人肝组织中新的C2H2型锌指蛋白编码序列的批量分离与克隆

为了探讨人肝组织中Ｃ２Ｈ２型锌脂蛋白基因的分布数目以及克隆新的锌指蛋白基因,设计了简并ＰＣＲ引物,扩增基因组ＤＮＡ,以其中的２个扩增片段为探针筛选人肝ｃＤＮＡ文库,获得了近百个阳性克隆,对其中的２０个ｃＤＮＡ片段进行了末端测序和同源检索,证明了１５个为新的锌指基因片段。对其中的４个ｃＤＮＡ片段进行了组织表达谱分析,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交显示：Ｌ５－５为肝,胰脏高度表达;其余为广谱表达。     

一个猪免疫球蛋白 IgG H 链基因的克隆、序列分析及表达

用ＲＴ－ＰＣＲ方法从猪脾脏中分离到于段１４２５ｂｐ的ＤＮＡ片段,该片段编码免疫球蛋白基因。经全序列分析证明此片段与前人报道的序列有较高同源性,其Ｃ区属于猪Ｉｇγ链基因亚类３。用ＥｃｏＲＩ和ＮｓｉＩ切点将该片段切焉插入ｐＥＴ－３ｂ（ＮＳＥＢ）（－＿中,表达出约５２ｋｕ的蛋白质,表达量约为２１％。     

中国番茄黄化曲叶病毒小环状DNA分子的发现与证实

番茄黄化曲叶病毒为－Ｂｅｇｏｍｏｖｉｒｕｓ联体病毒。在中国番茄黄化曲叶病毒（ＴＹＬＣＶ－ＣＨＩ）中发现并主宰了与ＴＹＬＣＶ－ＣＨＩ有关一些小环状ＤＮＡ分子的存在。这些小环状ＤＮＡ分子的大小为ＴＹＬＣＶ－ＣＨＩＤＮＡＡ全长基因组的一半,１．２～１．４Ｋｂ左右。序列分析表明,这些小分子序列中间均有一段未知来源的ＤＮＡ片段插入。分子杂交证实这些未知来源的ＤＮＡ片段既不与ＤＮＡＡ同源也不与ＤＮＡＢ同源,可     

玉米S组CMS线粒体基因组细菌人工染色体文库的构建

细胞质雄性不育（ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ｍａｌｅｓｔｅｒｉｌｉｔｙ,ＣＭＳ）材料在杂交玉米生产中具有重要的应用价值,决定ＣＭＳ遗传性状的基因位于线粒体内,Ｓ组玉米ＣＭＳ种质Ｍｏｌ１７ＣＭＳ－Ｊ为试材,采用低熔点琼脂糖包埋线粒体、原位消化、电泳分级、酶解琼脂糖ＢＡＣ载体、电转化等新技术,成功构建了线粒体基因文库。从基因文库的容量、插入片段大小、来源、稳定性和在文库中筛选线粒体基因等质量因素分析,表明     

人类细胞因子信号传导抑制因子基因humSOCS-2的分离与克隆

采用国际ＧｅｎＢａｎｋ ＥＳＴ数据库同源筛选的策略,筛选到１个与小鼠细胞因子信号传导抑制因子基因ｍｍＳＯＣＳ－２高度同源的ＥＳＴ９ｇｂＡＡ１１５２３９）,在人胎盘ｃＤＮＡ分子库中步移获得一长１０１１ｂｐ的ｃＤＮＡ片段,包含一个长５９４ｂｐ的开放阅读框,编码了１９８个氨基酸残基,经ＮＣＢＩ数据库检索是一个全新的基因。     

VK3诱导的植物细胞凋亡及其机理

ＶＫ３可诱导烟草细胞的凋亡,表现为：染化体凝集,凋亡小体形成,ＤＮＡ末端断裂、降解形成梯状电泳,此过程伴随特异核酸酶的激活,其活性依赖于Ｃａ＾２＋,Ｍｇ＾２＋,可被Ｚｎ＾２＋和ＥＤＴＡ（Ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃ）抑制。ＤＮＡ降解可被ＤＥＶＤ（Ａｃ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ａｓｐ－ａｌｄｅｈｙｄｅ）抑制。核纤层蛋白降解为３５ｋｕ片段,ＤＥＶＤ,ＰＭＳＦ（Ｐｈｅｎｙｌｍｅｔ     

与水稻光敏核不育性相关的cDNA片段的鉴定和染色体定位

对利用ｃＤＮＡ－ＲＡＰＤ技术获得的光敏核不育水稻可育和不育幼穗ｍＲＮＡ差异表达的ｃＤＮＡ片段进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交鉴定,获得１个与光敏核不育性相关的阳性片段ＲＰＧ４３。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交及相应的ＲＡＰＤ分析表明,ＲＰＧ４３为单拷贝序列,是转录后的加工产物。序列分析表明,ＲＰＧ４３长度为７４４ｂｐ,其中第１２６～１８５的６０个碱基与人类１１号染色体的ｐａｃ ｐＤＪ３５６ｄ６ ＤＮＡ序列有７２％的     

水稻减数分裂相关基因OsDMC1的克隆

酵母ＤＭＣ１基因是一个在减数分裂前期 Ｉ表达的减数分裂特异基因,其产物是减数分裂同源染色体配对所必需的．根据在酵母Ｄｍｃ１与拟南芥ＡｔＤｍｃ１中保守的氨基酸ｍｏｔｉｆｓ合成的简并性引物,以ｃＤＮＡ作模板,通过套式ＰＣＲ（ｎｅｓｔｅｄ ＰＣＲ）和ＲＡＣＥｓ克隆了水稻中酵母ＤＭＣ１的同源基因 ＯｓＤＭＣ１．ＯｓＤＭＣ１全长的 ｃＤＮＡ是 １３４８ ｂｐ,编码 ３４４个氨基酸组成的多肽（ＯｓＤｍｃ１）． ＯｓＤｍｃ１与 Ｄｍｃ１和ＡｔＤｍｃ１的氨基酸序列一致性分别是５１．８％和８１．７％．ＯｓＤＭＣ１在生殖器官中表达量较高,在根中有少量表达,而在叶和幼芽中不表达． Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析结果表明水稻基因组中有两个拷贝的 ＯｓＤＭＣ１．     

小鼠胸腺上皮细胞株MTEC1表达的化学趋化因子的类型分析

以自行设计的引物用ＲＴ－ＰＣＲ方法从小鼠胸腺上皮细胞株ＭＴＥＣ１的总ＲＮＡ中扩增出了ＳＤＦ－１α,ＩＰ－同和Ｌｙｍｐｈｏｔａｃｔｉｎ等６种化学趋化因子的ｃＤＮＡ片段,对扩增片段进行了酸测序鉴定,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析结果显示;ＳＤＦ－１ｍＲＮＡ在ＭＴＥＣ１细胞株中存在两种不同的剪切形式,ＭＴＥＣ１的浓缩培养上清对小鼠胸腺ＣＤ＾４－ＣＤ＾８Ｔ细胞具有中等强度的趋化活性,符合ＳＤＦ－１的生物学功能。     

维甲酸激活新基因RA28 及其编码蛋白的定位

基因ＲＡ２８是用全反式维甲酸诱导肺腺癌细胞系ＧＬＣ－８２,用消减杂交方法分离得到的一个新的ｃＤＮＡ序列。作为体内报告分子的绿色荧光蛋白（ｇｒｅｅｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＧＦＰ）,在激发光４８８ｎｍ,不加任何底物时,能发出绿色荧光。     

再创辉煌

据来自“美国科学信息所”(ＩＳＩ)方面的消息,《科学通报》英文版,ＣｈｉｎｅｓｅＳｃｉｅｎｃｅＢｕｌｌｔｅｔｉｎ(ＣＳＢ),从1998年第1期起(Ｖｏｌ.43(1),1998),再次被收入ＳｃｉｅｎｃｅＣｉｔａｔｉｏｎＩｎｄｅｘ(即通常所说的ＳＣＩ-ＣＤＥ).此外,ＣＳＢ仍被ＳｃｉｅＳｅａｒｃｈ(即ＳｃｉｅｎｃｅＣｉｔａｔｉｏｎＩｎｄｅｘＥｘｐａｎｄｅ,ＳＣＩＥ),ＲｅｓｅａｒｃｈＡｌｅｒｔ,ＣｕｒｒｅｎｔＣｏｎｔｅｎｔｓ/Ｐｈｙｓｉｃａ1,ＣｈｅｍｉｃａｌａｎｄＥａｒｔｈＳｃｉｅｎｃｅｓ(ＣＣ/ＰＣＥＳ)收录。这样,我国被ＳＣＩ收录的…     

一种新的小鼠被毛突变基因定位

分别尝试用ＲＡＰＤ（随机扩增多态ＤＮＡ）法和重组率测定法对所发现的被毛突变进行基因定位。结果为所选用的１００个１０ｂｐＲＡＰＤ引物中,８７个获得了扩增产物,由于所获得的产物与小鼠表现间缺乏相关性,利用ＲＡＰＤ法未能交闰到染色体上。以分布于小鼠１１条染色休下的Ｉｄｈ１,Ｃａｒ２,Ｍｕｐ１,Ｐｇｍ１,Ｈｂｂ,Ｅｓ１０,Ｅｓ１,Ｍｏｄ１,Ｇｄｃ１,Ｃｅ２,Ｅｓ３等生化基因位点为遗传标记,对分别对与ＣＡＢ     

人类肽-甲硫氨酸亚砜还原酶的cDNA克隆、组织表达谱特征及染色体定位

蛋白质结构中某些氨基酸的氧化和还原是生物体内对蛋白功能的一种调控方式．甲硫氨酸（Ｍｅｔ）被氧化则变为甲硫氨酸亚砜（Ｍｅｔ（Ｏ））,它可导致所在蛋白质的生物学活性降低或丧失,但肽－甲硫氨酸亚砚还原酶（Ｐｅｐｔｉｄｅ ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ, ｍｓｒＡ）则可使甲硫氨酸亚砜还原为甲硫氨酸,使其所在蛋白质重新恢复活性．为了研究人体中Ｍｅｔ氧化还原的机制,以牛ｍｓｒＡ ｃＤＮＡ序列为信息探针,筛选人ＥＳＴ数据库,依据若干同源ＥＳＴ的信息从人ｃＤＮＡ分子库中克隆到一个长１２５５ｈｐ的人ＭＳＲＡ ｃＤＮＡ．该ＣＤＮＡ包含一个长７０５ ｂｐ的可读框,它编码了 ２３５个氨基酸残基．同源性比较表明,该基因与牛和大肠杆菌的ｍｓｒＡ基因的氨基酸一致性分别为８８％和６１％．表达谱分析发现,该基因在人体大多数组织中均有一条长约１．６ｋｂ的转录本,并在肾中呈高表达．应用辐射杂种细胞株定位系统（ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｈｙｂｒｉｄ ｍａｐｐｉｎｇ ｐａｎｅｌ, ＲＨ ｍａｐｐｉｎｇ）将该基因精确定位在人染色体８ｐ２２～２３区带的ＤＳＳ５１８和Ｄ８５５５０位标之间,由于此前已有Ｋｅｒａｔｏｌｙｔｉｃｗｉｎｔｅｒｅｒｙｔｈ     

CⅡTA反义RNA对HLAⅡ类分子表达的抑制作用

为研究ＭＨＣⅡ类基因转录活化因子对人类白细胞抗原Ⅱ类分子表达的影响,用ＲＴ－ＰＣＲ方法从Ｒａｊｉ细胞中克隆到ＣⅡＴＡ基因ｃＤＮＡ５’端片段,构建成ＣⅡＴＡ反义ＲＮＡ真核表达载体ｐｃＤＮＡ－Ⅱ,基因转移ＨＬＡⅡ类分子诱导型表达的ＨｅＬａ细胞,ＩＦＮ－γ诱导,发现稳定转染ｐｃＤＮＡ－Ⅱ的细胞中ＨＬＡ－ＤＲ,ＤＰ和ＤＱ的表达均较转ｐｃＤＮＡ３空载体的细胞有显著下降,而ＨＬＡ Ｉ类分子的表达不受影响。实验     

一种快速高效分离和纯化重组腺病毒伴随病毒载体的方法

利用２型腺病毒伴随病毒（ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ２,ＡＡＶ－２）能够抵抗氯仿的特性,采用“氯仿处理－ＰＥＧ／ＮａＣｌ沉淀氯仿抽提”３个步骤分离,浓缩和纯化重组腺病毒伴随病毒（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ,ｒＡＡＶ）,整个纯化过程可在４ｈ内完成,最终从５个转瓶生长的４＊１０＾９个载体生产细胞中可得到５＊１０＾３病毒颗粒／ｍＬ,ＳＤ     

蓝藻Synechocystis PCC6803中状态转换的研究

运用调制荧光法对蓝藻Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ ＰＣＣ６０８３的状态转换进行了研究。观察到蛋白质磷酸酯酶抑制剂ＮａＦ对蓝藻ＳｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓＰＣ６８０３由远红光诱导的状态Ⅱ向状态Ｉ的转换无抑制作用,表明蓝藻Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ ＰＣＣ６８０３的状态转换不受类囊体膜蛋白南可逆磷酸化的调节;ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ－泛醌还原酶专一抑制剂鱼藤酮可以促使蓝藻Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ ＰＣＣ６０８３暗     

MBLL cDNA的克隆及组织表达分析

果蝇的ｍｂｌ基因编码一个核蛋白,含有２个Ｃｙｓ３Ｈｉｓ锌指基序。ｍｂｌ基因的突变将影响果蝇所有光感受器细胞的分化。根据与ｍｂｌ基因高度同源的人ＥＳＴ ＡＡ０８６１３９设计ＰＣＲ引物,筛选胎儿脑ｃＤＮＡ点阵文库,得到一个人ｃＤＮＡ,命名为ＭＢＬＬ。     

人神经元电压门控钙通道γ-3基因的克隆

将小鼠Ｃａｃｎｇ２基因的编码区与ＥＳＴ数据库进行同源性分析，得到一个与小鼠Ｃａｃｎｇ２基因在 ４３５ ｂｐ中有 ７５％同源的 ＥＳＴ（ＧｅｎＢａｎｋ： Ｗ２９０９５）．在该 ＥＳＴ中设计引物与 ｃＤＮＡ文库载体臂上引物行巢式 ＰＣＲ和 ＲＡＣＥ反应，在人脑前叶皮质 ｃＤＮＡ文库和人脑 Ｒｅａｄｙ ｃＤＮＡ中获得 ｃＤＮＡ序列 １５４５ ｂｐ，其中包含一个 ９４８ ｂｐ的可读框，编码 ３１５个氨基酸．该可读框经确证命名为 ＣＡＣＮＧ３．ＣＡＣＮＧ３基因与大规模测序中定位于１６ｐ１２－ｐ１３．１的ＢＡＣ克隆ＡＣ００４１２５完全一致，从而将该基因定位于１６ｐ１２－ｐ１３．１，并由此获得它的基因组结构，编码区由４个外显子组成．经ＲＴ－ＰＣＲ分析，ＣＡＣＮＧ３在成人脑和胎脑有表达．运用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ在视网膜色素变性家系、视网膜色素变性伴耳聋和癫痫家系进行突变检测，未检测到突变．     

缺铁诱导玉米根cDNA文库的构建及铁胁迫基因(fdr3)的筛选和鉴定

为了分离铁缺乏相关基因,构建了一个滴度为４．５ｘ１０~５ｐｆｕ／μｇ的λＺＡＰ表达型缺铁胁迫玉米根 ｃＤＮＡ文库．通过差异筛选得到 ６个阳性克隆．经 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ和 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ验证在缺铁条件下加强表达的有ｆｄｒ３（Ｆｅ－ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ－ｒｅｌａｔｅｄ） ｃＤＮＡ ｃｌｏｎｅ。     

CⅡTA反义RNA对HLAⅡ类分子表达的仰制作用

为研究ＭＨＣⅡ类基因转录活化因子（ＣⅡＴＡ）对人类白细胞抗原（ＨＬＡ）Ⅱ类分子表达的影响,用ＲＴ－ＰＣＲ方法从Ｒａｊｉ细胞中克隆到Ｃ Ⅱ ＴＡ基因ｃＤＮＡ ５＇端片段,构建成ＣⅡＴＡ反义ＲＮＡ真核表达载体 ｐｃＤＮＡ－Ⅱ,基因转移 ＨＬＡ Ⅱ类分子诱导型表达的 ＨｅＬａ细胞．经 ＩＦＮ－γ诱导,发现稳定转染ｐｃＤＮＡ－Ⅱ的细胞中ＨＬＡ－ＤＲ,ＤＰ和ＤＱ的表达均较转ｐｃＤＮＡ３空载体的细胞有显著下降,而 ＨＬＡⅠ类分子的表达不受影响．实验证明 ＣⅡ ＴＡ反义 ＲＮＡ对 ＨＬＡ Ⅱ类分子表达具有显著的抑制作用,为进一步开展低免疫原性的细胞移植提供了依据．