酶联荧光免疫分析技术检测粪便中艰难梭菌毒素A/B

目的应用酶联荧光免疫分析(ELFIA)技术及PCR联合检测粪便标本中艰难梭菌毒素A/B(CDAB),分析不同临床表现的住院患者粪便标本中CDAB的检出情况。方法收集北京大学第一医院2010年8月～11月242位住院患者粪便标本,用ELFIA法检测CDAB,对检测结果为可疑的标本用PCR复测。将患者分为非抗生素相关腹泻组和抗生素相关腹泻组,对两组的CDAB阳性率进行χ2检验,并分析检测结果与临床表现的相关性。结果 242位患者中,22例ELFIA法CDAB检测为阳性,12例检测结果为可疑。12例可疑标本有10例进行了PCR复测,8例(80.0%)CDAB基因阳性。两法联合检测共计30例为CDAB阳性,阳性率为12.4%。抗生素相关腹泻组CDAB阳性率(24.0%)显著高于非抗生素相关腹泻组(6.9%)(χ2=14.21,P<0.01)。CDAB阳性组的年龄(68.2±23.6)岁高于CDAB阴性组(58.7±23.9)岁(P<0.05)。结论 ELFIA法检测CDAB,有商品试剂盒,方法简便可靠。可疑阳性标本用PCR法检测tcdA/tcdB基因,可进一步提高阳性率。艰难梭菌毒素在抗生素相关腹泻患者检出率较高,与临床表现具有较好的相关性。     

67例住院腹泻患者艰难梭菌感染情况分析

目的掌握哈尔滨医科大学附属肿瘤医院住院腹泻患者艰难梭菌感染(CDI)情况,探究该菌株分子特征和CDI危险因素。方法收集住院腹泻患者的67份粪便标本,并实施厌氧分离培养。应用聚合酶链反应(PCR)检测艰难梭菌毒素基因tcdA、tcdB,二元毒素基因cdtA、cdtB,菌株进行多位点序列分型(MLST),并研究患者临床数据。结果检出产毒艰难梭菌10株(14.9%),毒素A基因和毒素B基因均为阳性有8株(80.0%),2株毒素B基因阳性(20.0%)。检出5种ST型。对CDI危险因素进行分析,应用氟喹诺酮类抗菌药物是艰难梭菌独立危险因素(OR=3.12,P=0.036)。结论哈尔滨医科大学附属肿瘤医院住院患者中存在部分CDI情况,使用氟喹诺酮类抗菌药物与CDI有关。     

住院患者艰难梭菌无症状感染的危险因素分析

目的 分析住院患者无症状感染艰难梭菌的毒力特征及危险因素,为艰难梭菌感染(CDI)性腹泻的防治提供理论依据。方法 收集住院患者的粪便标本。将其中的CDI患者分为CDI有腹泻组和CDI无腹泻组,将无腹泻症状且艰难梭菌培养阴性患者设为对照组。收集患者临床资料,将粪便标本进行艰难梭菌分离培养并进行艰难梭菌毒素检测,对临床资料及检测结果进行统计学分析。结果 CDI有腹泻组毒素蛋白阳性率高于CDI无腹泻组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示：使用抑酸剂、2个月内使用头孢菌素类抗菌药物、住院时间>2周是艰难梭菌无症状感染的独立危险因素(P<0.05)。结论 艰难梭菌产毒素量是导致临床是否出现腹泻症状的重要因素;住院时间>2周、使用抑酸剂、2个月内使用头孢菌素类抗菌药物均是艰难梭菌无症状感染的独立危险因素。     

炎症性肠病患者中艰难梭菌感染的分子流行特征

目的初歩研究上海仁济医院炎症性肠病患者中艰难梭菌的分子流行特征,为炎症性肠病患者中艰难梭菌感染的监控提供证据。方法对2014年6月-2015年6月的222份炎症性肠病腹泻患者粪便标本进行艰难梭菌毒素检测和厌氧培养。采用多位点序列分型(MLST)进行分型,传统PCR方法检测其毒素基因,琼脂稀释法检测艰难梭菌体外药物敏感性,同时对炎症性肠病患者所在病房进行环境中艰难梭菌检测。结果222份粪便标本中艰难梭菌的检出率为13.5%(30/222),克罗恩病和溃疡性结肠炎患者中艰难梭菌检出率为15.7%(22/140)和9.8%(8/82),病房环境共检出4株艰难梭菌。MLST分型22株艰难梭菌为14种ST型,主要型别为ST54型。PCR检测毒素基因显示;TaM+raffl+菌株为主(72.7%,16/22),未检出二元毒素。22株艰难梭菌对氯霉素、四环素、氨苄西林、甲硝唑、万古霉素和美罗培南均敏感,对克林霉素耐药率较高,为63.6%,8株对莫西沙星耐药。结论炎症性肠病腹泻患者中艰难梭菌毒素基因以TcdA+TcdB+型为主,菌株克隆以ST54型为主,该型菌株在病房环境中也有检出。应当密切监测炎症性肠病患者中艰难梭菌的感染毒素基因。     

艰难梭菌谷氨酸脱氢酶抗原及毒素检测试剂盒的性能评估

目的对新产品艰难梭菌谷氨酸脱氢酶抗原及毒素检测试剂盒(免疫层析法,C.DIFF QUICK CHEK COMPLETE)进行性能评估。方法收集临床腹泻患者粪便标本130份,对腹泻粪便标本同时进行艰难梭菌毒素A/B检测试剂盒、艰难梭菌谷氨酸脱氢酶抗原及毒素检测试剂盒和毒素培养检测,以金标准毒素培养法结果作为参比标准,评价各种检测方法的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值,从而对艰难梭菌谷氨酸脱氢酶抗原及毒素检测试剂盒进行性能评估。结果毒素培养法检测艰难梭菌的阳性率为13.8%(18/130)。与金标准方法相比,艰难梭菌谷氨酸脱氢酶抗原及毒素检测试剂盒的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为55.6%、98.2%、83.3%和93.2%,艰难梭菌毒素A/B检测试剂盒的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为50.0%、95.6%、64.3%和92.1%。结论艰难梭菌谷氨酸脱氢酶抗原及毒素检测试剂盒特异性高,阳性预测值较高,且检测周期短,无需特殊仪器平台,可作为医院门、急诊艰难梭菌感染的初筛试剂盒。     

Xpert艰难梭菌检测系统的临床应用评价

目的评估Xpert艰难梭菌检测系统的临床应用价值。方法选取43份腹泻粪便标本,采用厌氧培养法、VIDAS检测A/B毒素法和Xpert艰难梭菌检测系统检测艰难梭菌,以产毒培养法作为金标准对检测方法进行评价,并比较不同检测方法对临床标本检测结果的一致性。通过自配027型标准菌株模拟粪便标本,验证Xpert艰难梭菌检测系统筛选027型流行株的能力。结果以产毒培养法为金标准,Xpert艰难梭菌检测系统的敏感性和特异性分别为90.9%和93.8%,阳性和阴性预测值分别为83.3%和96.8%。与产毒培养法结果一致性检验Kappa值为0.822(P0.05),与VIDAS检测A/B毒素法结果一致性检验Kappa值为0.419(P0.05);027型标准菌株模拟粪便标本检测结果阳性并报告为027型。结论 Xpert艰难梭菌检测系统能够快速准确地检测粪便标本中的艰难梭菌相关基因,且能准确报告027型高产毒力菌株。     

艰难梭菌毒素基因检测及分子流行病学分析

目的了解腹泻患者艰难梭菌感染现状,并分析分离菌株的核糖体分型情况。方法收集161例住院腹泻患者粪便标本进行艰难梭菌毒素基因PCR检测,同时进行产毒培养法,并比较2种方法的一致性;对分离的艰难梭菌进行核糖体分型。结果艰难梭菌产毒培养法阳性率为9.94%(16/161),粪便艰难梭菌毒素基因阳性率为9.94%(16/161),2种方法结果差异无统计学(P0.05),一致性较好(Kappa0.75)。培养所得18株艰难梭菌中A、B毒素基因均阴性的2株(11.11%),tcdA~+tcdB~+产毒株15株(83.33%),tcdA~-tcdB~+1株(5.56%)。18株艰难梭菌核糖体分型分为16种型别(GS1～GS16),未发现核糖体分型027型菌株。结论艰难梭菌粪便毒素基因PCR检测可用于临床诊断,未发现本院艰难梭菌暴发流行。     

快速检测粪便中艰难梭菌的方法研究

目的建立可用于粪便中艰难梭菌快速检测的环介导恒温扩增(LAMP)方法。方法针对艰难梭菌毒素A基因,设计引物。采用LAMP对艰难梭菌和其他腹泻干扰菌及不同浓度艰难梭菌的扩增检测,对其特异性和灵敏度进行评价。同时采用LAMP和荧光定量PCR对100例疑似艰难梭菌感染的临床腹泻患者粪便进行检测,对两种方法进行比较。结果 LAMP对艰难梭菌及6种腹泻干扰菌的检测,只针对艰难梭菌有扩增,显示了较好的特异性。LAMP最低检测限为10CFU/mL,灵敏度较高。对100例临床粪便标本LAMP检测结果与荧光定量PCR比较差异无统计学意义(P>0.05,χ2=0.1429)。结论本研究建立的粪便中艰难梭菌的LAMP快速检测方法特异性好、灵敏度较高、操作简便,适用于艰难梭菌的临床快速检测及现场检测。     

产酸克雷伯菌是抗生素相关性出血性结肠炎的病原菌

抗生素相关性出血性结肠炎(antibiotics—associated hemorrhagic colitis,AHC)是抗生素相关性结肠炎(antibiot—ics—associated colitis,AAC)的一种独特类型,该类型肠炎中艰难梭菌培养及毒素检测均阴性。与艰难梭菌所引起的AAC不同的是,AHC在停用抗生素后能够自愈。目前AHC的病原菌尚不明确,本研究提示为产酸克雷伯菌。作者等研究22例AAC患者,均接受结肠镜检查,并对其粪标本进行艰难梭菌、空肠弯曲杆菌、沙门菌、耶尔森菌、志贺菌属、大肠埃希菌O157、产酸克雷伯菌培养并检测艰难梭菌毒素A。同时对385例健康志愿者的粪便进行产酸克雷伯菌培养及细胞毒素检测,采用E试验测定药敏。     

GeneXpert实时荧光定量PCR在诊断艰难梭菌感染中的临床应用

目的评价Gene Xpert实时荧光定量PCR法在诊断艰难梭菌感染中的应用价值。方法收集住院腹泻患者非重复粪便标本296份,同时进行Gene Xpert试验和产毒素培养(toxigenic culture,TC)。TC包括厌氧培养、菌株基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)鉴定、PCR扩增艰难梭菌毒素基因。以TC结果为参考,评价Gene Xpert试验的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值,并评价Gene Xpert试验和TC 2种方法结果的一致性。结果 Gene Xpert试验的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为98.5%、92.6%、91.7%和98.7%。Gene Xpert试验与TC一致性好(Kappa=0.905)。Gene Xpert试验报告2株RT027型高毒力菌株,经核糖体分型确证为RT027型艰难梭菌。结论 Gene Xpert实时荧光定量PCR可快速、准确检测粪便标本中的艰难梭菌毒素基因,且可报告高毒力RT027型菌株,具有重要的临床应用价值。