血中降钙素基因相关肽来自血管周围神经

降钙素基因相关肽(CGRP)是Morris 等1984年在人甲状腺肿瘤中提纯并鉴定出来的。已发现它有很强的肌肉营养和血管舒张作用。它广泛地分布于内分泌和神经系统,并存在于人和大鼠的循环血中。英国学者M.Zaidi 等最近在雄性大鼠(150 g)用放射免疫法研究了对血中CGRP 浓度的影响因素。发现,腹腔注射辣椒素(10 mg/kg,引起神经未梢去极化)后7.5min,血浆CGRP 水平比对照组升高15倍,     

降钙素基因相关肽转基因预防小鼠自身免疫性糖尿病发病及其抗氧化应激机制

有证据表明,活性氧(reactive oxygens pecies,ROS)参与了胰岛β细胞自身免疫损伤,是自身免疫性糖尿病发病的重要原因之一。一氧化氮(NO)和过氧化氢(H2O2)介导了致炎性细胞因子对胰岛B细胞的损害,引起脂质过氧化反应,进而损伤胰岛细胞。降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)在心肌细胞中可抑制ROS生成而具有细胞保护作用。通过CGRP裸质粒肌肉注射体细胞电针强化转基因方法,使骨骼肌持续表达CGRP,观察其对小剂量多次注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)造成的小鼠自身免疫性糖尿病发病的影响,进一步测定胰腺局部活性氧含量以及抗氧化酶的改变,探讨其抗氧化应激机制。结果发现,CGRP裸质粒直接注射入小鼠双后肢胫前肌。继以程控电针刺激导入(体内电穿孔法),可使血浆和骨骼肌组织CGRP表达水平显著增高,且持续4周以上;注射STZ同时给予CGRP转基因治疗可减轻胰岛β细胞损伤,显著降低自身免疫性糖尿病的发病率及血糖水平;CGRP转基因可显著抑制自身免疫性糖尿病小鼠胰腺局部活性氧和丙二醛的生成,增加过氧化氢酶(CAT)及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活性。结果提示,CGRP裸质粒直接注射、电针辅助导人转基因可获得CGRF持续高水平的表达,能够预防小鼠自身免疫性糖尿病的发病,其机制之一可能为CGRP抑制了活性氧对胰岛β细胞的损伤。     

降钙素和降钙素基因相关肽的选择性表达

降钙素和降钙素基因相关肽(CT/CGRP)由同一基因编码,该基因结构及其5＇端侧翼序列决定了它能够在甲状腺C细胞以及中枢和外周神经细胞生成不同的表达产物.这种选择表达调控决定多细胞生物的发育、性别分化和进化.如果表达失控将导致甲状腺髓样瘤(MTC)和骨质疏松症等疾病.文章对该基因的结构和选择性表达调控进行了综述.     

人α降钙素基因相关肽基因在酵母细胞中的分泌表达与产物的分离纯化

化学合成的人α降钙素基因相关肽(CCRP)基因用PCR法改造后使其能正确融合在酵母分泌型表达载体pVT102U/α中的α交配因子前导肽序列之后,然后进行克隆并转化酵母宿主菌S－78进行表达．培养物的上清用酶标(ELlSA)鉴定为阳性,而对照S－78、pVT102u／α为阴性,表达量用ELISA定量大于2mg／L。表达产物经阳离子交按层析(CM—Sphadex C₂₅)和HPLC纯化得到了HPLC纯产品。纯化后的CGRP能引起小鼠血压的降低,说明表达的目的蛋白既有CGRP的免疫结合活性,又有CGRP的生理活性。测定其N－端10个氨基酸序列,证明人工合成的CGRP基因在酵母细胞中已正确表达。     

大鼠内毒素血症不同时期血浆CGRP和背根神经节CGRP mRNA水平的变化

本文采用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）方法测定大鼠内毒素血症不同时期胸腰段背根神经节降钙素基因相关肽（CGRP）mRNA水平的改变,结合血浆CGRP水平的改变,以期全面了解大鼠内毒素血症不同时期CGRP释放与合成的变化。结果显示：注射内毒素（5mg／kg）后30min时,大鼠血浆CGRP开始增高,而背根神经节CGRPmRNA水平无明显变化;注射内毒素后3h时,血浆CGRP及背根神经节CGRPmRNA均明显增高．分别为142％和32％,8h时则进一步增高,分别为216％和85％。提示内毒素不仅刺激外周组织释放CGRP,而且还能通过某些机制激活背根神经节CGRPmRNA的转录,使CGRP合成增加,以作为CGRP大量释放的重要补充来源。     

慢性肾缺血致心功能不全时大鼠心肌组织降钙素基因相关肽含量的变化

目的观察慢性肾缺血导致心功能不全时心肌组织降钙素基因相关肽（CGRP）含量变化,并分析变化的机制。方法将40只Wistar大鼠分为,狭窄对照组（n=15）和狭窄治疗组（n=15）,均采用两肾动脉之间腹主动脉缩窄术造成单侧慢性肾缺血。假手术组（n=10）仅分离腹主动脉。至术后16周狭窄治疗组给予阿魏酸钠40mg／kg腹腔内注射,狭窄对照组和假手术组均给予同等剂量生理盐水。治疗2周后,测定颈动脉压、左心功能,处死大鼠后测定心肌组织CGRP、ET-1和NO含量,分别测定心肌和脊髓背根神经节CGRP mRNA表达。结果狭窄对照组和狭窄治疗组心功能均下降,但狭窄治疗组心脏舒张功能优于狭窄对照组。狭窄对照组心肌内ET-1含量明显增加,CGRP含量明显下降。狭窄治疗组心肌内ET-1含量较对照组减少,CGRP含量略增高。各组心肌CGRP mRNA表达无明显差异。狭窄治疗组脊髓背根神经节CGRP mRNA表达较假手术组增加。结论大鼠慢性肾缺血导致心脏组织ET-1持续激活,CGRP、NO合成受损,与心功能下降密切相关。心功能不全时,脊髓背根神经节CGRP mRNA表汰代偿件增高,但心脏血管内皮绢织受损可能是心脏CGRP含量下降的主要因素。     

降钙素基因相关肽——一种强烈的舒血管物质

由37个氨基酸组成的新肽,降钙素基因相关肽(CGRP)是降钙素基因原始RNA 转录的产物之一。通过降钙素基因密码序列的分析,得到了大鼠CGRP 的一级结构,并已人工合成。人CGRP 亦被分离和鉴定,其组成亦为37个氨基酸,有四个和大鼠CGRP 不同。CGRP C 末端免疫活性已在大鼠中枢和外周神经系统中测得,大鼠主动脉提取物也含有免疫活性CGRP(20pmol/g)。离体大鼠三叉神经节能释放免疫活性CGRP,高K~ 浓度使之释放增加。有证据表明,CGRP 是中枢和外周神经系统递质,对心脏有强烈作用,脑     

尖体注射导入的人生长激素融合基因在小鼠乳腺中的暂态表达

以牛asl－酪蛋白基因的5′端及上游区3．4kb和3′端及下游区3．5kb作为调控元件,以人生长激素基因作为报告基因构建了融合基因,通过乳腺,心脏注射到小鼠体内,利用放射免疫分析方法（RIA）在泌小鼠的乳汁中检测到了表达的人生长激素,表明融合基因的构建是正确的。并由此建立了通过靶组织注射结合心脏注射对融合基因的构建无地自容伯快速简便方法,其中通过心脏注射而于乳腺获得特异性表达的实验结果尚未见报道。     

活体注射导入的人生长激素融合基因在小鼠乳腺中的暂态表达

以牛ａｓｌ－酪蛋白基因的５’端及上游区３．４ｋｂ和３’端及下游区３．５ｋｂ作为调控元件,以人生长激素基因作为报告基因构建了融合基因,通过乳腺、心脏注射到小鼠体内,利用放射免疫分析方法（ＲＩＡ）在泌乳期小鼠的乳汁中检测到了表达的人生长激素,表明融合基因的构建是正确的。并由此建立了通过靶组织注射结合心脏注射对融合基因的构建进行考察的快速简便方法。其中通过心脏注射而于乳腺获得特异性表达的实验结果尚未见报道。     

心肌直接注射转移基因

心肌直接注射转移基因钱虎声,陈诗书,张柏根（上海第二医科大学,上海２０００２５）关键词转移基因,直接注射肌肉内直接注射裸露ＤＮＡ质粒的基因转移技术为１９９０年美国威斯康星大学的Ｗｏｌｆｆ与圣地亚哥Ｖｉｃａｌ等偶然发现,为观察化学方法对大鼠骨胳肌基因转...     

The life and death of gene families

One of the unique insights provided by the growing number of fully sequenced genomes is the pervasiveness of gene duplication and gene loss. Indeed, several metrics now suggest that rates of gene birth and death per gene are only 10–40% lower than nucleotide substitutions per site, and that per nucleotide, the consequent lineage‐specific expansion and contraction of gene families may play at least as large a role in adaptation as changes in orthologous sequences. While gene family evolution is pervasive, it may be especially important in our own evolution since it appears that the “revolving door” of gene duplication and loss has undergone multiple accelerations in the lineage leading to humans. In this paper, we review current understanding of gene family evolution including: methods for inferring copy number change, evidence for adaptive expansion and adaptive contraction of gene families, the origins of new families and deaths of previously established ones, and finally we conclude with a perspective on challenges and promising directions for future research.     

真核基因的快速克隆及表达

以细胞间隙连接蛋白基因Cx26作为目的基因,通过T-A载体介导,构建真核表达重组载体pcDNA3.1( ) /Cx26,重组表达载体转染人鼻咽癌细胞株HNE1,表达Cx26间隙连接蛋白。     

利用套叠PCR技术进行基因突变和拼接

利用套叠PCR技术（又称重叠区扩增基因拼接法）对hGM-CSF基因内第28位氨基酸处的糖基化位点进行突变和进行人促性腺激素基因,腺苷酸激酶短肽与胰岛素样生长因子－基因三者之间的拼接,结果表明采用该技术能在体外实行有效的基因重组和定点突变,其成功率为100％,这一技术不需要内切酶消化和连接酶处理,技术操作员简单易行,在基因拼接,基因内部突变方面具有良好的应用价值。     

成簇基因的时空表达调控

成簇基因具有不同单个基因的特性,同一簇内基因大多有类似的结构,功能以及表达模式,基因之间时空表达模式及表达量高度协调,提示同一簇基因是作为统一整体进行调节的,具有共同的调节机制。基因成簇排列是实现基因时空协调表表达的基础,是遗传信息的一种高级组织形式,具有强大的进化优势,要揭示成簇基因表达调控的基本规律,应从顺式作用元件,反式作用因子,染色质等层次,进行整体的以及多基因相互作用的研究,这些机制的阐     

GFP-pl6融合基因表达载体的构建

本文报道了以ＧＦＰ（绿色荧光蛋白）基因为报告基因,ｐｌ６基因为目的基因,将ｐｌ６基因分别插入ＧＦＰ基因的上游和下游,构建成ＧＦＰ－ｐｌ６融合基因表达载体ｐＣｐｌ６Ｇ和ｐＣＧｐ１６,并通过酶切、电泳技术对重组体进行了鉴定。该表达载体的构建成功为开展ｐｌ６转基因动物模型的建立及其特性研究奠定了基础     

运动能力相关基因的先天遗传与后天转移

对人体生理特性的研究结果显示,部分运动相关基因如α-肌动蛋白-3、血管紧张素I转换酶、Ⅱ型活化素受体B的基因多态性会明显影响运动员的运动天赋和体能。建立优秀运动员基因库,发现和鉴定可影响运动能力的基因变异体,使得在儿童中开展DNA测试,挑选适合某种特殊体育项目的运动天才和优化训练方法具有一定现实操作意义。另一方面,随着滥用基因技术以提高运动能力的可能性不断提高,部分基因有可能作为基因兴奋剂,通过基因转移的方法导入人体,其所涉及的伦理问题、对人类健康及社会的潜在危害等,已经引起了来自自然科学和社会科学不同领域的广泛关注。     

基因功能研究方法浅介

随着人类基因组计划的进展,数据库中积累了越来越多未知功能的基因序列,分析这些基因的功能将成为基因组计划的主要任务。本介绍了几种研究特定基因功能的方法及程序。     

硫霉素环化酶基因在变铅青链霉菌TK24中的表达及基因定位

将含有硫霉素环化酶基因的重组质粒p6BCl2转化变铅青链霉菌(Streptomyceslividans)TK24,含有p6BCl2的转化子细胞抽提液分别与琉霉素生物合成阻断变株Y,发酵液以及纯化的Y。中间产物经过体外共培养可产生活性物质．化学分析表明与Y,发酵液混合后产生的是硫霉素,与纯化的Y。中间产物混合产生的是一种不稳定的活性物质。说明硫霉素环化酶基因在S.lividans TK24中得到了表达,其产物以Y。中间产物为底物并弥补了Y,中的缺陷。对p6Bcl2中4．5kb外源片段进行了限制酶酶切分析,建立了酶切图谱．利用含硫霉素环化酶基因的S．Lividans TK24转化子体外转化Y,的应用体系,将硫霉素环化酶基因定位在0．9kb Hinc I—Pst I片段上,并证明了硫霉紊环化酶的活性与IPNS同源片段无关。以上实验为进一步研究琉霉素环化酶基因的结构打下了基础。     

植物——病原互作系统中基因对基因识别研究

从自然植物种群对Ｒ基因的选择和淘汰、对属和种的专化性、抗病基因的复杂性、抗病基因的分子专化性、信号传导中基因的相互作用,以及Ｒ基因的开发利用与持久抗性战略等方面总结评述了当前在植物－病原互作系统中基因对基因识别研究领域的新进展,并且提出了需进一步研究的问题。