澳洲指橘与粗柠檬体细胞杂种倍性FCM分析及其花粉活力检测

利用流式细胞仪对5株澳洲指橘(Microcitrus papuana Swingle,2n=2x=18)与粗柠檬(Citrus jambhiri Osbeck,2n=2x=18)属间体细胞杂种进行倍性分析,以已知倍性的二倍体粗柠檬植株的峰对应荧光值(FL)50作为对照,5棵再生植株的FL值分别为51、51、47、52、48,表明这些体细胞杂种植株均为二倍体。同时,实验结果还表明,HR(HighResolution)试剂盒中的核提取液HR-A和染色液HR-B的最佳处理时间分别是5min和2min。体细胞杂种于2002年3月首次开花,对其花粉活力进行分析,结果表明体细胞杂种的花粉活力为50％～90％。     

柑橘种间体细胞杂种植株遗传变异研究

对6年生哈姆体甜橙 粗柠檬和4年生伏令夏橙 宜昌橙种间体细胞杂种遗传变异进行了研究。体细胞杂种气孔较大，密度较小，染色体数为四倍体（2n=4x=36)。POX、PPO、GOT和SOD4种同工酶图谱上，体细胞杂种为双亲酶带之和，RAPD分析显示，体细胞杂种含有双亲的谱带，同一融合组合不同单株在叶形指数、气孔特征、染色体数目，同工酶和RAPD图谱上表现一致。     

应用原生质体融合技术获得茄子种间体细胞杂种

 应用原生质体电融合技术, 获得了茄子近缘野生种Solanum torvum、S. aethiopicum 与栽培种S.melongena (六叶茄, Dourga) 的种间体细胞融合四倍体再生植株。染色体检测表明该植株为四倍体(2n =4x = 48) , 荧光免疫检测证明为种间体细胞杂种, 青枯病抗性鉴定表明带有抗病基因, 田间生长表现为倾向野生亲本的中间类型。     

应用GOT同工酶进行柑桔分类的研究

对柑桔亚科11个属52个种类、品种的GOT同工酶进行了分析。结果表明,各属之间谱带差异显著,基因型各异,但金柑属GOT-2谱带与酒饼簕属相一致,表明有可能酒饼簕是进化至金柑属的先头属,而印度枳属有可能是枳的先头属,试验结果支持Scora关于枸橼、柚和宽皮柑桔为柑桔亚属三个基本种的观点,但宽皮柑桔的原始种应当是台湾山桔或类似的野生桔。根据GOT酶带和形态分析,我们认为来檬由大翼橙进化而来;粗柠檬是(木黎)檬和柠檬的杂种;北京柠檬与巴甘檬是来檬与柠檬的杂种;橙类由宽皮柑桔与柚杂交产生。我们将小林神果属蚝壳刺属及酒饼簕属GOT-1带中出现的迁移速度快于P带的2条新带分别命名为H和G带。     

柑桔RAPD技术体系建立与体细胞杂种鉴定

通过优化反应条件,建立起柑桔ＲＡＰＤ分析技术体系,并成功地应用于体细胞杂种鉴定。柑桔ＲＡＰＤ以Ｍｇ２＋为１．５ｍｍｏｌ／Ｌ、〔ｄＮＴＰｓ〕为１００μｍｏｌ／Ｌ时扩增稳定,效果良好。用１６个引物扩增〔哈姆林甜橙（＋）粗柠檬〕融合植株,体细胞杂种表现为双亲谱带之和。结合染色体计数,可将〔Ｐａｇｅ桔柚（＋）粗柠檬〕融合再生的体细胞杂种（异源四倍体）、叶肉亲本类型及同源融合植株区别开来。     

马铃薯栽培种与野生种叶肉细胞融合及体细胞杂种鉴定

 以马铃薯栽培种Solanum tuberosum ‘中薯二号’的无性系3 # 、8 # (2n = 48) 和二倍体野生种Solanum chacoense (2n = 24) 的无菌苗为原生质体来源, 比较了PEG (聚乙二醇) 融合和电融合两种方式马铃薯原生质体融合效果的影响。结果显示, 两种融合方式对细胞的融合率没有显著差异, 但电融合的细胞植板效率和愈伤组织分化能力均显著高于PEG融合法。在早期挑选的生长旺盛的愈伤组织再生的100个株系中, 经RAPD 标记检测有97 个系为体细胞杂种。杂种植株经流式细胞仪倍性分析表明, 52.6 %为六倍体, 14.4 %为八倍体, 14.4 %为非整倍体, 18.6 %为混倍体。叶绿体SSR 引物NTCP29 用于细胞质重组检测, 结果显示, 体细胞杂种中叶绿体具有偏亲现象, 大多数杂种只含有单一亲本的叶绿体类型, 只有16.5 %株系为叶绿体重组的杂种植株。     

柑桔体细胞融合再生9个组合的二倍体叶肉亲本类型植株

电场诱导９个柑桔种间及体内体细胞融合，各组合均再生叶肉原生质体亲本类型植株。这些植株经形态学和细胞学检查证明为二倍体（２ｎ＝２ｘ＝１８）。对其中５个组合进行ＲＡＰＤ分析表明，４个组合植株的谱带在所分析的引物上均表现为与叶肉细胞亲本谱带一致，另１个组合，即Ｐａｇｅ柑柚＋粗柠檬，个别植株除含有叶肉亲本的所有谱带外，还扩增出了悬浮系亲本的部分特征带，为杂种类型。探讨了这类植株的产生原因及潜在价值。     

内生菌根对粗柠檬吸收难溶性磷肥的作用

粗柠檬实生苗经“泡囊一丛枝”菌根真菌的接种和施用磷矿粉作盆栽四个处理,用以测验菌根对柑桔吸收难溶性磷肥的效应。观察表明,中柑1号菌根菌种对粗柠檬的感染率可达96％以上。在四个处理中,接种菌根加施磷矿粉的植株生长反应最好,其枝茎长度和整株鲜重增长最快,分别为单施磷肥植株的2.9和4.3倍以上,主干粗增加2倍左右,其整株含磷量增加7倍。植株的干物质重,叶片含磷量和绝对含磷量等都比其他三个处理明显增多。单施磷肥的植株生长和含磷量与对照的差异不显著。结果证明柑桔根系必需形成内生菌根才能增强对难溶性磷肥的吸收。     

电场诱导原生质体融合获得柑橘属间四倍体体细胞杂种

 采用电融合方法诱导澳洲指橘(Microcitrus papuana Swingle) 悬浮系原生质体与柑(Citrusreticulata Blanco) 叶肉原生质体融合, 得到了再生植株。染色体检查表明再生植株为四倍体( 2n= 4x= 36) , 6 个10-mer 碱基随机引物PCR 扩增结果表明, 尽管再生植株带型表现多样, 但仍然可以证明为体细胞杂种。对再生植株田间生长异常的现象进行了讨论。     

原生质体非对称融合获得胡萝卜( Daucus carota L. ) 种内胞质杂种

 用紫外线辐射处理胡萝卜雄蕊瓣化型不育材料7-0-8 ( 供体) 的原生质体, 与经15 mmol/ L 碘乙酰胺预处理的来源于可育材料66-3 的原生质体( 受体) 电融合, 获得了33 株再生植株。所有再生植株营养体形态特征与受体亲本一致, 染色体数目为18 条, 是二倍体。RAPD 分析表明, 所有再生植株核基因型与受体亲本一致; 线粒体特异性引物- STS4 引物PCR 扩增中, 所有再生植株均得到了与供体亲本一致的谱带, 而与受体亲本不同, 认为33 株再生植株均为胞质杂种。对4 株再生植株进行花期形态学鉴定, 全部为雄蕊瓣化型不育株, 进一步证实获得的为胞质杂种, 雄蕊瓣化型细胞质不育性已由7-0-8 供体转移到受体可育材料66-3 中。     

柑桔体细胞杂种扦插繁殖及其有关性状研究

对３个由原生质体融合产生的柑桔体细胞杂种繁殖特性的研究表明，金柑与甜橙属间体细胞杂种扦插生根成活率较低。甜橙＋宜昌橙以及甜橙＋粗柠檬种间体细胞杂种扦插萌发和生根能力与权及粗柠檬没有显著差异；插条发根平均为２．０条和１．８条，一年生植株根系总长分别为１２２．２ｃｍ和８０．７ｃｍ，与积和粗柠檬均无显著差异；粗柠檬＋甜橙杂种的须根数为３９条，株－１，与权（５４．５条·株－１）差异显著，而宜昌橙＋甜橙种间杂种（４７．７条·株－１）与积差异不显著；体细胞杂种的抗寒性有介于双亲之间的趋势     

柑桔体细胞杂种植物学性状、生长特性及其扦插繁殖研究

采用宜昌橙和伏令夏橙、金柑和伏令夏橙、哈姆林和粗柠檬融合的3个体细胞杂种,进行高接和扦插繁殖,并以亲本或枳作比较。试验结果表明：体细胞杂种之间的生长量存在显著差异,并均受亲本影响;杂种的叶子植物学性状,与亲本相比,叶形指数变小;杂种的刺生长并不与两亲本均值成正相关;杂种扦插成活率偏向高值亲本,其中两个杂种具有与枳扦插应用一样的潜力。即使两亲本的扦插成活率均为0,而杂种仍有部分扦插成活。     

培养三倍体柑桔植株的研究

以柑桔异源四倍体体细胞杂种[哈姆林甜橙（CitrussinensisOsbeckcv．Hamlinsweetorange）＋粗柠檬（C．jambhiriLush　cv．Rough　lemon）]为父本与单胚的二倍体柑桔类型[宜昌橙（C．ichangensisSwingle）与华农本地早（C.reticulataBlancocv．Huanongbendizao）的杂交后代]杂交,通过幼胚早期离体培养,获得了113株再生植株,其中89％为三倍体,并初步筛选出了适宜的幼胚离体培养时间为授粉后80d。     

3种柑橘实生砧木及其2种体细胞杂种根系解剖结构的比较

采用石蜡切片法和组织离析法分别对3种柑橘实生砧木和2种体细胞杂种的根系木质部和导管分子的解剖构造进行了比较。结果表明：（1）粗柠檬、红橘和枳3种实生砧木根系的木质部和韧皮部呈同心圆环状排列,而‘红橘+枳’和‘红橘+粗柠檬’两种体细胞杂种木质部和韧皮部呈“海星状”排列,结构异常。（2）导管所占的面积和密度,均以生长势较强的粗柠檬为大,以生长势较弱的枳为小;体细胞杂种没有明显规律。（3）柑橘导管分子属于孔纹导管,穿孔板均为单穿孔,大多分布于端壁上;导管分子两端具尾、倾斜、侧壁穿孔等性状的有无及其比例,反映出生长势的差异及其输导能力的强弱。（4）粗柠檬具有较好输导能力的导管分子结构,而枳较差;体细胞杂种根系的导管分子长度和直径都大于其亲本,在导管分子性状上,向不利于输导能力的较原始性状偏移。     

脐橙与粗柠檬体细胞杂种果实类胡萝卜素、糖酸遗传的亲本偏向性

 采用高效液相色谱测定柑橘种间体细胞杂种[‘朋娜’脐橙（Citrus sinensis Osbeck）+ 粗柠檬（C. jambhiri Lush）]和其两个融合亲本果实的类胡萝卜素含量，气相色谱测定可溶性糖及有机酸含量，并检测代谢过程中关键基因的表达，比较分析体细胞杂种果实品质遗传及基因表达特点。结果表明，体细胞杂种类胡萝卜素成分及含量均偏向粗柠檬亲本，柠檬酸、苹果酸积累量也偏向粗柠檬；而蔗糖含量处在中亲值；实时定量PCR 技术检测类胡萝卜素代谢途径中的7 个基因，其中4 个基因在‘朋娜’脐橙中的表达量高于粗柠檬，环化途径中番茄红素ε 环化酶基因（CitLcy-e）、玉米黄质环氧酶基因（CitZep）在体细胞杂种中表达量偏向粗柠檬亲本，显著低于‘朋娜’脐橙。可见粗柠檬遗传物质的表达在体细胞杂种中占主导地位。     

Molecular analysis revealed autotetraploid,diploid and tetraploid cybrid plants regenerated from an interspecific somatic fusion in Citrus

More than 150 plants were regenerated from our previous somatic hybridization between embryogenic callus line of Page tangelo (Citrus reticulata Blanco × C. paradisi Macf) and mesophyll protoplasts of rough lemon (C. jambhiri Lush) mediated by electrofusion. Preliminary screening showed that 78% of these plants were tetraploids while the rest were diploids morphologically resembling the leaf parent (rough lemon). Herein, eight plants (six tetraploids and two diploids) were selected and further analyzed by flow cytometry, simple sequence repeat (SSR), mitochondria (mt) RFLP and chloroplast (cp) SSR techniques. The results showed that four of these six tetraploids were somatic hybrids, one tetraploid was autotetraploid of Page tangelo, and the remaining one tetraploid was cybrid with nuclear and cpDNA from rough lemon and mtDNA from Page tangelo; the two diploids were verified being cybrids with nuclear DNA from rough lemon and mtDNA from Page tangelo, cpDNA was randomly inherited. The regeneration mechanism of these novel cybrids was discussed.     

柑橘种间六倍体体细胞杂种开花及其花粉育性

 二倍体锦橙+种间四倍体体细胞杂种HR (哈姆林甜橙+ 粗柠檬) 的种间六倍体体细胞杂种植株移入温室7年后(即2004年) , 有1株六倍体首次开花, 花粉染色活力40.8% , 花粉萌发率3.7%;2006年该植株再次开花, 花粉染色活力为20.3%。由于自然界中没有柑橘六倍体, 本研究是人工的方法创造出可育的柑橘六倍体体细胞杂种植株的首例报道。     

Yield,fruit quality,and tree health of ‘Allen Eureka’ lemon on seven rootstocks in Saudi Arabia

Since environmental conditions and cultural practices vary from one area to another, yield, fruit quality, and tree health measurements were conducted over 9 years to evaluate the long-term adaptability and performance to local conditions of ‘Allen Eureka’ lemon (Citrus limon Burm.f.) budded on seven rootstocks in the Najran area of Saudi Arabia. Trees on Citrus macrophylla (CM), Volkamer lemon (VL), and Cleopatra mandarin (Cleo) were the most productive, while trees on Amblycarpa (Amb), rough lemon (RL), Citrus taiwanica (CT), and sour orange (Citrus aurantium L.) (SO) had the lowest yield. Fruit from trees on CM and VL were also the largest in size and had the thickest rind, but were among those that had the lowest juice content and lowest total soluble solids. None of the trees on Cleo, VL, or RL died until the 14th year. However, there was a high mortality rate and severe tree decline on SO, CT, and Amb.