Effect of T-lymphocytes on myeloid and erythroid progenitors in patients with paroxysmal nocturnal hemoglobinuria

目的：研究阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）患者的Ｔ淋巴细胞对粒系和红系祖细胞的影响。方法：分别将ＰＮＨ患者和正常人外周血制备的植物血凝素刺激的Ｔ淋巴细胞条件培养液（ＰＨＡ－ＴＣＭ）加入粒系和红系祖细胞的培养基中，用于ＰＮＨ患者和正常人的粒－巨噬系集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ）和红系爆式集落形成单位（ＢＦＵ－Ｅ）的培养。结果：在含有ＰＮＨ患者的ＰＨＡ－ＴＣＭ的培养条件下，ＰＮＨ患者和正常人骨髓ＣＦＵ－ＧＭ和ＢＦＵ－Ｅ集落数明显低于含有正常人ＰＨＡ－ＴＣＭ培养条件下的集落数；正常人骨髓ＣＦＵ－ＧＭ和ＢＦＵ－Ｅ集落数亦明显低于含有正常人的ＰＨＡ－ＴＣＭ培养条件下的集落数。结论：ＰＮＨ患者的Ｔ淋巴细胞对粒系和红系祖细胞的支持作用减弱     

阵发性睡眠性血红蛋白尿病人骨髓红系和粒－单系祖细胞的特点

本文采用造血祖细胞体外培养技术观察了阵发性睡眠性血红蛋白尿（ＰＮＨ）病人骨髓红系祖细胞（ＢＦＵ一Ｅ和ＣＦＵ一Ｅ）和粒一单系祖细胞（ＣＦＵ一ＧＭ）的增殖能力；骨髓细胞经酸化ＡＢ型血清处理后的ＢＦＵ一Ｅ，ＣＦＵ一Ｅ和ＣＦＵ一ＧＭ的增殖能力；以及ＢＦＵ一Ｅ、ＣＦＵ一Ｅ对红细胞生成素（Ｅｐｏ）和（ＣＦＵ一ＧＭ对粒一单系集落刺激因子（ＧＭ一ＣＳＦ）的反应能力，发现ＰＮＨ病人骨髓ＢＦＵ一Ｅ，ＣＦＵ一Ｅ和ＣＦＵ一ＧＭ集落数明显低于正常；骨髓细胞经新鲜酸化ＡＢ型血清处理后培养的ＢＦＵ一Ｅ、ＣＦＵ一Ｅ和ＣＦＵ一ＧＭ集落数明显低于经热灭活酸化ＡＢ型血清处理后培养的集落数；以及ＢＦＵ一Ｅ，ＣＦＵ一Ｅ对Ｅｐｏ和ＣＦＵ一ＧＭ对ＧＭ一ＣＳＦ的剂量反应曲线低平。因此认为ＰＮＨ病人骨髓红系和粒一单系祖细胞有以下特点：１．增殖能力降低：２．在酸性条件下对补体的敏感性增加；３．对造血因子的敏感性降低。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿病人骨髓红系和粒—单系祖细胞的特点

本文采用造血祖细胞体外培养技术观察了阵发性睡眠性血红蛋白尿（ＰＮＨ）病人骨髓红系祖细胞（ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－Ｅ）和粒－单系祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）的增殖能力；骨髓细胞经酸化ＡＢ型血清处理后的ＢＦＵ－Ｅ，ＣＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－ＧＭ的增殖能力，以及ＢＦＵ－Ｅ，ＣＦＵ－Ｅ对红细胞生成素（Ｅｐｏ）和（ＣＦＵ－ＧＭ对粒－单系集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）的反应能力，发现ＰＮＨ病人骨髓ＢＦＵ－Ｅ，ＣＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ     

单抗免疫导向药物3Al—DM对CFU—GM的效应试验

应用抗Ｔ淋巴细胞单抗（ＭｃＡｂ）３Ａｌ－柔霉素（ＤＭ）免疫结合物，在体外对骨髓粒－单核细胞集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ）进行导向杀伤效应试验。结果与Ｂ细胞单抗－ＤＭ结合物十分近似。说明单抗３Ａｌ－ＤＭ对ＣＦＵ－ＧＭ没有影响，不损伤正常骨髓造血干细胞，为３Ａｌ－ＤＭ用于体外骨髓净化提供实验依据。     

rhIL－6、rhGM－CSF和rhEPO对人骨髓造血干细胞的调节作用

重组人白细胞介素６（ｒｈＩＬ－６）和重组人粒—单细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）与正常人造血干细胞培养１周后，ｒｈＩＬ－６组干细胞数增至４．７±０．７倍；ｒｈＧＭ－ＣＳＦ组增至９．３±１．０倍；ｒｈＩＬ－６＋ＧＭ—ＣＳＦ组增至１３．４±３．３倍。与对照组比较，Ｐ均＜０．０１．造血干细胞ＣＦＵ－Ｅ集落分析：ｒｈＩＬ－６组未见ＣＦＵ－Ｅ集落形成；ｒｈＩＬ－６＋ＥＰＯ组则ＣＦＵ－Ｅ集落明显高于ｒｈＥＰＯ组，ｐ＜０．０１．造血干细胞ＣＦＵ－Ｍｉｘ集落分析：ｒｈＩＬ－６组和ｒｈＧＭ－ＣＳＦ组可见ＣＦＵ－ＧＭ浆落，无ＣＦＵ＋Ｍｉｘ集落形成；ｒｈＩＬ－６＋ＧＭ－ＣＳＦ组有ＣＦＵ－Ｍｉｘ集落形成；ｒｂＩＬ－６＋ＧＭ－ＣＳＦ＋ＥＰＯ联合应用，有ＣＦＵ－ｎ，ｍ，Ｍ，Ｅ混合集落数增多。实验结果提示ｒｈＩＬ－６对造血干细胞有直接的刺激作用，主要刺激粒—单系组细胞增殖。ｒｈＩＬ－６与ｒｈＥＰＯ有协同作用，能促进ｒｈＥＰＯ刺激红系祖细胞的作用。ｒｈＩＬ－６与ｒｈＧＭ－ＣＳＦ亦有协同作用，可以刺激多能干细胞形成混合集落。     

人参总皂甙对造血生长因子活性及其mRNA表达的影响

目的　探讨人参“补气生血”的现代生物学机理。　方法　采用核酸分子原位杂交和造血生长因子生物活性检测等技术,研究人参总皂甙（ＴＳＰＧ）对造血生长因子活性及其ｍ ＲＮＡ表达的影响。　结果　ＴＳＰＧ能显著促进小鼠骨髓基质细胞（ＢＭＳＣ）、腹腔巨噬细胞（ＰＭ）和脾细胞（ＳＰＣ）的粒－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）及白细胞介素－６（ＩＬ－６）ｍ ＲＮＡ的表达,经ＴＳＰＧ诱导制备的ＢＭＳＣ、ＰＭ和ＳＰＣ条件培养上清液含有较高的爆式红系集落刺激活性（ＢＰＡ）、粒－巨噬细胞集落刺激活性（ＧＭ－ＣＳＡ）和巨核细胞集落刺激活性（ＭＫ－ＣＳＡ）。　结论　ＴＳＰＧ促进血细胞生成的机理与其诱导造血生长因子的基因表达有密切关系。     

脐血清对培养人造血祖细胞集落生长的影响

目的：研究脐血清对培养人造血祖细胞集落生长的影响。方法：采用半固体细胞培养法。结果：在正常足月胎儿脐血清中有较高粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）和粒－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）活性，单用脐血清作刺激因子来源，在体外进行粒系造血祖细胞培养，可产生１４８１±８８７个粒系集落（ＣＦＵ－Ｇ），而植物血凝素刺激的单个核细胞条件培养液为５９０±２８８个ＣＦＵ－Ｇ，差别非常显著（Ｐ＜０００１）。脐血清组与３０ｎｇｒｈＧ－ＣＳＦ组所产生１５２０±３４５个ＣＦＵ－Ｇ相比，差别无显著（Ｐ＞００５）。并且我们还观察到脐血清组培养随时间延长有较多粒－巨噬细胞集落（ＣＦＵ－ＧＭ）生长，有些可出现混合爆式集落。结论：脐血清富含多种造血生长因子，并且Ｇ－ＣＳＦ水平较高     

原发性肝癌患者血清可溶性细胞间粘附分子-1检测

应用酶联免疫吸附法检测了３８例原发性肝癌（ＰＨＣ）患者血清ｓＩＣＡＭ－１含量,结果表明：⑴ＰＨＣ患者血清ｓＩ ＣＡＭ－１水平明显高于健康对照,肿瘤直径≥５ｃｍ或结节≥３个组血清ｓＩ ＣＡＭ－１水平高于肿瘤直径〈５ｃｍ或结节〈３个组,静脉癌栓形成组（Ｐ均小于０．００１）;⑵ＰＨＣ患者血清ｓＩ ＣＡＭ－１水平与血清Ｂｉｌ－Ｔ、ＡＳＴ含量呈明显正相关（Ｐ〈０．０５）,而与血清ＡＦＰ含量无明显正相关（Ｐ〉     

腺病毒、合胞病毒对外周血单个核细胞的IL-2受体表达及TNFα产生的影响

近年来国内外均注意到细胞因子及受体与病毒感染的关系。作者用１００ＴＣＩＤ５０的７型腺病毒（ＡＤＶ）及呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）Ｌｏｎｇ株刺激正常人体外培养的外周血淋巴细胞（ＰＢＭＣ），ＡＰＡＡＰ法检测淋巴细胞ＩＬ－２受体阳性率，酶联免疫法检测淋巴细胞上清液的ＴＮＦａ。初步观察了ＡＤＶ、ＲＳＶ对人ＰＢＭＣ的ＩＬ－２受体表达、ＴＮＦα产生的影响。经２００Ｕｇ／ｍｌ的ＰＨＡ活化的ＰＢＭＣ加入ＡＤＶ、ＲＳＶ后对照组ＩＬ－２＋细胞百分率为３４．３％，ＡＤＶ组为１７．３％，ＲＳＶ组为１７％，较对照组均显著降低…     

小鼠胸腺树突状细胞系MTSC4诱导早期T细胞株C320表达IL－2R

通过流式细胞仪（ＦＡＣＳ）分析了我室自建的小鼠胸腺树突状细胞系ＭＴＳＣ４与小鼠肿瘤性早期Ｔ细胞株Ｃ３２０细胞共育后，Ｃ３２０细胞表达ＩＬ－２Ｒ的状态，分析了ＣｏｎＡ和ＰＨＡ对Ｃ３２０及与ＭＴＳＣ４共育后的Ｃ３２０表达ＩＬ－２Ｒ的诱导促进作用以及ＩＬ－２Ｒ＋Ｃ３２０细胞在脱离外源性刺激后其比例的变化。ＭＴＳＣ４及ＣｏｎＡ和ＰＨＡ在不同程度上抑制Ｃ３２０细胞的无限制增殖，ＣｏｎＡ和ＰＨＡ对与ＭＴＳＣ４共育后的Ｃ３２０细胞的抑制增殖作用更强。     

肝素增强血小板生成素对巨核细胞增殖的作用

目的和方法：为了探讨巨核细胞增殖调控,我们研究了肝素对重组人血小板生成素刺激ＢＡＬＢ／ｃ小鼠巨核系祖细胞（ＣＦＵ－ＭＫ）和人巨核细胞系－红白细胞白血病细胞 作用。采用固体和液体培养、ＣＦＵ－ＭＫ－乙酰胆碱脂酶染色和５－溴－２‘－脱氧尿嘧啶核苷（５－ＢｒｄＵ）－酶联免疫吸附等方法,观察了ＣＦＵＭＫ和ＨＥＬ细胞集落数以及ＨＥＬ细胞的吸光度。结果：在培养基中加入ｒｈＴｐｏ１００ｎｇ／ｍｌ和肝素２．５Ｕ／     

SLE T细胞功能的改变

探讨Ｔ细胞免疫功能改变与系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）的关系。方法 检测３８例ＳＬＥ患者淋巴细胞的Ｅ花环形成率（ＥＲＦ＿Ｒ）,ＰＨＡ刺激的ＰＢＭＣ活化反应（ＰＨＡ淋转反应）,治疗前后血清可溶性ＩＬ－２Ｒ（ＳＩＬ－２Ｒ）、ＩＬ－６及尿ＳＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－６水平、抗ｄｓ－ＤＮＡ抗体,用疾病活动性评分（ＳＬＡＭ）判断疾病活动性,进行分析。结果 ＳＬＥ患者腺苷处理前ＥＲＦＲ显著低于正常,处理后ＥＲＦ－Ｒ则显著     

IFN—α联合GM—CSF在无血清培育条件下诱生DC的研究

本研究分别采用ＩＦＮ－α联合粒单系集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）及ＩＬ－４联合ＧＭ－ＣＳＦ在无血清培育条件下从正常人及多发性骨髓瘤（ＭＭ）患者外周血单个核细胞性树突状细胞（ＤＣ）,并对其形态、功能及免疫表型进行比较。结果表明ＩＦＮ－α联合ＧＭ－ＣＳＦ能与ＩＬ－４联合ＧＭ－ＣＳＦ同样有效地诱导产生ＤＣ,所得的ＤＣ在形态、免疫表型及功能上无明显差异（Ｐ〉０．０５）,正常人和ＭＭ患者的外周血单个核细胞经诱     

rhGM—CSF／IL—3融合蛋白对人骨髓造血祖细胞体外培养的研究

研究了ｒｈＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－３融合蛋白对人骨髓造血祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－ＧＥＭＭ、ＢＦＵ－Ｅ）集落形成的影响，结果表明ｒｈＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－３能显著促进ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－ＧＥＭＭ、ＢＦＵ－Ｅ集落的形成，分别与ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－３单独或联合用药比较，差异有显著性（Ｐ〈０．００１），ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ＝ＧＥＭＭ、ＢＦＵ－Ｅ集落的形成对融合蛋白均有剂量依赖性，培养体系浓度在５￣１０ｎ     

人血小板生成素cDNA转染COS-7细胞及表达产物对小鼠骨髓巨核细胞的作用

将克隆全长１．１ｋｂ血小板生成素（ＴＰＯ）ｃＤＮＡ构建重组ＰＣＩｎｅｏＴＰＯ表达载体，利用ＬｉｐｏｆｅｃｔｉｎＴＭ介导转染ＣＯＳ－７细胞中，对阳性克隆ＣＯＳ－７细胞的ＤＮＡ、ｍＲＮＡ和培养上清分别进行ＰＣＲ扩增Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ、斑点杂交和ＴＰＯ夹心ＥＬＩＳＡ检测，观察表达产物对小鼠骨髓巨核细胞的作用。结果表明：全长１．１ｋｂＴＰＯｃＤＮＡ转染ＣＯＳ－７细胞获得表达，最高表达量可达４８．２８Ｕ／ｍｌ，其产物使骨髓巨核细胞集落形成单位（ＣＦＵ－ＭＫ）集落数增加４倍，巨核细胞增大至４２．１０±６．７０μｍ（Ｐ＜０．０１）；动态观察骨髓ＣＦＵ－ＭＫ集落数于实验第８天达最高峰，约持续２ｄ，第１０天后开始下降。提示ＴＰＯｃＤＮＡ转染ＣＯＳ－７细胞表达产物对骨髓巨核细胞生成有刺激活性     

血小板活化因子介导肾小球系膜细胞产生活性氧的研究

为探讨血小板活化因子（ＰＡＦ）对肾小球系膜细胞（ＧＭＣ）产生活性氧的调节作用，本研究观察了ＰＡＦ对体外培养的大鼠ＧＭＣ产生超氧化物阴离子（Ｏ）和过氧化氢（Ｈ－２Ｏ－２）的影响。结果表明１０￣（－９）Ｍ／Ｌ的ＰＡＦ已能诱导ＧＭＣ产生Ｏ和Ｈ２Ｏ２（１．１４±０．４２ｎｍｏｌ／１０￣５ＧＭＣ、０．９７±０．１６ｎｍｏｌ／１０－５ＧＭＣ），这一效应呈剂量依赖性；溶ＰＡＦ无诱导ＧＭＣ产生活性氧作用；特异性ＰＡＦ受体拮抗剂ＢＮ５２０２１抑制ＰＡＦ的刺激作用，抑制作用也呈剂量依赖性，５×１０￣（－５）Ｍ／ＬＢＮ５２０２１完全抑制ＧＭＣ合成活性氧。本研究说明ＰＡＦ可诱导ＧＭＣ合成活性氧。     

淋巴细胞对人主动脉平滑肌细胞迁移的影响

用微孔滤膜法分别检测淋巴细胞条件培养液（ＬＣＭ）和γ－ＩＦＮ对培养的人主动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）的趋化活性。结果表明，ＬＣＭ对ＳＭＣ有明显的趋化活性和较弱的化学促动作用；γ－ＩＦＮ对ＳＭＣ有明显的趋化作用和化学促动作用，在５００Ｕ／ｍｌ浓度时其活性最强。提示动脉粥样硬化早期病灶中激活的Ｔ淋巴细胞可通过分泌γ－ＩＦＮ（或伴有其它因子），吸引中膜的ＳＭＣ迁入内膜。     

脐血红细胞生成素和白细胞介素6水平检测

目的 :红细胞生成素 (ＥＰＯ)特异性作用于红系造血细胞 ,刺激红系祖细胞增殖、分化、成熟 ,是红细胞系统造血必不可少的造血刺激因子。白细胞介素 6(ＩＬ - 6)促进造血干细胞从Ｇ0 期进入Ｇ1 期 ,与ＥＰＯ、ＧＭ -ＣＳＦ及ＩＬ - 3协同作用可促进红系爆增生式集落形成单位 (ＢＦＵ -Ｅ)、粒细胞巨噬细胞集落形成单位 (ＣＦＵ -ＧＭ)、巨核细胞集落形成单位 (ＣＦＵ -ＭＫ)和多向性祖细胞集落形成单位 (ＣＦＵ -ＧＥＭＭ)形成。体外实验证实脐血浆具有刺激造血的活性。本实验检测正常足月新生儿脐血浆的ＥＰＯ和ＩＬ - 6水平以了解ＥＰＯ与…     

花生四烯酸产物对系膜细胞增殖作用的研究

用［３Ｈ］胸腺嘧啶核甙（［３Ｈ－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ，［３Ｈ］－ＴｄＲ）掺入法测定花生四烯酸产物对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞的增殖作用。前列腺素Ｅ２（ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ，ＰＧ）抑制血清所致的系膜细胞增殖。血栓素Ａ２（ｔｈｒｏｍｂｏｘａｎｅ，Ｔｘ）类似物Ｕ４６６１９、白三烯（ｌｅｕｋｏｔｕｉｅｎｅ，ＬＴ）Ｃ４、ＬＴＤ、１２－羟二十碳四烯酸（１２－ｈｙｄｒｏｘｙｅｉｃｏｓａｔｅｔｒａｅｎｏｉｃａｃｉｄ，１２－ＨＥＴＥ）、１５－ＨＥＴＥ促进静息的系膜细胞增殖，ＬＴＢ４及５－ＨＥＴＥ无此作用。用特异性蛋白激酶Ｃ（ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣ，ＰＫｃ）抑制剂可抑制Ｕ４６６１９、ＬＴＣ４、ＬＴＤ４及１２－ＨＥＴＥ的促增殖作用。ＰＧＦ２α、Ｕ４６６１９、ＬＴＣ４、ＬＴＤ４促进系膜细胞合成二脂酰甘油（ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ，ＤＡＧ）。ＰＧＦ２α及ＬＴＤ４刺激系膜细胞合成三磷酸肌醇（ｉｎｏｓｉｔｏｌｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ＩＰ３）。提示部分花生四烯酸产物活化ＰＫＣ而促进系膜细胞增殖。     

抗氧化剂PDTC抑制氧化的低密度脂蛋白诱导的人肾小球系膜细胞NF_(-k)B活化

目的 研究氧化的低密度脂蛋白（Ｏｘ－ＬＤＬ）对体外培养的人肾小球系膜细胞（ＨＭＣ）核因子－ＫＢ（ＮＦ－ＫＢ）活化的影响，以及抗氧化剂毗咯二硫氨基甲酸酯（Ｐ ＤＴＣ）对ＮＦ－ＫＢ活化的抑制作用，探讨ＯＸ－ＬＤＬ介导肾损害的基因调控机制及抗氧化剂ＰＤＴＣ防治脂质肾损害的可能性。方法 将Ｏｘ－ＬＤＬ或ＰＤＴＣ与ＨＭＣ共培养后，提取细胞核蛋白进行凝胶迁移率变动分析（ＥＭＳＡ）检测ＮＦ－ＫＢ的活化，用细胞ＥＬＩＳＡ法检测细胞内ＩＫＢα蛋白含量的变化，反映ＩＫＢα的降解及免疫组化染色检测细胞内的Ｐ６５向核转位。结果 正常对照组未见ＮＦ－ＫＢ活化，当用不同浓度（１０、２５、５０及１００ｍｇ／Ｌ）的Ｏｘ－ＬＤＬ，刺激肾小球系膜细胞 ｌｈ后，均可引起细胞 ＮＦ－ＫＢ活化及 ＩＫＢα降解。与对只组相卜较差异显著（ｐ＜０．０５），以５０ｍｇ／Ｌ 的ＯＸ－ＬＤＬ刺激ＨＭＣ１ｈ，ＮＦ－ＫＢ活化及 ＩＫＢα降解最明显。ＮＦ－ＫＢ活化的同时，伴有Ｐ６５由胞浆向胞核的转位。１００μｍｏｌ／Ｌ ＰＤＴＣ，能明显抑制 ＮＦ－ＫＢ的活化、ＩＫＢα降解（ｐ＜０．０１）及 Ｐ６５的核转位。结论Ｏｘ－ＬＤＬ。能诱导ＨＭＣ的ＩＫＢαａ降解、Ｐ６５的核转位，最终使Ｎ