HGV/GBV-C感染在肝细胞损伤中的作用探讨

目的 研究单一HGV/GBV-C感染者肝组织中该病毒核酸定位及相关抗原表达,探讨HGV/GBV-C感染在肝细胞损伤中的作用。方法 12例单一HGV/GBV-C感染者经肝穿获取的肝组织常规病理诊断,采用地高辛标记探针原位杂交法检测病毒RNA,并用免疫组织化学法检测病毒相关抗原表达。结果 病理诊断急性肝炎8例,慢性肝炎4例。HGV/GBV-C NS5抗原检出阳性率为66.67％(8/12),阳性信号主要位于肝细胞胞浆中;HGV/GBV-C RNA检出阳性率为58.33％(7/12),阳性信号位于胞浆,分布无一定规律,阳性细胞与肝细胞变性、淤胆、炎性细胞浸润、细胞坏死程度等并无相关关系。单一HGV/GBV-C感染者临床表现轻,不易被发现。结论 HGV/GBV-C RNA并不直接损害肝细胞;肝细胞中存在HGV/GBV-C相关抗原表达,其编码产物可能作为一种靶抗原,诱发免疫病理反应。     

GBV-C/HGV在血清学非甲～戊型急性肝炎发生中的作用

探讨GBV-C/HGV在血清学非甲～戊型急性肝炎发生中的作用及临床意义.采用免疫组化方法对56例血清学非甲～戊型急性肝炎患者肝组织标本进行GBV-C/HGV NS5抗原的检测,结合临床资料进行分析.血清学非甲～戊型急性肝炎肝组织中GBV-C/HGV NS5抗原检出率为53.6%,主要是以和HBV/HCV重叠感染的形式存在,重叠感染组的ALT升高和HBV/HCV感染组差异无显著意义.单纯GBV-C/HGV感染占16.1%,所引起的血清ALT升高明显低于HBV/HCV感染,而与病原不明病例差异无显著意义.GBV-C/HGV可能没有致病性或者有弱致病性,不是血清学非甲～戊型急性肝炎的主要致病因子.     

慢性肝病患者肝组织中庚型肝炎病毒抗原的定位研究

应用抗HGV NS5单克隆抗体(McAb),以辣根过氧化物酶与抗辣根过氧化物酶法(PAP)检测了166例慢性肝病患者(CLD)肝组织中庚型肝炎病毒抗原(HGV-Ag)。结果显示,慢性非甲～戊型肝炎、慢性丙型肝炎、慢性乙型肝炎、肝硬变和肝细胞癌患者阳性检出率分别为28.57％、22.45％、14.28％、18.52％和15.38％。HGV-Ag阳性肝细胞多呈散在、局灶和弥漫性三种形式分布,HGV-Ag染色阳性颗粒可见于细胞浆中,HGV-Ag NS5的检出率与HBV、HCV感染有关。提示HGV NS5抗原在慢性肝病患者肝细胞中表达,且HGV NS5的表达与血清HGV RNA水平关系较为密切,HGV感染可能在慢性肝病发生中起一定病原学作用。     

HGV/GBV-C与HCV混合感染者肝组织中相关病毒抗原表达

庚型肝炎病毒(HGV/GBV-C)的致病性是目前研究焦点之一,多数研究表明大多数HGV/GBV-C感染者体内常有两种或两种以上的肝炎病毒混合感染,并认为HGV/GBV-C感染对原有乙型肝炎病毒(HBV)或丙型肝炎病毒(HCV)感染的基础病变似无明显影响[1-3].但仅从血清学、临床表现及常规病理角度试图说明HGV/GBV-C对机体有无损害的研究工作是很困难,我们应用免疫组织化学技术对HGV/GBV-C与HCV混合感染者肝组织中HGV/GBV-C.HCV相关抗原表达进行研究,试图从免疫病理学角度探讨HGV/GBV-C对机体肝脏的致病性.     

肝炎患者肝组织中丙型肝炎病毒抗原的表达及其临床意义

应用抗-HCV NS4单克隆抗体(McAb)以酶标链酶亲和素生物素化二抗方法(LAB法)，对77例肝炎患者肝穿刺标本进行免疫组织化学研究。结果表明，HCV—Ag(NS4)呈细小颗粒状位于肝细胞浆中。急慢性肝炎肝组织中HCV-Ag阳性肝细胞数较少，呈散在分布．易见于汇管区周围;慢性重症肝炎肝内HCV—Ag阳性肝细胞数较多，提示HCV可能与慢性肝炎病情加重有关。15例血清抗HCV阳性和HCV RNA阳性患者中，12例肝HCV—Ag阳性．11例血清抗-HCV阳性和HCV RNA阴性患者中，3例肝HCV—Ag阳性，提示肝HCV—Ag(NS4)的表达与血清HCV RNA水平关系较为密切。HCV可能主要通过免疫机制引起肝细胞损伤。     

肝病患者肝组织HCV抗原的检测及意义

目的 探讨肝病患者肝组织丙型肝炎病毒（HCV）抗原的表达及意义。方法 应用免疫组织化学方法对252例肝病患者石蜡包埋肝组织中HVC抗原进行了检测。结果 多克隆抗HCV检出HcAg阳性25例（9．92％），单克隆抗HCV-NS3检出HCV—NS3蛋白阳性19例（7．54％）。19例HCV—NS3阳性肝组织均同时表现HcAg阳性，二者在肝细胞分布状况相似，不同病理类型肝炎患者肝组织中HCV抗原检出率无统计学意义。252例血清检出HCV标志物阳性71例，单独抗HCV阳性者无1例肝组织中检出抗原。结论 肝组织中抗原的检出和血清HCV标志具有良好对应性，但不同血清HCV标志模式抗原检出率有统计学意义。     

地高辛素标记探针原位杂交法检测肝组织中庚型肝炎病毒RNA

目的自从建立起甲、乙、丙、丁、戊5种肝炎病毒的病原学诊断之后,仍有少部分肝炎患者的病因得不到明确,因此不少学者试图探索是否还有新型肝炎病毒的存在,并进行了大量的流行病学和实验诊断的研究,认为的确存在可经肠道外传播并引起人类肝炎的致病因子.目前关于庚型肝炎病毒(HGV/GBV-C)的致病性和组织嗜性尚无结论性资料.本文目的是研究HGV/GBV-C RNA在肝组织中表达并进一步探讨HGV/GBV-C引起肝脏损害的可能机制.方法应用地高辛素标记HGV/GBV-C cDNA探针原位杂交法检测肝组织中庚型肝炎病毒RNA.结果检测196例肝炎患者肝组织切片中的HGV/GBV-CRNA阳性率为37.24%;在血清中HGV/GBV-CRNA呈阳性患者肝组织中该病毒RNA检出率为48.94%;单一HGV/GBV-C感染者肝组织中检出率为58.33%;阳性信号仅为胞质型.原位杂交信号阳性细胞与肝细胞变性、瘀胆、炎性细胞浸润及细胞坏死程度等并不相关.本文原位杂交与免疫组化两种检测方法对比研究结果表明,两项技术有较高的符合率(86.74%),说明这两项技术具有相辅相成的作用.结论提示HGV/GBV-CRNA并不直接损害肝细胞.原位杂交和免疫组化两项技术成功地应用于石蜡包埋切片,为回顾性研究HGV/GBV-C的致病性及致病机制提供了有价值的实验手段.     

临床肝病患者中庚型肝炎病毒(GBV-C/HGV)的感染

本文应用抗-HGV酶联免疫法(EIA)和逆转录套式聚合酶链反应法(RT-PCR)检测150份乙型、120份丙型、15份戊型和49份非甲-戊型肝炎患者血清。结果显示:乙肝、丙肝、戊肝和非甲-戊型肝炎患者中抗-HGV抗体的阳性率分别为22.0％(33/150)、25.0％(30/120)、33.3％(5/15)和40.1％(20/49)。其中乙型、丙型、戊型和非甲-戊型肝炎的抗-HGV抗体阳性者中,HGV RNA的阳性率分别为58.3％(7/12)、60.0％(6/10)、40.0％(2/5)和45.5％(9/12)。说明GBV-C/HGV可与HBV、HCV或HEV合并感染,该病毒可能引起临床型肝炎。     

肝炎病人血清、外周血单个核细胞和肝脏中GBV-C/HGV复制中间体的研究

目的:关于GBV-C/HGV组织亲和性的研究尚无结论性资料。我们研究27例肝炎病人血清、外周血单个核细胞(PBMCs)及肝脏中GBV-C/HGV正链及负链RNA(复制中间体)的存在状况。方法:应用逆转录-巢式多聚酶链反应技术检测GBV-C/HGV正、负链RNA。结果:27例病人血清中21例病人血清、7例PBMCs、10例肝组织中检测到GBV-C/HGV正链RNA,其中2例单一GBV-C/HGV感染者肝组织中检测到负链RNA,在27例病人血清及PBMCs中均未检测到负链RNA。结论:提示GBV-C/HGV是一种嗜肝病毒,肝脏可能是其复制的主要场所之一,但GBV-C/HGV与HCV混合感染时,在PBMCs及肝脏中尚未发现该病毒复制的证据。     

庚型肝炎病毒抗体在不同人群中的检测及意义

为了解庚型肝炎病毒(GBV-C/HGV)在我国人群的感染状况,应用ELISA法对277例各种肝病及103例肝炎高危人群血清进行了抗-GBV-C/HGV-IgG的检测。结果:急性肝炎、慢性肝炎、重型肝炎、肝炎肝硬变和肝癌患者抗-GBV-C/HGV检出率分别为20.3％(13/64)、15.6％(19/122)、26.7％(12/45)、28.2％(11/39)和28.6％(2/7);在HAV、HBV、HCV、HAV+HBV、HBV+HCV、HBV+HDV和HAV+HBV+HCV肝炎病人中检出率分别为15.6％(5/32)、26.1％(31/119)、20.7％(6/29)、26.1％(6/23)、28.6％(4/14)、18.2％(2/11)、33.3％(1/3)和在非甲-戊型肝炎中的检出率为12.1％(4/33);献血员、血液透析者、静脉毒瘾者抗-GBV-C/HGV检出率分别为14.7％(5/34)、6.3％(2/32)和8.1％(3/37),以上结果组间均无显著差异(P>0.05)。研究表明,在我国部分肝病及肝炎高危人群中存在庚型肝炎病毒感染,GBV-C/HGV与HAV、HBV、HCV、HDV之间存在多种形式的同时或重叠感染,非甲-戊型肝炎中存在GBV-C/HGV感染,但感染率并不高,提示GBV-C/HGV可能是非甲-戊型肝炎的一种病原体,但并非是非甲-戊型肝炎的主要致病因子。     

庚型肝炎病毒感染对急性肝炎致病性的探讨

目的 探讨急性肝炎患者肝组织中庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）的感染状况及其致病性。方法 采用免疫组织化学方法对３７例血清学肝炎病毒标记甲￣戊型均阴性的急性肝炎患者肝穿肝组织中的ＨＧＶ ＮＳ５抗原等进行检测,并对ＨＧＶ感染的致病性进行研究。结果 ＨＧＶ ＮＳ５抗原的检出率为３７．８％（１４／３７）,其中ＨＧＶ ＮＳ５单项阳性４例（急性庚型肝炎组）。结果 ＨＧＶ ＮＳ５抗原的检出率为３７．８％（１４／３７）,     

肝炎患者肝组织中庚型肝炎病毒相关抗原的表达

目的 研究庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）相关抗原在肝组织中定位。方法 采用免疫组织化学方法,用抗－ＨＧＶ非结构蛋白５（ＮＳ５）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）对１９６例肝炎患者肝组织中的ＨＧＶ相关抗原进行了检测。结果 １９６例肝炎患者肝组织中的ＨＧＶ相关抗原表达阳必国２５．０％;在血清中ＨＧＶＲＮＡ呈阳性患者肝组织中抗原检出率为３８．３％;单一感染者肝组织中抗原表达阳性率为６６．７％;阳性信号位于胞浆中,阳性信号表     

急性重型肝炎患者肝组织中庚型肝炎病毒的检测

检测急性重量型肝炎患者肝组织中庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）的存在状况及探讨与发病的关系,采用免疫组化方法以抗－ＨＣＶＮＳ５单克隆抗体对２６例急性重型肝炎患者尸检肝组织中的ＨＧＶ等抗原进行了检测,结果显示２６例肝组织中检测出ＨＧＶ阳性６例（２３．１％）ＨＧＶＮＳ５Ａｇ阳性着色颗粒表达于残存的肝细胞浆内,阳性细胞呈片簇状分布于汇管区周围,６例中４例重叠有ＨＢＶ或／和ＨＣＶ感染,肝组织中ＨＢｓＡｇ或／和ＨＣＶ     

庚型肝炎肝脏免疫组化研究

目的探讨庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）抗原在肝组织中定位，进一步研究ＨＧＶ引起肝脏损害的机制。方法采用ＨＧＶＮＳ５区抗原制备单克隆抗体（ＭｃＡｂ），对４例经临床和病理确诊的血清ＨＧＶＲＮＡ阳性的慢性庚型肝炎患者肝活检标本，进行免疫组化观察。结果１例呈阳性染色，光镜观察显示：特异染色大部分定位于肝细胞胞浆中，部分有核着色和膜型染色，呈黄色或棕黄色颗粒状，阳性细胞数量少，大多散在分布，部分呈灶性分布；阳性细胞周围可见较多淋巴细胞浸润。结论ＨＧＶ抗原可在肝细胞中定位，大多呈胞浆型，部分呈核型和膜型，ＨＧＶ属嗜肝病毒；免疫损伤可能参与了庚型肝炎的肝脏损伤机制     

丙型肝炎患者胃粘膜细胞中HCV NS3、NS5抗原定位研究

目的了解丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）在胃粘膜细胞中的感染状况。方法采用免疫组化Ｓ－Ｐ法以抗－ＨＣＶＮＳ３和抗－ＨＣＶＮＳ５检测了３３例慢性丙型肝炎（ＣＨＣ）患者胃粘膜组织中ＨＣＶＮＳ３及ＨＣＶＮＳ５抗原。结果ＨＣＶＮＳ３、ＨＣＶＮＳ５的检出率分别为３３．３３％（１１／３３）和２７．２７％（９／３３）。阳性物质沉积于胃粘膜上皮腺体细胞胞浆，呈单个或片灶状分布，部分病例淋巴细胞胞浆中也可见到。结论胃粘膜细胞中ＨＣＶ抗原的检出，表明ＨＣＶ可能是一种泛嗜性病毒，其机制及生物学意义须进一步研究。     

A high frequency of GBV-C/HGV coinfection in hepatitis C patients in Germany

AIM:To detect infection rate of GBV-C/HGV in hepatitis C patients, to determine the methods of higher sensitivity and the primers of higher efficiency for GBV-C/HGV RNA detection and to study the dominant subtype and mutation of GBV-C/HGV.METHODS:Quantitative RT-PCR for detection pf HCV RNA concentration in serum samples, RT-nested PCR with two sets of primers for detection of GBV-C RNA, RT-PCR ELISA with two sets of primers for detection of HGV RNA, nucleotide sequence and putative amino acid sequence analysis.RESULTS:The positive rates of GBV-C RNA at the 5'-NCR and NS3 region in 211 serums amples from the patients with HCV infection were 31.8% and 22.8% respectively. The positive rates of HGV RNA at the 5'-NCR and NS5 region in the same samples were 47.9% and 31.8% respectively. The total positive rate of GBV-C/HGV RNA was as high as 55.5%. HCV copy numbers in the patients without GBV-C/HGV coinfection were statistically higher than that in the patients with GBV-C/HGV coinfection (P<0.01).Frequent mutation of nucleotide residue was present in the amplification products. Frameshift mutation was found in two samples with GBV-C NS3 region nucleotide sequences. All nucleotide sequences from amplification products showed higher homology to HGV genome than to GBV-C genome even though part of the sequences were amplified with GBV-C primers.CONCLUSION:A high frequency of GBV-C/HGV coinfection existed in the hepatitis C patients. RT-PCR ELISA was more sensitive than RT-nested PCR for detection of GBV-C/HGV RNA. The primers derived from the 5'-NCR was more efficient than those derived from the NS3 and NS5 regions. A reverse relationship was found to exist between HCV RNA concentration and GBV-C/HGV infection frequency. HGV was the dominant subtype of the virus in the local area. The major mutations of GBV-C/HGV genomes were random mutation of nucleotide residue.