紫外线对翼状胬肉细胞的作用

目的研究紫外线对翼状胬肉细胞的作用，探讨紫外线和翼状胬肉发生发展的关系。方法收集翼状胬肉标本，采用血管内皮细胞和成纤维细胞单独培养、条件培养和共同培养的方法构建体系，用MTY法选择紫外线照射细胞的适宜强度；采用M1Tr法绘制强度20mJ／cm2紫外线照射下细胞生长曲线；采用ELISA和RT—PCR检测紫外线照射下3种体系中细胞上清液和细胞中血管内皮细胞生长因子（VEGF）和成纤维细胞生长因子（bFGF）的蛋白和RNA含量变化。结果不同强度紫外线照射细胞活性实验，选择20mJ／cm2强度作为实验照射基数；翼状胬肉微血管内皮细胞（PE）和成纤维细胞（PF）在紫外线照射下，细胞活性下降；单独培养PE受紫外线照射后VEGF的RNA含量和上清液VEGF蛋白含量，照射组较未照射组有显著性下降（P〈0．05）；单独培养和条件培养PF受紫外线照射后VEGF的RNA含量和上清液VEGF含量，照射组较未照射组有显著性下降（P〈0．05）。3种体系PE和PF照射后bFGF的RNA含量及细胞上清液中bFGF的蛋白含量，照射组较未照射组呈显著性下降（P〈0．05）。结论紫外线对体外培养的血管内皮细胞和成纤维细胞生长有抑制作用。     

bFGF对兔视网膜Müller细胞表达VEGF的影响

血管内皮生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）是视网膜细胞分泌的两种最重要的血管生成因子。二者有协同作用，bFGF还可以诱导内皮细胞表达VEGF。视网膜Müller细胞是视网膜中分泌VEGF的主要细胞之一，为了进一步探讨Müller细胞在糖尿病视网膜病变（DR）中的作用，本研究观察了bFGF对体外培养免视网膜Müller细胞表达VEGF的影响。     

人翼状胬肉中细胞因子及其受体的改变

目的 检测并探讨翼状胬肉中细胞因子及其受体的变化及其可能机制.方法 收集翼状胬肉标本20例和正常结膜10例,每例标本对称切成2份.一份制成石蜡和冰冻切片,采用免疫组织化学技术检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)及其相应受体--血管内皮细胞生长因子受体2(Vascular endothelial growth factor receptor2,VEGFR-2)和碱性成纤维细胞生长因子受体l(fibroblast growth factor receptor 1,FGFR-1)的表达.另一份:首先组织匀浆离心后,提取上清液,采用ELISA和Western blotting技术检测VEGF和bFGF含量;其次提取RNA后采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测VEGFR-2和FGFR-1的RNA含量.结果 免疫组织化学结果显示VEGF主要在血管内皮细胞及其周围表达,bFGF主要在成纤维细胞及其周围表达.VEGFR-2和FGFR-1主要在血管内皮细胞胞膜上表达;ELISA和Western blotting结果表明VEGF含量在翼状胬肉组织(50.37μ·g-1±4.18μ·g-1)中明显强于结膜组织(28.94μg·g-1±1.41μg·g-1),而bFGF的表达在翼状胬肉(3.36μg·g-1±0.15 μpg·g-1)和结膜组织(3.56μ pg·g-1±0.16μg·g-1)中比较,差异无统计学意义(P=0.06);RT-PCR结果证实VEGFR-2表达在翼状胬肉(0.01. U·g-1±0.00 U·g-1)中明显高于结膜组织(0 U·g-1),而FGFR1表达结膜组织(0.04 U·g-1±0.00 U·g-1)高于翼状胬肉组织(0.01 U·g-1±0.00 U·g-1).结论 翼状胬肉组织中VEGF的表达高于在结膜中,而bFGF表达差异无统计学意义;VEGFR-2的表达翼状胬肉明显高于结膜,而FGFR-1的表达则是结膜高于翼状胬肉,提示翼状胬肉中血管新生通过VEGF途径诱导.[眼科新进展2009;29(6):425-427,430]     

翼状胬肉中环氧合酶2的表达及其相关研究

目的探讨翼状胬肉中环氧合酶2（COX-2）的表达及其选择性抑制剂尼美舒利的相关抑制作用。方法翼状胬肉组织与对照的正常结膜组织标本分别取自在华中科技大学同济医学院附属协和医院眼科行手术治疗的患者,采用免疫组织化学法分别检测组织中COX-2的表达情况;原代培养人翼状胬肉成纤维细胞（HPF）,经鉴定后,分别应用浓度0、1、10、100ng／ml碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）作用24h,采用Western—blot法分别检测HPF中COX-2蛋白的表达变化;分别应用浓度0、25、50、100、200μmol／L尼美舒利作用于HPF,分别培养24、48、72、96h,四唑氮蓝还原法（MTT）检测不同浓度尼美舒利在不同时间对HPF增殖的影响。结果免疫组织化学结果显示翼状胬肉组织中COX-2阳性表达率为70％。Western blot法显示在不同浓度bFGF刺激下,HPF中COX-2蛋白的表达均呈阳性,且表达呈剂量依赖性;MTT试验证实尼美舒利呈剂量依赖性和时间依赖性抑制成纤维细胞的增殖。用药24h后50μmol／L浓度即开始明显抑制（P〈0．05）。结论bFGF可以刺激HPF的增殖并诱导翼状胬肉中COX-2的表达上调。COX-2可能参与翼状胬肉的形成;而应用选择性COX-2抑制剂尼美舒利可显著抑制HPF的增殖。     

生长因子诱导的血管内皮细胞增殖作用的研究

目的 研究生长因子对血管内皮细胞增殖活动的诱导和刺激作用。以进一步探讨生长因子在视网新生血管疾病中所起的作用。方法 采用血管内皮生长因子（VEGF）和碱性成纤维生长因子（bFGF）诱导离体培养的血管内皮细胞的增殖。研究VEGF及bFGF对血管内皮细胞DNA合成、细胞生长和细胞周期的调控，以及两种因子的协同效应。结果 VEGF及bFGF均可显著刺激血管内皮细胞的增生，其刺激效应与生长因子浓度呈剂量依赖关系。共同作用时，具有协同效应。两种因子均可显著增加^3H-TdR的掺入量，其刺激作用与浓度呈剂量依赖关系，共同作用时亦具有协同效应。VEGF和bFGF均可显著地产加S期细胞的比例。结论 VEGF及bFGF均可显著地刺激内皮细胞的增殖，促进细胞DNA的合成。两种因子联合应用时，具协同效应。提示：两种生长因子在视网膜新生血管的发生和发展中可能具有一定作用，且存在因子间的协同效应。     

纤维蛋白胶在兔眼翼状胬肉自体结膜瓣转移手术中的应用

背景 翼状胬肉为临床常见的眼表疾病.为降低其术后复发率,众多学者进行了广泛的研究.近年来,纤维蛋白胶的应用逐渐受到人们的重视. 目的 探讨利用纤维蛋白胶粘合翼状胬肉自体结膜瓣转移对于减少术后刺激的作用机制.方法 取12只清洁级家兔采用角巩膜缘组织切除和质量分数1.25％稀盐酸点眼法制作兔眼翼状胬肉模型并行翼状胬肉自体结膜瓣转移手术,其中左眼利用手术缝线缝合结膜瓣(缝线组),右眼利用纤维蛋白胶封闭结膜瓣(蛋白胶组),比较两组手术的持续时间.分别于术后1周和4周检查两组兔眼的刺激症状,采用免疫组织化学染色和逆转录聚合酶链反应( RT-PCR)法观察血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)蛋白及其mRNA在结膜组织中的表达情况. 结果 缝线组手术持续时间为(21.3±0.2)min,而纤维蛋白胶组为(10.1±0.1)min,纤维蛋白胶组较缝线组手术时间明显缩短(t=102.242,P＜0.05).术后1周及术后4周,纤维蛋白胶组的结膜充血程度为(+)～(++),缝线组为(++)～(+++),纤维蛋白胶组充血程度明显较轻.免疫组织化学染色显示,VEGF和bFGF主要在结膜上皮细胞层表达,棕黄色颗粒沉积于上皮细胞的细胞质.术后1周时,纤维蛋白胶组的VEGF和bFGF表达强度明显弱于缝线组;术后4周时,两组VEGF和bFGF的表达较术后1周时有所减弱,但纤维蛋白胶组仍明显弱于同期缝线组.RT-PCR检测显示,术后纤维蛋白胶组VEGF mRNA在结膜上皮组织中的表达明显低于缝线组,VEGFmRNA表达量随着术后时间的延长而下降,差异均有统计学意义(F组别=174.443,P=0.000;F时间=231.459,P=0.000);bFGF mRNA的表达遵循同样的模式,差异均有统计学意义(F组别=41.727,P=0.000;F时间=55.417,P=0.000).结论 纤维蛋白胶粘合可以免去缝合环节,节省手术时间,避免缝线的刺激,并可减轻炎症反应.通过减少VEGF和bFGF的表达,可能有助于降低翼状胬肉的复发率.     

缺氧、bFGF和VEGF对牛视网膜血管内皮细胞和周细胞增殖的影响

目的　探讨缺氧和细胞生长因子对视网膜血管内皮细胞和周细胞增殖的影响。方法　 ( 1)采用细胞克隆、机械除杂法培养视网膜血管内皮细胞和周细胞。 ( 2 )四唑盐比色试验 (MTT)和细胞计数法描绘正常和缺氧状态下牛视网膜血管内皮细胞和周细胞的增殖生长曲线。 ( 3 )加入碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)后用MTT法观察它们对内皮细胞增殖的影响。结果　 ( 1)缺氧组牛视网膜血管内皮细胞在第 4、5d数目较正常组显著增加 (P <0 0 5 ) ,周细胞则在 4～ 7d数目明显增多。 ( 2 )加入VEGF可使四甲基偶氮唑盐 [3 ( 4 ,5 dimethylthia zolzyl) 2 ,5 diphenyltetrazo diumbromide ,MTT]值达到 2 1786,加入bFGF可使MTT值达到 2 9897,加入VEGF和bFGF使MTT值达到 2 943 1,而对照组仅为 1 0 13。结论　 ( 1)缺氧环境能刺激培养的牛视网膜血管内皮细胞和周细胞的增殖。( 2 )VEGF和bFGF能促进视网膜血管内皮细胞增殖 ,且bFGF促增殖的能力更强 ,但两者相加并不能增加促增殖作用。     

汉防己甲素对翼状胬肉成纤维细胞相关因子分泌的影响

目的 观察翼状胬肉组织块分泌的相关因子变化,了解汉防己甲素（tetrandrine,Tet）对翼状胬肉病变的作用.方法 收集初发翼状胬肉（实验组）和正常球结膜组织块（对照组）体外培养上清液,ELISA检测上清液中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、白介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）的含量及10^-5 mol·L^-1 Tet作用48 h实验组中各因子含量的变化.结果 实验组上清液中VEGF含量较对照组高（P＜0.01）;加入Tet作用48 h后明显下降（P＜0.01）,与对照组上清液中VEGF含量无差异（P＞0.05）.2组上清液中IL-1β的含量相比差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 VEGF在翼状胬肉新生血管形成中发挥着重要作用.汉防己甲素对翼状胬肉组织中VEGF的分泌有明显抑制作用,有良好的应用前景,但IL-1β在翼状胬肉中的作用仍需进一步研究.     

糖皮质激素对翼状胬肉中SDF-1表达的影响

目的：研究基质细胞衍生因子-1（stroma cell-derived factor-1, SDF-1）和血管内皮生长因子（ vascular endothelial growth factor,VEGF）在翼状胬肉组织中的表达情况,探讨糖皮质激素应用对SDF-1表达的影响。 方法：选取翼状胬肉患者48例,其中随机选取24例患者在术前给予0.2g/L氟米龙眼药水点眼1wk。采用免疫组化SP法,检测翼状胬肉和正常球结膜组织中SDF-1、VEGF的表达。并使用IPP软件定量测定SDF-1、VEGF的光密度值。 结果：SDF-1和VEGF在正常结膜组织中仅见上皮基底层细胞有阳性表达或不表达,翼状胬肉中上皮全层细胞和血管内皮细胞均有阳性表达,其表达水平有显著性差异。SDF-1和VEGF在翼状胬肉中的表达呈显著相关性（ r=0.5235,P〈0.01）。糖皮质激素应用后,SDF-1和 VEGF的表达水平降低,差异有统计学意义。 结论：SDF-1、VEGF与翼状胬肉的发生发展存在着重要的联系,糖皮质激素可能通过减少SDF-1和VEGF的表达来抑制新生血管的形成。     

碱性成纤维细胞生长因子促进血管内皮细胞增殖作用的实验研究

目的:探讨不同浓度的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对体外培养的人眼眶内微血管内皮细胞生长的影响。方法:通过不锈钢筛网2次过滤法分离得到眼眶内微血管内皮细胞.将浓度为20,40,80,160μg/L的bFGF分别加入内皮细胞培养液中作为实验组(I-IV)。不加bFGF的作为对照组,分别在24,48,72h,应用MTT法进行细胞计数。结果:用不锈钢筛网两次过滤法成功的分离到内皮细胞。3d内,实验组和对照组的内皮细胞都有不同程度的增殖。培养24h,实验组与对照组比较,P>0.05,无统计学差异;48h,III,IV与对照组及I,II组比较,差异非常显著(P<0.01);72h时,III组与其它实验组及对照组比较,差异非常显著(P<0.01)。结论:一定浓度的bFGF有非常明显的促血管内皮细胞生长的作用,其中以80μg/L的浓度最显著,可能对早期羟基磷灰石眶内植入血管内生延迟有较大的治疗作用。     

人羊膜上皮细胞培养液抑制角膜新生血管的实验研究

背景 角膜新生血管(CNV)是一种常见的眼部病变,研究其发病机制及其抑制剂是眼科研究的热点和难点. 目的 研究人羊膜上皮细胞(AECs)培养液对CNV的抑制作用及机制. 方法 消化法培养及鉴定人AECs,并收集培养液,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测色素上皮衍生因子(PEDF)和白细胞介素1受体拮抗剂( IL-1Ra)在培养液中的质量浓度.兔角膜上皮细胞分离后分别用无血清DMEM培养基、人AECs培养液、混合培养液(DMEM+人AECs培养液)培养48 h,采用实时定量聚合酶链反应(QRT-PCR)法检测不同培养液培养的角膜上皮细胞中血管内皮生长因子(VEGF)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达.用含质量分数10％胎牛血清的DMEM培养基培养人脐静脉血管内皮细胞(UVECs),并分别加入无血清DMEM、混合培养液和人AECs培养液,划痕法和细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测各组培养液对人UVECs迁移的影响.分别在上述3种培养基中加入终质量浓度为50 μg/L的bFGF,CCK8法检测各培养液中人UVECs的增牛情况.在原子力显微镜(AFM)下观察人AECs培养液对人UVECs超微结构的影响. 结果 人羊膜培养和传代细胞角蛋白免疫组织化学染色阳性证实为人AECs.与无血清DMEM组相比,人AECs培养液组的兔角膜上皮细胞VEGF mRNA(1.00±0.22 vs.2.98±0.46)及bFGF mRNA( 1.00±0.36vs.2.55±0.48)的表达均明显下降,差异均有统计学意义(P=0.001、0.002);培养后不同时间人AECs培养液组人UVECs的增生吸光度(A)值明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05),人UVECs的迁移率下降,差异有统计学意义(P＜0.05).AFM观察见人AECs培养液组的血管内皮细胞膜粗糙、表面颗粒紊乱,细胞间连接及伪足减少.ELISA法检测人AECs培养液中PEDF的质量浓度为(70.41 ±0.68) μg/L,IL-1Ra的质量浓度为(153.56±0.36) ng/L,无血清DMEM组中未检出.结论 人AECs培养液可抑制角膜上皮VEGF及bFGF的表达,抑制血管内皮细胞的增生和迁移,细胞结构和功能改变,这可能是其抑制CNV的机制之一.     

血清中VEGF和bFGF水平与糖尿病视网膜病变关系的临床研究

目的:探讨糖尿病视网膜病变患者血清中血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)水平与糖尿病视网膜病变的关系。方法:收集患有糖尿病视网膜病变白内障患者的血清样本,并以无糖尿病白内障患者的血清样本作为对照,用ELISA方法测定血清中bFGF,VEGF的含量。结果:对照组12例血清样本bFGF含量为(34.95±9.62)ng/L,VEGF含量为(150±20)μg/L;单纯型DR组中10例bFGF含量为(52.6±7.54)ng/L,VEGF含量为(330±50)μg/L;增生型DR组7例bFGF含量为(64.929±11.917)ng/L,VEGF含量为(580±50)μg/L。和对照组相比糖尿病患者血清中bFGF,VEGF的含量均显著增加(P<0.01),并且随着DR病情的进展而增高(P<0.05);血清中VEGF与bFGF之间呈正相关(r=0.419,P<0.01)。结论:VEGF,bFGF参与了DR的发生发展,并与DR后期新生血管形成关系密切。     

VEGF和bFGF在蒙古族糖尿病视网膜病变中的表达

目的：研究血管内皮生长因子( vascular endothelial growth factor,VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)在蒙古族糖尿病患者视网膜病变中的表达,探讨其中在糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy, DR)发生过程中的作用。
　　方法：对2013-02/2015-02在内蒙古自治区人民医院眼科83例蒙古族糖尿病患者根据视网膜病变情况分为：无糖尿病视网膜病变患者(NDR 组)25例、背景型糖尿病视网膜病变患者(NPDR 组)31例、增殖型糖尿病视网膜病变患者(PDR 组)27例。36例年龄匹配健康志愿者作为对照组。分别采集患者外周静脉血,采用 ELISA 法分别对血清中 VEGF 和 bFGF 的表达情况进行测定。
　　结果：蒙古族糖尿病患者血清中 VEGF 和 bFGF 的水平显著高于对照组;三组蒙古族糖尿病患者中,PDR 患者血清VEGF 和 bFGF 水平高于 NDR 和 NPDR 组,差异具有统计学意义(P<0.05),NPDR 患者血清 VEGF 和 bFGF 水平又显著高于 NDR(P<0.05)。
　　结论：高表达的 VEGF 和 bFGF 可能是蒙古族 DR 发生、发展的重要致病因素。     

鱼精蛋白体外抑制RF/6A细胞中血管内皮生长因子表达的研究

目的研究鱼精蛋白对体外培养的RF/6A细胞中血管内皮生长因子（VEGF）表达的抑制作用。方法建立RF/6A细胞的正常及缺氧培养模型,在上清液中加入鱼精蛋白,质量浓度分别为10、20、40、80、160μg/mL。在细胞培养的0、24、48、72、96、120h取上清液行ELISA检测,定量分析细胞的VEGF表达情况。在培养96h时,取出细胞铺片行免疫病理学检测,检测VEGF与受体的结合状况。结果在10～80μg/mL的范围内,鱼精蛋白的抑制作用与质量浓度成正比,80μg/mL为最佳的抑制质量浓度。缺氧条件下RF/6AVEGF的表达量始终高于正常氧浓度条件下;正常和缺氧状态下,鱼精蛋白均可以明显抑制VEGF的表达,不同组的差异有统计学意义（F=7.85,P=0.002）。免疫病理染色表明鱼精蛋白减少了VEGF与其受体的结合。结论一定质量浓度的鱼精蛋白对正常及缺氧状态下的RF/6AVEGF的表达有明确的抑制作用,同时还可以减少VEGF与VEGF受体的结合。鱼精蛋白有可能成为临床治疗缺血型新生血管性眼底病的新药。     

Effect of a novel tyrosine kinase inhibitor nintedanib on bFGF and VEGF concentrations in a rabbit retinal vein occlusion model

AIM: To evaluate whether a novel tyrosine kinase inhibitor nintedanib could inhibit basic fibroblast growth factor (bFGF) and vascular endothelial growth factor (VEGF) simultaneously for retinal vascular disease in vivo. METHODS: After a laser induced rabbit retinal vein occlusion (RVO) model was made, 0.5 mg of nintedanib was injected intravitreally in the left eye on the third day while the right eye was as a control. Intracameral samples were taken on the day before laser treatment and days 1, 3, 7, 14, 21, and 28 after treatment. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to test the bFGF and VEGF-A concentrations in the aqueous humor. RESULTS: Both bFGF and VEGF-A rose significantly on the third day after laser treatment in both eyes. In the control eye the bFGF concentration peaked on the 14th day while the VEGF-A concentration dropped rapidly soon after the third day. After nintadanib injection in the study eye, both bFGF and VEGF-A showed a significant reduction on the 4th day (7th day after laser treatment) when compared to the control eye, and kept on low level in the following several weeks. CONCLUSION: Intravitreal injection of nintedanib can inhibit the expression of bFGF and VEGF in the process of RVO model to a certain extent, which is expected to become a new method for the treatment of retinal vascular diseases or fibrotic diseases.     

Differences in the temporal expression of regulatory growth factors during choroidal neovascular development

Although the roles of vascular endothelial growth factor (VEGF), basic fibroblast growth factor (bFGF), and hepatocyte growth factor (HGF) in pathologic neovascularization have been well characterized in certain tissues, their particular functions and expression patterns in choroidal neovascularization (CNV) have not been clearly established. After localized laser trauma to Bruch's membrane to induce CNV development, the temporal changes in mRNA and protein expression of these 3 cytokines were documented and compared histologically to areas of immunofluorescence, the proliferation of endothelial cells, neovascular development, and temporal changes in vascular permeability. Changes in mRNA and protein levels of bFGF and HGF occurred quickly and reached peak expression within hours. This activity corresponded in time to intense and localized immunofluorescence for these cytokines within the choriocapillaris within laser lesion sites. During this same initial time period, mRNA upregulation of VEGF occurred, primarily within the neural retina and this expression corresponded to intense immunolabeling of Müller cells immediately adjacent to the lesion sites. By 3 days after lasering, increased VEGF₁₆₄ protein expression was measurable, whereas early neovascular development histologically corresponded to HGF and bFGF mRNA expansion into the developing choroidal neovascular membrane (CNVM). At 7 days, CNV expansion, maturation, and increased vascular permeability corresponded to peak VEGF mRNA and protein expression and to immunofluorescence of the CNVM. Differences also occurred in the expression of precursor and activated isoforms of these cytokines in the retinal pigment epithelium/choroid as compared to those in the retina. These molecular and immunocytochemical results suggest that bFGF and HGF may be important as initial regulators neovascularization in this CNV model; whereas VEGF may be important during later phases of angiogenesis and neovascular hyperpermeability.     

初发胬肉与复发胬肉中IL-1α和VEGFR-1的表达相关性研究

目的探讨初发胬肉和复发胬肉中,白细胞介素1α（IL-1α）和血管内皮生长因子受体1（VEGFR-1）及它们的相关性及与胬肉的发生、复发的关系。方法用免疫组织化学方法对30例初发翼状胬肉和30例复发翼状胬肉组织中的IL-1α和VEGFR-1进行检测,并与正常人的角膜缘组织中的IL-1α和VEGFR-1进行对照。结果免疫组织化学染色显示IL-1α和VEGFR-1在初发胬肉和复发胬肉上的表达有高度相关性,正常结膜、初发胬肉、复发胬肉中的IL-1α和VEGFR-1的含量差异有统计学意义（P=0.000）。结论本研究是首次将初发翼状胬肉与复发翼状胬肉中的IL-1α和VEGFR-1进行检测和相关性研究。IL-1α和VEGFR-1表达成正相关,认为翼状胬肉切除术后两者相互作用可能是翼状胬肉复发的主要因素。