肾透明细胞癌组织中miR-34a和miR-34b/c基因CpG岛甲基化状态的变化及意义

目的 探讨肾透明细胞癌组织中miR-34a和miR-34b/c基因CpG岛甲基化状态的变化及其意义.方法 将30例肾透明细胞癌手术患者的肾癌组织和癌旁正常组织标本按是否有淋巴结转移分为2组:A组15例为无淋巴结和(或)远处转移,B组15例为有淋巴结和(或)远处转移.提取各标本中的DNA,经甲基化处理后,用PCR的方法检测miR-34a和miR-34b/c基因CpG岛甲基化状态在2组肾癌组织和癌旁正常组织中的表达情况.结果 电泳结果显示,miRNA-34a和miR-34b/c基因成单一条带,其所处的位置及其在正常组织和癌组织中的甲基化情况符合前期的预计.miR-34a和miR-34b/c基因CpG岛甲基化状态如下:A组肾癌组织中miR-34a 4例,占26.7％,miR-34b/c 15例,占100.0％,癌旁正常组织均为0;B组肾癌组织中miR-34a 13例,占86.7％,miR-34b/c15例,占100.0％,癌旁正常组织均为0.miR-34a和miR-34b/c基因CpG岛甲基化状态在肾癌组织中明显增高;伴有淋巴结转移的肾癌组织中,miR-34a基因CpG岛甲基化明显高于无淋巴结转移的肾癌组织(86.7％比26.7％,P＜0.05).结论 miR-34a和miR-34b/c基因CpG岛甲基化状态在肾癌组织中明显增高,提示其与肾透明细胞癌的发生与进展有关,尤其是miR-34a基因CpG岛高甲基化与肾透明细胞癌的转移可能存在密切联系,有望成为指导肾透明细胞癌诊断、治疗及判断预后的新靶点.     

肾透明细胞癌组织中miRNA-185水平的变化及其意义

目的探讨肾透明细胞癌组织中微小RNA-185（miRNA-185）水平的变化及其意义。方法提取22例手术患者肾癌组织和癌旁正常组织中的miRNAs,用RT-PCR的方法初步检测miRNA-185在肾癌组织和癌旁正常组织中的表达情况。采用Real-time PCR的方法定量分析miRNA-185在肾癌组织及癌旁正常组织中的表达情况。结果电泳结果显示,miRNA-185和U6 RNA均呈单一条带,其所处的位置及其在正常组织和癌组织中的表达情况符合前期的预计。Real-time PCR结果显示,miRNA-185在肾癌组组织中呈高表达,较癌旁组组织平均升高5.14倍。22例标本中有17例（77%）肾癌组组织中miRNA-185阳性表达率为77.3%（17/22）,明显高于癌旁组的22.7%（5/22）（P〈0.05）。G1期的4例肾癌标本均较相应的癌旁正常组织呈现低表达,高表达的则离散分布在G2和G3期。相关性分析结果显示,miRNA-185在肾透明细胞癌组织中的相对表达量与肾癌病理学分期呈正相关（r=0.58,P〈0.05）。结论 miRNA-185在肾癌组织中呈显著高表达,提示其与肾透明细胞癌的发生与演进有关,有望成为指导肾透明细胞癌诊断、治疗、预后的新靶点。     

E-cadherin、Bcl-2在早期肾癌及癌旁不同距离组织中的表达及其意义

目的通过检测E-cadherin、Bcl-2在早期肾癌及癌旁不同距离组织中的表达水平,为早期肾细胞癌行保留肾单位手术中安全边距的选择提供理论依据。方法选取我院行根治性肾切除术的标本45例,病理诊断均为肾透明细胞癌,分别取癌组织（a）,癌旁0.5cm（b）、1.0cm（c）、2.0cm（d）处正常组织,应用即用型非生物素免疫组化Elivision法研究E-cadherin、Bcl-2在各组组织中的表达和组织间的表达差异。结果 E-cadherin在肾癌组织中的阳性表达率为11.1%,Bcl-2在肾癌组织中的阳性表达率为80.0%,a组的E-cadherin、Bcl-2阳性表达率与b、c、d组差异均有统计学意义（均P〈0.01）,而b、c、d各组之间差异均无统计学意义（均P〉0.05）。结论癌旁0.5cm处可认为早期肾癌行保留肾单位手术的安全边距。     

microRNA-21、microRNA-135b和microRNA-141在结肠癌组织中的表达及相关性

目的探析结肠癌组织中microRNA-21、microRNA-135b和microRNA-141表达水平。方法入选该院2013年5月至2014年4月结肠癌手术切除标本40例,采自结肠癌组织及近癌切端结肠癌旁健康组织,进行实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR),检测结肠癌组织及结肠癌旁健康组织中的microRNA-141、microRNA-135b、microRNA-21表达水平;依据国内外相关文献,将性别、年龄、淋巴结转移、肿瘤分期系统(TNM)、分化程度列为相关因素,评估其和结肠癌组织中microRNA-141、microRNA-135b、microRNA-21表达水平的相关性。结果结肠癌组织中microRNA-141、microRNA-135b、microRNA-21表达水平显著高于结肠癌旁健康组织,差异有统计学意义(P0.05);结肠癌组织microRNA-141、microRNA-135b、microRNA-21表达水平与结肠癌是否发生淋巴结转移、TNM分期等指标密切相关,差异有统计学意义(P0.05)。结论结肠癌组织中miRNA-141、miRNA-135b、miRNA-21表达水平过高,与结肠癌是否发生淋巴结转移、TNM分期密切相关。     

miRNA-21-5p对食管癌的诊断价值及其与STAT3的相关性研究

目的分析微小RNA(miRNA)-21-5p在食管癌中的潜在诊断价值,并探索其可能的作用机制。方法选取2016年1月—2018年6月在浙江大学医学院附属邵逸夫医院下沙院区治疗的食管癌患者78例(病例组)以及体检健康者69名(对照组)。采集患者治疗前血液及术中癌组织、癌旁组织,通过实时聚合酶链反应(PCR)检测血清中miRNA-21-5p的表达,通过picTar、TagetScan、Tarbase 3个数据库分别预测miRNA-21-5p的靶基因;利用Draw venn diagram选取3个数据库预测靶基因交集;采用实时PCR检测食管癌患者癌组织和癌旁组织中信号传导和转录激活子3(STAT3)mRNA的表达情况。结果实时PCR结果显示,miRNA-21-5p在食管癌患者血清中高表达,且显著高于对照组(P0.01);STAT3 mRNA在食管癌患者癌组织中高表达,显著高于癌旁组织(P0.01);Spearman相关性分析发现两者呈正相关。结论在食管癌患者血清中miRNA-21-5p呈高表达,同时在癌组织中miRNA-21-5p的预测靶基因STAT3 mRNA也呈高表达,并且两者呈正相关。     

miRNA-224-5p通过TGF-β/Smad4信号通路调控甲状腺乳头状癌细胞凋亡

目的探讨miRNA-224-5p通过TGF-β/Smad4信号通路对甲状腺乳头状癌细胞凋亡的调控作用。 方法选取2015年7月至2017年11月新疆维吾尔自治区人民医院手术切除所得甲状腺乳头状癌组织及相应的癌旁组织冻存标本各60份。通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测60例甲状腺乳头状癌组织及60例癌旁组织中miRNA-224-5p的相对表达量,二者比较采用配对资料t检验。将miRNA-224-5p（miRNA-224-5p组）与miRNA-224-5p抑制剂（miRNA-224-5p抑制剂组）分别转染到甲状腺乳头状癌细胞株GLAG-66中,通过RT-PCR检测两组中GLAG-66细胞内miRNA-224-5p的相对表达量,应用流式细胞仪检测两组GLAG-66细胞转染48 h后凋亡率,应用Western blot实验检测两组GLAG-66细胞中Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase3、TGF-β1、Smad4蛋白的相对表达量,并采用两个独立样本t检验进行比较。 结果miRNA-224-5p在甲状腺乳头状癌组织中的相对表达量与癌旁组织比较明显升高,差异具有统计学意义［（4.175±0.523）vs（1.236±0.236）,t=9.675,P=0.001）］。miRNA-224-5p抑制剂组GLAG-66细胞中miRNA-224-5p的相对表达量与miRNA-224-5p组比较明显下降,差异具有统计学意义［（0.381±0.078）vs（1.000±0.023）,t=19.785,P<0.001）］。miRNA-224-5p抑制剂组GLAG-66细胞转染48 h后的凋亡率与miRNA-224-5p组比较明显增高,差异具有统计学意义［（18.66%±0.98%）vs（3.78%±0.36%）,t=17.561,P<0.001］。miRNA-224-5p抑制剂组和miRNA-224-5p组比较,GLAG-66细胞中Bcl-2、TGF-β1和Smad4蛋白的相对表达量明显降低,差异具有统计学意义［（0.197±0.008）vs（0.278±0.013）,t=8.259,P=0.001;（0.117±0.013）vs（0.227±0.012）,t=13.269,P<0.001;（0.268±0.012）vs（0.439±0.016）,t=9.897,P=0.001］;Bax、Cleaved-Caspase3蛋白的相对表达量明显升高,差异具有统计学意义［（0.286±0.011）vs（0.159±0.009）,t=12.569,P<0.001;（0.128±0.009）vs（0.083±0.010）,t=7.693,P=0.002］。 结论miRNA-224-5p在甲状腺乳头状癌组织中表达增高,下调miRNA-224-5p可以促进甲状腺乳头状癌细胞的凋亡,其作用机制可能与TGF-β/Smad4信号通路有关。     

血管生成素-2及其受体Tie2在肾癌中的表达及与微血管密度的关系

目的:探讨血管生成素-2及其受体Tie2在肾透明细胞癌中的表达及与肿瘤血管生成、肿瘤组织发生、发展之间的关系。方法:应用免疫组织化学SP法,分别检测80例肾透明细胞癌组织及10例癌旁组织中血管生成素-2,Tie2及CD34的表达,根据CD34染色结果计算微血管密度。结果:肾透明细胞癌组织中血管生成素-2、Tie2阳性表达率分别为61.25%,58.75%,均明显高于癌旁组织(P<0.05);血管生成素-2和Tie2的表达与肾透明细胞癌患者血尿、临床分期以及淋巴结转移密切相关(P<0.05);血管生成素-2和Tie2阳性表达组微血管密度均高于阴性表达组(P<0.05)。结论:血管生成素-2和Tie2在肾透明细胞癌发生和转移过程中起重要作用,并与肿瘤血管生成关系密切。     

miR-122和miR-144-3p在肾细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨miR-122和miR-144-3p在肾细胞癌组织中的表达及其临床意义。方法使用实时荧光定量PCR技术检测46例肾细胞癌患者癌组织与癌旁组织中miR-122和miR-144-3p的表达情况,比较二者在癌组织与癌旁组织中的差异。以肾细胞癌组织中miR-122、miR-144-3p的表达水平平均值作为分界,将46例患者分为miR-122低表达和miR-122高表达、miR-144-3p低表达和miR-144-3p高表达,并分析不同年龄、性别、临床病理特征患者中miR-122和miR-144-3p的表达情况。结果 miR-122和miR-144-3p在肾细胞癌患者癌组织中的相对表达水平均明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P0.05)。不同年龄、性别患者miR-122、miR-144-3p低表达百分率分别与miR-122、miR-144-3p高表达百分率比较,差异无统计学意义(P0.05)。不同TNM分期、临床分期患者miR-122、miR-144-3p低表达百分率分别与miR-122、miR-144-3p高表达百分率比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论 miR-122和miR-144-3p在不同TNM分期、临床分期的肾细胞癌患者中表达存在差异,可能在肾细胞癌发生、发展中起重要作用。     

Ang-2和VEGF在肾透明细胞癌中的表达及与肿瘤血管生成的关系

【目的】探讨Ang-2、VFGF及CD34在肾透明细胞癌中的表达及与肾透明细胞癌血管形成的关系。【方法】应用免疫组化S-P法,分别检测80例肾透明细胞癌组织及10例癌旁正常肾组织中Ang-2,VFGF及CD34的表达。【结果】肾透明细胞癌组织中Ang-2、VFGF阳性表达率分别为61.25%(49/80)、73.75%(59/80),均明显高于癌旁肾组织(P<0.01)。【结论】Ang-2对肿瘤血管生成的影响呈VFGF依赖性,Ang-2及VFGF在肾透明细胞癌血管生成中起协同促进作用。     

尾加压素Ⅱ在肾癌患者血液和孵育组织中的表达

目的测定肾癌患者和正常对照人群血液和孵育组织中尾加压素Ⅱ(Urotensin Ⅱ,UⅡ)的表达量,以期探讨UⅡ表达在肾透明细胞癌发生中的临床意义。方法对20例肾透明细胞癌患者及20例对照人群通过放免方法检测血液和孵育组织UII的表达。结果肾癌患者和正常对照人群血液和孵育组织中均有UⅡ表达。放免结果显示肾透明细胞癌组患者血浆UII水平(50.08±4.77 pg/ml)与正常对照组血浆UⅡ(45.55±6.05 pg/ml)相比差异无统计学意义(P>0.05)。肾透明细胞癌组织孵育后UII水平(30.83±8.51 pg/mg pro)明显高于正常肾组织(16.09±3.13 pg/mgpro)(P<0.01)。结论肾透明细胞癌组织可分泌UⅡ,且较正常肾组织高,提示UⅡ可能与肾透明细胞癌的发生、发展有关,UⅡ可能通过自分泌或旁分泌的方式发挥作用。     

miR-452在肾透明细胞癌中的异常表达研究

目的检测miR-452在肾透明细胞癌组织中的表达差异,探讨miR-452在肾癌发生过程中的作用。方法提取20例肾透明细胞癌及其相应癌旁组织的总RNAs,通过逆转录(RT)方法获得cDNA后,采用实时定量PCR(RT-qPCR)技术检测组织中miR-452的表达差异,并分析其与肾癌患者临床病理特征的关系。结果与相应的癌旁组织相比,miR-452在肾透明细胞癌组织中显著高表达,癌组织较癌旁组织升高约4.69倍,但其异常表达与肾癌患者临床病理特征并无显著相关性。结论 miR-452在肾透明细胞癌组织中明显高表达,其可能作为重要的致癌基因参与了肾癌的发生与发展过程,可能成为潜在的肾癌标志物,为肾癌的早期诊断及治疗提供新靶点。     

肾癌中miR-210的异常表达及意义

目的探讨miR-210在肾细胞癌发生过程中的作用。方法利用荧光定量PCR技术检测miR-210在52例不同阶段肾细胞癌及其癌旁组织中的表达量,并分析其与肾癌患者病理分期、年龄、性别的相关性。结果与相应癌旁组织相比,miR-210在肾癌组织中表达量显著上调(P=0.00),平均上调倍数为7倍。但miR-210上调倍数与肾细胞癌癌的病理分型、分期、年龄、性别均无显著相关。结论 miR-210在肾癌组织中表达明显上调,对肾癌的诊断和治疗具有潜在的意义。     

miRNA-592在肾细胞癌进展中作用及其与预后关系研究

目的 探讨miRNA-592在肾细胞癌(RCC)中的作用及其与预后的关系.方法 逆转录-聚合酶链反应检测110例RCC组织及其配对的癌旁组织、正常人肾上皮细胞系(HK-2)和人RCC细胞系(786-O、ACHN、Caki-1和769-P)中miRNA-592的表达.分析miRNA-592与RCC临床病理特征及生存预后的关系,生存分析用Kaplan-Meier法.用LipofectAMINETM 2000试剂盒将miRNA-592沉默质粒(sh-miRNA-592组)或空载体质粒(sh-NC组)转染入786-O细胞,克隆形成实验和CCK-8法检测增殖能力,Annexin-V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹法检测细胞增殖相关蛋白(Cyclin B1、增殖细胞核抗原)和凋亡相关蛋白(Bax、Cleaved caspase-3).结果 癌组织中miRNA-592相对表达量为(2.34±0.47),明显高于癌旁组织的(0.97±0.41),HK-2细胞的miRNA-592相对表达量为(1.01±0.08),低于786-O细胞(3.84±0.47)、ACHN细胞(2.76±0.53)、Caki-1细胞(1.98±0.12)与769-P细胞(2.45±0.52),差异均有统计学意义(P<0.05).miRNA-592高、低表达组的T分期患者比例比较,差异有统计学意义(P<0.05).miRNA-592高表达患者的存活率低于低表达患者,差异有统计学意义(P<0.05).sh-miRNA-592组miRNA-592相对表达量、细胞克隆数与细胞培养48、72和96 h时细胞增殖检测光密度值均低于sh-NC组,sh-miRNA-592组细胞凋亡率高于sh-NC组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 miRNA-592在RCC中的高表达与不良生存预后有关,沉默miRNA-592可抑制RCC细胞的增殖并促进凋亡.     

肾癌组织中TβRⅡ基因甲基化状态的检测及其临床意义

目的探讨转化生长因子β受体Ⅱ(TβRⅡ)在肾透明细胞癌(RCCC)中的甲基化状态及其临床意义。方法应用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测43例肾透明细胞癌组织,43例正常组织中TβRⅡ基因的甲基化状况;应用免疫组织化学P-V法检测40例肾透明细胞癌组织,28例正常组织中TβRⅡ基因的蛋白表达情况。结果 RCCC组织中TβRⅡ基因的甲基化率为58.1%(25/43),显著高于正常组织34.9%(15/43),差异有统计学意义(P0.05);肾透明细胞癌中TβRⅡ基因的甲基化率与患者年龄、性别、肿瘤的大小和肿瘤分化程度无显著相关性(P0.05)。TβRⅡ在RCCC组织中的免疫组化结果显示,基因蛋白表达在RCCC组显著低于正常组(P0.05),且其蛋白表达与肿瘤的大小和肿瘤分化程度相关(P0.05)。结论 TβRⅡ基因启动子甲基化可能与RCCC的发生有关。     

CAIX／MN／G250mRNA在肾癌根治术前后表达的检测

目的探讨肾癌相关蛋白CAIX／MN／G250mRNA在肾细胞癌（renal cell carcinoma,RCC）手术前后的表达水平及临床意义。方法应用RT—PCR技术检测57例RCC患者癌组织及术前外周血中CAIX／MN／G250mRNA的表达情况,并选择15例癌旁肾组织、15例正常肾组织及40例健康人外周血作对照,对术前外周血CAIX／MN／G250mRNA阳性RCC患者术后随访4周,并对其外周血CAIX／MN／G250mRNA水平进行半定量检测。结果57例RCC患者,其CAIX／MN／G250mRNA阳性率在外周血中为59．6％（34／57）,癌组织中为78．9％（45／57）,显著高于对照组（P〈0．01）。在肾透明细胞癌患者的外周血及癌组织中,CAIX／MN／G250mRNA的阳性率分别为76．2％（32／42）和95．2％（40／42）,均显著高于相应对照组（P〈0．01）。RCC患者外周血及癌组织中CAIX／MN／G250mRNA阳性率均随临床分期的增加而增加（P〈0．01）。34例外周血阳性患者CAIX／MN／G250mRNA水平术前2h、术后7、14、21和28d分别为0．54±0．13、0．56±0．15、0．34±0．13、0．29±0．18和0．22±0．11。RCC患者外周血CAIX／MN／G250mRNA水平在肾癌根治术后随时间的推移呈下降趋势（P均〈0．05）。结论使用RT—PCR技术检测CAIX／MN／G250mRNA对肾癌尤其是透明细胞癌有较好的特异性和敏感性。外周血CAIX／MN／G250mRNA检测可作为肾癌微转移的检测指标用于RCC的诊断、疗效评价及预后判断。     

miRNA-21在结直肠癌中的表达研究

目的 检测MicroRNA-21（miRNA-21）在正常人和结直肠癌患者血清,以及结直肠癌患者癌组织和癌旁组织中的表达,探讨其与结直肠癌临床病理参数的关系.方法 采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）技术检测正常人和结直肠癌患者血清,以及结直肠癌患者癌组织和癌旁组织中的表达,分析miRNA-21的表达与结直肠癌临床病理参数的关系.结果 miRNA-21在结直肠癌患者血清中表达水平显著高于正常人血清（P＜0.05）;结直肠癌组织中miRNA-21表达水平明显高于癌旁组织;中晚期（Ⅲ期和Ⅳ期）结直肠癌组织中miRNA-21表达水平明显高于早期（Ⅰ期和Ⅱ期）结直肠癌（P＜0.05）;低分化肿瘤组织中miRNA-21表达水平明显高于中高分化者;有淋巴结转移的结直肠癌组织中miRNA-21表达水平明显高于无淋巴结转移者.结论 miRNA-21在结直肠癌患者血清及肿瘤组织中呈高表达,可能与结直肠癌的发生发展有关.     

支气管内超声引导针吸活检标本检测3种microRNA对肺癌分型的价值

目的探讨支气管内超声引导针吸活检术(EBUS-TBNA)获取标本联合检测3种micro RNA对肺癌分型的价值。方法收集2014年10月-2016年1月在该院住院的肺癌患者35例,同期收集肺部良性病变者20例为对照组,经EBUS-TBNA获取标本,用实时定量PCR方法检测其mi RNA-21、mi RNA-205、mi RNA-375的表达水平,评价其在肺癌病理分型的价值。结果肺癌组EBUS-TBNA标本mi RNA-21、mi RNA-205和mi RNA-375的相对表达量明显高于对照组,差异有统计学意义(均P0.01)。mi RNA-21在腺癌患者EBUS-TBNA标本中的表达水平明显高于肺鳞癌,差异有统计学意义(P0.05);mi RNA-205在肺鳞癌患者EBUS-TBNA标本中的表达水平明显高于肺腺癌,差异有统计学意义(P0.05);mi RNA-375在小细胞肺癌患者EBUS-TBNA标本中的表达水平明显高于鳞癌和腺癌,差异有统计学意义(P0.01)。根据受试者工作特征曲线(ROC),mi RNA-21取1.955为诊断肺腺癌的临界值时,其敏感度和特异度分别为65.00%和100.00%;mi RNA-205取2.305为诊断肺鳞癌的临界值时,其敏感度和特异度均分别为91.67%和100.00%。结论 EBUS-TBNA标本行mi RNA检测是可行的,联合检测mi RNA-21、mi RNA-205和mi RNA-375有助于肺癌的诊断和病理分型。