DLX4在子痫前期胎盘组织的表达及与上皮细胞间质化相关性的研究

目的:探讨DLX4在妊娠期高血压疾病中的作用及其对滋养细胞EMT的影响。方法:采用Western blot法分别检测子痫前期胎盘组织及缺氧培养的滋养细胞系JEG-3中DLX4蛋白表达的变化;通过实时PCR技术,比较缺氧条件下滋养细胞中DLX4、HIF-1α和E-cad表达变化的差异。结果:滋养细胞缺氧培养后DLX4蛋白表达明显下降(P0.05),与其在子痫前期胎盘组织的表达变化一致;缺氧抑制滋养细胞中DLX4 mR-NA表达,同时伴有HIF-1α和E-cad mRNA表达增加。结论:缺氧引起滋养细胞DLX4表达下调,伴随EMT相关因子表达的改变。子痫前期滋养细胞侵袭力异常可能与缺氧引起DLX4表达下调及滋养细胞EMT异常有关。     

5-杂氮脱氧胞苷对JEG-3细胞及印迹基因H19效应的初步研究

目的:研究甲基化酶抑制剂5-杂氮脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,ADC)对人绒毛膜上皮癌细胞株JEG-3细胞的生物学作用,观察JEG-3细胞H19表达变化与滋养细胞增殖、分化和侵袭等行为的相关性,从表观遗传学角度探讨滋养细胞侵袭行为的调控。方法:应用MTT法检测不同浓度5-杂氮脱氧胞苷在不同时相下对JEG-3细胞增殖的影响。体外小室迁移实验观察5-杂氮脱氧胞苷对JEG-3细胞迁移的影响。荧光定量RT-PCR检测5-杂氮脱氧胞苷作用下JEG-3细胞H19mRNA表达的变化。结果:5-杂氮脱氧胞苷对JEG-3细胞增殖起抑制作用,在一定范围内与时间和剂量呈正相关。经100μmol/L5-杂氮脱氧胞苷作用24h后的JEG-3细胞迁移能力明显受限,迁移细胞数较对照组差异显著(P<0.01)。经5-杂氮脱氧胞苷作用后JEG-3细胞中H19mRNA表达增高,在一定范围内与时间和剂量呈正相关。结论:甲基化酶抑制剂5-杂氮脱氧胞苷可致H19mRNA过量表达,并进一步抑制滋养细胞的增殖和迁移能力。H19印迹基因表达上调与滋养细胞增殖抑制和迁移能力降低有关。     

环孢素A通过活化Src信号通路促进人绒毛膜癌细胞株JEG-3侵袭

目的:探讨Src信号通路在环孢素A(cyclosporin A,CsA)促进人滋养细胞侵袭中的作用。方法:应用Transwell侵袭实验观察CsA对人绒毛膜癌细胞株JEG-3侵袭能力的影响,应用Western blotting检测CsA作用于JEG-3细胞后Src的活化水平,并观察Src特异性抑制剂PP2对CsA作用后JEG-3细胞侵袭能力及E-钙粘蛋白表达水平的变化。结果:CsA可明显促进JEG-3细胞的侵袭(P<0.05),并可提高JEG-3细胞Src的活化水平(P<0.05),降低E-钙粘素蛋白的表达。PP2可明显抑制JEG-3细胞CsA诱导的Src活化(P<0.05),阻抑CsA对细胞侵袭的促进作用(P<0.05)和恢复CsA下调的E-钙粘蛋白表达水平(P<0.05)。结论:CsA可通过增强Src信号通路活化促进JEG-3细胞侵袭,并下调E-钙粘蛋白的表达,提示Src信号通路可能参与CsA对人滋养细胞生物学行为的良性调节作用。     

乌司他丁通过调节uPA表达对绒癌细胞体外侵袭能力的影响

目的:探讨尿胰蛋白酶抑制剂(UTI)乌司他丁(Ulinastatin)对绒癌细胞侵袭力的影响及其作用机制。方法:Matrigel体外侵袭实验比较绒癌细胞JEG-3和JAR的体外侵袭能力及不同浓度乌司他丁对JEG-3细胞体外侵袭能力的影响,半定量RT-PCR法检测两种细胞内uPA mRNA表达及不同浓度乌司他丁对JEG-3细胞中uPA mRNA表达的影响。结果:JEG-3细胞体外侵袭能力(201±21)明显强于JAR细胞(106±18),两者差异有统计学意义(P0.001);细胞内uPA mRNA表达JEG-3(0.3835±0.01255)明显高于JAR(0.1057±0.01664),两者差异有统计学意义(P0.01);在本实验的浓度范围内,乌司他丁浓度达100U/ml及以上时,各组JEG-3细胞中uPA mRNA表达水平、穿膜细胞数与对照组相比,差异均有统计学意义(P0.05),不同浓度组间差异亦有统计学意义(P0.05),uPA mRNA表达水平、穿膜细胞数与药物浓度之间呈负相关(r=-0.862,P0.05;r=-0.885,P0.05);细胞侵袭力与细胞中uPA mRNA表达水平呈正相关(r=0.996,P0.05)。结论:uPA可能是与绒癌侵袭转移相关的基因,UTI可通过下调uPAmRNA表达抑制绒癌JEG-3细胞的体外侵袭转移。     

γ-分泌酶抑制剂DAPT对宫颈癌细胞系及HPV16亚基因转化的永生化人宫颈上皮细胞系作用的研究

目的:研究γ-分泌酶抑制剂DAPT对宫颈癌细胞系以及HPV16亚基因转化的永生化人宫颈上皮细胞系的作用,探讨DAPT临床治疗宫颈癌的可行性。方法:体外培养宫颈癌Siha、HeLa细胞系和HPV16亚基因转化的永生化人宫颈上皮细胞系(CRL2614)。加入不同浓度的γ-分泌酶抑制剂DAPT,不同时间点终止细胞生长,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色方法检测细胞生长情况;使用流式细胞计数仪检测细胞增殖周期中增殖指数(PI)、S期细胞比例(SPF)和凋亡细胞百分比。结果:应用MTT法检测细胞生长情况,5μmol/L及10μmol/LDAPT作用宫颈癌细胞系72h,可显著抑制其生长(P均0.05)。10μmol/LDAPT对CRL2614细胞系作用72h无抑制作用(P0.05)。流式细胞计数仪检测细胞增殖周期及细胞凋亡百分比。用5μmol/L及10μmol/LDAPT作用宫颈癌细胞系24,48,72h均可见SPF、PI明显降低,凋亡细胞百分比明显增加(P均0.05)。10μmol/LDAPT作用CRL2614细胞系72h对SPF、PI及凋亡细胞百分比无影响(P0.05)。结论:DAPT能抑制宫颈癌HeLa、Siha细胞系增殖,促进肿瘤细胞凋亡,对HPV16亚基因转化的永生化人宫颈上皮细胞系的增殖和凋亡没有明显影响。DAPT可能为药物治疗宫颈癌提供新思路。     

甲氧滴滴涕对人绒毛外滋养细胞的白细胞表面抗原G(HLA-G)表达的影响

目的:探讨甲氧滴滴涕(MXC)对绒毛外滋养细胞(EVCT)白细胞表面抗原G(HLA-G)表达的影响。方法:用胰蛋白酶消化加流式细胞仪分离得到人绒毛外滋养细胞,进行原代培养及鉴定。将所获细胞分为MXC(1μmol/L、3μmol/L、5μmol/L、7μmol/L)处理组及空白对照组,培养12h、24h、48h。用Western blotting检测各组各时间点HLA-G的表达,同时用RT-PCR法检测HLA-GmRNA表达。结果:MXC处理组滋养细胞HLA-G表达呈时间剂量依赖性下降,HLA-G mRNA变化与其一致。结论:MXC可从蛋白和mRNA水平降低绒毛外滋养细胞HLA-G表达,从而降低其免疫耐受功能。     

ABCG2在人绒毛膜癌耐药细胞株中的表达研究

目的:研究多药耐药基因ABCG2在人绒毛膜癌亲本细胞株(JEG-3)及耐药细胞株(JEG-3/VP16)中的表达情况,探讨ABCG2在绒毛膜癌耐药性中所起的作用.方法:用逆转录聚合酶链式扩增反应(RT-PCR)检测ABCG2的mRNA表达,用蛋白质印迹法(Western blot)检测ABCG2的蛋白质水平的表达,并采用流式细胞技术测试出两种细胞株中ABCG2阳性细胞的比例.结果:RT-PCR和Western blot结果显示:在JEG-3细胞及JEG-3/VP16细胞中均可检测到ABCG2mRNA和蛋白的表达,但JEG-3/VP16细胞中ABCG2 mRNA的表达(1.74±0.07)和蛋白的表达(1.13±0.09)水平要明显高于JEG-3细胞(0.86±0.06和0.64±0.05),差异有统计学意义(P＜0.01);流式细胞检测结果示:ABCG2在JEG-3/VP16细胞中的阳性表达率(50.66±3.82)％要明显高于在JEG-3细胞中的阳性表达率(14.78±1.02)％,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:ABCG2在耐药性人绒毛膜癌细胞株JEG-3/VP16中高表达,提示ABCG2可能参与了绒毛膜癌的耐药机制.     

STAT3基因介导表观遗传学调控对子痫前期发病的影响机制

目的:探讨滋养细胞STAT3基因介导表观遗传学调控对子痫前期（PE）发病中的影响机制。方法:收集30例正常（Con组）和30例子痫前期（PE组）产妇胎盘组织,采用Real time-PCR和Western blot检测DNMT1、STAT3、PTEN、TSC2 mRNA和蛋白表达水平,甲基化DNA免疫共沉淀测序（MeDIP-Seq）检测甲基化程度差异。体外培养HTR8/Svneo、JEG-3、JAR、BeWo滋养细胞株,分为空白对照组（Con组）、STAT3沉默组（shSTAT3组）、STAT3过表达组(STAT3OE组)。应用去甲基药物（5-AZA-DC）处理,采用GST-pull down,染色质免疫共沉淀实验（CHIP）,双荧光素酶报告基因,甲基化特异性PCR（MSP）和亚硫酸盐测序PCR（BSP）检测。结果:（1）在胎盘组织中,与Con组相比,PE组胎盘组织中DNMT1 mRNA和蛋白[（5.25±1.12 vs 8.02±0.67）ng/ml、（3.33±0.98 vs 7.31±0.55）μg/ml,P<0.05]表达升高,STAT3[（5.17±0.98 vs 2.27±0.33）ng/ml、（6.12±1.03 vs 2.59±0.43）μg/ml,P<0.05]、PTEN[（4.58±0.77 vs 1.97±0.28）ng/ml、（6.21±1.04 VS 2.28±0.36）μg/ml,P<0.05]、TSC2[（6.39±0.83 vs 3.16±0.52）ng/ml、（6.56±0.67 vs 3.03±0.17）μg/ml,P<0.05]mRNA和蛋白表达下降。MeDIP-Seq检测出PE组甲基化水平显著增高,其中STAT3、PTEN、TSC2基因为甲基化差异显著基因,差异有统计学意义（P<0.05）。（2）在细胞株中,与Con组相比,GST-pull down验证HTR8/Svneo细胞中STAT3与PTEN、TSC2蛋白体外相互作用,CHIP证实在HTR8/Svneo、JEG-3、JAR、BeWo细胞中STAT3能明显富集靶基因PTEN,双荧光素酶报告基因验证HTR8/Svneo、JEG-3、JAR、BeWo细胞中STAT3调控PTEN启动子活性,5-AZA-DC干预后显著改善,差异有统计学意义（P<0.05）。MSP和BSP检测HTR8/Svneo细胞中PTEN基因启动子区CpG岛DNA甲基化,5-AZA-DC干预前shSTAT3、STAT3OE组甲基化显著,干预后呈非甲基化,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:STAT3基因是介导表观遗传学调控引起PE发病的重要基因,可作为子痫前期表观遗传学治疗的潜在靶点     

甲氧滴滴涕对人绒毛外滋养细胞侵袭能力的影响

目的:探讨甲氧滴滴涕(MXC)对绒毛外滋养细胞侵袭能力的影响。方法:用胰蛋白酶消化后再经流式细胞仪分离得到人绒毛外滋养细胞进行原代培养及鉴定。细胞分为MXC(1μmol/L,3μmol/L、5μmol/L、7μmol/L)处理组及空白对照组,培养12h、24h和48h。用侵袭小室检测每组各时间点的侵袭能力,Western blot检测各组各时间点MMP-2、MMP-9、TIMP-2、TIMP-1表达,RT-PCR法检测MMP-9 mRNA、MMP-2 mRNA表达。结果:MXC处理组滋养细胞侵袭能力呈时间剂量依赖型下降,MMP-9 mRNA、MMP-2 mRNA表达下降,MMP-9、MMP-2表达下降,TIMP-2、TIMP-1表达增高。MMP-2及其mRNA下降程度与MXC有时间剂量效应。结论:MXC可通过改变基质金属蛋白酶及其抑制物的比例降低绒毛外滋养细胞侵袭能力。     

MicroRNA-34a抑制Notch1并影响滋养细胞侵袭和增殖能力

目的:以胎盘组织和人绒毛膜滋养层细胞系JEG-3细胞为研究对象,研究MicroRNA-34a(miR-34a)对Notch1和JEG-3细胞侵袭和增殖能力的影响,进一步探讨miR-34a参与子痫前期(PE)发生发展的分子机制。方法:选取30例PE孕妇(PE组)和30例健康孕妇(正常对照组)。将miR-34a mimic、miR-34a inhibitor和Notch1 siRNA转染JEG-3细胞。Real-time PCR法检测各组中miR-34a和Notch1 mRNA表达,Western blot法检测各组Notch1蛋白表达,Transwell法观察转染后细胞的侵袭和迁移能力的变化,CCK-8法检测转染前后细胞存活情况。结果:PE组胎盘组织中miR-34a miRNA表达较对照组显著升高(P0.05),Notch1 mRNA表达较对照组明显降低(P0.05)。转染miR-34a mimic可抑制JEG-3细胞的侵袭、迁移和增殖,转染miR-34a inhibitor可促进细胞的侵袭、迁移和增殖。过表达miR-34a可减少JEG-3细胞中Notch1表达,抑制miR-34a可增加Notch1表达;转染Notch1 siRNA后,细胞的侵袭、迁移和增殖能力均受到抑制。结论:miR-34a影响滋养细胞的不同生物学功能,可能通过抑制Notch1表达发挥功能,参与了PE的发生发展。     

腹主动脉球囊预置术与髂内动脉球囊预置术在植入型凶险性前置胎盘治疗中的比较研究

目的:比较研究腹主动脉球囊预置术与髂内动脉球囊预置术在植入型凶险性前置胎盘治疗中的临床疗效。方法:选择2014年1月至2015年4月住院治疗的植入型凶险性前置胎盘患者64例,随机分为两组,择期剖宫产术前行腹主动脉球囊置管32例(腹主动脉组)和双侧髂内动脉球囊置管32例(髂内动脉组),观察比较两组孕妇术中、术后情况及新生儿出生和婴儿期生长发育情况。结果:两组患者在手术时间、术中出血量、术后最高体温、输血率、子宫切除率、住院时间、球囊预置术后穿刺部位出血率、感觉障碍发生率、新生儿Apgar评分、新生儿身高、出生体质量等方面比较,差异均无统计学意义(P0.05);而腹主动脉组球囊预置时间、透视时间、放射剂量均显著低于髂内动脉组(P0.05)。术后1年内随访,两组婴儿在42天、3个月、6个月、1年的体质量及身高情况比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论:腹主动脉球囊预置术与髂内动脉球囊预置术在植入型凶险性前置胎盘的治疗中均能安全、有效减少术中出血。而腹主动脉球囊预置术X线暴露时间更短、预判效果无需造影剂,对母胎保护性更强,可在临床推广。     

Laparoscopic Morcellator-Related Complications

Morcellation at laparoscopy is a commonly used minimally invasive method to extract bulky tissue from the abdomen without extending abdominal incisions. Despite widespread use of morcellation, complications still remain underreported and poorly understood. We performed a systematic review of surgical centers in the United States to identify, collate and update the morcellator-related injuries and near misses associated with powered tissue removal. We searched articles on morcellator-related injuries published from 1993 through June 2013. In addition, all cases reported to MedSun and the FDA device database (MAUDE) were evaluated for inclusion. We used the search terms “morcellation,” “morcellator,” “parasitic,” and “retained” and model name keywords “Morcellex,” “MOREsolution,” “PlasmaSORD,” “Powerplus,” “Rotocut,” “SAWALHE,” “Steiner,” and “X-Tract.” During the past 15 years, 55 complications were identified. Injuries involved the small and large bowels (n = 31), vascular system (n = 27), kidney (n = 3), ureter (n = 3), bladder (n = 1), and diaphragm (n = 1). Of these injuries, 11 involved more than 1 organ. Complications were identified intraoperatively in most patients (n = 37 [66%]); however, the remainder were not identified until up to 10 days postoperatively. Surgeon inexperience was a contributing factor in most cases in which a cause was ascribed. Six deaths were attributed to morcellator-related complications. Nearly all major complications were identified from the FDA device database and not from the published literature. The laparoscopic morcellator has substantially expanded our ability to complete procedures using minimally invasive techniques. Associated with this opportunity have been increasing reports of major and minor intraoperative complications. These complications are largely unreported, likely because of publication bias associated with catastrophic events. Surgeon experience likely confers some protection against these injuries. Understanding and implementing safe practices associated with the use of the laparoscopic morcellator will reduce these iatrogenic injuries.     

宫腔镜下清宫术治疗剖宫产瘢痕妊娠前不同预处理方式的疗效分析

目的:探讨宫腔镜下清宫术治疗剖宫产瘢痕妊娠(CSP)前不同预处理方式的临床效果。方法:回顾性分析2014年10月至2015年10月本院住院中B超检查提示妊娠囊下缘距子宫切口小于1.0 cm行宫腔镜下清宫术并确诊为CSP的患者170例作为研究对象。其中直接行宫腔镜下清宫术的患者23例(A组);行米非司酮+米索前列醇药物治疗后在宫腔镜下行清宫术的患者29例(B组);行米非司酮+甲氨蝶呤+米索前列醇杀胚治疗后在宫腔镜下行清宫术的患者40例(C组);行子宫动脉灌注+介入栓塞术后在宫腔镜下行清宫术的患者78例(D组),比较4组患者治疗效果。结果:①所有患者手术顺利,无一例发生术中大出血和组织残留,4组患者治疗后血β-HCG较治疗前明显下降,术后血β-HCG、术中出血量、手术时间两两比较,差异无统计学意义(P0.05)。②A组和D组住院时间较短,B组和C组较长,A组与D组住院时间差异无统计学意义(P0.05),但其余两两比较,差异有统计学意义(P0.05)。③A组住院费用最少,D组最多,B组住院费用与C组比较差异无统计学意义(P0.05),但其余两两比较,差异均有统计学意义(P0.05)。④术后不良反应情况:A组术后无一例发生不良反应,B组术后有2例肝功能受损,3例恶心、呕吐等胃肠道反应,C组术后有3例肝功能受损,26例发生胃肠道反应;D组1例发生肝功能受损,16例发热,57例疼痛,对症治疗后好转。结论:CSP的治疗应根据患者病情、经济条件、个人意愿和医院的技术设备条件选择合适的治疗方案。     

Fístula cutáneo-uterina poscesárea

A fistula is an abnormal communication between two epithelial surfaces. Although fistulas that wrap around the uterus are not infrequent, uterocutaneous fistula is rare. The treatment of choice is abdominal hysterectomy with excision of the fistula up to the skin. We report two cases of uterocutaneous fistula requiring surgical treatment.