1658例玻璃化冻融周期的临床结局分析

目的：探索应用玻璃化冻融技术冻融卵裂期胚胎及囊胚的临床效果。方法来源于江西省妇幼保健院生殖中心2012年9月至2014年1月1658例玻璃化冻融移植周期（其中卵裂期胚胎1426周期共2907枚胚胎,囊胚232周期共341枚胚胎）,用自制麦管作为胚胎载体及相同的玻璃化方法进行冷冻、复苏,及胚胎移植,观察其复苏存活率、全胚融解率、临床妊娠率、植入率和流产率等。结果卵裂期胚胎复苏率为98.5%,全胚融解率是0.35%。囊胚复苏率为99.7%,全胚融解率是0.43%。卵裂期胚胎的胚胎植入率显著低于囊胚（35.4%vs 49.3%）（P〈0.05）,平均每周期移植胚胎数显著高于囊胚（2.0±0.3 vs 1.5±0.5）（P〈0.05）,临床妊娠率低于囊胚（50.7%vs 55.4%）,差异无显著性意义,P〉0.05,双胎率卵裂期胚胎显著高于囊胚（38.3%vs 28.9%）（P〈0.05）,早期流产率无显著性差异（6.8%vs 7.8%,P〉0.05）。结论使用相同的玻璃化冷冻方法对人类卵裂期胚胎和囊胚可获得理想的冷冻效果。     

两种冻融方法对小鼠成熟卵母细胞冷冻效果的研究

目的 探讨不同冷冻方法对成熟期(MⅡ)卵母细胞体外受精及胚胎发育能力的影响.方法 收集昆明小鼠MⅡ期卵母细胞,分别行玻璃化冷冻与程序化冷冻.解冻后比较两组复活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率.结果 玻璃化冷冻法冷冻MⅡ期卵母细胞解冻后存活率显著高于程序化冷冻组的(80.1% vs.55.5%,P＜0.01),并且两组的囊胚形成率比较,差异有统计学意义(28.6% vs.19.4%,P＜0.05).结论 在进行卵母细胞冷冻保存时,玻璃化冷冻法冷冻效果好于程序冷冻法.     

不同载体用于人卵裂期胚胎玻璃化冷冻的初步研究

目的：比较不同载体用于人卵裂期胚胎玻璃化冷冻的效果。方法选择冰珠、自制叶片、冷冻环这三种载体,分别用于人卵裂期胚胎玻璃化冷冻后移植,比较不同组合的复苏率、临床妊娠率、植入率。结果冰珠组的复苏率、妊娠率、植入率为明显低于自制叶片组和冷冻环组,差异具有统计学意义（P＜0.05）;自制叶片组和冷冻环组的复苏率、妊娠率、植入率差异无统计学意义（P＞0.05）。结论冷冻载体选择自制叶片和冷冻环均可以取得较满意的冷冻效果,其中自制叶片的成本更低,所以应用自制叶片于人卵裂期胚胎玻璃化冷冻效果好且更经济。     

RapidWarm Blast玻璃化解冻液对囊胚复苏的效果观察

目的 观察在囊胚复苏周期中,RapidWarm Blast玻璃化解冻液对囊胚的复苏效果。方法 回顾性分析2018年12月至2019年12月在安徽医科大学第一附属医院首次行囊胚复苏移植的655例患者临床资料,根据囊胚解冻液不同分A组357例及B组298例。A组采用传统Vitrification Media解冻液进行囊胚复苏,B组采用新型RapidWarm Blast解冻液复苏。比较两组囊胚复苏后整体存活率,解冻2 h后囊胚重扩张率、孵化率,囊胚种植率及临床妊娠率;同时比较两种解冻液对囊胚不同发育阶段(第5天囊胚、第6天囊胚)的重扩张率、孵化率及临床妊娠率的影响。结果 两组囊胚复苏后的存活率、重扩张率、孵化率、临床妊娠率比较,差异均无统计学意义(P>0.05);B组囊胚种植率(55.45%)高于A组(48.76%),差异有统计学意义(P<0.05)。两组中发育第5天的囊胚复苏2 h后重扩张率及孵化率均高于发育第6天的囊胚,差异均有统计学意义(P<0.05);两组间发育第5天的囊胚复苏2 h后重扩张率及孵化率比较,差异无统计学意义(P>0.05),B组发育第6天的囊胚复苏2 h后扩张率及孵化率均高于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 新型RapidWarm Blast解冻液用于囊胚玻璃化复苏,可获得与传统的Vitrification Media相似的临床结局,但新型解冻液对发育第6天囊胚的复苏效果更好,胚胎种植率更高。     

海藻糖应用于人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻研究

目的 探讨海藻糖的应用能否改善人成熟卵母细胞玻璃化冷冻效果、提高冻融后卵母细胞的发育潜能.方法 从该中心IVF/ICSI治疗的病人中经知情同意获取卵母细胞248枚,随机分成四组：显微注射海藻糖组（A组）、细胞外海藻糖组（B组）、常规蔗糖组（C组）、新鲜对照组（D组）.卵母细胞复苏后,所有存活卵母细胞均行卵胞浆内单精子显微注射（ICSI）,观察各组卵母细胞冻融后存活率、受精率、卵裂率、囊胚率、优质胚胎率、优质囊胚率.结果 A、B、C三组存活率、优质胚胎率、囊胚率差异无统计学意义（P〉0.05）,A组受精率、卵裂率、优质囊胚率高于B组和C组,差异均有统计学意义（P〈0.05）,其中与B组受精率、卵裂率差异极显著（P〈0.01）,与C组卵裂率差异极显著（P〈0.01）;B组与C组存活率、受精率、卵裂率、优质胚胎率、囊胚率、优质囊胚率差异均无统计学意义（P〉0.05）;A组与D组优质胚胎率、优质囊胚率差异有统计学意义（P〈0.05）;B组及C组与D组受精率、卵裂率、优质胚胎率、优质囊胚率差异极显著（P〈0.01）.结论 海藻糖作为细胞内冷冻保护剂似乎能够改善人卵母细胞玻璃化冷冻效果及冻融后卵母细胞发育潜能.     

抗坏血酸盐对小鼠囊胚冷冻结果的影响

目的:探讨在慢速冷冻和玻璃化冷冻中添加抗坏血酸盐对小鼠囊胚冷冻结果的影响。方法:用慢速冷冻法和玻璃化法冷冻小鼠囊胚,将0.1mmol/L抗坏血酸盐分别加到冷冻和解冻液中作为观察组,不加抗坏血酸盐冷冻作为对照组,观察解冻后囊胚腔重新扩张率和囊胚孵出率。结果:在慢速冷冻方法中观察组囊胚腔重新扩张率和囊胚孵出率高于对照组(P<0.05)。而玻璃化法两者差别无统计学意义(P>0.05)。结论:抗坏血酸盐可在慢速冷冻方法中提高冻融囊胚继续生长发育能力,玻璃化法没有此作用。     

卵裂期胚胎玻璃化冷冻解冻后继续培养至囊胚的妊娠结局分析

目的了解卵裂期胚胎玻璃化冷冻解冻后行囊胚培养的妊娠结果。方法回顾性分析2013年5月-2013年9月在郑州大学第二附属医院生殖中心行玻璃化冷冻解冻后移植的患者共202周期的妊娠情况;其中卵裂期胚胎冷冻解冻后移植者136周期,卵裂期胚胎解冻后行囊胚培养后移植者66周期。结果卵裂期胚胎冻融移植者136周期,均有胚胎可移植,获得妊娠45周期,妊娠率为33．08％（45／136）、着床率为17．35％（55／317）,早期流产率为17。78％（8／45）;卵裂期胚胎解冻后行囊胚培养者66周期212个胚胎,其中43个周期共形成囊胚87个,囊胚形成率为41．03％（87／212）、获得妊娠22周期,妊娠率为51．16％（22／43）、着床率为32．94％（28／85）、早期流产率14．29％（3／22）。囊胚期移植者的着床率及临床妊娠率显著高于卵裂期移植者,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论卵裂期胚胎解冻后培养至囊胚能获得较高的着床率和妊娠率。     

玻璃化冷冻法在人桑葚胚胎和卵裂期胚胎冻融周期中的临床研究

目的探讨玻璃化冷冻法对人桑葚胚和卵裂期胚胎解冻后的妊娠结局。方法回顾性分析河北医科大学第二医院生殖中心行冻融胚胎移植患者的解冻及妊娠情况,并根据冷冻方法和胚龄分为3组。A组为前期采用慢速程序法冷冻卵裂期胚胎的冻融移植周期,共215周期;B组为前期采用玻璃化法冷冻卵裂期胚胎的冻融移植周期,共208周期;C组为前期采用玻璃化法冷冻桑葚期胚胎的冻融移植周期,共159周期。比较A组和B组解冻后的胚胎存活率、存活胚胎的完整率、临床妊娠率、胚胎种植率和流产率;比较B组和C组解冻后的胚胎存活率、存活胚胎的完整率、临床妊娠率、胚胎种植率和流产率。结果 A组和B组比较,胚胎存活率和存活胚的完整率差异有统计学意义(P<0.01),胚胎种植率、临床妊娠率、流产率差异有统计学意义(P<0.05),临床妊娠率差异无统计学意义(P>0.05),而胚胎种植率、流产率差异有统计学意义(P<0.05)。B组和C组比较,存活胚完整率差异有统计学意义(P<0.01),胚胎种植率差异有统计学意义(P<0.05),胚胎存活率和临床妊娠率C组高于组B,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论玻璃化冷冻法在冷冻人卵裂期胚胎由于具有较高的胚胎存活率和存活胚完整率而优于慢速程序化冷冻法。而桑葚期胚胎的玻璃化冷冻法在存活胚的完整率和胚胎种植率上优于卵裂期胚胎,可能是玻璃化法冷冻保存胚胎的较好时期。     

两种人工皱缩预处理方法在人囊胚玻璃化冻融中的应用

目的比较两种囊腔人工皱缩(AS)预处理方法在人囊胚玻璃化冻融中的应用效果。方法囊胚玻璃化冷冻复苏患者564例分为两组:A组201例,采用注射针抽穿AS法;B组363例,采用激光打孔AS法。比较两组的相关结果。结果 A组平均移植囊胚数(1.72±0.67)个,B组平均移植囊胚数(1.72±0.52)个;A、B组冷冻囊胚复苏后的存活率和孵出率分别为92.1%和79.0%、94.6%和79.6%,A组和B组玻璃化冻融移植后临床妊娠率、种植率、活产率、流产率分别为51.8%、38.4%、42.4%、18.2%和56.4%、43.2%、46.7%、16.3%,两组在以上各指标间均无统计学差异(P>0.05)。结论两种囊腔AS法均是有效的预处理方法,激光打孔AS法效果可能稍好一些。     

Application of Cryotop vitrification for human day 3 cleavage embryos

目的 探讨玻璃化冷冻技术在人类卵裂期胚胎冷冻中的应用效果.方法 将接受体外受精-胚胎移植的患者第3天移植后剩余的胚胎进行Cryotop玻璃化冷冻保存,液氮下储存3个月后,根据患者情况复苏胚胎,观察胚胎复苏后的临床妊娠效果.结果 玻璃化冷冻复苏55个周期共172个胚胎,存活144个(83.7％).移植54个周期共133个胚胎,临床妊娠24个周期(44.4％).其中,3例流产(12.5％),5例足月分娩10个正常新生儿,19例继续妊娠.结论 Cryotop玻璃化冷冻法适于人类早期胚胎的冷冻保存,获得了理想的复苏率、妊娠率和种植率.     

Expression of ganglioside GT1b in mouse embryos at different developmental stages after cryopreservation

Gangliosides are a family of sialic acid-containing glycosphingolipids that are abundant in neurons and have a variety of functions in developing and mature tissues. We examined the expression of ganglioside GT1b in the embryonic preimplantation stage after freezing and thawing processes to determine the regulatory roles of ganglioside GT1b in early embryonic development. ICR mouse embryos at the two-cell stage obtained by flushing the oviducts were frozen by two cryopreservation procedures, slow freezing using a programmable freezer or vitrification by direct plunging into liquid nitrogen. Slow freezing was conducted with equilibration in 1.5 M 1,2-propanediol or 5% equilibration glycerol. Vitrification was applied with a 10–15 min equilibration in 7.5% ethylene glycol (EG), 7.5% dimethylsulfoxide (DMSO), and 30 sec in a solution of 15% EG, 15% DMSO and 0.5 M sucrose. Immediately after thawing, the survival rate of the embryos was assessed by their morphology and ability to develop to blastocysts in culture. The survival rate of vitrified and thawed embryos (92%) was significantly higher than that of slow frozen and thawed embryos (76%) (P<0.05). A tendency of higher blastocyst rate was found in the vitrified and thawed embryos compared to that of the slow frozen and thawed embryos. Confocal immunofluorescence staining confirmed that surviving embryos expressed ganglioside GT1b, with the strongest expression at the compacted eight-cell or later stage embryos. Ganglioside GT1b was not observed in the TUNEL-positive, apoptotic embryos, suggesting that cryopreservation had induced DNA breaks in them. These results suggest that ganglioside GT1b may play an important role in embryo survival or development. These authors contributed equally to this work.     

玻璃化冷冻对冻融卵裂期胚胎移植周期结局的影响

目的探讨玻璃化冷冻法对卵裂期冻融胚胎移植周期结局的影响。方法将接受体外受精-胚胎移植患者剩余的可利用胚胎进行玻璃化冷冻或者慢速程序化冷冻,比较胚胎复苏后的复苏率、胚胎存活率、完整存活率、种植率、妊娠率等指标。结果玻璃化冷冻复苏248个周期、746个胚胎,存活643个（86．2％）,完整存活594个（79．4％）,移植244个周期,临床妊娠107个周期（43．9％）,种植率26．1％,流产9个周期（8．5％）。慢速程序冷冻复苏225个周期、818个胚胎,存活598个（73．1％）,完整存活436个（53．3％）,移植225个周期,临床妊娠74个周期（32．9％）,种植率15．2％,流产7个周期f9．5％）。玻璃化法冷冻后的胚胎存活率、完整存活率、临床妊娠率、种植率明显高于慢速程序冷冻法（P〈0．05）。结论玻璃化冷冻法是冻存人类卵裂期胚胎理想的方法,可以提高胚胎的有效利用。     

高龄女性单囊胚冷冻复苏周期中囊胚腔大小及孵化程度对妊娠及出生结局的影响

目的 分析高龄女性单囊胚冷冻复苏周期中囊胚腔大小及孵化程度对妊娠结局及出生结局的影响.方法 选择2014年1月至2017年12月于沈阳东方医疗集团菁华医院进行单囊胚冷冻复苏移植周期共4103个,根据囊胚腔大小和是否孵化将其分为4期囊胚、5期囊胚和6期囊胚.分别比较三组的囊胚复苏后的移植结局是否存在差异;之后对年龄>35...     

Bisphenol A causes mortality and reduced hatching success through increase of cell damage and dysfunction of antioxidant defense system in marine medaka embryo

In this study, marine medaka embryos were continuously exposed to different concentrations of bisphenol A (BPA; 200-1000 μg/L) during post fertilization. Mortality, hatching rate, and cellular death in marine medaka embryos were detected. In addition, survival rate of hatched larvae was measured to analyze whether BPA has persistent effects from BPA-exposed embryos to post-hatching period. Our results clearly showed that the hatching rate was decreased in a dose-dependent manner, while the mortality was increased with induction of cellular death and dysfunction of antioxidant defense system in marine medaka embryos. Of hatched larvae, the survival rate was decreased as the exposure concentrations increasing. Thus, our data suggested that early exposure of BPA caused embryonic toxicity, resulted in persistent effects on larval survival in marine medaka.     

不同质量胚胎囊胚培养比较以及对妊娠结局的影响

目的:探讨不同质量胚胎进行囊胚培养的情况以及移植后对妊娠结局的影响。方法:收集2018年1月—2019年12月太原市中心医院生殖中心行常规体外受精/卵胞浆内单精子显微注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)助孕且进行囊胚培养的患者资料,根据囊胚培养前胚胎质量分为优质胚胎囊胚培养组(A组)与非优质胚胎囊胚培养组(B组),比较两组患者一般情况、囊胚培养情况以及妊娠结局。结果:共156个周期患者资料,两组年龄、体质量指数(BMI)、不孕年限、基础雌二醇(E₂)、基础促卵泡激素(FSH)、子宫内膜厚度等一般资料比较,差异无统计学意义(P>0.05)。囊胚培养结果显示,A组囊胚形成率和可利用囊胚形成率都高于B组(P<0.05)。妊娠结局显示,两组移植胚胎数、临床妊娠率比较,差异无统计学意义(P>0.05),但A组多胎率高于B组(P<0.05)。结论:优质胚胎囊胚培养形成率及可利用囊胚率优于非优质胚胎,但临床妊娠率无差异,只是优质胚胎囊胚培养移植后多胎率较高,临床可对非优质胚胎进行囊胚培养以提高临床妊娠率。     

Improvement of the cellular quality of cryopreserved bovine blastocysts accompanied by enhancement of the ATP-binding cassette sub-family B member 1 expression

The ATP-binding cassette sub-family B member 1 (ABCB1) plays a critical role in maintaining the metabolic capability of cells as an efflux transporter that pumps xenobiotics out of cells. We investigated the effects of highly expressed ABCB1 on the development and viability of cryopreserved bovine embryos. The ABCB1 level in cultured bovine embryos was decreased during development to blastocyst-stage compared to germinal vesicle- and second metaphase-stage oocytes. When bovine embryos were cultured with forskolin and/or rifampicin, the ABCB1 level was significantly increased in blastocysts but embryo development was not significantly improved. After embryo cryopreservation, highly ABCB1-expressed blastocysts exhibited significant increases in viability and hatching rates. The high viability of the cryopreserved blastocysts was accompanied by a significant increase in cell proliferation during culture for 48 h. Thus, ABCB1 is expressed in bovine oocytes and embryos, and the cellular quality of bovine blastocysts is improved by the enhancement of ABCB1 expression.