自发性高血压大鼠血管紧张素Ⅱ－1型受体基因的表达

应用反转录一聚合酶链式反应（ＲｅｖｅｒｓｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，ＲＴ－ＰＣＲ）方法，亚克隆出大鼠肾脏血管紧张素Ⅱ－１型受体（ＡｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎⅡＴｙｐｅ－１Ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＡＴＲ１）ｃＤＮＡ，并以此为探针，通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ分析和定量ＰＣＲ方法，测定大鼠不同组织中ＡＴＲ１ｍＲＮＡ的分布，证明ＡＴＲ１ｍＲＮＡ广泛存在于不同组织中，其中以肾脏含量为最高，其次为心脏和小脑；自发性高血压大鼠（ＳｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙＨｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅＲａｔ，ＳＨＲ）肾、心组织中ＡＴＲ１ｍＲＮＡ较正常对照大鼠（Ｗｉｓｔａｒ－ＫｙｏｔｏＲａｔ，ＷＫＹ）明显下隆。     

一氧化氮合成酶（NOS）基因表达的半定量检测及其应用

参照Ｍａｒｔｉｎ（１９９３）定量ＲＴ－ＰＣＲ方法，建立一种灵敏、简捷、特异的半定量ＮＯＳｍＲＮＡ测定方法；证明了ＮＯＳｍＲＮＡ不仅存在于脑组织，亦广泛分布于心、肾、肺和肝组织中，其中以脑组织含量最高，肾、心次之，除内皮细胞以外平滑肌细胞中亦有ＮＯＳ基因的表达；此外，本工作还观察到自发性高血压大鼠的脑、肾、肝和平滑肌细胞中ＮＯＳｍＲＮＡ水平下降，表示ＮＯＳ基因表达受抑，可能与高血压的病因密切相关。     

内皮素对血管平滑肌细胞中一氧化氮合成酶基因表达的影响

应用反转录－聚合酶链式反应（ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＲＴ－ＰＣＲ）方法，测定出一氧化氮合成酶（ＮｉｔｒｉｃＯｘｉｄｅＳｙｎｔｈａｓｅ，ＮＯＳ）ｍＲＮＡ不仅在心血管系统细胞中广泛存在，并且发现内皮素可以促进血管平滑肌细胞中ＮＯＳｍＲＮＡ的表达（＋３４．８％），增高血管平滑肌细胞中ＮＯＳ酶活性（＋７４％）。结果提示，由内皮素引起的血管平滑肌细胞中ＮＯＳ基因表达和ＮＯＳ活性的增加，可能是高血压中的一个重要的负反馈因素。     

输精管结扎鼠小脑及阴茎组织一氧化氮合酶基因的表达

研究输精管结扎后３个月及同条条件下假手术对照组大鼠小脑和阴茎组织一氧化氮合酶ｍＲＮＡ的表达。方法：应用ＲＴ－ＰＣＲ法测定。结果：１小脑ＮＯＳｍＲＮＡ表达：结扎后３个月组与假手术３个月组相比，Ｐ〈０．００１，二者有显著性差异ＳＯＧ３高于ＶＧ３。２．阴茎ＮＯＳ ｍＲＮＡ表达；ＶＧ３与ＳＯＤ３相比，Ｐ〈０．０５，二者有显著性差异，ＳＯＧ３高于ＶＧ３。     

大鼠肺和脑组织中一氧化氮合成酶mRNA表达的研究

以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂法法观察了３种一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）即脑ＮＯＳ（ｂＮＯＳ）内皮ＮＯＳ（ｅＮＯＳ）和巨噬细胞ＮＯＳ（ｍａｃＮＯＳ）在大鼠肺和脑组织中ｍＲＮＡ的表达情况，结果显示：肺组织存有ｅＮＯＳ和ｍａｃＮＯＳｍＲＮＡ表达，其ｍＲＮＡ杂交带分子大小分别为４．８ｋｂ和４．５ｋｂ脑组织只有ｂＮＯＳｍＲＮＡ表达，其杂交带分子大小为１０．５ｋｂ，提示３种ＮＯＳ基因结构各异，且其在大鼠肺和脑组织中的     

大鼠肺和脑组织中一氧化氮合成酶mRNA表达的研究

以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交法观察了３种一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）即脑ＮＯＳ（ｂＮＯＳ）、内皮ＮＯＳ（ｅＮＯＳ）和巨噬细胞ＮＯＳ（ｍａｃＮＯＳ）在大鼠肺和脑组织中ｍＲＮＡ的表达情况。结果显示：肺组织存有ｅＮＯＳ和ｍａｃＮＯＳｍＲＮＡ表达，其ｍＲＮＡ杂交带分子大小分别为４．８ｋｂ和４．５ｋｂ；脑组织只有ｂＮＯＳｍＲＮＡ表达，其杂交带分子大小为１０．５ｋｂ。提示３种ＮＯＳ基因结构各异，且其在大鼠肺和脑组织中的分布和表达亦不相同。     

心肌再灌注损伤中一氧化氮合酶及其基因异常表达的研究

目的用鼠的离体工作心脏研究心肌再灌注损伤中一氧化氮（ＮＯ）、ＮＯ合酶（ＮＯＳ）同功酶及其ｍＲＮＡ表达的变化。方法逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）定量检测心肌组织ＮＯＳ同功酶ｍＲＮＡ表达,测定心肌组织中的丙二醛（ＭＤＡ）、ＮＯＳ及冠脉流出液的ＮＯ、肌酸磷酸激酶（ＣＰＫ）的量,同时检测心脏缺血再灌注前后的心功能变化。并分别于冷停跳液中加用地塞米松（Ｄｅｘ）和缓激肽（ＢＫ）,观察其对心肌再灌注损伤的影响。结果心肌缺血再灌注后,结构型ＮＯＳ（ｃＮＯＳ）的ｍＲＮＡ表达下调,诱导型ＮＯＳ（ｉＮＯＳ）的ｍＲＮＡ表达上调;ｃＮＯＳ活性下降,ｉＮＯＳ活性升高,ＮＯ量减少。使用Ｄｅｘ后,与缺血再灌注的对照组相比,ｉＮＯＳ的ｍＲＮＡ表达下调,ｉＮＯＳ活力下降,ＮＯ分泌减少,并且心功能恢复好转,ＭＤＡ、ＣＰＫ下降;使用ＢＫ后,ＮＯＳ的ｍＲＮＡ表达无变化,ｃＮＯＳ活力升高,ＮＯ分泌增多,心功能恢复有好转,ＭＤＡ、ＣＰＫ亦下降。结论ＮＯＳ同功酶表达的变化可能是心肌再灌注损伤的重要机制之一,激活ｃＮＯＳ或下调ｉＮＯＳ的ｍＲＮＡ表达具有心肌保护作用     

消瘀片对粥样硬化兔血管壁组织ET-1 mRNA和NOSmRNA表达的影响

采用原位杂交和ＲＴ－ＰＣＲ方法,观察消瘀片治疗１６周动脉粥样硬化兔后对血管壁组织ＥＴ－１ｍＲＮＡ和ＮＯＳｍＲＮＡ表达的影响。结果显示,粥样硬化组的ＥＴ－１ ｍＲＮＡ和ｉＮＯＳｍＲＮＡ表达较多,而ｃＮＯＳｍＲＮＡ表达较少。使用消瘀片后动脉 的ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达明显减少,提示血浆和血管壁组织中的ＥＴ－１减少是由于ＥＴ－１ｍＲＮＡ转录水平降低所致。     

内皮素A型受体（ET＿A－R）基因在大鼠心血管系统细胞中的表达

应用改良的Ｍａｒｔｉｎ（１９９３）定量反转录－聚合酶链式反应（ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ｐｏｌｙ－ｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＲＴ－ＰＣＲ）方法，测定了大鼠ＥＴＡ型受体（（Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ－Ａｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＥＴＡ－Ｒ）ｍＲＮＡ在心血管系统细胞中的分布。结果证明，ＥＴＡ－ＲｍＲＮＡ广泛地分布在心血管系统细胞中．其中以平滑肌细胞中含量最高。内皮素及其受体的配基可以促进血管平滑肌细胞（ｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈＭｕｓｃｌｅｃｅｌｌ，ＶＳＭＣ）中ＥＴＡ－ＲｍＲＮＡ的表达。此外，还发现在自发性高血压动物的血管平滑肌细胞中ＥＴＡ－Ｒ基因的高表达可能是高血压血管高反应性的一个重要机制。     

脊髓损伤后诱导型一氧化氮合酶基因表达变化的实验研究

目的　探讨大鼠脊髓损伤后诱导型ＮＯＳ（ｉＮＯＳ）基因表达变化规律。方法参考Ｎｙｓｔｒｏｍ方法建立的大鼠脊髓压 迫伤模型,用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法测定伤段脊髓组织ｉＮＯＳ ｍＲＮＡ的表达情况。结果正常脊髓组织内未 见ｉＮＯＳ ｍＲＮＡ表达,脊髓压迫伤后ｉＮＯＳ ｍＲＮＡ开始表达并逐渐增强,伤后２４ｈ达到高峰。结论ｉＮＯＳ未参与脊髓 组织正常生理调节,脊髓损伤后ｉＮＯＳ ｍＲＮＡ开始表达并逐渐增强,提示ｉＮＯＳ参与了继发性脊髓损伤过程。     

The cloning of Na+/Ca2+exchaanger Gene and its expression in brain ischemia

ＴＨＥＣＬＯＮＩＮＧＯＦＮａ￣＋／Ｃａ￣（２＋）ＥＸＣＨＡＮＧＥＲＧＥＮＥＡＮＤＩＴＳＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮＩＮＢＲＡＩＮＩＳＣＨＥＭＩＡＴａｎｇＪｉａｎ汤健，ＷａｎｇＹｕ王瑜，ＺｋａｎｇＣｈｅｎｈｕｉ张晨晖，Ｅ．ＣｏｓｔａＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣａｒ...     

大鼠脑、肝和前列腺一氧化氮合酶mRNA表达

根据大鼠脑型一氧化氮合酶（ｂＮＯＳ）和内皮型一氧化氮合酶（ｅＮＯＳ）的ｃＤＮＡ序列分别设计特异引物，用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测２种ＮＯＳ在脑、肝脏和前列腺中的ｍＲＮＡ表达差异。结果表明：ｂＮＯＳ在小脑、大脑皮质和海马中有表达，并且在肝脏和前列腺组织中也有表达：ｅＮＯＳ在肝组织中有表达，在小脑、大脑皮质和海马等脑组织中均有表达，但前列腺组织中未检测到ｍＲＮＡ表达。２种ＮＯＳ在上述组织中的广泛分布提示ＮＯ具有多种复杂的、有时甚至是相反的生理功能可能与ｂＮＯＳ和ｅＮＯＳ甚至诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）分别或共同作用有关。     

转录共激活子p300分布及其表达的组织差异性

目的阐明转录共激活因子(p300)在大鼠组织中的分布特点及其表达的组织差异,探讨p300在组织差异相关的基因表达调控中的作用.方法采用免疫组织化学技术检测p300在雄性大鼠大脑皮质、海马、小脑、心肌、肝脏、肺脏、肾脏、睾丸中的分布特点;运用免疫印迹技术,对不同组织中p300蛋白水平进行检测.结果① p300蛋白在心肌、肝脏、肺脏、肾脏、睾丸、小脑、海马、大脑皮质中均有分布.②在睾丸、海马和肾脏组织中,p300主要分布在精原细胞、锥形神经元细胞和远曲小管上皮细胞中;大脑皮质神经元均表达p300,在分子层中呈弱阳性;p300在小脑蒲肯野细胞和心脏组织的心肌细胞表达呈强阳性.p300在肝细胞中均匀分布,而肺脏组织中p300表达呈弱阳性.③ p300蛋白在骨骼肌中表达水平最高,其次是心肌、睾丸、肝脏和小脑,下丘脑中未检测到明显的阳性表达.结论 p300的表达和分布具有组织和细胞差异性,这种差异分布可能是机体不同组织、细胞中蛋白表达差异的重要机制.     

一氧化氮合成酶（NOS）活性的测定及其应用

本文介绍一种一氧化氮合成酶活性测定的改良方法。用这一方法测定了大鼠９种组织以及血清和血浆中一氧化氮合成酶的活性，并比较了正常与高血压大鼠小脑、大脑、肝脏和肾脏中一氧化氮合成酶活性的变化。     

The role of hypertension-related gene in aortic vascular smooth muscle cells from mice and rats

目的　研究高血压相关基因 (HRG 1)在心血管病发病中的作用。方法　用RT PCR和Northernblot分析HRG 1的表达。用3 H TdR掺入和组织学方法检测血管平滑肌细胞 (VSMC)的增殖。结果　Northernblot分析显示 ,HRG 1mRNA不仅可在VSMC中表达 ,亦可在大鼠多种组织中表达 (心、脑、肺、肾和肝 )。此外 ,在SHR大鼠的心、脑、肾和肝组织的HRG 1基因表达均明显低于正常WKY大鼠。半定量RT PCR和组织学分析表明 ,ApoE敲除小鼠和再狭窄动物模型的HRG 1mRNA表达减少 ,并且均可见到新生内膜形成。刺激VSMC增殖的ET ,AII和IL 1可减少VSMCHRG 1mRNA的表达。ANF ,CGRP和Adm可抑制VSMC增殖 ,增加HRG 1mRNA表达。这些作用能被相应的阻断剂或抗体所阻断或抑制。结论　HRG 1是一种与VSMC增殖相关的基因 ,它在动脉粥样硬化 ,再狭窄和高血压等心血管疾病中可能具有重要作用。     

白细胞中血管紧张素原mRNA的定量分析

目的：检测白细胞中血管紧张素原（ＡＧＴ）ｍＲＮＡ的量。方法：提取总ＲＮＡ,进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交;应用ＲＴ－ＰＣＲ技术联合印迹杂交和同位素掺入法对微量ｍＲＮＡ检测。结果：Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交显示肝细胞血管紧张素原ｍＲＮＡ有明显的杂交带,而白细胞无杂交信号。将ＲＴ－ＰＣＲ技术同印迹杂交或同位素掺入法联合应用能提高血管紧张素原微量ｍＲＮＡ检测灵敏度。结论：白细胞的ＡＧＴｍＲＮＡ量低于肝细胞;ＲＴ－ＰＣＲ联合印迹杂交或同位素掺入法是微量ｍＲＮＡ定量分析的有效方法。     

自发性糖尿病长爪沙鼠环氧化酶(COX)-2在三种组织中的表达

目的 研究环氧化酶(COX)-2基因在糖尿病长爪沙鼠3种组织中的表达水平,进一步探索其与长爪沙鼠糖尿病发生和发展的关系.方法 选取糖尿病长爪沙鼠和正常沙鼠各6只,分别采集动物的骨骼肌、肝脏和肾脏组织,用实时PCR和Western blotting检测COX-2基因在各组织中mRNA和蛋白表达水平.结果 实时PCR的结果表明,COX-2基因的mRNA水平在糖尿病组动物的骨骼肌组织中表达与对照组无明显差异,而肝脏和肾脏组织中有表达升高趋势.Western blotting结果显示,糖尿病组COX-2的蛋白水平在肝脏和肾脏组织中存在表达升高趋势,且肾脏具有统计学意义.结论 COX-2在糖尿病长爪沙鼠肝脏和肾脏组织中表达升高,在肾脏组织尤其明显,说明COX-2对长爪沙鼠糖尿病的影响可能发生在肝脏和肾脏组织中.