瘤胃源枯草芽孢杆菌BX1-12的筛选鉴定及其产酶抑菌活性

本试验通过筛选瘤胃环境中具产酶抑菌活性的芽孢杆菌,为开发功能型饲用微生态制剂奠定基础。采用可培养的方法从健康高产奶牛瘤胃液中分离芽孢杆菌,并测定其产酶能力及抑菌活性,同时对筛选到的功能菌株进行生理生化和分子生物学鉴定。结果显示：从健康高产奶牛瘤胃液中筛选出一株芽孢杆菌BX1-12,其产纤维素酶、蛋白酶及α-淀粉酶活力分别为27.33、137.54 U/mL和1450.53 U/100 mL,同时该菌具广谱抑菌效果,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和伤寒沙门氏菌的抑菌圈直径分别为13.62、23.21 mm和25.97 mm。结合Biolog生理生化实验及16S rRNA序列分析,鉴定该菌为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。综上,从健康高产奶牛瘤胃液中分离得到的这株枯草芽孢杆菌BX1-12,具有产多种酶活及广谱抑菌的能力,是一株良好的用于奶牛微生态制剂的候选菌株。 [关键词] 奶牛瘤胃液|饲用芽孢杆菌|枯草芽孢杆菌|产酶抑菌活性     

产植酸酶枯草芽孢杆菌诱变选育方法的研究

通过对产植酸酶枯草芽孢杆菌进行不同方法的诱变处理,确定最佳诱变条件.对产植酸酶的枯草芽孢杆菌进行筛选,然后采用紫外(UV)、亚硝基胍(NTG)、UV-NTG和NTG-UV4种方法对其进行诱变.UV诱变(100 s)选育的Z3菌株植酸酶活性最高(71.96 U/mL),比筛选出发菌株提高38.46％.结果表明:UV (100 s)选育方法为最佳的诱变条件.     

饲用高产纤维素酶菌株的诱变选育

以里氏木霉40359为出发菌株,对其进行紫外线、亚硝酸钠、硫酸二乙酯诱变,选育纤维素酶高产菌株。经过平皿初筛和摇瓶复筛,得到一株稳定性好的菌株YB40359,FPA酶活力达到57.31 U/mL,较原始菌株提高了87.12%;CMC酶活达到142.60 U/mL,较原始菌株提高了58.66%,且遗传稳定性好,可以用作饲用纤维素酶的降解菌。     

发酵玉米蛋白粉饲料的枯草芽孢杆菌紫外诱变选育

玉米蛋白粉饲料作为一种重要的饲料资源其中含有大量的蛋白质,但多数为醇溶蛋白不易被动物所吸收,利用微生物发酵玉米蛋白粉,可提高其吸收利用率。本研究以实验室保存的枯草芽孢杆菌为原始菌株,采用紫外诱变的方法,筛选出高产蛋白酶的突变菌株,以提高其发酵玉米蛋白粉的能力。通过大量筛选及连续传代试验,筛选出一株遗传性状稳定的较原始菌株的产蛋白酶能力有明显提高的枯草芽孢突变菌株11-1。经试验测定该菌株的蛋白酶活力较原始菌株提高1.66倍。发酵验证试验表明,菌株11-1对玉米蛋白粉饲料中的可溶性蛋白转化率由原始菌株的37.39%提高到47.83%。     

蛋白酶和淀粉酶产生菌的筛选及酶学性质分析研究

从牛瘤胃液中筛选出一株性状优良、产蛋白酶和淀粉酶活力较高的菌株,经初步鉴定为枯草芽孢杆菌。结果表明:该菌株产蛋白酶和淀粉酶的最适时间分别在培养的48h和96h,蛋白酶和淀粉酶的最高酶活力分别为221.57U/mL和54.06U/mL,最适温度分别为40～50℃和20～50℃,最适范围pH在6.0～7.0和pH6.0～8.0。     

高产中性蛋白酶芽孢杆菌的筛选鉴定及酶学性质研究

为了获得高产中性蛋白酶芽孢杆菌菌株，试验从不同环境样本中分离细菌并进行16S rDNA序列鉴定，利用酪蛋白琼脂培养基对产蛋白酶菌株进行初筛、福林酚法检测中性蛋白酶活性，结合形态学和分子生物学鉴定对高产中性蛋白酶芽孢杆菌菌株进行分类鉴定，通过对培养时间、温度和pH值的调节，研究该菌株的酶学性质。结果表明：成功筛选出1株贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)A1,该菌株具有较强产中性蛋白酶能力，中性蛋白酶活性为31.40 U/mL,所产中性蛋白酶的最适反应温度为50℃、最适pH值为7,在pH值=6～8时稳定性较好，对碱性环境有一定的耐受性，5.0 mmol/L的Ca²⁺和Mn²⁺对中性蛋白酶活性有显著促进作用(P<0.05),Zn²⁺和Fe²⁺对中性蛋白酶活性有抑制作用(P<0.05),Mg²⁺无明显作用。说明贝莱斯芽孢杆菌A1可以作为生产中性蛋白酶的备选菌株。     

高活性抗菌、抗逆芽孢杆菌的筛选及其紫外诱变育种

以7株芽孢杆菌为研究对象,对其主要生物学特性进行了研究,包括抑制大肠杆菌能力、产酶特性、对人工胃液和人工肠液的耐受性。结果表明,巨大芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌具有较强的抑制大肠杆菌的能力,枯草芽孢杆菌的蛋白酶总活力最高,淀粉酶活力最高的是巨大芽孢杆菌,脂肪酶活力最高的是地衣芽孢杆菌,纤维素酶活性最高的是枯草芽孢杆菌,7株芽孢杆菌均对人工胃液的耐受性较强,除地衣芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌外,其他5株芽孢杆菌对人工肠液的耐受性较强。通过本次研究综合分析,巨大芽孢杆菌在7株菌中的抑制大肠杆菌能力最强,产酶能力及耐人工胃液、肠液的能力也较强,具有作为新型饲料微生态制剂的开发潜力。进一步采用紫外诱变的方法提高该株巨大芽孢杆菌的抑制大肠杆菌的能力。结果显示:最佳的诱变时间为80 s,诱变后抑菌率为90.92%,比出发菌株增加了6.16个百分点,5次传代试验结果表现出较好的遗传稳定性,适合用于新型微生态制剂产品的研发。     

枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶发酵条件的优化

通过单因素试验和正交优化试验,对枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶的发酵条件进行优化。通过单因素试验表明,枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶的最佳碳源、氮源、无机盐种类、碳源添加量、氮源添加量、发酵温度和初始pH值分别为麦芽糖、蛋白胨、氯化钙、麦芽糖添加量8%、蛋白胨添加量4%、发酵温度37℃、初始pH值7.0。在单因素试验的基础上进行正交优化试验得到了枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶最优发酵条件为:麦芽糖添加量8%、蛋白胨添加量8%、氯化钙添加量8 g/L、发酵温度37℃、初始pH值7.0。在最优发酵条件下,枯草芽孢杆菌所产的中性蛋白酶酶活为420.36 U/mL,比优化前98.36 U/mL提高了3倍。     

发酵羽毛粉的细菌菌株筛选及诱变

从自然界分离出一株产角蛋白酶的G-短杆菌。通过紫外线和亚硝酸钠复合诱变,筛选出产角蛋白酶活力强的诱变株RUN25.903,通过优化试验得到复合诱变的最优条件为15 W紫外灯进行紫外线诱变,诱变距离30 cm,诱变时间25 s;0.2 mol/L亚硝酸钠溶液等体积诱变,诱变时间90 s。诱变株RUN25.903产角蛋白酶活力最高达0.936 U/m L,比诱变前提高86.1%,发酵液的氨基酸含量达23.82 mg/m L。研究为工业化生产生物发酵羽毛粉培育优良菌种。     

枯草芽孢杆菌诱变株发酵羽毛工艺条件的研究

通过对枯草芽孢杆菌紫外线和亚硝酸钠复合诱变菌株FUN30.2的发酵培养基及发酵条件的优化,得到最优的发酵培养基成分为:羽毛粉5.5%,青贮玉米秸秆粉0.8%,K+浓度0.018mol/L,Mg2+浓度0.065mol/L,Ca2+浓度0.072mol/L,Fe2+浓度0.010mol/L,Na+浓度0.088mol/L。最优的发酵条件为:培养温度33℃,培养时间72h,摇床转速170r/min,接种量6%,装液量100mL/500mL,菌体生长适宜的培养基初始pH值是7.0,菌体产酶的最适宜pH值为7.5～8.0。60h菌体产酶活力最高达1.267U/mL;发酵时间72h,羽毛降解率为69.61%;发酵液的氨基酸含量达22.66mg/mL。     

产蛋白酶和纤维素酶纳豆芽孢杆菌(B.Subtilis Natto)的筛选及其生物特性研究

采用酪蛋白平板和羧甲基纤维素钠(CMC-Na)平板初筛法,分别从北京、大连、日本3个产地的纳豆食品中分离筛选到10株产蛋白酶菌株(NY-1~NY-10)和10株产纤维素酶菌株(NS-1~NS-10)。经酶活力测定NY-1为蛋白酶活力最高菌株,NS-1为纤维素酶活力最高菌株。通过2株菌的生长曲线、芽孢形成曲线、产酶动态变化曲线和酶活力传代稳定性试验,得出NY-1的最佳种龄为16 h,最佳芽孢收获时间为28 h,芽孢量的对数值为(6.92±0.047)、蛋白酶产酶高峰时间为18 h,酶活力为(44.12±1.48)U/mL,;NS-1的最佳种龄为14 h,最佳芽孢收获时间为28 h,芽孢量的对数值为(8.41±0.0060),纤维素酶产酶高峰时间为40 h,酶活力为(60.94±1.22)U/mL,蛋白酶和纤维素酶酶活力在7代内保持稳定。     

一株饲用贝莱斯芽孢杆菌的分离鉴定及其生理特性

本试验以淀粉培养基和羧甲基纤维素钠培养基为筛选培养基，自AA+白羽肉鸡肠道中分离到1株高产淀粉酶和纤维素酶的细菌菌株CY-03，经形态学和分子生物学鉴定，确定该菌株为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）。对该菌株的产酶能力及其生物安全性进行了初步研究，试验结果表明：菌株CY-03具有高产淀粉酶和纤维素酶的特性，摇瓶液体酶活分别为89.47 U/mL和 65.63 U/mL。并以斑马鱼为宿主进行高浓度菌液饲养试验，饲喂30 d的斑马鱼状态正常。表明该菌株具有较丰富的产酶能力，对生物安全，在生物饲料领域具有较好开发潜力。 [关键词] 贝莱斯芽孢杆菌|淀粉酶|纤维素酶|安全性|生物饲料     

高产赖氨酸枯草芽孢杆菌的选育

为提高枯草芽孢杆菌产赖氨酸的能力,本试验拟从10株猪源枯草芽孢杆菌中,初步筛选出一株赖氨酸高产菌株。再以此菌株为出发菌株,采用紫外诱变的方法复筛出高产赖氨酸的突变株。结果发现,初筛得到的菌株YB83,其培养上清液中赖氨酸含量为179.39 mg/L,较LB液体培养基高出22.58%;经过紫外诱变后,得到一株遗传性稳定的突变菌株YB83-U5,其培养上清液中赖氨酸含量为277.49 mg/L,比原始菌株YB83提高了52.97%。     

驴源枯草芽孢杆菌分离鉴定及生物学特性

为分离驴源具有抑菌活性的优良芽孢杆菌,本试验通过分离培养和形态观察,从健康驴新鲜粪便样品中分离芽孢杆菌,采用牛津杯法初步筛选具抑菌活性目标菌株,并进行生理生化和分子鉴定,研究其产酶活性、抑菌活性、耐酸性和耐胆盐性能、药物敏感性。结果显示：筛选到两株对金黄色葡萄球菌有强抑制作用的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）,编号分别为LV1和LV2。两菌株具有很强的耐酸、耐胆盐特性,能产淀粉酶、纤维素酶和蛋白酶,并对检测用9种抗生素都敏感。结果表明,两株驴源枯草芽孢杆菌LV1和LV2具备良好的抑制金黄色葡萄球菌、产酶和耐酸、耐胆盐等益生活性,可作为研发驴用微生态制剂的潜在益生菌菌株。 [关键词] 驴|枯草芽孢杆菌|金黄色葡萄球菌|微生态制剂     

产蛋白酶和纤维素酶纳豆芽孢杆菌（B.Subtilis Natto）的筛选及其生物特性研究

采用酪蛋白平板和羧甲基纤维素钠（CMC-Na）平板初筛法,分别从北京、大连、日本3个产地的纳豆食品中分离筛选到10株产蛋白酶菌株（NY-1～NY-10）和10株产纤维素酶菌株（NS-1～NS-10）。经酶活力测定NY-1为蛋白酶活力最高菌株,NS-1为纤维素酶活力最高菌株。通过2株菌的生长曲线、芽孢形成曲线、产酶动态变化曲线和酶活力传代稳定性试验,得出NY-1的最佳种龄为16 h,最佳芽孢收获时间为28 h,芽孢量的对数值为(6.92±0.047)、蛋白酶产酶高峰时间为18 h,酶活力为（44.12±1.48） U/mL,;NS-1的最佳种龄为14 h,最佳芽孢收获时间为28 h,芽孢量的对数值为(8.41±0.0060),纤维素酶产酶高峰时间为40 h,酶活力为（60.94±1.22） U/mL,蛋白酶和纤维素酶酶活力在7代内保持稳定。     

一株喜油嗜热芽孢杆菌G1201产高温蛋白酶的性质研究及异源表达初探

从高温环境中分离出产高温蛋白酶菌株，以脱脂奶粉为唯一碳氮源，通过形态学、生理生化特性和16S rRNA基因序列测定确定菌株种属|硫酸铵沉淀法获得高温蛋白酶的粗酶，并对其进行酶学性质分析|克隆编码高温蛋白酶的基因序列，构建表达载体在大肠杆菌中进行异源表达。结果表明：筛选到1株产高温蛋白酶的菌株G1201，经鉴定为喜油嗜热芽孢杆菌（Geobacillus thermoleovorans)，所产高温蛋白酶大小52.5 kD，属丝氨酸蛋白酶家族，最适作用温度和pH分别为70 ℃和9.0，Ca2+、Mg2+、吐温20和TritonX-100对酶活有促进作用|异源表达结果显示产物以包涵体的形式存在，目的蛋白复性后含量为0.108 mg/mL。该菌株所产高温蛋白酶可耐受饲料、食品加工过程中的高温环境，具有良好的应用潜力。 [关键词] 喜油嗜热芽孢杆菌|高温蛋白酶|酶学性质|异源表达     

不同种属芽孢杆菌对彭泽鲫生长性能、背肌营养成分、肠道结构及消化酶活的影响

为探究饲料中添加不同种属芽孢杆菌对彭泽鲫（Carassius auratus var. Pengze）生长性能、背肌营养成分、肠道结构及消化酶活性的影响，试验选取体质健壮初始体重为（25.07±0.21）g的彭泽鲫500尾，随机分成5组，每组4个重复，每个重复25尾，分别饲喂添加0（对照组）、1.5×108 cfu/g枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）、凝结芽孢杆菌（Bacillus coagulans）、复合菌（地衣芽孢杆菌：凝结芽孢杆菌=1：1）的5种等氮等能饲料。在流水水族箱中开展60 d饲喂试验。试验结果表明：在饲料中分别添加枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌及复合菌均能显著提高彭泽鲫的增重率和特定生长率，显著降低饲料系数（P < 0.05），其中复合芽孢杆菌组促生长作用更明显|地衣芽孢杆菌组及复合芽孢杆菌组彭泽鲫的肠道绒毛高度均显著提高（P < 0.05）|彭泽鲫饲喂含枯草芽孢杆菌及复合芽孢杆菌的饲料后，其肝胰脏淀粉酶、中肠胃蛋白酶及血清脂肪酶活力均显著提高（P < 0.05）|同时，饲喂彭泽鲫含芽孢杆菌的饲料后，彭泽鲫背肌营养成分无显著变化（P ＞ 0.05）。综上所述，枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌均能促进鱼类生长，调节肠道健康|其中复合芽孢杆菌对肠道结构及酶活性的影响效果最佳。 [关键词] 芽孢杆菌|彭泽鲫|生长性能|肠道结构|消化酶     

坎儿井水产蛋白酶菌株X-34产酶条件及其部分酶学特性研究

从吐鲁番坎儿井水样为实验材料,筛选出一株产生蛋白酶活性较高的X-34菌株,经生长特点、菌体及菌落形状和生理生化指标和16S r RNA基因序列比对分析,将该菌株鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),并对其产酶条件和部分酶学特性进行实验研究,结果显示:该菌株最佳产酶条件为:时间为48 h,温度为37℃;初始pH为7;装液量为80 mL,碳源为葡萄糖,氮源为牛肉膏。该蛋白酶的作用最适温度为40℃,反应最适pH为7.5。在最适条件下,X-34菌株产生的蛋白酶活力达到1558 U/mL。     

紫外链霉素复合诱变选育高产surfactin菌株研究

Surfactin是芽孢杆菌产生的一种抗菌脂肽,在畜牧养殖中有替代抗生素的潜力。野生菌株代谢产生surfactin能力弱,限制了surfactin的开发使用,为提高Bacillus subtilis S21产surfactin的能力,以B.subtilis S21为出发菌株,采用紫外链霉素复合诱变,以期得到高产surfactin菌株。诱变筛选结果表明:经过复合诱变筛选,得到了诱变菌株38',其传代8次后的遗传稳定菌株,surfactin产量为0.28 mg/mL,比出发菌B.subtilis S21的surfactin产量提升了9.33倍,取得较佳的诱变效果。     

猪源枯草芽孢杆菌BL-Y9益生特性研究及小鼠安全试验

本研究对实验室自行分离保存的猪源枯草芽孢杆菌BL-Y9进行抑菌、产酶、体外消化率等益生特性研究,并测定了其对小鼠的安全性。结果表明：菌株BL-Y9对猪大肠杆菌K88、鸡大肠杆菌O78、鸡白痢沙门氏菌CVCC533及金黄色葡萄球菌C56011有较好的抑菌效果,抑菌圈直径均可达到10 mm以上,发酵上清液中性蛋白酶及纤维素酶活性分别可达184.94、9.68 U/mL|经模拟动物体消化道的试验结果表明：菌株BL-Y9对三种不同饲料组合的消化效果较好,其中以对玉米面+豆粕组合消化效果最好,经作用后,消化液粗纤维消化率、游离氨基酸增加幅度、可溶性氨基酸增加幅度、还原糖增加幅度及酸溶蛋白增加幅度分别为37.79%、152.94%、438.11%、325.62%、131.39%。动物试验结果显示,每只小鼠灌胃1 ~ 100亿剂量菌体是安全的。菌株BL-Y9可作为畜禽饲料添加剂使用。 [关键词] 枯草芽孢杆菌|产酶特性|抑菌特性|消化率|小鼠安全性