鲍曼不动杆菌临床分离株16S rRNA甲基化酶基因研究

目的 了解临床分离鲍曼不动杆菌(ABA)氨基糖苷类药物耐药性与16S rRNA甲基化酶基因存在的关系,探讨多药耐药机制.方法 收集临床标本20株鲍曼不动杆菌,采用K-B法测定细菌对卡那霉素、阿米卡星、妥布霉素、庆大霉素、奈替米星的敏感性;采用PCR法检测armA、rmtA、rmtB、rmtC和rmtD 5种16S rRNA甲基化酶基因.结果 19株鲍曼不动杆菌对上述5种氨基糖苷类药物全部耐药,1株对阿米卡星敏感,对另外4种表现为中度耐药.基因检测显示armA阳性率为90％,且armA基因存在变异,未检测到rmtA、rmtB、rmtC和rmtD基因.结论 鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物耐药情况严重,16S rRNA甲基化酶基因armA为本次临床分离菌株耐药的主要原因,且armA基因存在变异.     

天津地区鲍曼不动杆菌16SrRNA甲基化酶基因的检测与耐药性分析

目的:了解天津地区鲍曼不动杆菌16SrRNA甲基化酶基因的携带情况,并进行耐药分析.方法:收集天津地区2所医院2010年8月-12月临床分离的152株鲍曼不动杆菌,采用琼脂稀释法或纸片扩散法测定菌株药敏情况;聚合酶链反应(PCR)对鲍曼不动杆菌扩增7种16SrRNA甲基化酶基因(armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、rmtE、npmA)并测序.结果:152株鲍曼不动杆菌对多黏菌素B的耐药率最低(0),其次是头孢哌酮/舒巴坦(15.79％)和左氧氟沙星(36.84％),对其他11种抗菌药物耐药率均在45％以上.83株耐氨基糖苷类菌株中armA阳性率为87.95％ (73/83),占实验菌株的48.03％(73/152),未检出其他6种16SrRNA甲基化酶基因.armA阳性菌株耐药严重,除多黏菌素B外,armA阳性菌株对其余13种抗菌药物的耐药率明显高于armA阴性菌株(均p＜0.01).多重耐药和泛耐药占的比例在armA阳性株中(100％和69.86％)也明显高于阴性株(21.52％和11.39％).结论:armA广泛存在于鲍曼不动杆菌中,未检出其他6种基因.     

氨基糖苷类药物双圈耐药型鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶基因研究

目的 探讨在K-B法药物敏感试验中对氨基糖苷类药物双圈耐药的鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶基因携带状况以及药物诱导对该基因mRNA表达量的影响.方法 收集42株鲍曼不动杆菌,K-B法测定其药敏情况;PCR法扩增三种16S rRNA甲基化酶基因armA、rmtB及rmtC;用RT-PCR的方法分析阿米卡星诱导前后耐药基因表达量.结果 90.4％(38/42)的菌株阿米卡星药敏纸片周围呈现双圈耐药,且均检测到armA,未检测到rmtB及rmtC,其余3株为敏感,1株为普通耐药,且PCR检测耐药基因为阴性.RT-PCR结果显示经阿米卡星诱导后细菌armA基因mRNA表达量显著上升.结论 双圈耐药现象与armA基因诱导型表达有关.     

鲍曼不动杆菌质粒上氨基糖苷类耐药基因的研究

目的探讨鲍曼不动杆菌(Acinotobacter baumannii)对氨基糖苷类抗生素的耐药性及其耐药机制。方法对71株MDR A.baumanni用VITEK分析仪进行药敏分析,通过PCR和测序探索质粒上的相关耐药基因(aaaCl,aacC2,aacC3,aacA4和armA)。结果 71株A.baumanni对庆大霉素、妥布霉素和阿米卡星的耐药率分别为100%、73%和20%,其中20%的菌株对3种氨基糖苷类抗生素完全耐药,且aaaCl、aacA4和armA基因阳性率分别为100%、100%和84.5%。结论质粒上广泛携带aacCl、aacA4和armA基因是鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类抗生素多重耐药的主要机制之一。     

鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶与氨基糖苷修饰酶基因检测研究

目的了解高水平耐氨基糖苷类鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶、氨基糖苷修饰酶基因的流行情况。方法从2008年9月至2011年1月收集的110株鲍曼不动杆菌,琼脂二倍稀释法测定其对6种氨基糖苷类抗生素的药物敏感性,并筛选出对阿米卡星MIC≥256μg/mL的60株鲍曼不动杆菌,PCR法检测7种甲基化酶基因(armA、rmtA-rmtE、NpmA)和3种氨基糖苷修饰酶基因(aac(6′)-Ib、ant(3″)-Ia、aph(3′)-I)。结果鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类高水平耐药率较高(46.4%～65.4%),armA、aac(6′)-Ib、ant(3″)-Ia、aph(3′)-I的基因检出率分别为66.7%(40株)、51.7%(31株)、81,7%(49株)、58.3%(35株),其余基因未检出。结论鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类抗生素的高度耐药性与16S rRNA甲基化酶基因及氨基糖苷修饰酶基因有关。     

铜绿假单胞菌临床分离株16S rRNA甲基化酶基因研究

目的:了解临床分离铜绿假单胞菌氨基糖苷类药物耐药性与16SrRNA甲基化酶基因的关系,探讨多药耐药机制。方法:收集20株铜绿假单胞菌临床标本,采用K-B法检测20株铜绿假单胞菌对卡那霉素、阿米卡星、妥布霉素、庆大霉素、奈替米星的敏感性;采用PCR法检测5种(armA,rmtA,rmtB,rmtC,rmtD)16SrRNA甲基化酶基因。结果:10株铜绿假单胞菌对上述5种氨基糖苷类药物全部耐药,1株对阿米卡星敏感,对另外4种药物表现为耐药,6株对1~2种药物表现为耐药,其余3株对5种药物全部敏感。基因检测显示rmtB和armA阳性率为15%,未检测到rmtA,rmtC,rmtD基因。结论:铜绿假单胞菌对氨基糖苷类药物耐药情况严重,并在其中检出16SrRNA甲基化酶基因,应引起重视。     

多重耐药鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶研究进展

氨基糖苷类抗生素在治疗鲍曼不动杆菌引起的感染中起着重要的作用.而鲍曼不动杆菌对该类抗生素的耐药机制主要包括产氨基糖苷修饰酶,外膜孔蛋白表达缺失,药物外排泵的表达和核糖体结合位点的改变等.质粒介导的16S rRNA甲基化酶是近年在多重耐药鲍曼不动杆菌中发现的一种新的耐药机制,可导致对氨基糖苷类抗生素的高水平耐药.本文就细菌rRNA的修饰作用、16S rRNA甲基化酶的发现、耐药与传播机制、耐药菌的流行、多重耐药鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶基[因的研究进展等方面作一综述.     

氨基糖苷类修饰酶基因aac(2 ')-Ⅰb型在耐药鲍曼不动杆菌中流行

目的 调查一组耐药鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类的耐药机制.方法 收集2013年1至3月江苏省淮安市第一人民医院住院患者标本中分离到的鲍曼不动杆菌共32株,用分子鉴定法确认为鲍曼不动杆菌,再用聚合酶链反应(PCR)方法分析9种氨基糖苷类修饰酶基因与7种16S rRNA甲基化酶基因.结果 本组32株耐药鲍曼不动杆菌共检出5种氨基糖苷类修饰酶基因:aac(2')-Ⅰb 32株(100.0％)、aac(3)-Ⅰ 15株(46.9％)、aac(6')-Ⅰb 19株(59.4％)、ant(3")-Ⅰ 20株(62.5％)、aph(3')-Ⅰ 19株(594％),与1种16S rRNA甲基化酶基因armA 25株(78.1％).阳性基因共分为7种检测模式,其中以aac(2')-Ⅰb+ aac(3)-Ⅰ+ aac(6')-Ⅰb+ ant(3")-Ⅰ+ aph(3')-l+armA等6种基因均阳性的模式最高,为12株(37.5％).结论 产5种氨基糖苷类修饰酶基因(aac(2')-Ⅰb、aac(3)-Ⅰ、aac(6')-Ⅰb、ant(3")-Ⅰ、aph(3)-Ⅰ)与1种16S rRNA甲基化酶基因armA是本组耐药鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类耐药的重要原因.在鲍曼不动杆菌临床分离株检出aac(2')-Ⅰb型氨基糖苷类修饰酶基因为国内首次报道.     

颅脑外伤者痰标本鲍曼不动杆菌多重耐药性及机制研究

目的了解浙江湖州解放军第98医院分离自颅脑外伤者痰标本鲍曼不动杆菌的（Acinetobacter baumannii）多重耐药性以及耐药机制。方法收集自2000年7月至2002年12月所分离到的27株鲍曼不动杆菌，采用ATB药敏试验条板微量肉汤法测定14种抗菌药物的敏感性，采用聚合酶链反应及序列分析的方法检测16种耐药相关基因，采用Average法对耐药基因进行聚类分析。结果除1号株外，其余26株均同时耐经典β-内酰胺类、氨基糖苷类和环丙沙星等抗生素，这些菌株在其染色体编码基因（gyrA基因）存在突变的同时还获得了1～2种β-内酰胺酶基因和1～4种氨基糖苷类修饰酶基因。根据耐药基因的聚类分析该27株鲍曼不动杆菌可分三群，为院内感染所致。结论鲍曼不动杆菌已呈多重耐药，β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶基因携带率较高，gyrA基因突变是对环丙沙星耐药的主要原因。     

鲍曼不动杆菌整合子阳性与多重耐药的相关性研究

目的在鲍曼不动杆菌中检测1~3类整合子,并分析整合子对细菌多重耐药性的影响。方法用琼脂二倍稀释法测定24种抗菌药物对临床分离68株鲍曼不动杆菌的抗菌活性,用聚合酶链反应进行整合子的初筛,对整合子阳性的菌株进行测序,并分析其多重耐药性。结果在68株临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌中,发现19株I类整合子阳性,占27.9%;未检测到II、III类整合子。整合子阳性菌株对青霉素类(哌拉西林)、头孢菌素类(头孢噻肟、头孢哌酮、头孢曲松、头孢他啶、头孢吡肟)、氨基糖苷类、四环素类均呈现出高度耐药为86.7%~100%;对第3代头孢菌素类(头孢噻肟、头孢哌酮、头孢曲松)为100%耐药;对β内酰胺酶抑制剂复合制剂耐药率也达82.5%以上。比较整合子阳性与整合子阴性鲍曼不动杆菌耐药性,发现对氨基糖苷类、磺胺类抗菌药物耐药率差异有统计学意义。结论鲍曼不动杆菌耐药性严重,I类整合子广泛地存在于鲍曼不动杆菌中,I类整合子阳性菌株对氨基糖苷类、磺胺类抗菌药物的耐药率大于整合子阴性的菌株,提示整合子对细菌耐药性的播散有重要作用。     

多重耐药大肠埃希菌16S rRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解多重耐药大肠埃希菌(ECO)氨基糖苷类药物耐药机制。方法采用PCR检测20株多重耐药ECO菌11种16S rRNA甲基化酶和氨基糖苷类修饰酶基因。结果1株检出16S rRNA甲基化酶基因(5.0%),并为新亚型;16株检出氨基糖苷类修饰酶基因(80.0%)。15号株rmtB基因测得序列翻译成氨基酸序列与美国核酸库(GenBank)已登录的rmtB氨基酸不同,为新亚型。结论本组多重耐药ECO菌氨基糖苷类耐药机制与产16S rRNA甲基化酶和产氨基糖苷类修饰酶相关。多重耐药ECO菌存在新的氨基糖苷类药物耐药机制。     

Prevalence of β-lactamases and 16S rRNA methylase genes amongst clinical Klebsiella pneumoniae isolates carrying plasmid-mediated quinolone resistance determinants

To characterise the prevalence of β-lactamases and 16S rRNA methylase genes amongst clinical Klebsiella pneumoniae isolates carrying plasmid-mediated quinolone resistance (PMQR) determinants in China, 59 non-duplicate K. pneumoniae isolates harbouring at least one PMQR gene were screened for common β-lactamases and 16S rRNA methylases genes. The genetic relatedness of the isolates was analysed by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). Most of PMQR gene-positive isolates carried no substitutions within the quinolone resistance-determining regions (QRDRs) or single point mutation in GyrA or ParC. Over one-half (52.5%) of the isolates exhibited decreased susceptibility to ciprofloxacin [minimum inhibitory concentration (MIC)=0.5-2 μg/mL] or low-level resistance to ciprofloxacin (MIC=4-8 μg/mL). qnr, aac(6')-Ib-cr and qepA were positive in 52 (88.1%), 16 (27.1%) and 3 (5.1%) isolates, respectively. The identified genes for β-lactamases were distributed as follows: bla(TEM), 50.8%; bla(SHV), 91.5%; bla(CTX-M), 55.9%; bla(DHA), 59.3%; and bla(OXA-1), 22.1%. armA and rmtB were detected in 16.9% and 3.4% of isolates, respectively. All qnrB were detected in DHA-producing K. pneumoniae. Approximately 81.3%, 68.8% and 43.8% of aac(6')-Ib-cr carrying isolates produced OXA-1, DHA and ArmA, respectively. In conclusion, owing to few QRDR substitutions, most of the PMQR gene-carrying K. pneumoniae isolates exhibited low-level resistance to fluoroquinolones. qnr appears to be the predominant PMQR gene and it presented a significant correlation with bla(SHV), bla(CTX-M) and bla(DHA), whereas aac(6')-Ib-cr exhibited a close relationship with bla(OXA-1), bla(DHA) and armA. qepA was rarely detected in this study.     

广州三所医院鲍曼不动杆菌携带耐消毒剂基因及耐药基因的调查

目的 了解临床分离鲍曼不动杆菌携带耐消毒剂基因及耐药基因的情况.方法 收集广州地区3所三甲医院60株鲍曼不动杆菌,采用琼脂扩散法检测菌株对13种抗菌药物的药敏结果;聚合酶链反应（PCR）方法检测qacA/B、qacG、smr、qacEA1等4种耐消毒剂基因和Isabal、tnp513、PER-1和armA等4种耐药基因.结果 60株鲍曼不动杆菌主要见于重症监护病房（ICU）、烧伤科和呼吸内科,分别为33株（55.0％）、11株（18.3％）、8株（13.3％）,其余为重症监护病房1株（1.7％）、神经外科1株（1.7％）、其他6株（10.0％）.其中40株（66.7％）标本来自下呼吸道,另有创面分泌物9株（15.0％）、血7株（1 1.7％）、尿2株（3.3％）、引流物2株（3.3％）.60株鲍曼不动杆菌均为多重耐药菌,对亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、四环素、环丙沙星、阿米卡星和复方新诺明等抗菌药物耐药率分别为91.7％ （55/60）、98.3％（59/60）、98.3％（59/60） 、96.6％（58/60）、96.7％ （58/60）、78.3％ （47/60）和86.7％（52/60）,对其他抗菌药物耐药率大于70.0％;PCR结果显示,qacE△1、Isaba1、PER-1和armA基因阳性率分别为78.3％ （47/60） 、85.0％（51/60）、16.7％（10/60）和88.3％ （53/60）;qacA/B、qacG、tnp513和smr 4种基因检测结果为阴性.结论 鲍曼不动杆菌对广谱抗菌药物耐药严重,并携带了耐消毒剂基因.应规范此类抗菌药物的使用并采取相应的消毒措施防止多重耐药菌株在院内传播.     

70株鲍曼不动杆菌耐药性及β-内酰胺酶基因型检测

目的调查和研究南京地区70株鲍曼不动杆菌耐药性及β内酰胺酶基因型。方法用KB法测定临床分离的70株鲍曼不动杆菌对5种抗生素的耐药性,采用PCR法检测β-内酰胺酶耐药基因型。结果70株鲍曼不动杆菌对头孢哌酮／舒巴坦耐药率为7．1％,头孢吡肟和头孢他啶的耐药率分别为61．4％和64．3％,头孢唑啉和头孢呋肟的耐药率均在80．0％以上;有40株菌检测到TEM型β-内酰胺酶基因,且均对头孢吡肟等抗生素耐药,2株为GES型,1株是VEB型,未检出CARB、DHA和PER基因。结论南京地区鲍曼不动杆菌以TEM型为主,其对β-内酰胺类的高耐药率与TEM型基因有直接的关系。     

临床分离鲍曼不动杆菌耐药性及qnr基因检测

目的了解临床分离鲍曼不动杆菌中qnr基因和ESBLs基因的分布及其耐药特征。方法采用PCR法对115株鲍曼不动杆菌进行qnrA、qnrB、qnrS基因筛查,并用PCR法检测qnr阳性菌株SHV、TEM、CTX-M-14及CTX-M-3型ESBLs基因;用琼脂对倍稀释法测定15种抗菌药物对qnr阳性株的MIC值。结果115株鲍曼不动杆菌中,2株(1.74%)细菌检出qnrB基因;qnr阳性菌株同时检出SHV、CTX-M-14、TEM、CTX-M-3型ESBLs基因。1株qnr阳性菌株对4种喹诺酮类耐药,1株对左氧氟沙星及莫西沙星中介,对环丙沙星和洛美沙星耐药;2株阳性菌除对亚胺培南和头孢哌酮/舒巴坦敏感外,对其他的β-内酰胺类抗菌药物均耐药。结论临床分离鲍曼不动杆菌中存在qnrB基因,qnr阳性株同时含有ESBLs基因,且呈多重耐药,临床应加强监测。     

鲍曼不动杆菌Ⅰ类整合子与多重耐药相关性研究

目的 了解临床分离鲍曼不动杆菌的耐药状况、Ⅰ类整合子的分布情况,探讨Ⅰ类整合子与多重耐药的关系.方法 检测20种临床常用抗菌药物对鲍曼不动杆菌临床分离株的最低抑菌浓度(MIC).PCR扩增Ⅰ类整合酶基因.对部分Ⅰ类整合酶阳性菌株进行耐药基因盒序列分析.结果 鲍曼不动杆菌呈现多重耐药,鲍曼不动杆菌对IMP和MRP耐药率分别为0.9%和1.8%,对CPZ/SB的耐药率为35.7%,对其它抗菌药物的耐药率均大于60%,多重耐药率为76.8%(86/112),但对COL和MIN均敏感.80.4%(90/112)的菌株检测出Ⅰ类整合子.Ⅰ类整合子阳性株对多种药物的耐药率均高于阴性株,且Ⅰ类整合子阳性株多重耐药率(90%)明显高于阴性株(22.7%)(P<0.01).Ⅰ类整合子基因盒序列分析显示,Ⅰ类整合子携带aacA4,catB8和aadA13种耐药基因.结论 Ⅰ类整合子在鲍曼不动杆菌中检出率很高并与其多重耐药性关系密切.     

一株特殊耐药表型肺炎克雷伯菌的耐药机制研究

目的 研究对氨基糖苷类抗生素产生特殊耐药现象（双抑菌圈）的肺炎克雷伯菌的耐药表型和耐药机制.方法 用K-B法、E-test法、三维试验等方法对其耐药表型进行研究.采用聚合酶链反应（PCR）技术对7种氨基糖苷类钝化酶基因、2种核糖体甲基化基因和Ⅰ类整合子进行检测,并对PCR产物测序.结果 细菌的这种特殊耐药表型是稳定的;PCR结果表明：这株菌含有Aac（3）-Ⅱ钝化酶基因、armA核糖体甲基化耐药基因和1000bp左右的Ⅰ类整合子.结论 这株菌对氨基糖苷类抗生素的耐药是多种耐药机制相互作用的结果.但是这尚不能满意地解释这种特殊的耐药现象,其机理有待进一步研究.     

安徽地区耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌分子流行病学研究

目的 研究安徽地区耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌(carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii, CRAB)的耐药性、碳青 霉烯酶基因型及分子流行病学研究,为控制医院感染提供理论依据。方法 收集安徽地区43家三级医院2015年9月和2016年9月 CRAB非重复菌株312株,从中挑选出两年内均有CRAB的医院12家,菌株147株。对挑选出的147株CRAB采用琼脂稀释法测定 16种抗菌药物的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC);PCR扩增碳青霉烯酶耐药基因;采用多位点序列分型技 术(multilocus sequence typing, MLST)进行分子分型,使用eBURST软件分析菌株亲缘性。结果 147株临床分离的CRAB均为多 重耐药菌株,对16种抗菌药物耐药性均较高,其中对替加环素和米诺环素耐药性较低,分别为9.27%和54.26%。147株CRAB中 有134株携带blaOXA-23基因,1株携带blaOXA-24 基因,4株携带blaIMP基因,全部携带blaOXA-51基因,其余碳青霉稀类耐药基因均未检 出。147株CRAB分为26个ST基因型,其中13个ST分型属于CC92克隆群,ST195有48株,为安徽地区最常见ST型,另外新发现 15个ST基因型。结论 本研究中安徽地区147株CRAB对临床常用抗生素耐药性严重,除替加环素和米诺环素外,耐药率均在 76%以上。blaOXA-51是位于染色体上的固有基因,检出率为100%;blaOXA-23 是安徽地区最主要的碳青霉烯酶基因型,检出率为 91.15%。CC92为安徽地区最主要克隆群,与世界流行克隆群一致。本研究所测147株菌株间存在进化间关系,提示可能存在水 平传播趋势。