水通道蛋白8对结肠癌细胞侵袭转移的影响

目的探讨水通道蛋白8(aquaporin 8,AQP8)与结肠癌细胞侵袭转移的关系。方法应用免疫组组织化学链霉卵白素-过氧化物酶连结(SP)法检查18例发生转移的结肠癌、15例未发生转移的结肠癌原发肿瘤组织中AQP8的表达水平差异;结肠癌细胞系Caco-2细胞中过表达AQP8后聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测上皮细胞间充质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)相关蛋白(钙黏蛋白和波形蛋白);Transwell侵袭实验检测过表达AQP8后细胞的侵袭能力,定量分析穿膜细胞数量。结果 AQP8在发生转移的结肠癌组织中高表达;AQP8能促进EMT的发生,细胞表型由上皮细胞向间质细胞转化;Transwell实验显示,过表达AQP8后肿瘤细胞穿膜数为88.0±7.2,显著高于对照组(51.6±4.0;P0.01)。结论 AQP8通过促进EMT的发生,促进结肠癌细胞侵袭转移。     

长链非编码RNA HOST2对胰腺癌细胞增殖迁移和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)HOST2对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法:qRT-PCR检测正常胰腺上皮细胞系HPDE6-C7及胰腺癌细胞系Panc-1、AsPC-1、BxPC-3、HPAC中lncRNAHOST2表达水平。将Panc-1细胞分别转染siRNA-HOST2(si-HOST2组)和阴性对照序列(阴性对照组)后,用MTT法测定细胞增殖,细胞划痕和Transwell实验测定细胞迁移和侵袭,Westernblot测定上皮-间质转化(EMT)相关蛋白vimentin、Snail、Twist的表达。以无转染的Panc-1细胞为空白对照组。结果:与正常胰腺上皮细胞HPDE6-C7相比,lncRNAHOST2在各胰腺癌细胞系中的表达均明显上调(均P0.05)。与空白对照组比较,si-HOST2组细胞增殖、迁移和侵袭能力均明显减弱,vimentin、Twist1、Snail蛋白相对表达量均明显下调(均P0.05),而阴性对照组上述指标均无明显变化(均P0.05)。结论:lncRNAHOST2在胰腺癌细胞中高表达,且与胰腺癌增殖、迁移和侵袭密切相关,其机制可能与调节EMT相关蛋白的表达有关。     

LAMP1在膀胱癌细胞中的表达及对肿瘤细胞迁移的影响

目的:探讨溶酶体膜相关蛋白LAMP1(Lysosomal-associated membrane proteins 1,CD107a)在膀胱癌细胞系和正常膀胱上皮细胞系中表达情况,检测其与膀胱癌细胞迁移关系,推测其对膀胱癌进展的影响。方法:采用RT-PCR检测正常膀胱上皮细胞系和膀胱癌细胞系LAMP1表达;免疫荧光明确其蛋白表达定位;采用RNAi方法对LAMP1敲减,然后通过划痕实验检测其对肿瘤细胞迁移影响。结果:膀胱癌细胞系5637和UMUC3均表达LAMP1,正常移行上皮细胞系SV-HUC-1不表达;LAMP1蛋白定位在肿瘤细胞胞浆中;LAMP1敲减后膀胱癌细胞迁移减慢。结论:LAMP1参与膀胱癌发生发展过程,促进癌细胞迁移。     

钙调蛋白2调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的研究

目的探讨钙调蛋白2(CALM2)对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法通过基于基因表达水平值的交互式分析平台(GEPIA2.0)对癌症基因组图谱(TCGA)和基因型组织表达(GTEx)数据库中的179例胰腺癌和171例癌旁组织中CALM2基因的表达使用方差分析(ANOVA)进行差异分析, 对89例高表达CALM2的胰腺癌患者和89例低表达CALM2的胰腺癌患者分别绘制Kaplan-Meier曲线, 使用log-rank检验进行预后分析。采用短发夹RNA(shRNA)慢病毒感染人源胰腺癌细胞系SW1990和ASPC1, 建立对照组和CALM2敲低组细胞系;采用慢病毒包被质粒感染人源胰腺癌细胞系BxPC-3, 建立对照组和CALM2过表达组细胞系。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测敲低或过表达CALM2后细胞内CALM2的mRNA和蛋白表达水平。采用克隆形成和皮下注射裸鼠荷瘤实验验证敲低或过表达CALM2对胰腺癌细胞增殖能力的影响, 采用划痕愈合实验和Transwell实验验证敲低或过表达CALM2对胰腺癌细胞的迁移、侵袭能力的...     

circ_0009910在胃癌细胞中作用机制初步研究

目的通过检测分析胃癌细胞中circ_0009910表达,初步探讨其在胃癌细胞中的作用机制。方法用qRT-PCR检测胃癌细胞系BGC823、SGC7901、AGS、MGC803、MKN45中的circ_0009910表达水平,在BGC823、AGS细胞中采用circ_0009910 siRNA转染敲降circ_0009910,验证转染效果;在circ_0009910敲降的BGC823、AGS细胞中,用MTT法检测细胞增殖、平板法检测集落形成、Transwell检测迁移和侵袭、western-blotting检测上皮间质转化(EMT),采用SPSS 18.0软件进行统计学分析。结果BGC823、SGC7901、AGS、MGC803、MKN45中的circ_0009910相对表达水平为(7.238±0.895)、(5.023±0.786)、(4.184±0.356)、(8.561±1.026)、(3.478±0.301),较正常胃癌显著升高(P<0.01),siRNA转染敲降circ_0009910后,BGC823、AGS细胞活力、集落形成数目、迁移和侵袭能力与对照组相比均明显降低(P<0.01),N-cadherin、Snail蛋白的相对表达降低,而E-cadherin表达增加。结论circ_0009910在胃癌细胞中高表达,可促进胃癌细胞增殖、集落形成、迁移和侵袭及EMT。     

转录因子激活增强子结合蛋白4对胃癌细胞迁移和侵袭调控作用的实验研究

目的探讨转录因子激活增强子结合蛋白4(TFAP4)在胃癌中的表达及对预后的影响,并观察TFAP4在胃癌细胞迁移和侵袭过程中发挥的作用。方法通过生物信息学分析,获取TFAP4在胃癌中的表达及在胃癌患者的预后中所起到的作用。采用Transwell小室法及划痕实验检测TFAP4对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响。应用蛋白质印迹法(Western blot)检测敲低TFAP4后上皮-间充质转化(EMT)相关通路蛋白的表达变化。对独立样本采用t检验。结果基因表达谱交互分析(GEPIA2)网站对胃癌组织的RNA测序(RNA-seq)数据进行分析,结果显示TFAP4在胃癌组织中高表达(t=32.070,P<0.01),差异有统计学意义。生存分析(KM-PLOTTER)网站对TFAP4进行生物信息学分析,TFAP4为胃癌预后的危险因素。划痕实验结果显示,敲低TFAP4的实验组在划痕48 h后相较于对照组迁移距离更短。Transwell实验结果显示,敲低TFAP4的实验组在24 h内穿膜细胞数量显著低于对照组[(83.000±3.786)个比(186.700±4.055)个,t=18.690,P<0.05],差异有统计学意义。Western blot结果显示,敲低TFAP4的表达后,上皮间充质转化(EMT)通路相关蛋白N-钙黏蛋白及基质金属蛋白酶(MMP)-2的表达水平随之降低。结论TFAP4在胃癌中高表达,和不良预后呈正相关,具有促进胃癌细胞迁移和侵袭的作用。     

多嘧啶序列结合蛋白2通过调控Slug促进乳腺癌细胞上皮-间充质转化的机制

目的探讨多嘧啶序列结合蛋白2(PTBP2)在乳腺癌组织及细胞中的表达, 探讨PTBP2通过调控上皮-间充质转化(EMT)影响乳腺癌细胞的侵袭和迁移的具体分子机制。方法利用蛋白质印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测PTBP2在乳腺癌细胞中的表达水平。并利用Transwell实验、侵袭实验检测PTBP2对乳腺癌细胞迁移侵袭能力的影响。两组之间的比较采用独立样本t检验。结果 Western blot及RT-PCR结果表明PTBP2在乳腺癌组织中的表达水平明显高于正常组织(7.22±0.27比3.02±0.16, t=13.33, P<0.01);敲低PTBP2表达后, MDA-MB-231细胞迁移能力、侵袭能力明显弱于对照组(30.20±1.56比113.80±4.23, t=18.52, P<0.01;9.60±1.60比29.20±4.28, t=4.29, P<0.01);并导致乳腺癌细胞发生MET转变。过表达PTBP2表达后, MCF7细胞迁移能力、侵袭能力明显强于对照组(136.00±5.33比63.40±4.32, t...     

槲皮素通过G3BP1调控Wnt/β-catenin信号通路对前列腺癌细胞迁移、侵袭及上皮-间充质转化的影响

目的探讨槲皮素对前列腺癌(PCa)细胞迁移、侵袭及上皮-间充质转化(EMT)的影响,并分析其可能机制。方法人前列腺癌细胞(PC-3)随机分为空白对照组及槲皮素低、中、高浓度组,转染GTP酶激活蛋白-Src同源结构域3-结合蛋白1(G3BP1)siRNA及其阴性对照、pcDNA3.1-G3BP1及其阴性对照至PC-3细胞,并用槲皮素处理。分别采用细胞划痕试验和Transwell小室法检测细胞迁移、侵袭能力,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测G3BP1 mRNA表达,Western blot法检测G3BP1蛋白、EMT相关蛋白及Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路蛋白表达。结果槲皮素抑制PC-3细胞迁移、侵袭,上调E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达,下调N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、转录因子Snail表达;槲皮素下调PC-3细胞G3BP1 mRNA和蛋白表达,下调Wnt家族成员3A(Wnt-3α)、β-catenin、磷酸化糖原合成酶激酶3β(Glycogen synthase kinase-3β,p-GSK-3β)表达,上调GSK-3β表达;沉默G3BP1增强槲皮素对PC-3细胞及Wnt/β-catenin通路的作用,过表达G3BP1逆转槲皮素对PC-3细胞及Wnt/β-catenin通路的作用。差异均有统计学意义(P<0.05)。结论槲皮素可通过抑制EMT抑制PCa细胞的迁移、侵袭能力,其作用机制可能与其靶向G3BP1抑制Wnt/β-catenin信号通路相关。     

FOXC2在肝外胆管细胞癌中的表达及其对肿瘤侵袭迁移和上皮间质转化的作用

目的:检测FOXC2在肝外胆管细胞癌(EHCC)中表达的临床意义,并初步探讨FOXC2在体外对EHCC肿瘤细胞增殖、侵袭迁移和上皮间质转化的作用。方法:免疫组织化学法检测FOXC2在EHCC组织和正常胆管组织中的表达;qRT-PCR检测FOXC2 m RNA在EHCC组织和正常胆管组织中的表达;分析FOXC2表达水平与患者临床病理因素和预后的关系。选择FOXC2高表达的HuCCT1细胞进行转染敲降FOXC2,CCK-8实验检测细胞增殖活力;Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力;Westernblot检测上皮间质转化蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和MMP-2的表达。结果:免疫组化结果表明,77例EHCC样本中68例(88.3%)FOXC2表达阳性。qRT-PCR检测结果表明FOXC2mRNA在EHCC组织的表达水平显著高于正常胆管上皮组织。FOXC2表达水平与EHCC患者肿瘤组织分化、临床病理分级、淋巴侵犯等相关;进一步分析发现,FOXC2高表达组患者预后较差,且FOXC2高表达是影响EHCC患者临床预后的独立危险因素。体外实验结果显示,敲降FOXC2显著降低HuCCT1细胞侵袭和迁移能力,但不改变细胞增殖活力;显著降低EMT蛋白N-cadherin、Vimentin和MMP-2的表达,促进E-cadherin的表达。结论:FOXC2在EHCC组织中的高表达促进肿瘤进展并与患者不良预后相关,可能与FOXC2促进EHCC癌细胞的侵袭、迁移和上皮间质转化有关。     

低氧对肝癌细胞上皮间质转化及侵袭转移能力的影响

目的:观察低氧环境下肝癌细胞上皮-间质转化(EMT)情况和侵袭转移能力的改变。方法:选取2种具有不同侵袭转移能力的人肝癌细胞株SMMC-7721和HepG2,通过1%O2低氧培养建立人肝癌细胞物理缺氧模型。动态观察2种细胞在低氧环境中的形态学改变;应用Westernblot方法检测上皮细胞标志蛋白E-cadherin和间质细胞标志蛋白vimentin表达的变化;应用Transwell小室检测肝癌细胞迁移、侵袭能力。结果:低氧环境中,该2种肝癌细胞均由原来的紧密排列上午上皮样状态转为较松散的纺锤体样改变;Western blot检测显示,2种肝癌细胞株的E-cadherin表达量明显下降(均P<0.01),而vimentin表达量明显升高(均P<0.01);Transwell迁移及侵袭实验显示,2种肝癌细胞的迁移及侵袭能力明显增强(均P<0.01);SMMC-7721细胞的上述变化均较HepG2细胞明显(均P<0.01)。结论:低氧环境可诱导肝癌细胞发生EMT,并增强肝癌细胞的迁移和侵袭能力。     

磷脂酰肌醇蛋白聚糖3促进肝细胞癌侵袭和转移的初步研究

目的探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC3）是否能促进肝细胞癌（HCC）侵袭、转移。 方法通过siRNA靶向沉默GPC3在人肝癌细胞Hep3B、HepG2中的表达,慢病毒介导GPC3在人肝癌细胞SMMC-7721和SK-HEP-1中过表达,用于体外细胞功能试验和建立体内裸鼠原位种植瘤模型。Western blotting、qPCR检测GPC3、上皮间质转化（EMT）相关分子N-Cadherin、E-Cadherin、SNAIL、Vimentin和基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-3、MMP-7的表达。 结果过表达GPC3的Hep3B、HepG2细胞株的迁移和侵袭能力显著大于GPC3低表达的SMMC-7721、SK-HEP-1细胞株（P<0.05）;小鼠肝脏原位癌模型显示,过表达GPC3的HCC肝脏转移发生率明显高于GPC3低表达者（P<0.05）。过表达GPC3可以降低E-Cadherin,上调N-Cadherin的表达;干扰GPC3表达后,E-Cadherin表达上调,N-Cadherin表达下调。GPC3过表达可显著上调MMP-2、MMP-3、MMP-7的表达（P<0.05）。 结论GPC3可通过诱导HCC发生EMT和分泌MMPs,促进HCC细胞迁移和侵袭。     

胆囊癌组织中TROP2、PTEN和p-AKT的表达及其临床意义

目的探讨人滋养层细胞表面抗原-2(human trophoblast cell-surface antigen 2,TROP2)、磷酸酶与张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog,PTEN)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-AKT)在胆囊癌组织中的表达情况、相互关系及临床意义。方法收集我院2003年1月至2009年12月期间确诊并手术的胆囊癌患者71例,获得胆囊癌组织标本71例及癌旁组织15例。采用免疫组织化学法检测TROP2、PTEN和p-AKT的表达,χ~2检验分析TROP2、PTEN和p-AKT蛋白表达水平与临床病理参数之间的关系,Spearman检验法分析TROP2、PTEN和p-AKT间两两相关性。结果 (1)与癌旁组织比,TROP2和p-AKT蛋白在胆囊癌组织中的阳性表达率明显升高(P0.05),而PTEN蛋白在胆囊癌组织中的阳性表达率明显降低(P0.05);(2)TROP2、PTEN和p-AKT三种蛋白的表达与胆囊癌患者的性别、年龄均无关(P0.05),但与胆囊结石、分化程度、其他脏器侵犯、浸润深度及TNM分期相关(P0.05);(3)TROP2与p-AKT呈正相关(P0.05),但两者与PTEN呈负相关(P0.05)。结论 TROP2/PTEN/p-AKT信号通路异常激活可能是胆囊癌恶性进展的重要原因,其机制可能涉及TROP2对PTEN及p-AKT的调控作用,这为临床上靶向干预胆囊癌研究提供理论基础。     

乙酰辅酶A羧化酶通过参与上皮间质转化促进肝癌转移

目的 研究乙酰辅酶A羧化酶（Acetyl-CoA carboxylas,ACC）在肝癌细胞侵袭与迁移过程中的调控作用与机制。方法 （1）用免疫组化方法,分析30例肝癌患者癌与癌周组织中的ACC表达,明确ACC在肝癌中表达是否发生异常改变。（2）siRNA干涉肝癌细胞中ACC表达后,用Transwell法检测肝癌细胞的迁移与侵袭能力。（3）siRNA干涉肝癌细胞中ACC表达后,用qRT-PCR及Western blotting检测肝癌细胞上皮间质转化相关分子E-cadherin、ZO-1、N-cadherin与Vimentin表达。结果 （1）免疫组化结果证实,ACC在肝癌组织中表达显著高于癌旁组织,癌组织中染色阳性率为93.3%（28/30）,癌周组织中染色阳性率为40%（12/30）。（2）干预ACC表达后,肝癌细胞迁移和侵袭能力均下降。（3）干涉ACC表达后,肝癌细胞中由Snail介导的上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）被抑制,具体表现为：干涉ACC表达后,上皮细胞标志分子E-cadherin和ZO-1表达上调,而间质细胞标志分子N-cadherin和Vimentin表达下调。结论 ACC在肝癌组织中高表达并通过参与细胞上皮间质转化促进肝癌转移。     

miR-200a-3p在胆囊癌中的表达及其作用与机制

背景与目的 miR-200a-3p参与了多种肿瘤的生物学过程的调控,但在不同肿瘤中起着不同的作用（促癌基因或抑癌基因）。目前,其在胆囊癌中的作用尚不清楚。因此,本研究探讨miR-200a-3p在胆囊癌中的表达及其对胆囊癌细胞生物学功能的影响与机制。方法 采用qRT-PCR法测定32例胆囊癌及癌旁组织、胆囊癌细胞系（GBC-SD、SGC-996、NOZ）及正常人胆囊上皮细胞系HGBEC中miR-200a-3p的表达。采用Lipofectamine? 3000试剂盒将GBC-SD及NOZ细胞系分别转染miR-200a-3p模拟物（miR-200a-3p过表达组）、miR-200a-3p抑制物序列（miR-200a-3p沉默组）及阴性对照序列（阴性对照组）。MTT实验测定细胞增殖能力,Transwell实验测定细胞侵袭能力,MiRBD/Targetscan7.2/starBase2.0/miRtarbase网站预测miR-200a-3p的下游靶基因,并采用荧光素酶实验验证。Western blot检测上述3组细胞中靶基因与上皮间质转化（EMT）相关分子蛋白（E-cadherin、vimentin）的表达。结果 qRT-PCR结果显示,胆囊癌组织中miR-200a-3p表达量低于癌旁组织,所有胆囊癌细胞系中miR-200a-3p表达量低于正常人胆囊上皮系HGBEC（均P<0.05）。GBC-SD及NOZ细胞系转染后,与各自的阴性对照组比较,两种细胞的miR-200a-3p过表达组miR-200a-3p表达量明显升高、增殖与侵袭能力明显减弱,两种细胞的miR-200a-3p沉默组miR-200a-3p表达量明显降低、增殖与侵袭能力明显增强（均P<0.05）。在线网站预测显示,miR-200a-3p和Notch2存在潜在结合位点;荧光素酶实验显示,miR-200a-3p导致Notch2野生型质粒pmirGLO-Notch2-3''UT WT荧光素酶活性明显降低,而miR-200a-3p对Notch2突变型质粒pmirGLO-Notch2-3''UTR MUT的荧光素酶活性没有影响。Western blot结果显示,两种细胞的miR-200a-3p过表达组与各自的阴性对照组比较,E-cadherin蛋白表达量升高、vimentin蛋白与Notch2蛋白表达量降低,而3种蛋白在两种细胞的miR-200a-3p沉默组则呈相反的变化（均P<0.05）。结论 miR-200a-3p在胆囊癌中表达降低,并可能起了抑癌基因的作用,其抑制胆囊癌细胞增殖和侵袭的机制可能与靶向下调Notch2从而抑制EMT过程有关。     

Snail controls the mesenchymal phenotype and drives erlotinib resistance in oral epithelial and head and neck squamous cell carcinoma cells

Objective The presence of regional metastases in patients with head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a common and adverse event associated with poor prognosis. The authors' recent work on human HNSCC tissues underlies Snail's role as a molecular prognostic marker for HNSCC. Snail positivity is significantly predictive of poorly differentiated, lymphovascular invasive, and regionally metastatic tumors. Here, the authors investigate the capacity of Snail to drive epithelial-mesenchymal transition (EMT) in human oral epithelial cell lines and its ability to confer drug resistance. Study Design Snail was overexpressed in HNSCC and oral epithelial cell lines. Anchorage independent growth assays, wound healing assays, invasion and migration assays, spheroid modeling, and cell survival assays were performed. Setting Academic tertiary medical center. Subjects and Methods Snail overexpressing HNSCC (OSC, Tu212, Tu686) and oral epithelial cell lines (HOK 16-B, OKF-6) were evaluated using assays for wound healing, invasion and migration, 3-dimensional growth, Western blot, and immunofluorescence. Results The overexpression of Snail in human HNSCC and oral epithelial cell lines drives EMT. The transfection of Snail confers the expression of a mesenchymal molecular signature, including downregulation of the epithelial adherens, such as E-cadherin and β-catenin, and induction of mesenchymal markers. Snail-overexpressing cell lines demonstrate rapid growth in Anchorage-independent growth assays, a decreased capacity to form tight spheroids, an increased resistance to erlotinib, and an increased capacity for invasion. Conclusion Snail controls the mesenchymal phenotype and drives erlotinib resistance in HNSCC cells. Snail may prove to be a useful marker in predicting epidermal growth factor receptor inhibitor responsiveness.     

MiR-197靶向JAK2调节人皮肤鳞状细胞癌细胞增殖侵袭能力的研究

目的:探讨miR-197通过调控JAK2对人皮肤鳞状细胞癌细胞A431增殖和侵袭的影响。方法:收集2018年7月-2019年5月于笔者医院经手术切除且被证实为皮肤鳞状细胞癌的组织标本以及对应的癌旁组织标本各40例,RT-qPCR检测miR-197在皮肤鳞状细胞癌组织、癌旁组织、人正常皮肤细胞系HaCaT、人皮肤鳞状细胞癌细胞株A431、A431-miR-197-siRNA和A431-miR-197-siRNA-NC中的表达情况;Western-Blot检测JAK2在各细胞株中的表达;生物信息学预测及双荧光素酶报告基因实验验证miR-197和JAK2的靶向关系;MTS法检测miR-197对A431增殖能力的影响;Transwell检测miR-197对皮肤鳞状细胞癌细胞侵袭能力的影响;IFA检测miR-197对上皮间质转化(EMT)相关分子N-cadherin表达的影响。结果:miR-197在皮肤鳞状细胞癌组织和皮肤鳞状细胞癌细胞株A431中的表达水平分别高于癌旁组织和人正常皮肤细胞系HaCaT,差异均具有统计学意义(P<0.05);与A431和A431-miR-197-siRNA-NC相比,稳定下调细胞系A431-miR-197-siRNA中miR-197、JAK2的表达水平均显著下降(P<0.05)。经Target Scan数据库分析发miR-197和JAK2有互补结合位点。下调miR-197能显著降低皮肤鳞状细胞癌细胞的增殖和侵袭能力,同时抑制N-cadherin的表达水平。结论:下调miR-197能够靶向抑制皮肤鳞状细胞癌中JAK2的表达和降低EMT相关分子N-cadherin的表达,进而抑制皮肤鳞状细胞癌细胞的EMT进程以及增殖侵袭能力。