、改进双层吸附模型和R itch ie双层吸附模型,其中后两者与实验数据吻合更好;双层吸附模型能更好地描述活菌体对3种重金属离子的吸附过程;对3种吸附剂吸附3种重金属离子的动力学过程进行了比较,结果显示复合吸附剂与活菌体吸附剂对3种离子的吸附过程一致,都是快速过程。     

酵母菌固定化及对锶吸附的影响

酵母菌具有吸附富集重金属离子的能力.利用海藻酸钠对酿酒酵母菌进行固定,对固定化后的酿酒酵母菌吸附锶的能力做了对比研究.结果表明,海藻酸钠颗粒对锶有一定吸附作用,吸附速度较快,但是结合不稳定,未固定的酵母菌吸附较稳定,但是在低浓度时,吸附率不高;固定化酵母菌对锶的吸附分两个阶段,低质量浓度(10 mg/L)时,吸附率可达80%.在不同质量浓度梯度下(10～100 mg/L)吸附研究中发现,三者的吸附率均随浓度增大而减小,但吸附总量均有所增加.随培养时间延长,未固定与固定化酵母菌对锶的吸附率和吸附量趋于一致.结果表明海藻酸钠可以作为酵母菌活细胞生长固定化载体并表现出对低浓度Sr2+的较好吸附效果.     

胶冻样类芽孢杆菌菌粉的研制及功能菌株的存活性研究

针对应用较为广泛且增产效果稳定的胶冻样类芽孢杆菌在实际生产过程中存在的发酵有效活菌数低、液体制剂运输不便及保存周期短等问题,筛选出耐高渗透压胶冻样类芽孢杆菌HB-02菌株,并利用该菌株芽孢耐高压、耐高温等特点,采用喷雾干燥方法研制出胶冻样类芽孢杆菌菌粉。试验研究了该菌株发酵液的喷雾干燥处理工艺,结果在入料流量0.75 t/h、通风量20 m~3/min、进风温度150℃条件下,3批次喷雾干燥菌粉平均含菌量达到265.1×10~8 cfu/g,收率达到81.3%,成功研制出高含量胶冻样类芽孢杆菌HB-02菌株菌粉。通过该胶冻样类芽孢杆菌在不同复合微生物肥料中的存活性研究,结果表明在w(N+P_2O_5+K_2O)达到30%、室温保存120 d的情况下,胶冻样类芽孢杆菌在复合微生物肥料中的存活率为89.8%,为该菌株与化肥的有机结合以生产复合微生物肥料提供了理论依据。     

多粘类芽孢杆菌HY96-2制剂中活菌的稳定性研究

考察了芽孢、贮存温度、含水率、光照和pH对多粘类芽孢杆菌HY96-2制剂稳定性的影响。结果表明，与非芽孢制剂相比，芽孢制剂在-20℃～37℃的范围内贮存时活菌存活率较高；含水率为5％左右的芽孢制剂的贮存稳定性较好；当含水率低于5％时，HY96-2芽孢制剂在-20℃贮存30d、20℃贮存90d和54℃贮存14d过程中，活菌存活率均在85％以上；光照2d后制剂中活菌的存活率仅为32．0％；pH在5．5-8时，HY96-2芽孢制剂中活菌能够正常地生长，并具有较高的活菌量。实际使用HY96-2芽孢制剂时，应选择阴天或傍晚，避开光照强烈的时间，并且施药土壤的pH宜在5．5-8范围内。     

桉叶素-松油醇型复合精油对6种霉菌的抑制作用研究

采用平板试验并以丙酸为对照研究桉叶素-松油醇型重整复合精油对轮枝镰刀菌、黄曲霉、桔青霉、枯草芽孢杆菌、酵母菌和副干酪乳杆菌6种菌的抑菌作用。试验结果表明,复合精油在一定浓度范围对6种菌具有较好的抑菌作用,对黄曲霉、桔青霉、酵母菌和副干酪乳杆菌的抑制效果优于丙酸,对轮枝镰刀菌和枯草芽孢杆菌的抑制效果稍差于丙酸,对这6种菌有明显抑制效果的应用体积比范围为0.075~0.240μL/m L,丙酸的有效抑菌体积比范围为0.045~0.263μL/m L,复合精油的有效浓度范围处于丙酸有效浓度范围之内,具有很好的抑菌效果。     

大孔树脂静态吸附番茄内生菌Brevibacillus brevis W4抑细菌成分

[目的]Brevibacillus brevis W4是从番茄茎中分离得到的1株对灰霉病菌有强烈抑制作用的内生菌.为明确其发酵液抑细菌活性,并探索抑细菌物质的大孔树脂吸附条件.[方法]采用管碟法测定了B.brevis W4发酵液对6种病原细菌的抑制活性.并以金黄色葡萄球菌为指示菌,选用大孔树脂对发酵液中的抑细菌活性物质进行静态吸附条件优化.[结果]B.brevis W4发酵液对供试枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、水稻白叶枯病菌、柑橘溃疡病菌、大白菜软腐病菌、姜青枯假单孢杆菌均有抑制活性,对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑菌圈突出,直径分别为21.7、20.1 mm.大孔树脂AB-8对活性物质的吸附效果最好,其较优的静态吸附条件为上样液pH值为8.0,上样量为树脂质量的15倍,最佳的洗脱液体积分数为40％甲醇.[结论]B.brevis W4发酵液具有抑制细菌作用,对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑制作用最强.AB-8可以作为抑细菌活性成分的吸附树脂.     

活性炭增效处理的研究

用化学药剂对活性炭进行浸泡、活化增效处理,结果表明,用CaCl2溶液浸泡活性炭,并分别在350℃、400℃下活化4 h后,其吸附性能增效效果最佳。     

壳聚糖及其衍生物的吸附特性研究进展

综述了壳聚糖及其衍生物对重金属离子、酸和有机染料等吸附特性的研究进展。     

香草醛改性壳聚糖对水中Cu2＋，Pb2＋的吸附性能探讨

研究了香草醛与壳聚糖在pH值为6．8和5．5时,分别对水中Cu2＋,Pb2＋的吸附容量达到476．7mg／g和382．94mg／g。当吸附剂的用量小时,其吸附效果令人满意,可以作为自来水中祛除金属离子,净化水质的吸附剂。     

离子筛型锂吸附剂的吸附性能研究

研究了自制粒状离子筛型锂吸附剂的吸附容量、洗脱性能和重复吸附洗脱时的稳定性。结果表明，吸附剂在纯锃盐溶液中的锂离子吸附容量为15．63mg／g，在海水中的锂离子吸附容量为5．68mg／g；洗脱剂盐酸的浓度越高，对吸附剂中锂离子的洗脱率越高，但同时离子筛的溶损率加大；吸附剂循环吸附洗脱时，吸附与洗脱性能较稳定，并可重复使用。     

天然可降解柚子皮吸附材料制备及其对有机污染物的吸附性能

以天然柚子皮为原料,经干燥后制备了天然可降解吸附材料;应用差热-热重分析了其稳定性,采用X射线衍射分析和扫描电子显微镜对其物相、形貌和微结构特征进行了表征;并用红外光谱分析对其表面特性进行了测试。分析结果表明,热处理过程中柚子皮有四个主要变化过程：吸附水脱附、结晶水脱附、预碳化和碳化与灰化;柚子皮含有丰富的纤维素,内部具有良好的多孔层状结构,且随着热处理温度的升高,纤维素逐渐被分解,多孔层状结构被破坏。以甲苯、甲醛和丙酮等有机物为吸附对象,测试了天然柚子皮吸附材料的吸附性能。结果表明,80℃时干燥后,柚子皮吸附材料对有机污染物的吸附效果最佳。这与柚子皮的吸附水和结晶水的脱除和多孔层状结构保持良好有关。     

呋喃甲酰基吡唑啉酮Cu(Ⅱ)配合物吸附波的研究

在pH=5.0的HAc-NaAc介质中,Cu(Ⅱ)与1-苯基-3-甲基-4-呋喃甲酰基-吡唑啉酮-5(HPMαFP)生成配合物,于-0.55V(vs.SCE)处出现一尖锐、灵敏的极谱峰,Cu含量在1.5～9.0 mg·ml-1区间时与峰电流呈线性关系.用多种电化学方法研究了极谱波的性质及反应机理,证明-0.55V处的极谱波为配合物吸附波,峰电流由中心离子Cu(Ⅱ)还原产生.用直线法测得配合物的组成为Cu2 :HPMαFP=1:2,表观稳定常数为3.89×105.     

膨润土对水中聚丙烯酰胺的吸附行为研究

为了降低聚丙烯酰胺(PAM)对反渗透膜的影响,采用膨润土对水中的PAM进行吸附处理。试验研究了膨润土和非离子聚丙烯酰胺的质量比为10∶1的情况下,PAM在膨润土上的吸附行为,探讨了吸附时间、温度、pH值对吸附效果的影响。结果表明:在温度为30℃,pH9,吸附时间为1 h的条件下,0.1 g膨润土对100mg/L PAM的吸附量为59 mg/g,其吸附行为符合Langmuir吸附等温模型和HO准二级动力学方程式。吸附焓变ΔH为23.62 kJ/mol,该吸附过程是吸热的自发过程。     

高纯度金丝桃素生产工艺研究

利用大孔吸附树脂吸附法研究了金丝桃素的提取分离方法.结果表明,采用HZ 816大孔吸附树脂对贯叶连翘粗提物进行吸附纯化,以水、40%乙醇、60%乙醇洗去大量杂质后,以80%乙醇解吸,所得样品再经酸水结晶可得高纯度的金丝桃素.该方法简便,消耗低,产品纯度高,回收率高.     

甲壳素/壳聚糖及其衍生物的制备和吸附特性研究进展

综述了甲壳素/壳聚糖的制备方法,并论述了壳聚糖及其衍生物对重金属离子、酸和染料等吸附特性的研究进展.     

膨润土的改性及其对染料的吸附性能的试验研究

探讨了膨润土的改性机理、改性方法及其改性后对染料的吸附性能。以钙基膨润土为原料,系统地研究了pH值、活化时间及活化温度对膨润土改性的影响。通过对染料进行吸附试验确定出最佳改性条件,再将改性膨润土用于吸附染料实验,判断出pH值、活性白土用量以及吸附时间对染料吸附的影响。