P2X受体在血细胞中的表达及意义

P2X是ATP配体门控离子通道,属P2受体族。与细胞外ATP结合时P2X通道开放,允许阳离子(Na~+、Ca~(2+)等)通过。已克隆了7个哺乳动物的P2X(P2X_(1-7))受体,并阐明了其结构和功能。天然P2X可以同型或异聚体形式组成离子通道,在包括血液在内的多种组织中存在,与信号传导有关。P2X的异常与人类疾病的关系已引起关注,如慢性淋巴细胞白血病P2X的表达水平可能有预后意义。本文介绍P2X的结构、功能及其与血细胞关系的研究进展。     

P2X7受体在癫痫相关研究中的应用

作为ATP门控离子通道之一,P2X7受体以其独特的生理结构在癫痫发病机制中颇受关注.在具体的动物模型可见该受体表达的变化,其机制有P2X7受体在炎症因子产生中的重要作用、与对谷氨酸递质的释放及再摄取的调节有关.     

P2X7受体在疼痛调制中作用

嘌呤信号在疼痛信息的调制中有重要作用。P2X7受体是ATP门控离子通道家族中的一个亚型,表达于多种组织,受多种因素的调控并具有独特的结构和功能。病理性疼痛时,外周和中枢神经系统P2X7受体表达上调,功能增强;通过受体特异性拮抗剂或基因干预技术调节P2X7受体的表达和功能可以对疼痛信息进行调制。阐明P2X7受体在病理性疼痛发生、维持中的作用有利于加深对疼痛调制机制的认识,同时P2X7受体也是治疗病理性疼痛潜在的新靶点。本文对近年P2X7受体在病理性疼痛中的作用及其相关机制的研究做一综述。     

钴对表达在爪蟾卵母细胞上P2X4受体介导的ATP-激活电流的调制

目的 研究钴对P2X4受体介导的ATP-激活电流（ⅠATP）的调制作用.方法 应用双微电极电压钳技术,记录细胞外液加CoCl2对表达在爪蟾卵母细胞上的大鼠颈上神经节P2X4受体介导的ⅠATP的调制作用.结果 0.1 ～30 μmol/L浓度范围的钴离子对P2X4受体介导的ⅠATP呈明显的增强效应,钴浓度越高,ⅠATP幅值越大,0.1μmol/L、0.3μmol/L、1μmol/L、3μmol/L、10 μmol/L、30 μmol/L的钴离子使ⅠATP增加的百分比分别为：12.1±4.6,30.4±5.1,49.3±6.8,70.9±7.2,104.2±16.7,145.8 ±20.1（P ＜0.01）;ⅠATP的量-效曲线在钴离子的作用下向左上移位;应用1 μmol/L钴离子加ATP的混合液同时灌流细胞,可导致ATP的EC50从（15.6±1.9）μmol/L降低到（8.1 ±0.6）μmol/L（P ＜0.01）;即使是高浓度的钴,仍然对ⅠATP表现出明显的增强作用;当ATP浓度不变,钳制电位变化（-140 ～ 60 mV）时,钴离子对P2X4受体介导的ⅠATP的增强作用无明显变化.结论 钴对P2X4受体介导的ⅠATP的增强效应呈浓度依赖性而非电压依赖性.钴与通道蛋白胞外环的作用位点可能与锌和镉不同.     

5-HT_7受体活化对中脑导水管周围灰质ATP诱发电流的影响

目的:探讨中脑导水管周围灰质(periaqueductal gray,PAG)神经元5-HT7受体活化对α,β-me ATP诱发内向电流的影响。方法:取SD大鼠乳鼠PAG组织进行原代神经元细胞培养,运用全细胞膜片钳技术观察PAG神经元α,β-me ATP激活电流以及5-HT7受体活化对PAG神经元α,β-me ATP激活电流的影响。结果:α,β-me ATP能够引起PAG神经元产生3种内向电流,即快反应电流、慢反应电流和混合电流。其中快反应内向电流能够被P2X3受体特异性阻断剂A-317491阻断;5-HT7受体特异性激动剂AS-19对α,β-me ATP激活快电流的增大效应呈浓度依赖性;5-HT7受体特异性阻断剂SB-269970能够翻转AS-19对α,β-me ATP激活快电流的增大效应。结论:PAG神经元上5-HT7受体可与P2X3受体在功能上产生协同作用,进而促进机体内源性镇痛系统的功能,产生镇痛作用。     

乙醇和锌离子对爪蟾卵母细胞表达的5 '-三磷酸腺苷门控P2X3受体的影响

目的 探讨乙醇和锌离子(Zn2+)对爪蟾卵母细胞表达的重组P2X3受体的影响.方法 使用双极电压钳技术检测乙醇和Zn2+对爪蟾卵母细胞表达的P2X3受体介导的5'-三磷酸腺苷(ATP)门控电流的影响.实验共分3组,第1组研究不同浓度乙醇对爪蟾卵母细胞表达的P2X3受体介导的ATP电流的影响,存在或不存在乙醇的情况下,P2X3受体的ATP量-效曲线;第2组研究不同浓度Zn2对爪蟾卵母细胞表达的P2X3受体介导的ATP电流的影响,存在或不存在Zn2+的情况下,P2X3受体的ATP量-效曲线;第3组研究乙醇和Zn2+共同作用于爪蟾卵母细胞表达的ATP门控P2X3受体的影响.结果 乙醇(5～ 200 mmoL/L)可逆性地增强了爪蟾卵母细胞中表达的P2X3受体的ATP门控功能,乙醇以变构的方式增强ATP效应,乙醇不会改变Hill系数或ATP最大效应(Emax).Zn2+(1 ～300 μmol/L)可逆性地增强了爪蟾卵母细胞中表达的P2X3受体的ATP门控功能,乙醇和Zn2+联合应用导致协同作用.乙醇增强了Zn2+对P2X3受体介导的ATP门控电流的最大效应,这表明乙醇和Zn2+作用于不同的位点.结论 乙醇和Zn2+可能作用于P2X3受体上的不同位点,但乙醇在P2X受体上起作用的机制和位点尚未明确,后续研究可以使用嵌合方法和定点突变来识别和分析P2X受体中乙醇潜在的作用位点.     

P2X3受体在疼痛机制中的作用

ATP是广泛存在于周围和中枢神经系统的神经递质.自损伤细胞或炎症组织释放至细胞外的ATP可激活初级传入神经元上的P2X和P2Y受体,引起疼痛.P2X受体中的P2X3亚单位高度选择性表达于感觉神经元,应用P2X3受体反义寡核苷酸、RNA干扰、基因敲除技术和选择性拮抗剂等研究表明,ATP和P2X3受体在多种疼痛的产生和维持中起重要作用.PGE2、NGF、SP和谷氨酸等可增强P2X3受体激动剂激发的内向电流,对P2X3受体的功能起急性上调作用.但是在一些慢性疼痛模型中,P2X3受体表达上调和活性增加的机制并不十分清楚.     

耳蜗中三磷酸腺苷的来源及其释放机制

大量的研究结果表明,三磷酸腺苷(ATP)是在耳蜗及前庭功能中起着重要作用的信号分子。ATP的信号传导通过有7种亚型离子型的P2X受体(P2XR1-7)和有11种亚型的代谢型P2Y受体(P2YR1-11)来实现。P2XR亚型位于毛细胞顶端尤其是静纤毛处、Deiters细胞、Reissner膜、血管平滑肌、螺旋神经节神经元胞体及其与内外毛细胞形成突触的神经末端。     

嘌呤信号通路对成熟神经祖细胞功能的调节

细胞外的嘌呤是胚胎发育过程中脑和脊髓原位内的信号分子,它们通过激活胚胎神经干细胞(NSCs)及成熟神经祖细胞(NPCs)表面的嘌呤受体发挥作用。虽然NSCs/NPCs内表达了能和几乎所有核苷酸敏感型P2X/P2Y受体和核酸敏感型腺苷受体相作用的m RNA和蛋白,但其中只有一部分具有功能。ATP被异位核苷酸酶依次降解为ADP,AMP和腺苷,它们都是神经激动剂并作用于不同类型的受体。核苷酸/核苷促进或抑制NSC/NPC增殖、迁移和分化。所有激动剂(特别是ATP和ADP)的最普遍的作用是促进细胞增殖,常通过P2Y1Rs,有时也通过P2X7Rs。但P2X7R的激活通常导致NPCs的坏死或凋亡。激活P2Y2R或阻断P2X7R可促进神经细胞的分化。转导机制的核心是细胞内游离钙离子浓度的升高,游离的钙离子可能来自细胞内的释放(G蛋白偶联;P2Y),或细胞外的钙离子通过被激活的受体通道进入细胞内(ATP门控离子通道;P2X)。进一步的研究将着重阐明嘌呤信号通道如何调控NSC/NPC的分化,以及静息和活化状态之间的平衡如何通过精细和动态的调节来建立。     

血细胞中P2家族嘌呤受体表达和功能的研究进展

核苷酸类物质是细胞间通讯载体,通过P2家族嘌呤受体向细胞内传递信号。P2家族受体分为结构和功能不同的P2X和P2Y家族受体,不同的血细胞表达不同类型的P2受体,在胞外三磷酸腺苷(ATP)的作用下,产生多种生物学效应:调节细胞增殖、分化、迁移、趋化、细胞因子和溶酶体成分的释放以及活性氧和氮化物的产生等。P2受体的异常与人类疾病的关系备受关注。本文就血液系统各类血细胞中P2受体亚型的表达情况和功能进行了综述。     

J6-1白血病细胞P2X7受体基因的克隆和功能初步分析

目的从白血病细胞系J6—1细胞中克隆P2X7受体编码区全序列并研究其功能。方法用RT—PCR法从J6—1细胞中扩增P2X7受体编码区全序列，克隆到pTARGET真核表达载体，并进行DNA序列分析；然后转染HEK293细胞，获得稳定表达细胞株，RT-PCR和Western blot法检测P2X7受体在HEK293中的表达；相差显微镜下观察转染细胞在激动剂刺激下膜泡的形成。结果从J6—1细胞中克隆了P2X7受体编码区全序列，在第559位有1个A—G有义突变，导致Asn187→Asp182；J6—1细胞来源的P2X7受体可在HEK293细胞中表达，在激动剂作用下可介导膜泡的形成。结论从白血病细胞中克隆出具有正常功能的P2X7受体编码区全序列，J6—1细胞中可能存在其它未知的机制造成P2X7受体功能丧失。     

ATP7B蛋白在肝豆状核变性中的分子机制研究进展

肝豆状核变性（HLD）是一种铜代谢缺陷病，其发病与铜转运相关的P型ATP酶（ATP7B蛋白）功能改变密切相关。ATP7B蛋白通过一系列相互独立的分子生物学机制作用于铜的转运。ATP7B蛋白的突变会打乱铜平衡，导致铜过量并沉积于肝、脑和眼角膜，引起相应的器官脏器损伤。近几年，有关肝豆状核变性的分子学研究取得了很大进展，作者将就ATP7B蛋白在肝豆状核变性过程中的分子机制进行综述。     

75例结肠癌患者癌组织铜转运相关蛋白表达分析

目的探讨结肠癌组织中铜转运相关蛋白ATP7A、ATP7B和CTR1的表达与患者临床病理特征及预后的关系。方法对上海芯超生物科技有限公司提供的75例未进行任何治疗的癌组织标本组织芯片的CTR1、ATP7B和ATP7A表达面积比率进行统计分析。分析铜转运相关蛋白表达与患者临床病理特征的关系,并分析其中26例与患者生存期的关系。结果 ATP7A、ATP7B和CTR1表达水平与性别及肿瘤分期均无相关性（P〉0.05）,与年龄有关（P〈0.05）;ATP7A胞浆中位染色率为47%,胞核中位染色率为60%,胞膜不表达;ATP7B胞浆中位染色率为70%,胞核中位染色率为50%,胞膜不表达;CTR1胞浆中位染色率为52%,胞核、胞膜几乎不表达;TP7A、ATP7B和CTR1染色比率大于均数组与小于均数组之间的生存率差异无统计学意义（P〉0.05）。结论在结肠癌中铜转运相关蛋白表达水平与性别及肿瘤分期均无关,与年龄大小有关;ATP7A、ATP7B在胞浆、胞核中均有表达,在细胞膜上未见表达;ATP7A胞核表达高于胞浆,ATP7B在胞浆、胞核中均匀分布;CTR1主要在胞浆中表达,胞核、胞膜几乎不表达;CTR1、ATP7A和ATP7B在亚细胞定位的表达率与生存期无关系。     

热休克蛋白70过表达对骨骼肌细胞内ATP水平的影响

目的：探讨热休克蛋白70（heat shock protein 70，Hsp70）过表达对骨骼肌细胞（C2C12）内ATP水平的影响。方法通过构建重组pTRE2hyg-Hsp70质粒，稳定转染C2C12细胞系，建立Hsp70过表达的C2C12细胞系。分别在转染后细胞培养的不同时间点（0 d，3 d，7 d），检测细胞内ATP的水平。结果 Hsp70过表达的C2C12细胞系在培养的3 d，7 d，细胞内ATP的水平分别达到（14.5±2.87）nmol/mg蛋白质、（15.3±3.12）nmol/mg 蛋白质，与对照组相比明显增高（P＜0.05）。结论 Hsp70过表达的骨骼肌细胞可以提高细胞内的ATP水平，提示Hsp70对骨骼肌细胞的能量代谢产生影响。     

P2X7受体蛋白表达对胰腺癌的发生及发展的影响

目的探讨胰腺癌组织中P2X7受体蛋白表达及与患者临床病理学特征之间的关系。方法选取本院病理科收集的手术后胰腺癌组织80例为病例组、既往病理科收集的20例正常胰腺组织石蜡块为对照组,收集时间2013年1月-2017年1月,应用免疫组织化学染色法(SP)检测两组标本中的P2X7受体蛋白表达水平,并分期P2X7受体蛋白表达与患者临床分期、肿瘤分化、淋巴结转移等特征的关系。结果病例组胰腺癌组织中的P2X7受体蛋白阳性表达率66.25%显著的高于对照组胰腺组织中的10.00%,差异具有统计学意义(P0.05);UICC分期(Ⅲ期)胰腺癌组织的P2X7受体蛋白阳性表达率、低分化程度的P2X7受体蛋白阳性表达率、发生淋巴结转移的P2X7受体蛋白阳性表达率均分别显著的高于UICC分期(Ⅰ期+Ⅱ期)、高+中分化、未发生淋巴结转移的胰腺癌组织,差异具有统计学意义(P0.05);经Logistic回归分析,UICC分期为Ⅲ期、组织学低分化、P2X7受体蛋白阳性表达是胰腺癌患者12个月随访不良结局的独立危险因素(P0.05)。结论胰腺癌组织中P2X7受体蛋白表达上调,并且与UICC分期、肿瘤分化及发生淋巴结转移密切相关。     

脓毒性休克时大鼠心、肝、肾组织能量代谢的变化

参照Wichterman等盲肠结扎穿孔（CLP）改良方法复制脓毒性休克模型，观察了大鼠心、肝、肾组织能量代谢的变化规律。CLP后4h出现心率增加，6h时平均动脉压开始显著下降；肝组织在CLP后5h磷酸肌酸（PC）含量明显降低（P＜0．05），6h时肝脏三磷酸腺苷（ATP）含量、肾脏PC和ATP含量均明显降低，心肌PC、ATP含量显著下降则分别始于CLP后6h及7h。结果提示脓毒性休克时存在脏器组织能量代谢障碍，可能与组织低灌注、氧摄取利用功能降低有关。     

针刺足三里穴对端粒酶基因敲除小鼠海马P2X受体及其表达的影响

目的观察针刺足三里穴对端粒酶基因敲除小鼠海马P2X受体表达的影响。 方法采用随机数字表法将端粒酶基因敲除的早衰模型纯合子小鼠分为空白组、手针组及电针组，每组各6只小鼠。3组小鼠均正常饲养，期间空白组不给予任何特殊处理，手针组及电针组小鼠分别给予手针或电针刺激足三里穴。于治疗7d后观察各组小鼠海马区P2X受体及cAMP应答元件结合蛋白(CREB)表达间差异。 结果①手针组及电针组海马区P2X4相对表达量［分别为（0.67±0.05）和（0.70±0.13）］均较空白组（0.79±0.03）有下降趋势，但各组间差异均无统计学意义（P>0.05）。②电针组及手针组海马区P2X7表达［分别为（1.00±0.04）和（1.07±0.02）］均较空白组（1.21±0.05）明显下降（P<0.05），但电针组与手针组海马区P2X7表达组间差异无统计学意义（P>0.05）。③电针组小鼠海马区CREB表达（0.67±0.07）较空白组（0.82±0.05）及手针组（0.86±0.03）明显下降（P<0.05）。 结论电针可抑制端粒酶基因敲除小鼠海马区P2X4受体及CREB表达，其相关信号通路在针刺治疗神经退行性疾病的作用机制中可能发挥重要作用。     

女性体重、体脂含量、下肢肌力与骨密度的关系

目的：分析妇女体重、体重指数、体脂含量、下肢肌力与骨密度的关系，从生物力学角度探讨骨量的影响因素。方法：以在本中心进行保健的1109例女性为研究对象，分别测量身高、体重，计算体重指数（BMI），用肌肉功能分析仪测定体脂含量（FAT％）、下肢最大肌力（MLF），用双能X线吸收法（DEXA）测定股骨颈骨密度（FBMD）。结果：股骨颈骨密度与体重、体重指数、体脂含量、下肢肌力呈显著正相关，相关系数分别为0．145（P〈0．001）、0．182（P〈0.001）、0．189（P〈0.001）、0．074（P〈0.05）。结论：体重、体重指数、体脂含量、下肢肌力是骨密度的影响因素，适宜体重和运动有益于骨质疏松的防治。     

白血病细胞中共表达P2X7受体和Notch1胞内区

本研究旨在构建野生型及N187D突变型P2X7与ICN1基因的共表达载体,并在白血病细胞中表达,为进一步探讨P2X7在白血病发展中的作用奠定基础。采用Overlap PCR法,通过2A连接,构建野生型或N187DP2X7与ICN1的共表达载体;经DNA序列分析验证后,包装病毒、感染K562细胞并经细胞分选获得稳定感染细胞系。采用RT-PCR、Western blot、胞浆游离钙离子浓度测定等方法,验证外源基因的表达及P2X7受体的功能。结果表明,序列分析显示载体构建正确;包装病毒对K562细胞感染效率40%-70%,流式分选获得稳定表达细胞株;RT-PCR结果显示,P2X7受体和/或ICN1基因可在对应的稳定表达细胞株中高效表达;Western blot也证明,P2X7受体可在感染编码P2X7受体基因病毒的K562细胞中高效表达;胞浆游离钙离子浓度检测显示,在BzATP刺激下,表达野生及N187D突变型P2X7的K562细胞胞浆游离钙离子浓度持续升高。结论：本研究在白血病细胞中成功共同高表达P2X7受体与ICN1,为进一步探讨野生型和N187D突变型P2X7受体在白血病发展中的作用奠定基础。     

肝移植术后早期白细胞分类计数与CD4^＋T细胞ImmuKnow法ATP值的相关性研究

目的探讨临床常用的白细胞（WBC）分类计数与ImmuKnow法检测CD4^＋T细胞内的腺苷三磷酸（ATP）值的相关性,为临床提供一种快速判断细胞免疫功能的方法。方法选择50例行经典原位肝移植术受者术后1周至1个月内的样本,进行WBC分类计数并采用ImmuKnow法检测CD4＋T细胞内ATP值,分析两者的相关性。随机选择5例肝移植受者于术后1、2、3、4、5周分别重复检测上述指标,进一步验证两者动态变化的相关性。结果 50例行肝移植受者ImmuKnow法ATP值为446.7±219.1μg/L,WBC总数为（8.08±3.62）×109/L,与ImmuKnow法ATP值的相关系数（r）为0.659（P〈0.001）;中性粒细胞计数为（6.07±3.07）×109/L,与ImmuKnow法ATP值的r为0.593（P〈0.001）;单核细胞计数为（0.53±0.25）×109/L,与ImmuKnow法ATP值的r为0.371（P=0.006）。淋巴细胞计数为（1.13±0.69）×109/L,与ImmuKnow ATP值无相关关系（r=0.138,P=0.135）。5例肝移植受者术后重复检测,WBC总数的变化与ImmuKnow法ATP值的变化呈正相关,r均〉0.5,但由于样本量较少,仅有1例差异有统计学意义。结论肝移植术后早期WBC计数与CD4^＋T细胞ImmuKnow法ATP值具有一定的正相关性,WBC计数的变化可以在一定程度上反映ImmuKnow法ATP值的变化。