左归丸对小鼠CD4~+CD25~+调节性T细胞的影响

目的:观察左归丸制剂对小鼠脾细胞中Treg亚群及其相关细胞因子表达的影响。方法:BALB/c小鼠给予不同剂量左归丸处理后,利用流式细胞术检测小鼠脾细胞中Treg亚群(CD4+/CD25+)的变化;采用RT-PCR法检测小鼠脾细胞中IL-10、TGF-β、IFN-γ及Foxp3的表达水平;采用ELISA法检测小鼠外周血中IFN-γ的分泌水平。结果:小剂量左归丸对小鼠脾脏Treg亚群及相关细胞因子的表达没有显著影响;中剂量左归丸可明显上调小鼠脾脏Treg亚群比例(P<0.05),提高Treg特异性胞内信号Foxp3及相关细胞因子IL-10、TGF-β的转录水平,同时抑制IFN-γ的表达;大剂量左归丸可显著降低Treg细胞亚群比例,对Foxp3I、L-10、TGF-β、IFN-γ的表达均有明显的抑制作用(P<0.05)。随着中、大剂量左归丸处理小鼠IFN-γ的转录下调,血清中IFN-γ的水平也明显下降(P<0.05)。结论:左归丸可上调Treg细胞及相关细胞因子的表达水平,抑制IFN-γ的表达,但这种免疫效应有剂量限制性,大剂量应用时显示抑制作用,提示左归丸对Treg亚群有剂量依赖性的双向调节作用。     

紫癜方对ITP模型小鼠TGF-β1和TLR4表达的影响

目的:观察两种制备方法获取的紫癜方提取物对特发性血小板减少性紫癜(ITP)模型小鼠TGF-β1和TLR4表达的影响。方法:免疫法建立ITP模型,设立正常组(C)、模型组(M)、醋酸泼尼松组(DC)、血美安组(X)、紫癜水提组(S)和紫癜醇提加水提组(G),采用RT-PCR和Western Blot检测各组小鼠脾TGF-β1和TLR4的表达。结果:与M组比较,DC组、X组、S组和G组脾TGF-β1和TLR4 mRNA和蛋白表达升高;与DC组比较,S组和G组脾TGF-β1 mRNA和蛋白表达升高,G组脾TLR4蛋白表达水平升高;与X组比较,S组和G组脾TGF-β1、TLR4 mRNA和蛋白表达升高。结论:两种制备方法的紫癜方治疗ITP可能与上调脾组织TGF-β1和TLR4的表达有关。     

大分割剂量照射内皮细胞持续表达细胞因子模型的建立

目的:通过大分割剂量的X线照射人脐静脉血内皮细胞ECV-304,构建放射反应相关因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β1(TGF-β1)持续表达模型,为探讨晚期放射反应中的分子靶点及干预策略提供基础。方法:大分割剂量的X线[5Gy/(次·周),连续6周,总计30Gy]照射指数生长期的ECV-304,在第一次照射后1,3,24,72h和后续每次照射后第5天及末次照射后第5,6,7,8周提取mRNA,采用qRT-PCR检测TNF-α、TGF-β1 mRNA水平的变化。于第一次照射后第1,3,24小时和后续每次照射后第5天,及末次照射后第4,6,8周收集细胞上清液,采用ELISA法测定其蛋白水平的表达情况。结果:正常ECV-304低表达TNF-α和TGF-β1。ECV-304细胞受到连续多次5Gy剂量照射后,于不同时间点,TNF-α和TGF-β1mRNA的表达均呈现先升高后降低的趋势,但始终高于正常水平。其中,TNF-αmRNA于末次照射后的第8周,表达量最高,为未照射时的(8.05±1.28)倍(P<0.05);而TGF-β1mRNA于末次照射后第5周升至高峰[为对照组(7.3±0.39)倍,P<0.05]。ECV-304细胞于单次照射后24h,TNF-α、TGF-β1蛋白表达量即开始升高,和mRNA趋势一致,TNF-α蛋白至第6次分割剂量照射后第5天表达量最高[(479.10±21.94)pg/ml(P<0.01)]。而TGF-β1蛋白于末次照射后6周升至高峰,蛋白含量为(2 335.93±126.18)pg/ml(P<0.01)。结论:TNF-α,TGF-β1在大分割剂量照射后,在mRNA和蛋白水平均明显升高,照射后8周仍持续升高,结果表明放射反应相关因子TNF-α、TGF-β1持续表达细胞模型构建成功。     

X射线对肺腺癌细胞粘附分子及其相关生物学特性的影响

目的:探讨X射线对肺腺癌细胞粘附分子及其相关生物学特性的影响.方法:不同剂量X射线照射肺腺癌细胞A549,MTT法检测细胞增殖抑制;免疫细胞化学法蛋白水平检测细胞中E-cadherin及其连环蛋白β-catenin的表达;Transwell小室检测细胞的侵袭力.结果:X射线对A549细胞的增殖抑制作用呈剂量依赖性;照射后E-cadherin和β-catenin蛋白的表达均显著高于对照组(P<0.05),其变化趋势是随照射剂量增加表达逐渐增加;Transwell小室结果表明随着照射剂量的增加.细胞侵袭力逐渐降低(P<0.05).结论:X射线上调A549细胞上粘附分子E-cadherin和β-catenin在细胞中的表达,增加细胞间的粘附力,降低肿瘤细胞的侵袭力,这可能是X射线抑制肺腺癌细胞转移的作用机制之一.     

辐射对肾小管上皮细胞及支架蛋白JLP表达的影响

目的:探索辐射对肾小管上皮细胞及支架蛋白JLP表达的影响。方法:(1)体外实验:采用不同剂量X线辐照HK-2细胞,并于辐照后24h和48h提取细胞蛋白及mRNA,Western印迹法检测JLP、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)、转长生长因子(TGF)-β1蛋白的表达;RT-PCR检测JLP mRNA的表达;免疫荧光观察辐照后α-SMA的变化。(2)体内实验:将JLP野生型(jlp~(+/+))小鼠分为辐照组和非辐照组,辐照组小鼠采用6Gy X线照射,7d后处死小鼠。Western印迹法检测肾组织辐照后JLP、α-SMA、TGF-β1、胶原蛋白(COL)-Ⅰ蛋白的表达;PAS染色观察辐照后肾脏病理改变。结果:体外研究结果显示,辐照后JLP蛋白表达下调,α-SMA、TGF-β1蛋白表达上调;免疫荧光结果显示辐照后α-SMA的荧光表达增加。jlp+/+小鼠辐照后7d肾脏病理可见明显空泡变性,刷状缘紊乱,小管坏死,脱落,部分小管再生;Western印迹结果显示,辐照后α-SMA,TGF-β1,COL-Ⅰ表达增加。结论:辐照下调肾小管上皮细胞JLP的表达,同时上调TGF-β1的表达,进一步促进α-SMA、COL-Ⅰ表达上调,加重肾脏病理损害。     

X射线对小鼠脾细胞内P16、cyclin D1和CDK4表达的影响

目的:探讨X射线对小鼠脾细胞内P16、cyclin D1和CDK4表达的影响.方法:采用细胞间接荧光标记法、FACScan流式细胞仪检测不同剂量X射线全身照射后小鼠脾细胞内P16、cyclin D1和CDK4三种蛋白表达的时程变化和量效关系.结果:2.0 Gy X射线照后24 h小鼠脾细胞P16表达明显高于假照组;CDK4表达水平在照后8 h明显降低,持续至照后72 h仍低于正常水平.周期蛋白cyclin D1表达轻度下调.不同剂量照射后P16蛋白表达呈剂量依赖性增加,1.0～4.0 Gy组与假照射组相比显著增多(P＜0.05,P＜0.01);cyclin D1蛋白表达随剂量升高有降低趋势;CDK4亦呈剂量依赖性降低,0.5～6.0 Gy组与假照组比较差异具有显著性(P＜0.05,P＜0.01).结论:P16/cyclin D1/CDK4/pRb通路在电离辐射诱导脾细胞G1期阻滞中可能起十分重要作用.     

龙葵碱对肝癌Treg细胞介导的肿瘤免疫逃逸的影响

目的 研究龙葵碱对荷肝癌小鼠体内调节性T细胞(Treg细胞)介导肝癌细胞免疫逃逸的影响及其作用机制。方法 建立肝癌H22细胞移植瘤小鼠模型,并设对照组、龙葵碱组、TGF-β1抑制剂组和龙葵碱联合TGF-β1抑制剂组。14 d处理称取各组小鼠移植瘤质量,ELISA法检测各组小鼠外周血中IL-2、IL-10、TGF-β1等免疫性抑制细胞因子的含量变化,流式细胞术检测各组小鼠脾淋巴细胞培养液中CD4+、CD4+CD25+Foxp3+Treg的表达水平,免疫荧光法检测小鼠脾淋巴细胞培养液中Foxp3+免疫荧光强度。结果 14 d后,与对照组相比,龙葵碱组、TGF-β1抑制剂组和联合组的肝癌荷瘤小鼠肿瘤瘤重量均显著低于对照组,差异有统计学意义(P0.05);龙葵碱组、TGF-β1抑制剂组、联合组3组小鼠外周血中免疫性抑制细胞因子IL-2、IL-10、TGF-β1均有明显降低(P0.05);龙葵碱组、TGF-β1抑制剂组、联合组三组CD4+表达水平均高于对照组,CD4+CD25+Treg的比例则明显下降(P0.05);免疫荧光染色结果显示,龙葵碱组、TGF-β1抑制剂组、联合组3组荷瘤小鼠Treg细胞中Foxp3+的表达明显低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 龙葵碱可能通过降低荷瘤小鼠Treg细胞含量来改善免疫逃逸,从而发挥抗肿瘤作用。     

Effects of whole body irradiation with X—rays on the expression of TfR on lymphocytes in spleens of mice

目的:通过研究不同剂量X射线全身照射后小鼠脾淋巴细胞运铁蛋白(TfR)表达的变化,探讨电离辐射后TfR对免疫功能的作用.方法:应用直接免疫荧光抗体和流式细胞仪检测TfR表达的变化.结果:75 mGy X射线全身照射后24 h和72 h,脾脏中TfR阳性表达细胞数显著增加;但1～6 Gy X射线全身照射后24 h,脾脏中TfR阳性表达细胞数显著减少.同时检测的IL-2活性显示出平行变化.结论:低剂量电离辐射时TfR增强免疫功能,而在高剂量电离辐射时TfR则抑制免疫功能.TfR表达的变化可能是因为电离辐射使IL-2活性改变所致.     

TGF-β3在小鼠放射性肺纤维化中的作用研究

目的观察经60 Coγ射线全胸照射后小鼠肺脏的改变,探究转化生长因子-β3(TGF-β3)在小鼠放射性肺纤维化中的作用。方法180只C57BL/6雌性小鼠随机分为对照组、照射组和TGF-β3组。照射组和TGF-β3组经60 Co γ射线单次全胸照射,照射后每周分别腹腔注射0.5 ml 0.9%生理盐水和TGF-β3(1μg/kg)一次。于照射后3、7、14 d和1、3、6个月活杀,肺脏经HE和天狼星红染色观察病理,检测小鼠肺内循环纤维细胞( CF)的数量。结果建立小鼠放射性肺纤维化模型。照射后6个月时,TGF-β3组肺脏见点状实变,部分成纤维细胞增生,少量胶原纤维沉积。照射后14 d到6个月,照射组肺脏 CF 数量比对照组明显增加( P <0.05)。照射后1个月时,TGF-β3组肺脏CF数量比照射组明显减少( P<0.05)。结论 TGF-β3使CF在肺内的聚集明显减少,其可能在延缓肺纤维化发生过程中发挥重要作用。     

X射线对小鼠腹腔巨噬细胞表达B7-1和B7-2的影响

目的 :观察 X射线全身照射对小鼠腹腔巨噬细胞表达 B7- 1和 B7- 2的影响。方法 :采用免疫组织化学法 ( ABC法 )。结果 :小鼠腹腔巨噬细胞表达 B7- 2达到高峰的时间早于 B7- 1,而且 B7- 2表达幅度也高于 B7- 1。剂量 -效应关系的研究表明 ,B7- 1和 B7- 2的表达均在 0 .0 75Gy剂量点出现峰值 ,而在较大剂量照射时也出现一个峰值。但在不同分度分析结果中发现 ,低剂量 X射线照射组的高密度细胞百分数比较大剂量组多。结论 :B7分子的表达上调可能是参与低剂量电离辐射免疫增强效应的重要因素。     

人参多糖对X射线照射小鼠骨髓细胞染色体畸变和造血干、祖细胞的影响

本实验观察了人参多糖对X射线照射小鼠骨髓细胞染色体和造血干、祖细胞的影响。结果表明:人参多糖对受不同剂量X射线照射小鼠骨髓CFU—S和CFU—GM均有显著的保护作用,3.0Gy X射线照射后7天,人参多糖组小鼠骨髓CFU—S和CFU-GM仍高于对照组。同时发现,人参多糖对X射线诱发的染色体畸变率有明显的降低作用。     

C57/BL小鼠TGF-β1、TNF-α在不同照射剂量下的表达及与放射性肺损伤的关系

目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在不同照射剂量下的变动情况及与放射性肺损伤的关系.方法雄性C57/BL小鼠,右肺单次照射15 MeV电子线6 Gy或10 Gy,不同时间处死后取肺组织HE染色,同时ELISA法测定血清中TGF-β1及TNF-α.结果不同剂量照射后,血清TGF-β1平均水平10 Gy组较6 Gy组、正常对照组高,有显著性差异(P<0.05);6 Gy组与正常对照组比较无显著性差异(P>0.05).各组间血清TNF-α平均水平比较情况同TGF-β1.HE染色病理切片不同时段(照射后36 h～40 d)显示,10 Gy照射组肺照射区域内出现进行性加重的炎症改变,但并不严重;6 Gy组受照肺组织与正常肺组织基本无差别.结论放射性肺损伤的原因是多因素的.血清中TGF-β1、TNF-α的变化情况与照射剂量关系密切.     

不同照射剂量对鼠血清中TGF-β1表达的影响及放射性肺损伤的关系

目的探讨转化生长因子TGF-B1在不同照射强度下表达情况及与放射性肺损伤的关系。方法BALB／c雄性小鼠,体重25g,6MV-X射线照射,按不同单次照射剂量和照射间隔时间分为A组、B组、C组、D组和对照组。分别在第1、2、3、6月处死后取肺组织HE染色,同时ELISA法测定血清中TGF-β1。结果TGF-β1含量从第2个月开始上升,6个月值最高。A组、B组、D组和对照组无显著差别（P〉0．05）。C组和对照组比较有显著差别（P〈0．05）,C组TGF-β1血浆浓度明显高于对照组。结论放射肺损伤的原因是多因素的,与血清中的TGF-β1变化情况及照射剂量关系密切。一定剂量内增加大单次剂量,增加间隔时间不会加重放射性肺损伤,提示放射性肺损伤的发生很可能存在一定的单次照射剂量和强度最佳阈值。     

左归丸对小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的影响

目的：观察左归丸制剂对小鼠脾细胞中Treg亚群及其相关细胞因子表达的影响。方法：Balb/c小鼠给予不同剂量左归丸处理后，利用流式细胞术检测小鼠脾细胞中Treg亚群（CD4^＋／CD25^＋）的变化；采用RT-PCR法检测小鼠脾细胞中IL-10、TGF-β、IFN-γ及Foxp3的表达水平；采用ELISA法检测小鼠外周血中IFN-γ的分泌水平。结果：小剂量左归丸对小鼠脾脏Treg亚群及相关细胞因子的表达没有显著影响；中剂量左归丸可明显上调小鼠脾脏Treg亚群比例（P〈0．05），提高Treg特异性胞内信号Foxp3及相关细胞因子IL-10、TGF-β的转录水平，同时抑制，IFN-γ的表达；大剂量左归丸可显著降低Treg细胞亚群比例，对Foxp3、IL-10、TGF-β、IFN-γ的表达均有明显的抑制作用（P〈0．05）。随着中、大剂量左归丸处理小鼠IFN-γ的转录下调，血清中IFN-γ的水平也明显下降（P〈0.05）。结论：左归丸可上调Treg细胞及相关细胞因子的表达水平，抑制IFN-γ的表达，但这种免疫效应有剂量限制性，大剂量应用时显示抑制作用，提示左归丸对Treg亚群有剂量依赖性的双向调节作用。     

正常猕猴与人视网膜血管的比较

目的 探讨小鼠肺、胸腺、小肠、脾不同组织受到辐射损伤后血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA 的表达及意义.方法 使用不同剂量(0、4、8 Gy)的 X 射线照射小鼠,然后取其肺、胸腺、小肠、脾组织.用逆转录多聚酶链反鹰(RT-PcR)法研究照射后24h不同组织中的VEGF mRNA表达水平.结果 经 4、8 Gy 射线照射后 24h,肠、肺组织 VEGFmRNA 表达水平与正常对照组相比,无显著差异(P＞0.05).脾、胸腺组织 VEGF mRNA 表达水平与正常对照组相比,均升高.4 Gy 射线照射后 VEGF mRNA 表达水平与其它剂量射线照射组相比显著升高(P＜0.01).结论 不同剂量辐射损伤后脾、胸腺组织 VEGF mRNA 表达增强,肠、肺组织 VEGF mRNA 表达变化差异不大,VEGF 可能对免疫系统比对其他组织的辐射防护作用大,这为放射性损伤的治疗提供了理论依据.     

大剂量60Co放疗后豚鼠咽鼓管TGF-β1的表达

目的 观察大剂量60Co放疗后豚鼠咽鼓管中转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达情况,探讨TGF-β1在放射性咽鼓管损伤中的作用.方法 健康成年豚鼠20只分为放疗组16只和对照组4只.放疗组一次性给予右耳耳颞部70 Gy60Co γ射线照射,照射结束后7 d、14 d分别处死动物各8只;对照组未进行放疗.动物处死后立...     

TNFR2基因敲除小鼠H22移植瘤生长特点和Treg数量与功能检测

目的 观察tmTNF-α/TNFR2信号轴对荷瘤鼠肿瘤生长影响及其机制.方法 采用Western blot检查H22荷瘤鼠肿瘤微环境中Treg细胞TNFR1及TNFR2的表达.TNFR2敲除BALB/c小鼠和野生型鼠各10只,在TNFR2敲除的BALB/c小鼠皮下接种H22肝癌细胞株,观察肿瘤直径及肿瘤微环境中Treg的募集数量,同时以野生型小鼠做对照.用tmTNF-α刺激Treg细胞,ELISA检测上清IL-10和TGF-β的含量.结果 荷瘤鼠微环境中Treg细胞TNFR2表达明显高于野生型小鼠脾脏Treg细胞(P＜0.05),而TNFR1表达未见明显变化;TNFR2基因敲除鼠肿瘤直径明显低于野生型小鼠(P＜0.05),且肿瘤微环境中Treg细胞数量也明显少于野生型小鼠(P＜0.05).在体外tmTNF-α可以促进Treg细胞产生IL-10和TGF-β(P ＜0.05).结论 TNFR2基因敲除小鼠肿瘤生长减缓,肿瘤局部微环境中Treg细胞减少,同时tmTNF-e能够刺激Treg细胞释放抑炎因子IL-10和TGF-β,增强其免疫抑制功能.     

TGF-β1、TNF和维拉帕米对烧伤小鼠CD14表达的影响

目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子(TNF)和维拉帕米对严重烧伤小鼠早期腹腔巨噬细胞(Mψ)CD14表达的影响.方法:BALB/c小鼠被随机地分成烧伤组和假烫组,将收集到的腹腔巨噬细胞分别加入不同浓度TGF-β1(0.02,0.20,2.00μg/ml)、TNF(0.1,1.0,10.0 μg/ml)和维拉帕米(10,100,1 000 pm01/ml)培养.用细胞原位杂交方法,观察TGF-β1、TNF和维拉帕米对小鼠MψCD14 mRNA表达的影响.结果:(1)烧伤后腹腔MψCD14 mRNA的表达明显增加.(2)0.02,0.20 μg/ml TGF-β1可使烧伤小鼠MψCD14 mRNA表达增加,2 μg/ml则可使烧伤小鼠MψCD14 mRNA表达减少.TNF、维拉帕米各浓度对烧伤小鼠MψCD14 mRNA表达均无明显影响.结论:TGF-β1能通过改变MψCD14 mRNA的表达,调节其功能状态.TNF、维拉帕米对烧伤小鼠MψCD14 mRNA表达无明显影响.     

电离辐射对小鼠胸腺和脾细胞MDM2 mRNA和蛋白表达的影响

目的 :探讨 X射线全身照射诱导小鼠胸腺和脾细胞 G1期阻滞的分子机制。方法 :采用流式细胞术和斑点印迹杂交检测 X射线全身照射后昆明系小鼠胸腺和脾细胞中 MDM2 m RNA和蛋白表达的变化。结果 :2 Gy X射线全身照射后 4～ 8h小鼠胸腺细胞 MDM2蛋白的表达明显升高(P<0 .0 5)。时效和量效观察发现 ,无论是 75m Gy还是 2 Gy X射线全身照射 ,小鼠胸腺和脾细胞中 MDM2 m RNA水平在照后 1～ 48h均未见明显变化 ;0 .5～ 6Gy X射线全身照射后 4h,胸腺和脾细胞中 MDM2 m RNA转录亦未见显著改变。结论 :X射线全身照射可诱导小鼠淋巴细胞MDM2蛋白表达 ,从而限制 G1期阻滞的时间 ,使 DNA损伤修复后的细胞重新进入细胞周期     

慢性乙型肝炎患者外周血CD+4CD+25调节性T细胞与转化生长因子β1水平变化及其意义

目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血CD+4CD+25调节性T细胞(tregulatory cell,Treg)、转化生长因子β1(transforming growth factor β1, TGF-β1)水平变化及临床意义.方法 选择105例CHB患者为病例组,其中依患者病情分为轻、中、重度组;选择26例健康体检正常者为对照组.用流式细胞仪检测外周血中Treg表达水平;用双抗夹心ELISA法检测血清TGF-β1;用PCR法检测患者HBV-DNA载量.结果 CHB患者组Treg、TGF-β1水平明显高于对照组,差异均有统计学意义.Treg水平与TGF-β1水平呈正相关.结论 CHB患者Treg、TGF-β1表达增加,提示Treg、TGF-β1在CHB中担负着重要的免疫调节作用,可能抑制CHB患者特异性细胞免疫反应,与HBV感染的慢性化及肝病的临床发生、发展有关.