大肠埃希菌质粒型AmpC酶基因的检测分析

目的 调查大肠埃希菌质粒型Ampc酶基因的存在状况。方法 采用MH药敏平板对40株临床分离的大肠埃希菌进行抗菌药物敏感试验和ESBLs纸片法确诊,PcR方法检测DHA和ACT-1型Ampc酶基因。结果 40株大肠埃希菌呈多重耐药,20株ESBLs阳性菌AmpCM基因阳性率90％,20株ESBLs性菌Ampc酶基因阳性率45％,40株大肠埃希菌ACT-1和DHA基因阳性率分别为57．5％,40．0％,有12株大肠埃希菌同时携带ACT-1和DHA基因。结论 临床分离的大肠埃希菌多重耐药严重,质粒型AmpC酶基因携带率高。     

海南地区产质粒介导AmpC酶大肠埃希菌基因型研究

目的 了解海南地区产质粒介导AmpC酶大肠埃希菌基因型特点.方法 收集来自海南地区8所医院2009年度不重复临床分离的大肠埃希菌540株,分别采用纸片扩散法和三维试验进行表型筛选和AmpC酶检测,用接合试验证实酶基因型的转移性,通过PCR检测及序列分析进行质粒AmpC酶基因型确定,用E-Test法对产质粒AmpC酶株进行MIC测定.结果 540株大肠埃希菌中,头孢西丁抑菌环直径≤17mm的占22.8%(123/540),除五指山市菌株全部对头孢西丁敏感外,其他医院均有对头孢西丁的耐药株.酶提取物三维试验检测阳性的占1.90%(10/540),以PCR方法 对10株三维试验阳性大肠埃希菌进行基因检测,结果 6株在约462 bp处扩增出条带,经测序和比对结果 证实为CMY-2型质粒AmpC酶.10株产AmpC酶大肠埃希菌接合试验有2株接合阳性,接合子均扩增出CMY-2型条带.药敏结果 显示6株产质粒AmpC酶大肠埃希菌对3代头孢菌素、氨曲南和含酶抑制剂的敏感性极低,对亚胺培南和美罗培南均敏感.结论 海南地区存在产质粒介导的CMY-2型AmpC酶大肠埃希菌,药敏结果 显示对3代头孢菌素耐药率极高,但对亚胺培南和美罗培南均敏感.     

产质粒介导AmpC酶大肠埃希菌的基因型分布和耐药现状

大肠埃希菌广泛存在于自然界，属于肠道正常菌群，其作为条件致病菌是临床细菌感染的最常见病原菌之一。当机体免疫力低下时，大肠埃希菌可引起感染，其感染类型多样，感染部位也比较广泛。随着新的β-内酰胺类抗生素的临床应用，尤其是头孢菌素类在临床上的广泛使用，其耐药性问题日益严重。据文献报道，大肠埃希菌临床分离率逐年上升，对常见抗生素的耐药性也呈现出明显的上升趋势，且对多种抗生素同时耐药，是一种多重耐药菌，使其成为临床抗菌治疗中亟待解决的难题。近年来发现，染色体或质粒介导的超广谱β-内酰胺酶和AmpCβ-内酰胺酶能使多种β-内酰胺类抗生素失活，被认为是导致大肠埃希菌耐药的最重要的两类酶，     

宁波地区大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌质粒AmpC酶基因检测

目的 了解近三年宁波地区大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床分离株中质粒AmpC酶基因流行状态.方法 用K-B法对临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌作耐药表型分析,对可能产生Am-pC酶的菌株通过聚合酶链反应(PCR)检测AmpC酶基因,然后用三维试验予以证实.结果 140株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中,质粒AmpC酶基因阳性率2004、2005和2006年分别为4.4%(2/45)、8.6%(3/35)和13.3%(8/60);其中2004、2005年所检出的均为DHA基因型,2006年分别从2株大肠埃希菌和1株肺炎克雷伯菌中检出ACT-1基因.结论 宁波地区临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中质粒AmpC酶基因的流行率有增长趋势.     

用头孢西丁三相试验检测大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的质粒AmpC酶

目的：检测质粒介导的持续高产AmpC酶在大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌中的携带率，为临床治疗提供指导。方法：采用头孢西丁纸片药敏试验（K-B法）作AmpC酶的初筛试验，头孢西丁三相试验间接法作AmpC酶的确证试验。结果：在检测的86株菌中，有9株菌K-B法初筛结果为阳性。在这9株菌中经头孢西丁三相试验确证有5株产AmpC酶，阳性率为5.8%。其中大肠埃希菌3株，肺炎克雷伯菌2株。结论：头孢西丁K-B法筛选试验结合头孢西丁三相试验可准确检出质粒介导的AmpC酶，可用于临床常规检测。     

大肠埃希菌耐药特征及AmpC酶基因分析

目的：了解产生超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的大肠埃希菌耐药表型和AmpC酶基因型。方法：用双纸片扩散法和E-test筛选确认大肠埃希菌产ESBLs和AmpC酶菌株,通过PCR基因扩增对AmpC酶耐药基因型进行确认。结果：68株产生超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌中有1株为AmpC酶。结论：大肠埃希菌是产生ES-BLs的常见菌,同时产生AmpC酶的菌株使其耐药性增强,实验室对其检测和监控非常重要。     

45株大肠埃希菌产ESBLs和AmpC酶的调查及药敏结果分析

近年来,由于革兰阴性杆菌产生的超广谱β-内酰胺酶和高产AmpC酶引起的耐药问题在临床越来越受到重视.因此,作者对本院分离出的1000株大肠埃希菌进行ESBLs和高产AmpC酶的检测,并对产ESBLs同时高产AmpC酶的菌株进行药敏分析.现将结果报告如下:     

呼吸道标本中大肠埃希菌AmpC酶和ESBLs的检测及耐药性分析

目的 对呼吸道标本中大肠埃希菌AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)进行检测,并分析其耐药性,指导临床合理用药.方法 采用改良三维实验法,分别对所分离的280大肠埃希菌进行AmpC酶 ESBLs测定,K-B法进行药敏测定.结果 大肠埃希菌AmpC酶、ESBLs、AmpC酶 ESBLs检出率分别为1.3%、22.3%、2.3%,AmpC酶和EsBLs总检出率分别为3.1%和26.6%.产酶(单产AmpC酶、ESBLs及同时产AmpC酶 ESBLs)菌株对17种监测抗生素(除亚胺培南全部敏感外)的耐药率均高于平均水平.结论 大肠埃希菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要原因是产生AmpC酶和ESBLs,对产酶菌株临床经验用药可选用碳青霉烯类抗生素.     

大肠埃希菌AmpC酶检测及2010年CLSI降低三代头孢菌素药敏折点对其药敏影响评估

目的 了解佛山市禅城区中心医院大肠埃希菌产AmpC酶情况及2010年美国临床实验室标准化委员会(CLSI)降低三代头孢菌素折点后对其药物敏感性的改变.方法 收集2010年6月至2011年1月大肠埃希菌814株,对于头孢西丁耐药者采用酶提取物三维试验方法检测AmpC酶,及用双纸片扩散试验检测ESBLs,药敏结果与2010年CLSI更新标准作比较,评估更新后对三代头孢菌素的耐药性改变.结果 814株大肠埃希菌中检出AmpC酶68株,产ESBLs共188株,检出率分别为8.4%和23.1%.814株大肠埃希菌在折点更新前对头孢他啶、头孢噻肟及头孢曲松的耐药率分别为24.1%、24.8%及25.3%,折点更新后耐药率为21.6%、24.1%、25.3%;产酶大肠埃希菌对抗生素的耐药率大部分均高于不产酶菌株.结论 2010年三代头孢菌素折点改变后头孢他啶的耐药率有所下降,我院产AmpC酶的大肠埃希菌日益增多且呈多重耐药,为临床经验用药应首选.     

产AmpC酶大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性研究

目的 了解本地产AmpC酶大肠埃希菌(escherichia coli,E.cold对氨基糖苷类抗生素(aminoglyco-sides,AGs)的耐药情况,分析氨基糖苷修饰酶(aminoglycoside modifying enzymes,AMEs)基因与AmpC酶、AGs耐药表型之间的相互关系.方法 头孢西丁三维试验方法,检测产AmpC酶菌株;用KB纸片扩散抗生素做药敏试验以及采用PCR技术检测AMEs基因.结果 分离出产AmpC酶的菌株9株(11.69%);产酶菌对氨基糖苷类抗生素的耐药及交叉耐药率明显高于非产酶菌株,其中耐3种及以上AGs差异有统计学意义(P<0.05);产酶菌株AMEs基因携带率高于非产酶菌株,以aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰ、ant(3")-Ⅰ等3种基因明显(P<0.05).结论 产AmpC酶菌株耐药对AGs耐药率亦高于非产AmpC酶菌株,提示AmpC酶与AMEs基因导致的耐药存在一定的相关性.     

临床分离大肠埃希菌和克雷伯菌质粒介导AmpCβ内酰胺酶的研究

目的 研究儿科临床大肠埃希菌和克雷伯菌中质粒介导AmpC β内酰胺酶的检出率和基因型.方法 收集2009年1至12月北京儿童医院住院患儿中分离的大肠埃希菌和克雷伯菌.采用头孢西丁纸片扩散法进行大肠埃希菌和克雷伯菌AmpC酶表型初筛,对AmpC酶表型阳性大肠埃希菌和克雷伯菌用多重聚合酶链反应(PCR)方法测定质粒AmpC酶MOX、CIT、DHA、ACC、MIR及FOX基因型.结果 大肠埃希菌和克雷伯菌中,共筛选出65株对头孢西丁不敏感的菌株,经多重PCR扩增,有17株AmpC酶DHA型基因阳性,DHA型质粒AmpC酶的总检出率为26.2%.其中,肺炎克雷伯菌14株DHA-1基因阳性,检出率为38.9%(14/36);大肠埃希菌2株DHA-1基因阳性,检出率为7.7%(2/26);产酸克雷伯菌1株DHA-1基因阳性,检出率为33.3%(1/3).其余48株质粒AmpC酶MOX、CIT、DHA、ACC、MIR及FOX型基因均为阴性.结论 儿科临床分离的大肠埃希菌和克雷伯菌中,均有质粒介导DHA-1型AmpC酶的产生,其中肺炎克雷伯菌的产生率更高.     

大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌连续分离株质粒AmpC基因研究

目的 研究大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌连续分离株质粒AmpC基因情况和耐药性.方法 应用聚合酶链反应(PCR)法对耐药的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌连续分离株进行AmpC酶DHA和ACT-1基因检测和分析.结果 68株大肠埃希菌中ACT-1基因阳性4株(5.9%),DHA基因全为阴性;44株肺炎克雷伯菌中DHA基因阳性4株(9.1%),ACT-1基因全为阴性.结论 质粒型AmpC酶基因可通过转化、接合等方式转移给其他同种或不同种菌,易于传播,应加强监测.     

超广谱AmpC酶的研究进展

革兰阴性杆菌产AmpC酶是继产超广谱β-内酰胺酶之后出现的对β-内酰胺类抗菌药物的另一种主要耐药机制。最近在临床肠杆菌科中出现了一种新的AmpC酶——超广谱AmpC酶(ESAC),它由传统的AmpC酶通过氨基酸缺失、插入或置换得来,这些结构的改变增强了其对β-内酰胺类抗菌药物的水解活性。文章在传统AmpC酶研究的基础上,对ESAC的发现和流行情况、结构改变与功能的关系及产ESAC细菌对β-内酰胺类药物的耐药情况做一综述。     

衰减子基因突变导致临床大肠埃希菌高产头孢菌素酶的研究

目的研究临床分离的一株大肠埃希菌中衰减子基因突变对头孢菌素酶（AmpC）基因表达以及耐药表型的影响。方法用三维试验、等电聚焦、酶抑制试验以及微量稀释法等对临床分离的一株大肠埃希菌进行表型检测。采用聚合酶链反应（PCR）、基因测序以及比对等方法对调节基因进行扩增、分析,并把调节基因克隆到pCAT3-basic（无启动子的报告基因载体）上,用酶联免疫法（直接法）和最小抑菌浓度测定（间接法）等方法对基因表达进行研究。结果与标准菌株大肠埃希菌K-12AmpC基因相比,受试菌的衰减子区出现了4个碱基22C—T,26、27TA—GT,32G—A的替换。该株菌三维试验阳性,等电聚焦以及酶抑制试验表明该菌株能产3种等电点（PI）,分别为5．4、8．2及9．0的B一内酰胺酶,等电点为9．0的β-内酰胺酶能够被氯唑西林抑制而不能被克拉维酸抑制。微量稀释法检测表明,该菌株不但对多种三代头孢菌素耐药,而且对头孢吡肟耐药,但对碳青霉烯类抗生素仍敏感。把它的AmpC调节基因成功地克隆到报告基因载体pCAT3-basic中,直接和间接检测表明突变的调节基因表达CAT蛋白的水平比敏感菌株调节基因高约10倍。结论大肠埃希菌衰减子突变能够导致AmpC基因高表达而对多种β-内酰胺类抗生素表现耐药。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中ESBLs酶和AmpC酶的检测结果分析

目的:了解对头孢菌素类耐药的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中ESBLs和AmpC酶的分布及其对抗生素的敏感性。方法:利用双纸片协同试验及纸片法确证试验检测ESBLs,三相试验检测AmpC酶,并用纸片扩散试验和微量稀释法测定细菌对抗生素的敏感性。结果:从头孢噻肟耐药的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中检出产ESBLs分别为91.4%和96.7%;产AmpC酶分别为17.1%和10.0%;产SSBL分别为8.6%和6.7%。产酶菌株对三代头孢菌素高度耐药,对环丙沙星、庆大霉素及复方新诺明耐药率较高,对亚安培南敏感,产AmpC酶细菌对含酶抑制剂的复合抗生素高度耐药。结论:产生ESBLs和AmpC酶是大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对头孢菌素耐药的重要机制,实验室应对其检测和监测给予足够重视,临床医生也应了解其对抗生素的耐药规律。     

从大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中检出质粒介导的AmpC DHA-1型β内酰胺酶基因

目的 了解产质粒介导AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性和基因型.方法 收集2002年1月-2004年5月间我院呼吸科临床标本中分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌共110株,用酶提取物三维试验检测AmpC酶;用等电聚焦电泳、耐药质粒电转化试验、聚合酶链反应(PCR)及测序确定AmpC酶基因型.结果 大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中AmpC酶检出率分剐为9.30%和4.48%.药敏试验显示产酶株对头孢西丁全部耐药,对第三代头孢菌素、酶抑制剂、氨曲南、阿米卡星及环丙沙星均有不同程度耐药,对头孢吡肟及亚胺培南较敏感.7株产AmpC酶菌株中有5株通过电转化试验可将头孢西丁耐药性传递给受体菌,经PCR扩增和测序证实为质粒介导DHA-1型AmpC酶.结论 我院临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中已经出现产质粒介导AmpC酶菌株,其耐药性能够水平传播,给临床抗感染治疗带来重大威胁.