细粒棘球蚴病患者淋巴细胞及细胞因子变化的初步观察

目的 探讨细粒棘球蚴感染后机体淋巴细胞及细胞因子的变化。 方法 细粒棘球蚴病患者第1次手术组80例（汉族60，维族20例），第2次手术组37例（汉族24，维族13例），分别于术前采集外周血进行荧光抗体标记、流式细胞仪检测T细胞亚群、B细胞、自然杀伤细胞（NK细胞）及胞浆内细胞因子γ干扰素（IFN-γ）和白细胞介素4（IL-4）水平。选取179名健康成人为对照组。 结果 汉族患者第1次手术组的总T细胞（CD3⁺）低于对照组（P＜0.05），第2次手术组的CD3⁺水平与对照组之间差异无统计学意义（P＞0.05）；辅助性T细胞（CD3⁺/CD4⁺）、 NK细胞（CD3⁺/CD16,56⁺）和B细胞（CD3^-/CD19⁺）水平，第1次手术组和第2次手术组的均显著低于对照组（P＜0.01），细胞毒性T细胞（CD3⁺/CD8⁺）高于对照组（P＜0.05）。维族患者第1次手术组的B细胞低于对照组（P＜0.05）；NK细胞水平第1次手术组和第2次手术组均低于对照组（P＜0.01和P＜0.05）；3组间Th0和Th1差异无统计学意义（P＞0.05），但第1次手术组Th2水平显著高于对照组（P＜0.01）。 结论 感染细粒棘球蚴的患者机体免疫呈抑制状态；Th1、Th2水平在1次手术组合2次手术组间有所不同。     

感染弓形虫小鼠脾脏CD4+CD25+T细胞的变化

目的 观察小鼠感染刚地弓形虫后脾脏CD4⁺CD25⁺调节性T细胞的动态变化。 方法 将28只雌性C57BL/6小鼠随机分为4组，其中3组每鼠腹腔接种弓形虫速殖子悬液200 μl（含弓形虫速殖子5×10⁴个/ml），对照组腹腔接种灭菌PBS 200 μl。分别于弓形虫感染后第2、4和6天取脾，制成单个核细胞，用实时荧光定量PCR检测脾CD4⁺ T细胞Foxp3基因表达水平，流式细胞仪检测脾CD4⁺CD25⁺调节性T细胞占CD4⁺ T细胞的比例，并对CD4⁺CD25⁺调节性T细胞和CD4⁺ T细胞进行绝对计数。 结果 感染后第4和6天，小鼠脾脏CD4⁺ T细胞Foxp3 mRNA相对表达水平分别为 1.89±0.23和1.79±0.24， 均显著高于正常水平（1.00±0.12）（P＜0.01）；CD4⁺CD25⁺调节性T细胞占CD4⁺ T细胞的比例从感染后第2天（15.07%±2.73%）开始上调（P＜0.05），至感染后第4 和6天分别为24.29%±3.19%和19.80%±2.66%，均明显高于正常水平（11.58%±2.04%） （P＜0.01）；脾脏CD4⁺ T细胞占脾细胞的比例及其绝对数量均从感染后第2 天开始降低，至感染后第6 天分别降至5.49%±1.71%和（1.71±0.44）×10⁶ （P＜0.01）。 结论 弓形虫感染导致小鼠脾脏CD4⁺CD25⁺调节性T细胞占CD4⁺ T细胞的比例上调，而脾脏CD4⁺ T细胞的显著减少是促成比例上调的主要原因。     

弓形虫复合黏膜疫苗鼻内免疫小鼠抵抗弓形虫感染作用的观察

目的 观察弓形虫复合黏膜疫苗鼻内免疫小鼠诱导的肠黏膜和系统免疫应答及其抗弓形虫感染作用。方法 BALB/c小鼠52只随机分为两组（每组26只），免疫组小鼠用弓形虫复合黏膜疫苗（每毫升含可溶性速殖子抗原1 mg， 霍乱毒素50 μg） 20 μl/只滴鼻免疫2次，间隔2周；对照组用等剂量PBS滴鼻。末次免疫后14 d，各组处死6只，摘眼球取血（0.5～1 ml）；取直肠内粪便（4～5粒），ELISA测定血清IgG和粪IgA抗体；分别计数脾组织、派伊尔集合淋巴结（PP）和肠上皮淋巴细胞（IEL），免疫细胞化学法检测各组织中CD4⁺、CD8⁺ T细胞亚群水平。用RH株弓形虫速殖子（4×10⁴个/只）灌胃攻击感染各组其余小鼠，30 d后颈椎脱位处死，计数肝、脑组织速殖子虫荷。 结果 免疫后14 d，免疫组小鼠血清IgG和粪IgA抗体水平（分别为0.224和0.371），显著高于对照组（分别为0.041和0.037）（P<0.05），脾、PP和IEL中T淋巴细胞与对照组相比明显增生（P<0.01），其中脾、PP中CD4⁺、CD8⁺ T淋巴细胞增殖显著（P<0.05），IEL中以CD8⁺ T细胞为主，增殖显著（P<0.01），CD4⁺/CD8⁺ 比值降低（P<0.05）。攻击后30 d，免疫组小鼠存活率（85.0%）显著高于对照组（45.0%）（P<0.05）。免疫组肝、脑组织速殖子数比对照组分别减少86.3%、86.7%，两组差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 弓形虫复合黏膜疫苗鼻内免疫小鼠，能有效诱导黏膜和系统免疫应答，小鼠存活率显著提高，肝、脑组织虫荷显著降低。     

日本血吸虫不同阶段抗原免疫抑制过敏性哮喘小鼠气道炎症的实验观察

目的 观察日本血吸虫不同生活史阶段抗原对过敏性哮喘小鼠气道炎症的影响。方法 雌性BALB/c小鼠48只,随机均分8组,A组为健康对照组;B组为哮喘模型组,以鸡卵白蛋白（OVA）抗原腹腔注射致敏,OVA滴鼻诱发哮喘;C、D和E组小鼠分别用可溶性虫卵抗原（SEA）、可溶性成虫抗原（SWA）和童虫抗原（SSA）经腹部皮下免疫,共4次,每次间隔1周,末次免疫后1周再按B组方法诱发哮喘;F、G和H组分别用SEA、SWA和SSA免疫接种小鼠（免疫方法及剂量分别同C、D、E组）,末次免疫后1周用等量生理盐水代替OVA处理小鼠,不诱发哮喘。诱发哮喘后48 h剖杀各组小鼠,观察各组小鼠肺组织的病理变化和支气管肺泡灌洗液（BALF）中的相关细胞成分及细胞因子的变化。 结果 A组小鼠气道肺组织无明显炎症变化;B组小鼠气道肺组织可见明显的炎性细胞,尤其是嗜酸粒细胞的浸润;C、D和E组小鼠气道肺组织炎症明显轻于B组小鼠。B组小鼠BALF中白细胞总数［（98.4±16.1）×10⁴/ml］、嗜酸粒细胞百分数[（17.6±4.3）×10⁴/ml]和白细胞介素-5(IL-5)水平［（197.9±36.5）pg/ml］均明显高于A组［分别为（8.2±1.1）×10⁴/ml、（0.02±0.01）×10⁴/ml和（12.3±7.4）pg/ml］,而IL-10和γ干扰素(IFN-γ)水平明显低于A组。C、D和E组小鼠BALF中白细胞总数、嗜酸粒细胞百分数和IL-5水平均明显低于B组,而IL-10,IFN-γ水平则明显高于B组,差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 日本血吸虫不同抗原免疫后能有效调节过敏性哮喘小鼠的细胞因子平衡,同时对哮喘小鼠嗜酸粒细胞在肺组织中的浸润及肺组织炎症都有一定的抑制作用。     

弓形虫ROP2核酸疫苗免疫保护作用的研究

目的 研究ROP2核酸疫苗对BALB/c小鼠的免疫保护作用。 方法 42只BALB/c小鼠随机分为3组：实验组、空质粒组和PBS对照组，各组小鼠分别肌注pc-DNA3-ROP2重组质粒50 μg、pc-DNA3空质粒50 μg和PBS 50 μl，共免疫3次，每次间隔3周，末次接种量均加倍。末次免疫后2周，各组分别取4只小鼠的血清、脾和淋巴组织，检测CD4⁺、CD8⁺ 及各细胞因子。其余各组每鼠腹腔攻击感染RH株弓形虫速殖子500个，观察其存活时间等。 结果 ROP2核酸疫苗能诱发小鼠产生细胞免疫和体液免疫反应，小鼠血清抗体滴度高并能识别由基因重组体外诱导表达的ROP2蛋白抗原；实验组小鼠的CD4⁺T细胞增殖明显(69.5±3.4)%、CD4+/CD8+ 比值显著升高(4.69±1.32)%（P<0.01）；其脾、淋巴结细胞培养液及血清中白细胞介素-2（IL-2）、IL-4、IL-6、IL-12、γ干扰素（IFN-γ）和肿瘤坏死因子（TNF）均有不同程度的升高，尤其是血清中升高最为显著。弓形虫攻击感染180 h后，实验组小鼠免疫保护率为88.9%，与对照组相比，小鼠存活时间明显延长、初始死亡时间明显推迟（P<0.01）。 结论 ROP2核酸疫苗具有较强的免疫原性，能产生良好的免疫保护作用。     

囊性棘球蚴病免疫发病机制研究进展

本文从宿主对棘球蚴感染的先天性抵抗、早期免疫、包囊形成期免疫、影响CD4⁺ T细胞分化因素、细胞因子在细粒棘球绦虫(Eg)感染中的作用、Eg感染与变态反应、Eg感染的逃避机制等7个方面进行了综述。     

补骨脂与双氢青蒿素合剂治疗小鼠隐孢子虫病的实验研究

用补骨脂和双氢青蒿素合剂治疗经地塞米松诱导的隐孢子虫病小鼠, 剂量为补骨脂3.4 g/kg, 双氢青蒿素60 mg/(kg·d), 灌胃, 连用7 d。 结果粪检隐孢子虫卵囊数、 全血CD4⁺、 CD3⁺ T细胞比例、 血清γ干扰素 (IFN-γ) 浓度, 以及小肠组织匀浆一氧化氮 (NO) 浓度均高于感染对照组 (P值均＜0.01)。小肠组织病变程度均轻于感染对照组。表明补骨脂和双氢青蒿素合剂可通过调节血清IFN-γ、 全血CD4⁺、 CD3⁺ T 细胞比例, 以及提高肠组织NO浓度, 参与宿主免疫应答和炎症反应过程, 抑杀虫体、 治疗小鼠隐孢子虫病。     

Sj26基因转染的树突状细胞对日本血吸虫感染的免疫保护机制研究

目的 探讨日本血吸虫Sj26基因转染的树突状细胞（DC）对日本血吸虫感染的保护性免疫作用机制。 方法 BALB/c小鼠48只随机均分4组, 于小鼠耳廓分别注射细胞悬液(浓度1×10⁶/ml)0.2 ml, A组注射Sj26基因转染的DC、B组注射质粒pcDNA3转染的DC、 C组注射未处理的DC, D组注射RPMI-1640。共免疫3次，间隔2周。末次免疫后2周，每鼠经皮肤感染40±2条尾蚴。分别于免疫前、末次免疫后第 2 周以及攻击感染后第 6 周采血, ELISA法检测血清IgG抗体、γ干扰素（IFN-γ）和白细胞介素-4（IL-4）水平，免疫印迹法（Western blot）检测血清特异性抗Sj26 IgG抗体，双夹心ELISA法检测脾淋巴细胞经伴刀豆球蛋白A(ConA)和可溶性虫卵抗原(SEA)刺激后培养上清中IFN-γ和IL-4含量。噻唑蓝法（MTT）检测脾淋巴细胞增殖情况。 结果 A组血清IgG抗体水平(吸光度A₄₉₁值)，免疫后（A₄₉₁=0.117）显著高于免疫前（A₄₉₁=0.049）（t=2.73，P<0.05），也显著高于B组（A₄₉₁=0.061）和C组（A₄₉₁=0.058）（t值为2.48和2.56，P<0.05）。A组血清能特异识别血吸虫成虫抗原Mr 26 000蛋白。血清IL-4水平，各组免疫前、后均无明显变化。 IFN-γ水平，A组血清免疫后为（101.4±4.9)pg/ml, 明显高于免疫前的(15.0±1.9) pg/ml（t=5.80，P<0.01），亦高于免疫后的B组（40.1±3.1) pg/ml和C组（35.6±1.2) pg/ml (t值为3.98和4.13，P<0.01)。脾淋巴细胞经ConA刺激诱生的IFN-γ， A组（171.2 pg/ml）显著高于 D组（91.0 pg/ml）（t=4.25，P<0.01）。 经SEA刺激诱生的IFN-γ， A组（70.8 pg/ml）显著高于D组（49.7 pg/ml）（t=2.83，P<0.01）。经ConA刺激诱生的IL-4水平，A组（79.7 pg/ml）明显低于D组（125.2 pg/ml）（t=4.40, P<0.01）。经SEA刺激诱生的IL-4，A组（50.7 pg/ml）明显低于D组（70.5 pg/ml）（t=2.62，P<0.05）。A组脾淋巴细胞经ConA和SEA刺激后的刺激指数分别为4.1和2.82，均高于其他各组（与D组比较，t=3.20, P<0.01和t=2.15，P<0.05）。 结论 Sj26基因转染的树突状细胞免疫小鼠主要诱导Th1型免疫应答。     

阿苯达唑亚砜及其对映体体外抗细粒棘球绦虫原头蚴作用

目的 观察阿苯达唑亚砜消旋体（ASOX）、左旋体（L-ASOX）和右旋体（D-ASOX）体外抗细粒棘球绦虫原头蚴作用。 方法 将细粒棘球绦虫原头蚴随机分为8组（每组约6 000个），分别置含6 ml DMEM培养液（含15%胎牛血清，青霉素和链霉素各500 U/ml）的培养瓶中，ASOX、L-ASOX和D?鄄ASOX的各50 μg/ml和100 μg/ml组分别加入各药液150 μl和300 μl（配制液含0.1%二甲基亚砜和0.1%吐温-80的蒸馏水），DMSO组中加入等量配制液，并设空白对照组，每组设2个平行组。每隔1 d观察1次，取样滴于玻片，用0.03%美蓝染色，显微镜下计数原头蚴约400个，计算死亡率。直至其中一组的原头蚴全部死亡为止。 结果 ASOX、L-ASOX和D-ASOX两个浓度（50 μg/ml和100 μg/ml）组不同作用时间原头蚴的死亡率分别与空白对照组和溶剂组相比，差异均有统计学意义（P<0.01）；ASOX组与D-ASOX组相比，差别无统计学意义（P>0.05），而与L-ASOX组相比，差异有统计学意义（P<0.05）；D-ASOX与L-ASOX相比，差异有统计学意义（P<0.05）。各药物作用至第9天时，ASOX、L-ASOX、D-ASOX的50 μg/ml组原头蚴死亡率分别为（93.6±3.7）%、（56.2±3.9）%和（99.0±1.9）%，各药的100 μg/ml组死亡率分别为100%、（74.5±3.7）%和100%，对照组为（19.1±1.3）%，溶剂组为（22.5±1.9）%。 结论 ASOX、L-ASOX和D-ASOX在体外均有抗细粒棘球绦虫原头蚴作用，D-ASOX抗原头蚴作用较L-ASOX强。     

内生真菌JJ18接种江滩土壤灭螺实验研究

金钱松内生真菌JJ18（Aspergillus）分别接种到固体培养基（A）、灭菌土壤（B）和未灭菌土壤（C）中,按照WHO的杀螺剂浸泡试验法观察各培养基浸出液的发酵产物对钉螺的杀灭作用,以及JJ18在土壤中的存活时间,并设不接种内生真菌JJ18的未灭菌空白土壤组（D）、去氯离子水阴性对照组（E）和氯硝柳胺阳性对照组（F）。采用WHO推荐的浸泡法,用卤虫（Artemia salina）模型观察其急性毒性,以人工海水为对照组,观察A～D组对卤虫的杀灭情况。结果显示,浸泡钉螺24、48、72 h,B组灭螺率分别为（36.67±7.56）%、 （63.33±4.65）%、 （90±0）%, 明显高于D组（30±6.87）%、 （33.33±5.68）%、 （56.67±8.55）% （P<0.05, P<0.01）。内生真菌JJ18在土壤中至少可存活30 d。B组对卤虫的杀虫率为（25.24±3.74）%, 显著低于A组（57.15±8.90）% （P<0.01）。     

阿苯达唑脂质体和阿苯达唑片治疗囊型包虫病的临床疗效及安全性

目的 观察阿苯达唑脂质体(L-ABZ)和阿苯达唑片(T-ABZ)治疗囊型包虫病的临床疗效及安伞性.方法 收集1998-2008年我院门诊收治及下乡现场普查发现的囊型包虫病患者269例,采用回顾性病例对照方法,纳入符合病例218例,其中经L-ABZ治疗的患者110例,经T-ABZ治疗的患者108例.依据随访的临床症状及影像和血清学化验结果对比分析药物的疗效及不良反应.短期为服药3个月,长期为服药6个月.囊型包虫病患者分为单囊型(CE1)、多子囊型(CE2)和内囊塌陷坏死型并囊内可见活性子囊(CE3).用χ2检验分析计量资料、计数资料;用Wilcoxon秩和检验分析等级资料;统计学检验均为双侧检验,统计数据均用SPSS13.0及PEMS3.1医学统计软件分析完成.结果 短期疗效评价中,L-ABZ组与T-ABZ组总有效率及治愈率分别为77.9%和49.1%,28.4%和13.9%,两组比较,χ2值分别为19.581、6.877,P值均<0.05,差异有统计学意义.长期疗效评价中,L-ABZ组与T-ABZ组总有效率及治愈率分别为81.7%和49.0%,47.6%和20.6%,两组比较,χ2值分别为20.977、15.049,P值均<0.05,差异有统计学意义.T-ABZ组不同类型包虫囊肿疗效比较:对于短期治愈率、短期总有效率、长期治愈率、长期总有效率,CE1组分别为50.0%(15/30)、56.7%(17/30)、58.3%(7/12)、75.0%(9/12);CE2组分别为8.8%(8/91)、35.2%(32/91)、28.6%(12/42)、69.0%(29/42);CE3组分别为33.3%(7/21)、61.9%(13/21)、70.0%(7/10)、100.0%(10/10).CE1组、CE3组分别与CE2组的短期疗效(治愈率和总有效率)比较,χ2值分别为24.887、4.329、8.860、5.076,P值均<0.05,差异有统计学意义;L-ABZ组不同类型包虫囊肿疗效比较:对于短期治愈率、短期总有效率、长期治愈率、长期总有效率,CE1组分别为47.4%(18/38)、92.1%(35/38)、79.3%(23/29)、96.6%(28/29).CE2组分别为12.2%(12/98)、65.3%(64/98)、35.9%(23/64)、84.40/0(54/64).CE3组分别为61.5%(8/13)、92.3%(12/13)、50.0%(3/6)、100%(6/6).CE1组、CE3组分别与CE2组的短期疗效(治愈率、总有效率)比较,χ2值分别为19.648、9.930、18.880、3.876,P值均<0.05,差异有统计学意义;在安全性评价中,T-ABZ组和L-ABZ组药物相关的不良反应发生率分别为11.1%(12/108)、12.7%(14/110),两组比较,χ2=0.155,P>0.05,差异无统计学意义.结论 L-ABZ及T-ABZ均是有效的抗包虫药物,但L-ABZ临床疗效更佳.

Abstract：

Objective To explore and compare the clinical effect and safety of liposomal albendazole (L-ABZ) and tablet-albendazole (T-ABZ) in the treatment of cystic echinococcosis (CE1, CE2, and CE3). Methods A total of 269 cases treated with cystic echinococcosis (CE) in Xinjiang Medical University the First Affilicated Hospital from 1998 to 2008 were reviewed. 51 cases were excluded and 218 cases were enrolled in this research by retrospective case-control method. Among 110 cases were treated with L-ABZ and 108 cases were treated with T-ABZ for short-term (3 months) and long-term courses (6 months) respectively. The effects and safety of the two medicines were compared by analyzing the clinical symptoms, imaging check and serologic test results. Results In short-term effect evaluation, the total effective rates and curative rates of L-ABZ group and T-ABZ group were 77.9% and 49.1% vs 28.4% and 13.9%, respectively. The effects of L-ABZ group was better than that of T-ABZ group, with remarkable difference in total effective rates and curative rates ( χ2 value was 19.581, 6.877, respectively, P < 0.05). In long-term effect evaluation, the total effective rates and curative rates of L-ABZ and T-ABZ group were 81.7% and 49.0% vs 47.6% and 20.6%, respectively. There was significant difference between L-ABZ group and T-ABZ group in total effective rates and curative rates (χ2 value was 20.977, 15.049, respectively, P < 0.05). In T-ABZ group the short-term curative rates were 50.0% (15/30), 8.8% (8/91) and 33.3% (7/21) respectively in CE1, CE2, and CE3, the short-term total effctive rates were 56.7% (17/30), 35.2% (32/91) and 61.9% (13/21) respectively in CE1, CE2, and CE3. The long-term curative rates were 58.3% (7/12), 28.6% (12/42) and 70.0% (7/10) respectively in CE1, CE2 and CE3, the long-term total effctvie rates were 75.0% (9/12), 69.0% (29/42) and 100.0% (10/10) respectively in CE1, CE2, and CE3. When compared with CE2, differences existed in CE1 ( χ2 = 24.887,4.329; P < 0.05) and CE3 groups ( x 2 = 8.860, 5.076; P < 0.05) in terms of short-term effects. In L-ABZ group, the short-term curative rates were 47.4% (18/38), 12.2% (12/98) and 61.5% (8/13) respectively in CE1, CE2 and CE3, the short-term total effctive rates were 92.1% (35/38), 65.3% (64/98) and 92.3% (12/13) respectively in CE1, CE2 and CE3, the long-term curative rates were 79.3% (23/29), 35.9% (23/64) and 50.0% (3/6) respectively in CE1, CE2 and CE3, the long-term total effective rates were 96.6% (28/29),84.4% (54/64) and 100% (6/6) respectively in CE1, CE2 and CE3. When compared with CE2, there were significant differences in CE1 (χ2 = 19.648, 9.930; P < 0.05) and CE3 groups ( χ2 = 18.880, 3.876; P < 0.05) in terms of short-term effect. In L-ABZ and T-ABZ groups, the durg-related adverse effects were 11.1% (12/108) and 12.7% (14/110) respectively without significant difference ( χ2 = 0.155, P > 0.05). Conclusion L-ABZ and T-ABZ were both effective anti-echinococcosis drugs without dominant sideeffects. The clinical effect of L-ABZ was better than that of T-ABZ.     

细粒棘球蚴亲肌肉抗原在小鼠中的免疫保护力研究

目的 对细粒棘球蚴亲肌肉抗原(myophilin antigen)进行原核表达、纯化并用小鼠实验评价其免疫学特性. 方法 提取总RNA,构建克隆质粒Eg myophilin/pGEM-T,然后将亲肌肉抗原基因亚克隆于表达载体pET28a,进行诱导表达;纯化重组蛋白并免疫小鼠.利用Western blot、ELISA鉴定其免疫学特性,并通过包囊计数,评价其免疫保护力. 结果 成功构建原核重组表达载体Eg myophilin/pET28a,并表达、纯化出浓度较高的亲肌肉抗原.ELISA检测显示,用纯化的亲肌肉抗原免疫小鼠,诱导产生了特异性抗体;Western blot鉴定该抗体能识别重组抗原及原头蚴.攻击感染实验表明亲肌肉抗原免疫小鼠的包囊数为0.93±2.1,对照组为7.13±10.21,两者差异有统计学意义,获得的保护力约为94.4%. 结论 成功表达细粒棘球蚴亲肌肉抗原,纯化后的重组蛋白具有抗原性和免疫原性,有望作为棘球蚴病疫苗候选分子.     

细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗诱导小鼠脾细胞亚群的变化

目的 探讨细粒棘球绦虫(Eg)转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗免疫和Eg原头节攻击后小鼠脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的变化.方法 热絮凝法提取转基因苜蓿叶蛋白,用无菌双蒸水将叶蛋白提取液配成20 g/L,同时提取转空质粒(pBI121)苜蓿叶蛋白及正常苜蓿叶蛋白作对照.32只雌性Balb/c小鼠按体质量随机分为4组,每组8只.口服灌胃组:灌胃接种100 μl转基因苜蓿叶蛋白提取液;鼻腔黏膜接种组:滴鼻接种10 μl转基因苜蓿叶蛋白提取液;空质粒对照组:滴鼻接种10μl转空质粒苜蓿叶蛋白提取液;正常蛋白对照组:灌胃接种100μl正常苜蓿叶蛋白提取液.小鼠每3天免疫1次,连续免疫2个月.末次免疫后第8周,各组小鼠用Eg原头节腹腔注射攻击感染(50个/只),感染后第24周剖杀小鼠,分离脾细胞,用流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群百分比.结果 口服灌胃组小鼠脾CD4+T细胞亚群百分比(0.286±0.009)、CD8+ T细胞亚群百分比(0.102±0.004)和CD4+/CD8+比值(2.814±0.014)均显著高于正常蛋白对照组(0.166±0.018、0.083±0.006、2.019±0.369,P<0.01或<0.05);鼻腔黏膜接种组小鼠脾CD4+T细胞亚群百分比(0.269±0.016)和CD4+/CD8+比值(2.955±0.986)与正常蛋白对照组比较明显升高(P均<0.01);口服灌胃组小鼠脾CD4+T细胞亚群百分比高于鼻腔黏膜接种组(P<0.05);空质粒对照组小鼠脾CD4+、CD8+T细胞百分比和CD4+/CD8+比值(0.169±0.018、0.093±0.019、1.852±0.188)与正常蛋白对照组比较,差异无统计学意义(P均>0.05).结论 CD4+T细胞亚群可能与细粒棘球绦虫转Eg95-Eg31融合基因苜蓿疫苗诱导的小鼠抗Eg原头节攻击感染的保护力有关.疫苗灌胃接种可能是一种较好的免疫途径.     

细粒棘球绦虫Eg10诱导树突状细胞产生Th2免疫反应

目的 研究细粒棘球绦虫蛋白10(antigen 10 of Echinococcus granulosus Eg10)对小鼠感染细粒棘球绦虫免疫机制的影响。方法 通过体外培养骨髓来源的小鼠树突状细胞(Bone marrow dendritic cell, BMDC),用不同的抗原包囊囊液(hydatid fluid HF)、 Eg10、脂多糖(lipopolysaccharide LPS)单独或联合作用DC,共6组。通过扫描电镜和透射电镜观察各组DC形态学的变化;通过流式细胞仪检测DC的吞噬能力、迁移能力的变化、刺激T细胞增殖能力的变化及DC表面分子的表达情况;利用ELISA检测DC分泌各种细胞因子的变化。结果 Eg10抑制DC向成熟状态发展,与囊液对照组相比,DC表面仅增多了褶皱,两者均可提高DC吞噬能力;刺激T细胞的增殖能力很弱,但是能够提高Treg细胞的含量;同时发现Eg10组DC表面分子MHCII 和CD86的表达量高于空白组,分泌高含量的IL-10, IL-6。通过给予LPS联合刺激DC形态趋于半成熟状态,细胞表面树突增加,表面分子MHCII、CD80、CD40的表达增高,CD86的表达量降低;IL-10和IL-6的含量也相应的下降。结论 Eg10诱导DC产生Th2反应。     

细粒棘球绦虫Eg95抗原基因疫苗体外瞬时表达及对小鼠诱导的免疫应答

目的　检测细粒棘球绦虫Eg95抗原基因疫苗(pcDNA3 Eg95)体外瞬时表达,探讨其诱导小鼠的体液和细胞免疫效果。　方法　pcDNA3 Eg95经脂质体转染HeLa细胞瞬时表达。逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测Eg95抗原信使RNA(mRNA)在HeLa细胞中的表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)和蛋白质印迹法(Westernblot ting)检测Eg95蛋白的瞬时表达情况。pcDNA3 Eg95基因疫苗肌肉注射免疫BALB/c小鼠,ELISA检测IgG和IgG2a水平,四甲基偶氮唑盐试验(MTT法)检测免疫小鼠T淋巴细胞增殖反应。　结果　RTPCR检测结果显示,pcD NA3 Eg95瞬时表达组有Eg95抗原基因mRNA表达,ELISA和Westernblotting检测结果表明,可在HeLa细胞中特异性表达Eg95蛋白。用pcDNA3 Eg95基因疫苗免疫BALB/c小鼠,第3周出现特异性IgG免疫应答,持续升高至第10周,显著高于对照组。从第2周开始,小鼠血清IgG2a应答即为阳性,且长时间(至第10周 )维持较高水平,与pcD NA3空质粒组比较,其差异具有非常显著性意义(P<0.01)。用原核表达的Eg95重组蛋白刺激免疫小鼠脾细胞,有明显的T细胞增殖反应。pcDNA3 Eg95基因疫苗免疫组刺激指数明显高于pcDNA3空质粒组(P<0.01)。结论　pcDNA3 Eg95基因疫苗可诱发小鼠产生特异的体液免疫和细     

细粒棘球蚴重组铁蛋白和重组线粒体苹果酸脱氢酶免疫差异的初步观察

目的比较细粒棘球蚴重组铁蛋白(rEgferritin)和重组线粒体苹果酸脱氢酶(rEgmMDH)对感染细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus)小鼠的免疫差异。方法 30只雌性ICR小鼠随机分为3组(rEgferritin免疫组、rEgmMDH免疫组和对照组)。将rEgferritin、rEgmMDH和PBS与佐剂乳化后,分别于背部皮下多点注射免疫小鼠,每次注射100μl/只(含抗原10μg),共免疫3次,每次间隔2周。末次免疫后2周,3组小鼠分别于腹腔注射0.1 ml原头节悬液(约1 500个)进行攻击感染,22周后剖杀,无菌取脾组织,并记录包囊数量和直径,评价免疫保护力。用流式细胞仪检测脾组织中CD4+T细胞和CD8+T细胞,计算两者比例。结果 rEgferritin免疫组30%(3/10)小鼠有包囊,包囊总数为5个;rEgmMDH免疫组小鼠均有包囊,包囊总数为118个;对照组9只小鼠中7只有包囊,包囊总数为35个。rEgferritin免疫组小鼠获得了84.7%的免疫保护力,而rEgmMDH组无免疫保护力。小鼠脾淋巴细胞CD4+亚群百分比,rEgferritin免疫组[(57.50±7.02)%]显著高于对照组[(43.60±6.09)%](P<0.05)。小鼠脾淋巴细胞CD8+亚群百分比,rEgferritin免疫组[(25.66±6.18)%]和rEgmMDH免疫组[(19.23±5.40)%]与对照组[(21.80±6.12)%]比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。小鼠脾淋巴细胞CD4+/CD8+亚群比值,rEgferritin免疫组和rEgmMDH免疫组与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)结论 rEgferritin能抑制细粒棘球蚴的生长,而rEgmMDH促进了细粒棘球蚴的生长。     

口服阿苯达唑脂质体大鼠体内药物动力学的研究

通过Wistar大鼠口服阿苯达唑脂质体的体内药物动力学实验,建立和考察了高效液相色谱法（HPLC）测定生物样品中阿苯达唑及其代谢产物的浓度的方法;用药动学软件包进行体内模型拟合,获取药动学参数和比较阿苯在唑脂质体的相对生物利用度。结果显示;测定阿苯达唑及其代谢产物的HPLC方法回收率较高,可满足汪同生物样品的测定;口服阿苯达唑脂质符合一级吸收二室动力学模型。与阿苯达唑片剂粉末相比,具有较高有生物利用度并有一定的肝脏靶向性。     

细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗诱导小鼠脾细胞亚群变化的研究

目的探讨细粒棘球绦虫(Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31疫苗免疫和Eg原头节攻击后小鼠的囊重抑制率及脾细胞亚群的变化。方法将细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗分别采用皮下注射、肌肉注射、鼻腔内接种和口服灌胃4种途径免疫BALB/c小鼠,免疫后8周每鼠用50个Eg原头节攻击感染,感染后25周剖杀小鼠,分离细粒棘球蚴包囊并称重,计算囊重抑制率;取脾,分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T细胞亚群的百分比,同时设有空载体、Bb和MRS对照。结果以上4种疫苗接种组小鼠的囊重抑制率分别为45.33%、41.33%、70.67%和62.67%;疫苗接种组的脾CD4+和CD8+T细胞亚群显著增加,鼻腔内接种和口服免疫组的的CD4+T细胞亚群和CD4+/CD8+比值显著高于皮下和肌肉注射组。结论CD4+和CD8+T细胞亚群在疫苗诱导的保护力中起重要作用。疫苗鼻腔内接种和口服免疫是两种较好的免疫途径。     

细粒棘球蚴Eg10基因的克隆、表达及免疫特性研究

目的克隆、表达细粒棘球蚴分离株Eg10基因,并研究其重组蛋白的免疫特性。方法将细粒棘球蚴Eg10基因亚克隆于表达载体pET28a,转化重组质粒至大肠埃希菌BL21进行融合表达,His-bind树脂纯化系统纯化重组融合蛋白,以之作为抗原免疫小鼠。48只ICR小鼠随机均分为4组,A、B组为对照组,分别注射不含抗原的磷酸盐缓冲液(PBS)和福氏佐剂+PBS,每鼠皮下注射100μl。C、D组为免疫组,注射用福氏佐剂乳化的重组抗原Eg10,抗原量分别为0.1mg/μl和0.5mg/μl,每鼠皮下注射100μl。各组小鼠每隔2周免疫1次,共免疫3次。于免疫前和免疫后2、4、6、8和10周采血以获得抗血清。通过蛋白质印迹(Westernblotting)分析和ELISA检测重组抗原的免疫学特性。结果成功构建含目的片段Eg10的基因工程菌株。Westernblotting分析结果表明,免疫血清能识别重组抗原Eg10。ELISA检测结果显示,用重组蛋白免疫小鼠可诱导产生特异性抗体。统计学分析表明,免疫后C、D组抗体水平逐渐升高,至第8周抗体滴度达最高值,分别为(1.143±0.253)和(1.254±0.070);A、B组抗体一直维持在较低水平。第2、4、6、8和10周,A、B与C、D组间抗体水平差异有统计学意义(均P0.05),C、D组间差异无统计学意义(P0.05)。结论成功表达细粒棘球蚴重组蛋白Eg10,该蛋白有一定的免疫原性。     

微囊法棘球蚴继发感染小鼠动物模型的建立

目的 通过体外培养原头蚴发育成微囊,经腹腔注射建立稳定的细粒棘球蚴和多房棘球蚴继发感染小鼠动物模型。方法 无菌条件下采集羊源细粒棘球绦虫原头蚴和鼠源多房棘球绦虫原头蚴,经胃蛋白酶消化后检测虫体活力并计数,于37℃、5%CO₂条件下进行体外培养至发育成微囊,以每鼠50个微囊的剂量经腹腔注射的途径分别接种BALB/c小鼠。接种6个月后,通过腹部解剖大体观察和病理检测分析各组小鼠的感染情况及包虫囊的生长情况。结果 原头蚴在体外培养60d时发育成微囊,显微镜下观察Eg具有明显的透明角质层结构,而Em微囊角质层较薄。小鼠细粒棘球蚴和多房棘球蚴的感染率均为100%,Eg包虫囊为游离单囊,成囊率达70%,囊内无原头蚴;Em包虫囊为类似肿瘤的团块状组织,病灶内有生发囊及原头蚴。结论 采用微囊法可建立稳定的棘球蚴继发感染小鼠动物模型,为疫苗研制、药物筛选和疗效判定提供研究动物模型。