CaMKⅡ信号通路在黄芪多糖抑制异丙肾上腺素诱导心肌细胞肥大中的作用

目的从钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/calmodulin-de-pendent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)信号通路角度探讨黄芪多糖(astragalus polysaccharides,APS)对异丙肾上腺素(isoprot-erenol,Iso)诱导心肌细胞肥大的保护作用及机制。方法原代培养大鼠乳鼠心肌细胞,应用Iso 10μmol·L-1诱导心肌细胞肥大,观察β受体阻断剂普萘洛尔及不同浓度APS对肥大心肌细胞的影响。用消化分离法及计算机图像分析系统测细胞体积;Bradford法测心肌细胞总蛋白含量;ELISA法检测细胞外液中IL-6和TNF-α的含量;RT-PCR法检测ANP mRNA的表达;Western blot法检测心肌细胞CaMKⅡδ蛋白的表达。结果普萘洛尔(propranolol,PRO)和APS均能有效抑制Iso诱导的心肌细胞肥大,表现为体积减小、总蛋白含量降低及ANP mRNA表达降低,并能有效减少炎症反应,表现为细胞外液中IL-6、TNF-α的含量明显减少,CaMKⅡδ蛋白含量减少,且APS的作用呈一定的剂量依赖性。结论黄芪多糖对Iso诱导的乳鼠心肌细胞肥大具有保护作用,其机制可能与抑制CaMKⅡ信号通路及减少炎症反应有关。     

腺苷A1受体激活在钙调磷酸酶信号通路上对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大的抑制作用

目的观察腺苷A1受体激活在钙调磷酸酶(CaN)通路上对异丙肾上腺素(Iso)诱导的心肌细胞肥大的抑制作用及机制。方法体外培养大鼠乳鼠心肌细胞,以Iso 10μmol.L-1诱导心肌细胞肥大,观察腺苷A1受体激动剂R(-)-N6-(2-phenylIsopropyl)adenosine(R-PIA)1μmol.L-1对其作用,进一步探讨钙调神经磷酸酶特异性抑制剂环孢菌素A(CSA)1μmol.L-1、PKA抑制剂cAMP三乙胺盐(RP-cAMPS)1μmol.L-1、百日咳毒素(PTX)5 mg.L-1存在时,腺苷A1受体的激活对心肌细胞肥大的影响。通过Lowry法测心肌细胞蛋白含量;RT-PCR法检测心肌细胞心钠素(ANP)的mRNA表达;Western blot法测心肌细胞CaN的相对表达水平;以Fluo-3/AM为荧光探针,共聚焦显微镜下测量心肌细胞[Ca2+]i瞬变。结果 10μmol.L-1 Iso可以诱导心肌细胞肥大,腺苷A1受体激动剂R-PIA可以使其蛋白含量降低、ANP的mRNA表达减少、CaN相对表达降低、[Ca2+]i荧光强度减小,CSA、RP-cAMPS有类似抑制作用,PTX预处理的情况下,R-PIA对Iso诱导的心肌肥大的抑制作用消失。结论腺苷A1受体可以通过钙调磷酸酶通路抑制Iso诱导的心肌肥大,其机制与降低细胞内[Ca2+]i浓度及CaN表达有关。     

κ-阿片受体激动对异丙肾上腺素诱导的乳大鼠心肌细胞肥厚的抑制作用

目的通过观察选择性κ-阿片受体(κ-OR)激动剂U50488H抑制异丙肾上腺素(Iso)诱导乳大鼠心肌细胞肥厚的作用及其对细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)瞬变及钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达的影响,研究κ-OR激动抑制Iso诱导的大鼠心肌细胞肥厚的信号传导机制。方法以体外培养的乳大鼠心肌细胞为模型,应用β肾上腺素受体激动剂Iso10μmol.L-1诱导心肌肥大,观察U50488H1μmo.lL-1的作用,并进一步探讨在CaMKⅡ特异性抑制剂KN930.2μmol.L-1,普萘洛尔2μmol.L-1及L-钙通道阻滞剂维拉帕米1μmol.L-1存在情况下,κ-OR的激活对心肌肥厚的作用。用Lowry法检测心肌细胞蛋白含量;消化分离法及计算机图像分析系统检测心肌细胞体积;[3H]亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白的合成;采用Till阳离子测定系统,以Fura-2/AM为荧光探针,观察心肌细胞[Ca2+]i瞬间变化;用Western蛋白印迹法测定CaMKⅡδB表达。结果Iso10μmol.L-1使心肌细胞总蛋白含量、体积和蛋白合成明显增加,U50488H1μmol.L-1抑制Iso诱导的心肌肥大,且抑制程度与KN930.2μmol.L-1,普萘洛尔2μmol.L-1及维拉帕米1μmol.L-1相似,在KN93存在的情况下,U50488H抑制Iso诱导的心肌肥大作用增强;U50488H能降低Iso引起的心肌细胞[Ca2+]i瞬间变化升高;Iso能明显增强心肌细胞内CaMKⅡδB的表达,U50488H能降低其表达。结论κ-OR激动剂U50488H可能通过降低心肌细胞[Ca2+]i瞬间变化和减少心肌细胞内CaMKⅡδB的表达,抑制Iso诱导的乳大鼠心肌细胞肥厚。     

黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的乳大鼠心肌细胞肥大的保护作用

目的探讨黄芪甲苷(AsⅣ)对异丙肾上腺素(Iso)诱导的乳大鼠心肌细胞肥大的保护作用和机制。方法体外培养的乳大鼠心肌细胞分别加入AsⅣ3,10,30和90μmol.L-1孵育30 min后,再加入Iso 10μmol.L-1作用48 h。另设AsⅣ30μmol.L-1和Iso 30μmol.L-1模型对照组。考马斯亮蓝法测定心肌细胞总蛋白含量;消化分离法及计算机图像分析系统测量细胞体积;MTT测定细胞存活率;以Fura-2/AM为荧光探针,采用Till阳离子测定系统,观察胞内[Ca2+]i瞬间变化。结果与正常对照组相比,AsⅣ30μmol.L-1对正常心肌细胞无影响;Iso 30μmol.L-1可使心肌细胞总蛋白含量明显增加,体积明显增大,心肌细胞内[Ca2+]i瞬间峰值增大,同时使心肌细胞存活率降低了48.1%(P<0.01)。与Iso模型组相比,预加入AsⅣ10和30μmol.L-1心肌细胞蛋白质含量明显降低,ASⅣ30μmol.L-1组可以恢复达到正常对照组水平;AsⅣ3~90μmol.L-1可以拮抗Iso对正常心肌细胞体积增大、细胞内[Ca2+]i瞬间变化幅度增大的作用;ASⅣ3,10和30μmol.L-1可显著升高细胞存活率(P<0.01)。结论 AsⅣ对Iso诱导的乳大鼠心肌细胞肥大有良好的保护作用,其机制可能与降低[Ca2+]有关。     

Urocortin致心肌细胞肥大作用由细胞内游离钙离子升高诱导

目的探讨Urocortin(UCN)致心肌细胞肥大作用与细胞内游离钙离子([Ca2+]i)之间的关系。方法使用UCN0.1μmol.L-1诱导体外培养乳鼠心肌细胞肥大模型,通过计算机图像分析系统检测心肌细胞体积,荧光显微镜法测定细胞[Ca2+]i,Lowry法测定总蛋白水平,RT-PCR法测定ANP mRNA水平。结果与对照组相比UCN处理组细胞[Ca2+]i明显提高,细胞体积明显增大,所含总蛋白含量增加明显,ANP mRNA水平明显提高,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论 UCN能引起心肌细胞肥大,其过程与其引起的[Ca2+]i提高有一定关系。     

钙调磷酸酶信号通路参与κ-阿片受体激动对异丙肾上腺素诱导的乳大鼠心肌细胞肥大的抑制作用

目的研究钙调磷酸酶(CaN)信号通路在κ-阿片受体(κ-OR)激动对异丙肾上腺素(Iso)诱导的乳大鼠心肌细胞肥大中的抑制作用。方法利用体外培养模型,以Iso 10μmol.L-1诱导心肌肥大,观察U50488H1μmo.lL-1的作用,并探讨在环孢素A(CsA)1μmol.L-1、cAMP三乙胺盐(Rp-cAMPS)及百日咳毒素(PTX)5 mg.L-1存在的情况下,κ-OR的激活对心肌肥大的影响。用Lowry等法测定心肌细胞蛋白质含量;用消化分离法及计算机图像分析系统测定细胞体积;采用Till阳离子测定系统,以Fura-2/AM为荧光探针,观察胞内[Ca2 +]i瞬间变化,用Western印迹法测定CaN的表达。结果与正常对照组相比,Iso 10μmo.lL-1使心肌细胞蛋白质含量增加了42.1%,体积增大了86.7%,[Ca2 +]i瞬变增加了57.5%,CaN表达增加了101.7%;加入κ-OR激动剂U50488H1μmol.L-1后,与Iso模型组相比,心肌细胞总蛋白质含量和细胞体积分别降低了24.7%和46.7%,[Ca2 +]i瞬变降低了43.8%,CaN表达降低了48.8%;CsA和Rp-cAMPS对Iso诱导的上述指标的抑制程度与U50488H相似;PTX预处理的情况下U50488H对Iso诱导的上述指标的抑制作用消失。结论κ-OR激动通过降低胞内[Ca2 +]i瞬变和CaN表达抑制Iso诱导的乳大鼠心肌细胞肥大。     

Ca~(2+)/CaMKⅡ信号通路在肿瘤坏死因子-α诱导心肌肥大中的作用

目的研究钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)信号通路在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导心肌细胞肥大中的作用。方法Lowry法测心肌细胞蛋白含量;计算机图像分析系统测心肌细胞体积;[3H]-亮氨酸参入法测心肌细胞蛋白合成;Till阳离子测定系统观察胞内[Ca2+]i瞬变;Westernblot法测定CaMKⅡδB的表达。结果①TNF-α(100μg.L-1)明显诱导心肌细胞蛋白含量、蛋白合成及体积的增加,CaMKⅡ特异性抑制剂KN93(0.2μmol.L-1)明显抑制TNF-α诱导的心肌肥大,但对正常心肌细胞生长无影响。②TNF-α引起心肌细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)瞬间变化幅度增高,KN93明显降低TNF-α诱导的上述改变。③TNF-α明显增强心肌细胞内CaMKⅡδB的表达。结论TNF-α可能通过引起心肌细胞[Ca2+]i升高,促进CaMKⅡδB表达诱导心肌细胞肥大的。     

腺苷A1受体激动抑制高糖诱导的心肌细胞肥大

目的研究腺苷A1受体激动剂R(-)-N6-(2-phenyl-isopropyl)adenosine(R-PIA)对高糖(HG)诱导心肌细胞肥大的作用及机制。方法大鼠乳鼠心肌细胞培养,以HG(25.5mmol·L-1)诱导心肌细胞肥大模型,观察1μmol.L-1R-PIA和细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)特异性抑制剂U0126对心肌肥厚的作用。用Lowry法测心肌细胞蛋白含量;Western blot法测心肌细胞p-ERK1/2的相对表达水平;Till图像测定系统测心肌细胞[Ca2+]i瞬间变化。结果1μmol·L-1R-PIA和U0126可以相似程度地抑制HG诱导的心肌细胞蛋白含量增加、p-ERK1/2相对表达增加及[Ca2+]i瞬间增加。合用0.1μmol·L-1腺苷Al受体拮抗剂8-eyelo-pentyl-1,3-dipropylxanthine(CPDPX)抑制作用消失。结论腺苷通过激动A1受体抑制HG诱导的心肌肥厚,其机制与减少心肌细胞p-ERK1/2的相对表达和降低[Ca2+]i瞬间变化有关。     

尿促皮素诱导乳大鼠心肌细胞肥大的作用及信号传导机制

目的探讨尿促皮素(urocortin)诱导大鼠心肌细胞肥大的作用及其信号传导机制。方法实验分8组,正常对照组、尿促皮素0.1μmol.L-1组、星形孢菌素(Sta)1μmo.lL-1、H890.1μmol.L-1和维拉帕米(Ver)1μmol.L-1组及尿促皮素分别加Sta,H89和Ver组。采用体外培养的乳大鼠心肌细胞,应用尿促皮素0.1μmol.L-1诱导心肌肥大,观察Sta1μmol.L-1,H890.1μmo.lL-1和Ver1μmol.L-1的作用,进一步探讨尿促皮素0.1μmol.L-1诱导心肌肥厚的作用机制。用消化分离法及计算机图像分析系统检测心肌细胞直径;[3H]亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质的合成;用Lowry法检测心肌细胞蛋白质含量;用Western蛋白印迹法测定心房钠尿肽(ANP)表达;采用Till阳离子测定系统,以Fura-2/AM为荧光探针,观察心肌细胞[Ca2+]i瞬间变化。结果尿促皮素使心肌细胞直径、蛋白质合成、蛋白质含量和ANP表达分别增加30.9%,36.3%,35.5%和34.7%;尿促皮素+Sta组使心肌细胞直径、蛋白质合成、蛋白质含量和ANP表达分别降低了16.5%,22.1%,18.1%和21.3%;尿促皮素+H89组使心肌细胞直径、蛋白质合成、蛋白质含量和ANP表达分别降低了16.6%,21.5%,19.5%和20.6%;尿促皮素+Ver组使心肌细胞直径、蛋白质合成、蛋白质含量和ANP表达分别降低了17.1%,20.9%,17.9%及19.9%;尿促皮素能够使心肌细胞[Ca2+]i瞬间变化水平增高,Sta,H89和Ver能够降低尿促皮素引起的心肌细胞[Ca2+]i瞬间变化升高。结论尿促皮素可能通过蛋白激酶C和蛋白激酶A信号途径影响L-型Ca2+通道,进而影响细胞[Ca2+]i瞬间变化水平,诱导乳大鼠心肌细胞肥大。     

黄芪多糖通过TLR4/NF-κB信号通路抑制脂多糖诱导的大鼠心肌细胞肥大

目的旨在从TLR4-NF-κB信号转导通路角度探讨黄芪多糖(APS)对脂多糖(LPS)诱导新生大鼠心肌细胞肥大的作用机制。方法原代培养新生大鼠心肌细胞,以LPS 1mg.L-1诱导心肌细胞肥大,观察不同浓度APS及IκBα磷酸化抑制剂BAY11-7082对肥大心肌细胞的影响。以计算机图像分析系统检测细胞体积;考马斯亮蓝法测定细胞总蛋白含量;RT-PCR法检测TLR4 mRNA的表达;Western blot法检测心肌细胞IκBα的蛋白表达;ELISA法检测细胞外液TNF-α的含量。结果 APS及BAY11-7082均能有效抑制LPS诱导的心肌肥大,表现为蛋白含量降低,体积减小;并能有效减少炎症反应,表现为TLR4 mRNA表达降低,IκBα的蛋白含量升高,细胞外液中TNF-α明显减少,且APS的作用呈一定的剂量依赖性。结论黄芪多糖对LPS诱导的乳鼠心肌细胞有保护作用,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路有关。     

钙调神经磷酸酶在L-精氨酸抗心肌肥厚中的作用

目的研究L-精氨酸抗右心室心肌肥厚作用及其与钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)信号通路的关系。方法利用野百合碱(monocrotaline,MCT)诱导大鼠右心室心肌肥厚模型和前列腺素F2α(prostaglandin F2α,PGF2α)诱导心肌细胞肥大模型,分别以右心室肥厚指数(right ventricle hypertro-phy index,RVHI,即右心室/左心室+室间隔)、心肌细胞直径、蛋白含量和心房利钠肽(atrial natriuretic peptide,ANP)mRNA表达为心肌肥厚指标。用RT-PCR法检测mRNA的表达;Western blot法检测蛋白表达;荧光法检测细胞内钙[Ca2+]i的变化情况。结果L-精氨酸200mg.kg-1.d-1预防和治疗给药均明显抑制MCT诱导的大鼠心肌肥厚,降低MCT所致心肌CaN mRNA和蛋白及其下游因子NFAT3及GATA4蛋白表达的增加。L-精氨酸1mmol.L-1也明显抑制PGF2α100nmol.L-1诱导的大鼠心肌细胞肥大和[Ca2+]i升高,阻遏其诱导的CaN mRNA及CaN-,NFAT3-,GATA4-蛋白表达升高。在体和离体实验中一氧化氮合成酶抑制剂NG-硝基-L-精氨酸-甲酯均可完全阻断L-精氨酸的作用。结论L-精氨酸可能通过降低[Ca2+]i,从而抑制CaN信号转导通路而产生抗右心室心肌肥厚作用。     

黄芪苷Ⅳ对血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心肌细胞肥大的保护作用

目的研究黄芪苷Ⅳ(astragalosideⅣ,AST)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导新生大鼠心肌细胞肥大的保护作用并探讨其作用机制。方法AngⅡ刺激新生大鼠心肌细胞,制备心肌细胞肥大模型,分别用AST10mg·mL-1和20mg·mL-1进行预防性治疗。检测心肌细胞直径及细胞总蛋白含量,测定心肌细胞[Ca2+]i、肌浆网钙泵(SERCA)活力和钙调神经磷酸酶(CaN)活性。结果AngⅡ组细胞直径增大,总蛋白含量增加,与对照组相比差异有显著性(P<0.01);AST10mg·mL-1和20mg·mL-1能够降低心肌细胞肥大程度(P<0.05或P<0.01)、[Ca2+]i(P<0.01)及CaN活性(P<0.05或P<0.01)、提高SERCA活力(P<0.01)。结论AST对AngⅡ诱导心肌细胞肥大有明显的保护作用,可能与其降低[Ca2+]i、提高心肌SERCA活力及降低CaN活性有关。     

Cerivastatin,a hydroxymethylglutaryl coenzyme A reductase inhibitor,inhibits cardiac myocyte hypertrophy induced by endothelin

We investigated the direct effects of cerivastatin on hypertrophy of cultured rat neonatal myocytes induced by endothelin and the mechanism by which cerivastatin exerts its effects. Endothelin significantly increased [14C]phenylalanine ([14C]Phe) incorporation, atrial natriuretic peptide (ANP) release, ANP mRNA expression and cell size. Cerivastatin significantly reduced the increase in [14C]phenylalanine incorporation, ANP peptide release, ANP mRNA expression and cell size induced by endothelin, but pravastatin did not. Exogenous mevalonate completely prevented the inhibitory effect of cerivastatin on [14C]phenylalanine incorporation, ANP release and cell size. Cotreatment with geranylgeranyl pyrophosphate also attenuated the effect of cerivastatin on [14C]phenylalanine incorporation, but cotreatment with farnesyl pyrophosphate or squalene did not. Furthermore, both Rho inhibitor C3 exoenzyme and Rho-dependent kinase inhibitor, (R)-(+)-trans-N-(4-pyridyl)-4-(1-aminoethyl)-cyclohexanecarboxamide.2HCl (Y27632) significantly decreased [14C]phenylalanine incorporation, ANP secretion, ANP mRNA expression and cell size. Cerivastatin decreased endothelin-induced Rho protein expression, and mevalonate and geranylgeranyl pyrophosphate reversed this effect. These results suggest that cerivastatin directly attenuates cardiac hypertrophy induced by endothelin in cultured rat myocytes partly by inhibition of the Rho pathway.     

槲皮素降低大鼠心率和心肌钙振荡频率和抑制小鼠心肌肥厚

目的 研究槲皮素对心肌兴奋收缩耦联及构型重建的影响。方法 经动脉插管记录大鼠血流动力学,缩窄小鼠腹主动脉致心肌肥厚;检测Ｆｕｒａ２－ＡＭ负载的培养大鼠心肌细胞内游离钙（Ｃａ＾２＋）ｉ及钙振荡。结果：槲皮素剂量相关地降低大量窦性心率,而动脉血压,左室压及其微分改变轻微;１０－２５０μｍｏｌ．Ｌ＾－１时浓度依赖性降低培养心肌血发钙振荡频率,１００μｍｏｌ．Ｌ＾－１时预防异丙肾上腺素及哇巴因加速钙振荡频     

Astragalus polysaccharide attenuates isoproterenol-induced cardiac hypertrophy by regulating TNF-α/PGC-1α signaling mediated energy biosynthesis

We previously reported that Astragalus polysaccharide (APS) extracted from Chinese medicine Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge, attenuates hypertrophy of neonatal rat ventricular myocytes (NRVMs) induced by isoproterenol (Iso). The present study was designed to investigate the effects and the possible mechanism of APS on Iso-induced hypertrophy in rats and NRVMs with focus on tumor necrosis factor α (TNF-α)/peroxisome proliferator-activated receptor-γ coactivator 1α (PGC-1α) signaling mediated energy biosynthesis. 36-Week old rats were randomly divided into 3 groups: (1) Control, rats received vehicle; (2) Iso, rats received isoproterenol injections; (3) Iso+APS, rats received isoproterenol injections and APS. NRVMs were divided into similar groups as rats. The results showed that combination of APS with Iso significantly attenuated the pathological changes, reduced the ratios of heart weight/body weight (HW/BW) and left ventricular weight/BW (LVW/BW), improved the cardiac hemodynamics, down-regulated mRNA and protein expression of atrial natriuretic peptide (ANP), increased the ratios of ATP/ADP and ATP/AMP, and decreased the content of free fatty acid (FFA) in heart tissue of rats compared with Iso alone. In addition, pretreatment with APS significantly decreased the surface area and protein content, down-regulated mRNA and protein expression of ANP, increased the ratios of ATP/ADP and ATP/AMP, and decreased the content of FFA in NRVMs compared with Iso alone. Furthermore, APS increased the protein expressions of ATP5D, the σ subunit of ATP synthase, PGC-1α and pyruvate dehydrogenase kinase 4 (PDK4) in tissue and NRVMs respectively and inhibited the production of TNF-α in serum and culture medium compared with Iso alone. The results suggested that APS attenuates Iso-induced cardiac hypertrophy through regulating TNF-α/PGC-1α signaling mediated energy biosynthesis.     

Toll样受体4/NF-κB信号通路参与黄芪多糖对肿瘤坏死因子α诱导的乳大鼠心肌细胞肥大的抑制作用

目的探讨黄芪多糖(APS)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的乳大鼠心肌细胞肥大的保护作用及机制。方法 原代培养乳大鼠心肌细胞分别加入APS 25,50和100 mg.L-1作用30 min后再加入TNF-α50μg.L-1作用48 h。考马斯亮蓝法测定心肌细胞蛋白含量;消化分离法及计算机图像分析系统检测细胞体积;RT-PCR检测心肌心钠素(ANP)和Toll样受体4(TLR4)的mRNA表达;Western印迹法检测心肌细胞p65和IκBα的蛋白表达;ELISA法检测细胞外液白细胞介素1β(IL-1β)的含量。结果 与正常对照组相比,TNF-α组心肌细胞蛋白含量增加了52.8%,细胞体积增大了66.7%,ANP和TLR4 mRNA分别增加了60.3%和68.7%,p65蛋白表达增加了50.5%,IκBα蛋白表达减少了43.1%,IL-1β表达增加了59.0%,差异均有统计学意义(P<0.01)。与TNF-α模型组相比,APS 50,100 mg.L-1和IκBα阻断BAY11-7082 5μmo.l L-1组蛋白含量、细胞体积、ANP mRNA、TLR4 mRNA、IL-1β和p65蛋白表达显著降低(P<0.05),IκBα蛋白表达明显增高(P<0.05);APS 25 mg.L-1组蛋白含量、细胞体积和ANP mRNA表达显著性降低(P<0.05)。结论 APS对TNF-α诱导的乳大鼠心肌细胞肥大有保护作用,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路有关。     

腺苷对肿瘤坏死因子-α诱导乳鼠心肌细胞肥大及核因子-κB的影响

目的探讨腺苷对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis fac-tor,TNF-α)诱导心肌细胞肥大及核因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法以原代培养乳鼠心肌细胞为模型,应用TNF-α100μg.L-1诱导心肌细胞肥大,观察不同浓度腺苷对心肌肥大的影响。用考马斯亮蓝法测定心肌细胞蛋白含量;RT-PCR检测心肌细胞心钠素(atrial natriuretic peptide,ANP)mRNA的表达;Western blot法检测心肌细胞p65和IκBα的蛋白含量;ELISA法检测细胞外液白介素-1β(IL-1β)的含量。结果腺苷能够有效抑制TNF-α诱导的心肌肥大,表现为蛋白含量减少,ANPmRNA表达降低,并且能抑制TNF-α诱导的NF-κB活化,表现为细胞内p65蛋白表达减少,IκBα蛋白表达增加和细胞外液IL-1β表达降低。结论腺苷对TNF-α诱导的心肌肥大有保护作用,可能与腺苷抑制心肌细胞NF-κB活化有关。     

Inhibitory effect of ginsenoside Rb1 on calcineurin signal pathway in cardiomyocyte hypertrophy induced by prostaglandin F2α

Aim： To examine the antihypertrophic effect of ginsenoside Rb1 （Rb1） induced by prostaglandin F2α （PGF2α） in vitro and to investigate the possible mechanisms involved in the calcineurin （CAN） signal transduction pathway. Methods： The cardiomyocyte hypertrophy induced by PGF2α and the antihypertrophic effect of Rb1 were evaluated in primary culture by measuring the cell diameter, protein content, and atrial natriuretic peptide （ANP） mRNA expression. ANP and CaN mRNA expressions, CaN and its downstream effectors NFAT3 and GATA4 protein expressions, and the intracellular free Ca^2＋ concentration （[Ca^2＋]i） were assayed by RT-PCR, Western blot, and fluorescent determination using Fura 2/AM, respectively. Results： PGF2α （100 nmol/L） significantly increased the cardiomyocyte diameter, protein content and [Ca^2＋]i, and promoted ANP, CaN mRNA, and CaN/NFAT3/GATA4 protein expressions, which were inhibited by either Rb1 in a concentration-dependent manner （50, 100, and 200 μg/mL） or L-arginine （1 mmol/L）. N^G-nitro-L-arginine-methyl ester, a nitric oxide synthase inhibitor, could abolish the effects of L-arginine, but failed to change the effects of Rb1 in the experiments above. Conclusion： The present data implicate that Rb1 attenuates cardiac hypertrophy, the underlying mechanism may be involved in the inhibition of the Ca^2＋-CaN signal transduction pathway.