急性淋巴细胞性白血病bcr/abl融合基因表达的临床研究

目的：研究bcr/abl融合基因在急性淋巴细胞白血病（ALL）患的表达与临床疗效的关系。方法：利用逆转录多聚酶链反应（RT－PCR）方法检测了31例ALL患bcr/abl融合基因的表达。结果：患bcr/abl融合基因阳性表达9例（29％），其中完全缓解3例（33．3％）；bcr/abl融合基因阴性表达22例（71％），其中完全缓解17例（77．3％），两组比较具有差异性（P＜0．05）。结论：bcr/abl融合基因阳性表达的ALL患临床疗效较差。     

慢性粒细胞白血病bcr—abl基因反义核酸的初步研究

目的：探讨用逆转录病毒表达载体携带反义酸进入ＣＭＬ细胞并作用于ｂｃｌ－ａｂｌ基因的方法。方法：反义序列用ＲＴ－ＰＣＲ法,取自Ｋ５６２细胞系,使之成功地构建了正反义ＲＮＡ的逆转录病毒表达载体。结果：与正义链相比无反义ｂｃｒ－ａｂｌ序列显著抑帛其抑制程度与剂量呈正相关,其细胞形态学改变支持其进入凋亡进程。结论：此反义核酸是探索ＣＡＬ基因的重要材料。     

骨髓增生性疾病bcr/abl融合基因表达及临床意义

目的 :探讨骨髓增生性疾病 (MPD) bcr/ abl融合基因出现的频率及临床意义。方法 :采用骨髓细胞 2 4 h短期培养法制备染色体标本 ,RHG显带技术进行核型分析 ;以筑巢式逆转录聚合酶链反应 (nested- RT- PCR)技术检测bcr/ abl融合基因转录本。结果 :84例慢性粒细胞白血病 (CML )中 ,79例费城染色体 (ph′)阳性 ,其余病例包括 5例CML、5例真性红细胞增多症 (PV )、3例原发性血小板增多症 (ET)和 2例原发性骨髓纤维化 (IMF) ,均为正常核型。79例 ph′(+)的 CML ,bcr/ abl均为阳性 ,5例 ph′(- )的 CML ,3例 bcr/ abl阳性 ;5例 PV ,3例 bcr/ abl阳性 ;3例ET,1例 bcr/ abl阳性 ;2例 IMF,1例 bcr/ abl阳性。结论 :bcr/ abl融合基因在 ph′(- )的 CML、PV、ET、IMF中均有不同程度的表达 ,筑巢式逆转录聚合酶链反应技术是检测 bcr/ abl融合基因转录本的有效手段     

bcr／abl特异性siRNA真核表达载体的构建及鉴定

目的:构建ber/abl的特异性siRNA真核细胞表达载体,并初步探索对K562细胞bcr/abl mRNA和P210蛋白的影响.方法:根据GenBank数据库提供的bcr/abl基因核苷酸序列,按照Tusch Ⅰ设计原则,选择设计双链小干扰RNA(siRNA),再转化为能表达其小发卡结构RNA(shRNA)的DNA序列,并与pTER质粒定向连接,构建受控于人RNA聚合酶Ⅲ启动子H1的真核表达载体pTER117,经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定;在脂质体的介导下转染K562细胞,用RT-PCR分析bcr/abl mRNA的表达,细胞化学染色检测P210蛋白的表达.结果:构建bcr/abl融合基因siRNA真核表达载体pTER117经限制性内切酶酶切和DNA测序证实与设计完全一致,转染K562细胞24 h后,pTER117使bcr/abl mRNA的相对水平下降50%,使P210蛋白下降47%.结论:bcr/abl融合基因siR-NA真核细胞表达载体构建成功,并有效干扰K562细胞bcr/abl的表达.     

Bcr/abl融合基因阳性成人急性淋巴细胞白血病的治疗

目的:探讨B cr/ab l阳性成人急性淋巴细胞白血病(ALL)的治疗。方法:10例成人ALL经骨髓细胞形态学、细胞化学、免疫学分型、融合基因检查确诊为B cr/ab l阳性B细胞ALL。化疗不缓解者改用格列卫(400 m g/d)治疗。5例缓解后行异基因造血干细胞移植,5例行巩固强化治疗。结果:常规化疗使6例患者达到完全缓解(60%);4例未缓解者,用格列卫治疗均达到CR。5例接受移植患者2例复发,移植患者与接受巩固强化治疗的患者中位缓解期分别为12个月与8个月(P<0.01);中位生存期为18个月与10个月(P<0.05)。结论:B cr/ab l融合基因阳性成人ALL化疗缓解率较低,格列卫治疗显著提高缓解率,与单纯化疗相比,异基因造血干细胞移植使患者生存期明显延长。     

慢性粒细胞白血病bcr/abl基因检测在造血干细胞移植过程中的临床意义

目的探讨慢性粒细胞白血病（CML）bcr/abl基因检测的临床意义,以及移植后治疗效果及预后监测等方面的价值。了解慢性粒细胞白血病融合基因表达、染色体改变及细胞学的改变与临床诊断和治疗的关系。方法采用实时定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测15例CML患者移植前、后bcr/abl融合基因的表达;染色体制备采用骨髓短期培养法,G显带,分析核型。结果对照组bcr/abl基因表达、Ph染色体均为阴性;15例患者移植前：bcr/abl基因表达阳性率为100%（15/15）,表达量范围4.7×104～3.2×108copies/L;Ph染色体分析结果中,13例为Ph（＋）/bcr（＋）,2例为Ph（-）/bcr（＋）。细胞学分析结果 ：呈CML的细胞学改变。移植后1个月bcr/abl融合基因转阴率为80%,2个月转阴率达93%,3个月转阴率达100%。Ph染色体均为阴性。另外,0.5～3年内有13%（2/15）的患者bcr/abl基因表达呈阳性,6%（1/15）的患者Ph（＋）,有复发的阳性指标。结论 bcr/abl基因表达水平的定量检测及动态观察,对CML的临床诊断、移植后疗效判断及预后的监测具有重要意义.     

62例慢性髓系细胞白血病临床分析

本文总结我院10年来收治慢性髓系细胞白血病（CML）62例做一临床分析，同时对bcr／abl融合基因与CML细胞凋亡和治疗中耐药等问题做一简单讨论．     

磷酰肌醇-3激酶途径与bcr/abl基因介导的白血病细胞增殖和抗凋亡信号传导

目的探讨磷酰肌醇-3激酶途径在K562、NB4和HL60细胞增殖和凋亡抗性中的不同作用。方法短期培养法直接法G显带检测K562细胞和CML患者骨髓原代细胞的染色体核型,RQ-PCR检测K562细胞和CML患者骨髓原代细胞的bcr/abl基因;用磷酰肌醇-3激酶特异抑制剂渥曼青霉素(WT)抑制磷酰肌醇-3激酶活性,经细胞生长曲线测定、半固体集落形成实验、流式细胞膜联蛋白V标记技术检测细胞凋亡百分比和凋亡指数。观察K562、NB4和HL60细胞增殖能力及凋亡抗性的变化。统计学采用t检验。结果K562细胞G显带检出Ph染色体,RQ-PCR检测K562细胞存在bcr/abl基因;与标准Ph染色体表达的CML患者骨髓原代细胞的bcr/abl基因完全吻合;K562、NB4和HL60细胞在24h、48h、72h的增殖抑制率分别为41.33%、57.46%、65.85%和26.29%、5.51%、2.10%及32.14%、17.14%、13.14%。生长曲线显示WT抑制磷酰肌醇-3激酶途径可显著抑制K562细胞的增殖(P<0.05),而对NB4和HL60细胞增殖无明显影响(P>0.05)。K562、NB4和HL60细胞加和不...     

P210bcr/abl融合蛋白的形成机制及作用的研究进展

慢性粒细胞白血病(CML)是以费城染色体(Ph)为特征的多潜能干细胞异常的骨髓恶性增殖性疾病。Ph染色体是由9号染色体c-abl癌基因易位到22号染色体的bcr基因处,形成bcr／abl融合基因,该基因经转录后,编码8．5kb的嵌合体mRNA,翻译成分子量为210kD的蛋白质,即P210^bcr/abl融合蛋白(P210^bcr/abl),该蛋白具有异常活跃的酪氨酸激酶活性(PTK),并活化细胞内相关的信号转导通路从而调控细胞的分裂与增殖,抑制细胞的凋亡。P210^bcr/abl是CML的特征性标志。因此,研究P210^bcr/abl对研究与治疗CML具有重要的意义．有关P210^bcr/abl的形成机制及作用已部分阐明．现做综速如下．     

急性淋巴细胞性白血病bcr/abl融合基因表达的临床研究

目的研究bcr/abl融合基因在急性淋巴细胞白血病(ALL)患者的表达与临床疗效的关系. 方法利用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测了31例ALL患者bcr/abl融合基因的表达.结果患者bcr/abl融合基因阳性表达9例(29%),其中完全缓解3例(33.3%);bcr/abl融合基因阴性表达22例(71%),其中完全缓解17例(77.3%),两组比较具有差异性(P＜0.05).结论bcr/abl融合基因阳性表达的ALL患者临床疗效较差.     

地黄多糖对K562细胞增殖抑制作用及bcr/abl融合基因表达的影响

目的：研究地黄多糖（RPS）对K562细胞bcr/abl融合基因表达和细胞增殖的影响。方法：不同浓度RPS作用于K562细胞,MTS法检测其对细胞增殖的影响,Real-time PCR检测bcr/abl融合基因mRNA表达变化,Western blotting检测bcr/abl融合基因表达的P210蛋白变化。结果：RPS能够抑制K562细胞增殖,用400 μg·mL^-1 RPS作用12 h,细胞增殖抑制率为35.16%,随着RPS浓度增加抑制作用明显增强（P<0.05）;用200 μg·mL^-1 RPS作用24 h,K562细胞内bcr/abl融合基因mRNA相对表达量为0.26,P210蛋白相对含量为0.35。RPS使K562细胞内P210蛋白及bcr/abl融合基因mRNA表达量呈时间和剂量依赖性下降。结论：RPS可能通过下调bcr/abl融合基因mRNA及P210蛋白表达对K562细胞增殖产生抑制作用。     

38例不同病期慢性粒细胞白血病患者bcr-abl基因的表达

目的 探讨慢性粒细胞白血病(CML)不同病期bcr-abl基因的表达。方法 应用RQ-PCR方法检测38例共45份不同临床分期CML病人外周血中bcr-abI的表达水平。结果 CML病人的bcr-abl基因和bcr-abl/abl比率在慢性期分别为(11542±5106)拷贝/μg总RNA和(10.58±5.12)％;加速期分别为(83350±7844)拷贝/μg总RNA和(84.20±3.78)％;急变期分别为(79112±7956)拷贝/μg总RNA和(80.15±4.16)％。bcr-abl基因表达水平与CML不同临床病期密切相关。结论 RQ-PCR检测bcr-abl基因表达可作为CML疾病进展、预后判断和骨髓移植后微小残留疾病监测的良好指标。     

应用实时定量PCR技术检测慢性粒细胞白血病患者bcr/ablP190融合基因转录本

目的研究bcr/ablP190融合基因转录本在慢性粒细胞白血病(CML)中表达水平及其临床相关性.方法应用实时定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测74例CML患者骨髓单个核细胞中的bcr/ablP190转录本.结果 bcr/ablP190转录本阳性54例(77.1%),中位含量2.60(1.08～8.58)×10-3,与性别、年龄、白细胞总数、血红蛋白含量、血小板计数、bcr/ablP210转录本类型和表达水平均不相关,但bcr/ablP190阳性患者的白细胞总数和血小板计数较阴性者明显降低.bcr/ablP190转录本水平在急变期与慢性期患者以及不同类型急变患者中都无差异,而细胞遗传学完全缓解患者的bcr/ablP190水平较慢性期患者、干扰素无效患者和急变期患者则明显下降.结论不同阶段CML患者体内大都存在着不同的bcr/abl剪切型转录本,不同剪切型的存在具有一定的血液学相关性.     

用实时定量PCR检测93例CML bcr/abl融合基因

慢性粒细胞白血病(CML)是起源于造血干细胞的恶性克隆性疾病,约90%～95%CML患者共有费城染色体(Philadelphia PH)其分子基础是9染色体的c-abl基因易位到22染色体的bcr基因上形成新的基因嵌合体,bcr/abl融合基因,即t(9:22)(q34;q11)该基因表达融合蛋白具有高度酪氨酸激酶活性,在CML的发病中起重要作用.     

三氧化二砷对慢性髓细胞性白血病VEGF表达的影响

目的 研究慢性髓细胞性白血病(ＣＭＬ)患者血管内皮生长因子(ＶＥＧＦ)的表达及三氧化二砷(Ａｓ２Ｏ３)对其表达的影响。方法 采用酶联免疫吸附法(ＥＬＩＳＡ)检测正常人和初治ＣＭＬ患者骨髓细胞及ＣＭＬ细胞系Ｋ５６２细胞培养上清液中ＶＥＧＦ的含量。结果ＣＭＬ患者(ｎ＝２０)骨髓细胞培养上清液ＶＥＧＦ浓度为 ６４９．１６ｐｇ/ｍｌ,明显高于正常对照组的 １５２．１６ｐｇ/ｍｌ(Ｐ＜０．００１),而 ５×１０－６ｍｏｌ/ＬＡｓ２Ｏ３可明显降低ＶＥＧＦ的表达水平(Ｐ＜０．０５);细胞系Ｋ５６２有ＶＥＧＦ的过高表达,Ｋ５６２经２．５×１０－６ｍｏｌ/Ｌ及５×１０－６ｍｏl/Ｌ浓度Ａｓ２Ｏ３处理７２小时后ＶＥＧＦ浓度分别下降６６．４%和 ７８．０%。结论 ＶＥＧＦ在 ＣＭＬ患者骨髓细胞存在高表达;Ａｓ２Ｏ３可能通过抑制 ＶＥＧＦ的表达而阻断血管形成。     

慢性髓性白血病的反义寡核苷酸治疗

慢性髓性白血病（Chronic myeloid leukemia,CML）是造血干细胞的疾患,表现为在外周血中含有大量未成熟的粒细胞、嗜碱性细胞、血小板以及能引起脾大的白细胞减少症。发病率为（1～2）／100000,占成年人白血病的15％左右。     

慢性粒细胞白血病bcr-abl融合基因克隆与真核细胞表达的研究

目的 为研究慢性粒细胞白血病(CML)的肿瘤基因疫苗，克隆和表达CML的bcr—abl融合基因片段。方法 根据bcr—abl(b3a2)融合基因序列自行设计一对寡核苷酸引物，以CML K562细胞株的总RNA为模板，通过RT—PCR扩增包含bcr-abl融合位点周围450bp的基因片段，并将其克隆进pGEM—T easy载体。经序列测定证实其阅读框架正确后，将bcr—abl融合基因片段正向插入真核细胞表达载体pcDNA3．1。以脂质体介导重组质粒pcDNAbcr—abl转染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，用间接免疫荧光法(IFA)检测基因表达情况。结果 成功构建了包含融合位点基因片段的bcr—abl融合基因真核细胞表达载体pcDNAbcr—abl，pcDNAbcr—abl转染的CHO细胞的免疫荧光强度高于K562阳性对照细胞。结论 bcr—abl融合基因片段在真核细胞中能高效表达，pcDNAbcr—abl真核细胞表达载体的构建为进一步研究bcr—abl融合基因在CML防治中的作用奠定了基础。     

米托蒽醌治疗慢性髓性白血病

采用米托蒽醌联合阿糖胞苷治疗22例慢性髓性白血病患者，取得较好效果。