银杏叶内酯K对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

 目的 探讨银杏叶内酯K （ginkgolide K,GNK）对大脑局灶性脑缺血再灌注（MCAO）损伤大鼠的保护作用。方法 采用栓线法大鼠缺血2 h再灌注22 h模型,探讨银杏内酯K对模型大鼠神经缺损症状、脑梗死百分比、脑组织含水率、超氧化物歧化酶（SOD）活性 、丙二醛（MDA）含量及皮层神经元细胞内［Ca2+］_i浓度、Bax蛋白,Bcl-2蛋白及caspase-3蛋白的影响。结果与脑缺血再灌注组相比,GNK （4和8 mg·kg-1）组中大鼠神经缺损评分、脑含水率、脑梗死百分比显著降低（P<0.01）;脑组织丙二醛含量减少、SOD活性升高、［Ca2+］_i显著下降（P<0.01）,Bax和caspase-3蛋白表达显著降低,Bcl-2蛋白表达显著提高。结论 银杏内酯K对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠具有保护作用,本作用机制可能与银杏内酯K减少大鼠脑缺血再灌注后脑组织［Ca2+］_i浓度、抗自由基损伤及其抑制Bax与Bcl-2蛋白表达比例及caspase-3蛋白表达有关。     

连二亚硫酸钠诱导SY5Y细胞缺糖缺氧模型及泽泻白术药对的作用观察

目的：建立连二亚硫酸钠（Na₂S₂O₄）诱导SH-SY5Y神经细胞缺氧缺糖损伤模型,进行提取物筛选,对筛选出的有活性提取物初步探讨其对神经细胞的保护作用。方法：CCK-8检测细胞存活率,比色法检测乳酸脱氢酶（LDH）释放,超氧化歧化酶活性（SOD）,丙二醛含量（MDA）,荧光探针负载法检测细胞内活性氧（ROS）和细胞内钙离子（[Ca²⁺]i）荧光强度。结果：连二亚硫酸钠诱导SH-SY5Y细胞损伤模型上进行提取物初筛,发现泽泻白术药对提取物有一定活性。与模型组比较,提取物组细胞的LDH 释放降低,SOD活性升高,MDA含量降低,细胞内ROS水平和[Ca²⁺]i荧光强度均减弱。结论：泽泻白术药对提取物对连二亚硫酸钠致SH-SY5Y神经细胞损伤有一定的脑保护作用。     

氧化槐定碱对大鼠皮层及海马谷氨酸及γ-氨基丁酸免疫阳性细胞的影响

目的：探讨氧化槐定碱(oxysophoridine, OSR)对大鼠皮层和海马谷氨酸（Glu）和γ-氨基丁酸（GABA）免疫阳性神经细胞的影响。方法:采用免疫组织化学方法（SABC）和显微图像分析技术,检测OSR对大鼠皮层、海马谷氨酸和γ-氨基丁酸免疫阳性神经细胞的变化。结果:侧脑室注射氧化槐定碱10 mg,大鼠皮层、海马GABA免疫阳性神经细胞数明显增加,Glu免疫反应阳性细胞数显著下降(P<0.05)。结论:OSR引起中枢神经系统Glu及GABA的平衡变化可能是导致中枢抑制作用机制之一。     

救脑宁注射液对谷氨酸、5-羟色胺诱发大鼠皮质神经细胞内游离钙超负荷的影响

目的：探讨救脑宁注射液对谷氨酸（Glu）、5-羟色胺（5-HT）诱发大鼠皮质神经细胞内游离钙（〔Ca2 〕i）超负荷的影响。方法：以Fura-2／AM为细胞内钙离子的荧光指示剂，用双波长荧光分光光度计测定了急性分离的新生大鼠神经细胞〔Ca2 〕i的变化，观察Glu、5－HT对〔Ca2 〕i的影响及救脑宁注射液的干预作用。结果：Glu和5－HT剂量依赖性引起〔Ca2＋〕i增加，导致细胞内钙超载；救脑宁注射液可显著降低细胞内钙的升高，保护神经细胞免受Glu和5－HT的损害。结论：救脑宁注射液对中风病的治疗作用与其对抗Glu、5－HT等毒性物质的作用，抑制受体依赖性钙通道的开放，减少外钙的流入，有效地防止钙超载等机制有关。     

灯盏花素对谷氨酸体外诱导大鼠皮质神经元损伤的保护作用

目的 探讨灯盏花素对谷氨酸(Glu)体外诱导原代培养大鼠皮质神经元损伤的作用及机制.方法 通过MTT法观察灯盏花素对Glu诱导神经元损伤的细胞存活率的影响,并结合超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)生化测试及细胞钙影像方法探讨相关作用机制.结果 灯盏花素呈质量浓度依赖性提高Glu诱导神经元损伤细胞的存活率,并拮抗由Glu诱导的[Ca2 ];升高、MDA生成,提高SOD活性.结论 灯盏花素对Glu体外诱导大鼠皮质神经细胞损伤具有保护作用,可能与减轻胞内Ca2 超载、提高神经细胞抗氧化能力有关.     

丹皮酚对大鼠脑缺血再灌注损伤后TLR4及神经细胞凋亡的影响

 目的 观察丹皮酚对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后 Toll样受体4（TLR4）和神经细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注模型组、尼莫地平组（0.4 mg·kg^-1）、丹皮酚组（15、30 mg·kg^-1）。采用线栓法阻塞大脑中动脉建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。通过 HE染色观察大鼠大脑皮层区细胞损伤程度,免疫组化法检测缺血侧脑组织 TLR4表达的变化,酶联免疫吸附法测定血清白细胞介素6（IL-6）含量,流式细胞仪检测神经细胞凋亡。结果 丹皮酚可明显改善大鼠皮层区细胞损伤,减少 TLR4的表达、降低血清中 IL-6含量,减轻神经细胞凋亡率。结论 丹皮酚能减轻缺血再灌注脑组织损伤程度、降低神经细胞凋亡率,机制可能与抑制脑组织内 TLR4表达有关。     

甘西鼠尾草注射液与丹参注射液对大鼠皮层神经细胞缺血性损伤保护作用的比较研究

目的:比较甘西鼠尾草注射液与丹参注射液对体外培养的大鼠大脑皮层神经细胞谷氨酸(Glu)损伤的保护作用.方法:分离培养新生(1d)大鼠大脑皮层神经细胞,加入Glu模拟兴奋性损伤,MTT法测定细胞存活率,比色法测定上清中LDH含量,细胞中SOD、GSH-Px活性、MDA含量.结果:皮层细胞经Glu损伤后,上清LDH含量、细胞中MDA含量显著增加,SOD和GSH-Px活力明显下降,甘西鼠尾草注射液与丹参注射液均可改善上述情况.结论:甘西鼠尾草注射液与丹参注射液可保护由Glu引起的大鼠大脑皮层神经细胞的损伤,其机理可能与抗脂质过氧化、清除自由基有关.     

参芎注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的：研究参芎注射液对老龄大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。 方法：108只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫通组、参芎注射液高、中、低剂量组（36.4,18.2,9.1 mL·kg^-1·d^-1）。采用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型,观察参芎注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能评分、脑梗死体积的影响,检测脑组织中一氧化氮合酶（NOS）、一氧化氮（NO）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、乳酸脱氢酶（LDH）的含量,ELISA法检测对脑组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）水平的影响。 结果：参芎注射液可显著降低脑缺血再灌注大鼠的神经功能评分,减轻脑组织损伤程度,减少脑梗死范围,提高SOD活力,降低MDA,NO,NOS,LDH水平,抑制IL-1β和TNF-α的表达。 结论：参芎注射液对大鼠缺血再灌注损伤具有明显的保护作用,其机制可能与改善神经功能、减少自由基损伤和抑制炎症因子表达有关。     

茉莉花水提物对大鼠胸主动脉的舒张作用及机制

 目的 观察中药茉莉花水提物（AEJ）的血管舒张效应并探讨其机制。方法 采用大鼠胸主动脉环灌流,记录张力的变化;激光扫描共聚焦显微镜技术检测血管平滑肌细胞内 Ca2+浓度。结果 AEJ（0.375～6 g·L-1）能够浓度依赖性降低苯肾上腺素（PE,10 μmol·L-1)及 KCl (60 mmol·L-1)引起的主动脉环张力。在无钙环境下,AEJ 能抑制高浓度氯化钾 (KCl 60 mmol·L-1)环境下累计加入 CaCl₂(0.5～8 mmol·L-1)引起的收缩,抑制 PE (10 μmol·L-1) 引起的去内皮主动脉环的短暂收缩 (P<0.01)。钾通道阻断剂 4-氨基吡啶(5 mmol·L-1)可显著抑制 AEJ 的舒血管作用。激光扫描共聚焦检测细胞内 Ca2+的结果表明,AEJ 浓度依赖性（6,12 g·L-1）降低了 KCl 除极诱导的滑肌细胞胞浆内 Ca2+的升高幅度（P<0.05）。结论 AEJ 能够浓度依赖性舒张大鼠胸主动脉,其作用机制可能是减少 Ca2+经电压依赖性钙通道和受体操纵性钙通道流入血管平滑肌细胞及抑制内质网内 Ca2+释放有关;电压敏感型 K+通道（K_V）的激活部分参与了 AEJ 舒血管作用。     

灯盏细辛注射液通过调节JAK2/STAT3信号通路抗脑卒中大鼠神经损伤的研究

[目的] 探讨灯盏细辛注射液（EBI）对脑卒中大鼠的神经保护作用及在该过程中对Janus激酶2（JAK2）/信号转导子和转录激活子3（STAT3）信号通路的调节机制。[方法] 通过大脑中动脉闭塞（MCAO）建立缺血性脑卒中大鼠模型,然后将造模成功的大鼠随机分为模型组、尼莫地平组、EBI组、JAK2抑制剂组（AG490组）和EBI+JAK2激动剂组（EBI+CA1组）,每组20只,另外选取20只大鼠只暴露颈动脉不进行结扎作为假手术组。利用神经功能缺损评分评估大鼠神经功能;2,3,5-三苯基氯化四氮唑（TTC）染色检测大鼠脑梗死面积;苏木精-伊红（HE）和尼氏（Nissl）染色检测大鼠脑组织的病理性形态;TUNEL染色检测大鼠脑组织中神经细胞凋亡情况;酶联免疫吸附测定（ELISA）检测大鼠脑组织中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和丙二醛（MDA）的水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠脑组织中Bax、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）及JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白的表达。[结果] 与假手术组相比,模型组大鼠脑梗死面积增大,神经元细胞凋亡率增加,神经缺损评分、MDA水平、Bax蛋白表达及p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值均升高（P＜0.05）,同时脑组织中神经元退化,神经元数量减少,SOD、GSH-Px活性及Bcl-2蛋白表达降低（P＜0.05）;与模型组相比,EBI组、尼莫地平组和AG490组大鼠脑梗死面积减小,神经元细胞凋亡率减少,神经缺损评分、MDA水平、Bax蛋白表达及p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值均降低（P＜0.05）,同时脑组织中神经元损伤减轻,神经元数量增加,SOD、GSH-Px活性及Bcl-2蛋白表达升高（P＜0.05）;进一步利用JAK2激动剂进行回补实验发现,EBI对大鼠神经损伤的保护作用被逆转（P＜0.05）。[结论] EBI能够通过抑制JAK2/STAT3信号通路减轻脑卒中大鼠的神经损伤。     

水杨酸对丹参幼苗营养期生长及品质影响的研究

目的以丹参幼苗为材料,研究水杨酸对丹参种苗根部丹参酮类、丹酚酸类成分含量、抗氧化酶活性以及根部生长性状的影响。方法将丹参种苗进行根部灌溉水杨酸处理,按照生测法和HPLC法定期测定生长指标及丹参酮ⅡA、隐丹参酮和丹酚酸B的含量,并进行了超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定。结果经水杨酸处理后,丹参根的丹参酮ⅡA、隐丹参酮、丹酚酸B含量均高于对照,SOD酶活性增强,在水杨酸0.1～3 mmol/L的范围内,随浓度的升高和处理时间的延续而含量增加。高浓度(5 mmol/L)处理下对根部生长有一定的抑制作用,根部的丹参酮ⅡA、隐丹参酮、丹酚酸B含量也较最佳处理浓度(3 mmol/L)的效应有所减弱。结论在一定的浓度范围下,浇灌水杨酸能促进丹参根部丹参酮ⅡA、隐丹参酮、丹酚酸B含量的积累,并能增加SOD酶活性,以及丹参根部的根长、根直径及根鲜重。     

隐丹参酮对老年大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

目的：探讨隐丹参酮（cryptotanshinone,CTN）对老年大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其可能机制.方法：Longa法制作大鼠中动脉缺血再灌注损伤模型.将SD大鼠随机分为正常对照组（CTL）、缺血再灌注组（I/R）、隐丹参酮低剂量治疗组（CTN1） （2.5mg/kg）和隐丹参酮高剂量治疗组（CTN2） （5mg/kg）,对各组大鼠进行神经功能缺损评分,测定脑梗死体积,测定Caspase-3蛋白表达,检测SOD活性、GSH-Px、MDA及NO的含量变化,实时荧光定量PCR法检测脑组织中miR-210的表达.结果：与缺血再灌注组相比,隐丹参酮组可显著降低大鼠神经功能损伤评分、减少脑梗塞体积、显著降低脑组织内氧自由基的生成,提高SOD活性,并降低miR-210的表达,miR-210的表达量由（12.29±2.14）降至（6.91±0.53）（P＜0.05）.结论：隐丹参酮对老年大鼠脑缺血再灌注损伤有明显的保护作用,其机制可能部分与减轻氧化应激损伤、抗凋亡和降低miR-210的表达有关.     

HPLC同时测定通脉口服液中5种有效成分的含量

 目的 建立通脉口服液中5种活性成分的含量测定方法。方法 采用HPLC, 流动相：A相为甲醇,B相为0.1%冰醋酸;流速：1.0 mL·min-1 ;检测波长：280,320 nm。结果 咖啡酸、葛根素、阿魏酸、隐丹参酮、丹参酮ⅡA均达到较好的分离,峰型良好,线性关系良好,平均加样回收率分别为100.13%,100.70%,99.67%,100.38%,100.77%;RSD分别为1.97%,1.33%,2.18%,2.24%,1.23%。结论 该方法操作简单,准确,重复性好。     

HPLC-DAD法同时测定丹参中丹酚酸B和隐丹参酮的含量

目的对不同种植地区,不同采摘批次丹参药材中的活性成分丹酚酸B及隐丹参酮的含量同时进行测定,研究新的丹参质控指标。方法本文采用高效液相色谱及紫外-可见光二极管阵列检测器联用技术(HPLC-DAD),以乙腈-水(含0.026%磷酸)为流动相进行梯度洗脱,检测波长270 nm,柱温24℃。结果丹酚酸B浓度在65~390μg·mL-1,隐丹参酮浓度在2.2~22μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。丹酚酸B的含量为0.363%-0.497%,隐丹参酮的含量为0.0095%-0.0284%。结论本法测定结果准确可靠,可同时将丹酚酸B和隐丹参酮二者作为丹参的质量控制指标。     

纳米铁和褪黑素对驯化栽培条件下甘肃贝母产量和品质的影响

目的:研究纳米铁和褪黑素对栽培甘肃贝母产量和品质的影响,为驯化栽培提供技术支撑。方法:常规方法称量百粒重;2020年版《中华人民共和国药典》方法检测生物碱含量;分光光度法检测叶绿素、过氧化氢、丙二醛含量及超氧化物歧化酶(SOD),过氧化物酶(POD),过氧化氢酶(CAT)活性;超高效液相色谱串联质谱法检测生长素、细胞分裂素、赤霉素、水杨酸、茉莉酸、脱落酸含量。结果:在不影响品质的前提下,纳米铁和褪黑素处理显著提高了百粒重,对不同时期生理生化指标的影响显著,对内源激素含量的影响基本一致。相关性分析表明百粒重与SOD活性、丙二醛、茉莉酸含量成负相关,与POD活性、水杨酸、赤霉素、生长素、脱落酸含量成正相关;主成分分析能够将两种处理有效分开,表明其促生机制存在一定差异,纳米铁处理主要影响生长素、水杨酸、脱落酸;褪黑素处理主要影响SOD,丙二醛,赤霉素。结论:纳米铁和褪黑素可以作为一种简单的实用技术提高栽培甘肃贝母抗逆性和产量。     

隐丹参酮纳米混悬剂的制备及其抗肿瘤活性

目的制备隐丹参酮纳米混悬剂,并评价其抗肿瘤活性。方法高压均质法制备纳米混悬剂后,测定其平均粒径、Zeta电位、形态、稳定性、体外释药,MTT法检测它对人胃癌细胞SGC-7901的抑制作用。结果所得纳米混悬剂呈球形,平均粒径为104.15 nm,PDI为0.014,Zeta电位为-36.3 mV;室温下30 d内粒径无明显变化,在1.8%氯化钠溶液中的粒径变化程度小于空白血浆中;12 h内累积释放度达64.28%,之后呈明显缓释特征,体外释药符合Higuchi模型(R2=0.9817)。纳米混悬剂对SGC-7901细胞的抑制率高于原料药(P<0.05,P<0.01),并呈浓度、时间依赖性。结论纳米混悬剂可增强隐丹参酮稳定性和抗肿瘤活性。     

电针背俞穴对非酒精性脂肪肝病大鼠肝肿瘤坏死因子-α的表达及脂质过氧化的影响

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在非酒精性脂肪肝病(NAFLD)发病机制中的作用并观察电针背俞穴的疗效及作用途径。方法:将Wistar大鼠随机分为正常组(11只)和造模组(32只),造模组饲以高脂饮食复制NAFLD大鼠模型,8周后随机处死正常组1只和造模组2只,病理组织学检查以验证造模成功。然后将余下的造模组大鼠随机分为3组:NAFLD模型组(10只)、电针组(10只)、药物组(10只)。药物组将1%的东宝肝泰混悬液按照0.28g/kg(20mL/kg)灌胃,1次/d;电针组选取双侧背俞穴"脾俞""肾俞""膈俞"进行电针治疗,1次/d,每次20min。连续治疗4周后处死所有动物,HE染色观察肝组织病理学变化情况;全自动生化分析仪测定肝内游离脂肪酸(FFA)含量,比色法检测肝内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;免疫组化法检测肝组织中TNF-α的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠均出现中度至重度的肝细胞脂肪变性,肝组织TNF-α表达上调,FFA、MDA升高(P0.01),SOD活性降低(P0.01);与模型组比较,电针组和药物组肝组织脂肪变性得到不同程度的减轻,肝组织TNF-α表达下调,FFA、MDA均有不同程度的降低(P0.01,P0.05),SOD活性升高(P0.01,P0.05)。结论:电针背俞穴可抑制非酒精性脂肪肝大鼠TNF-α表达的上调,降低FFA的释放和减轻脂质过氧化反应,这可能是其治疗NAFLD的作用机制之一。     

针刺对慢性疲劳综合征大鼠血清丙二醛含量及超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性的影响

目的:探讨针刺治疗慢性疲劳综合征(CFS)的作用机制。方法:将雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、针刺组,每组10只。采用慢性多重复合应激法制备大鼠CFS模型。针刺组针刺双侧"足三里"三阴交"穴,留针20min,每日1次,7次为1个疗程,休息3d后行下一疗程,共3个疗程。采用硫代巴比妥酸比色法检测各组大鼠血清丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性,二硫基双硝基苯甲酸法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性。结果:模型组大鼠血清中MDA含量高于空白对照组(P<0.01),SOD、GSH-PX活性低于空白对照组(P<0.01);针刺组大鼠血清中MDA含量低于模型组(P<0.01),SOD、GSH-PX活性高于模型组(P<0.01)。结论:针刺可提高CFS大鼠抗氧化能力,针刺治疗CFS的作用机制可能与调节大鼠氧自由基代谢有关。     

维胃方对实验性胃溃疡大鼠血清超氧化物歧化酶活力及丙二醛含量的影响

目的观察维胃方对实验性胃溃疡大鼠血清SOD活力及MDA含量的影响,探讨其治疗胃溃疡的可能机制。方法利用冰醋酸制备实验性胃溃疡大鼠模型,予维胃方及雷尼替丁治疗7 d后观察胃粘膜大体标本,计算溃疡面积,测量血清SOD活力及MDA含量。结果 胃粘膜大体标本观察发现,用药组溃疡愈合良好;与模型组和自愈组相比,中剂量的维胃方可明显促进溃疡愈合,减小溃疡面积(P<0.01),提高血清SOD活力(P<0.05),降低血清MDA含量(P<0.01)。结论 维胃方对大鼠实验性胃溃疡具有良好的治疗作用,其治疗机制可能与清除氧自由基,提高血清SOD活力,降低MDA含量有关。     

Proliferative inhibition of danxiongfang and its active ingredients on rat vascular smooth muscle cell and protective effect on the VSMC damage induced by hydrogen peroxide

Aim of the study

Danxiongfang (DF) is a new Chinese medicine formula used to treat atherosclerosis and vascular restenosis. The active ingredients in DF are danshensu (DSS), tanshinones (cryptotanshinone, CT) and ferulic acid (FA). The aim of present study was to evaluate the inhibitory effects of DF and its active ingredients on cell proliferation and protection against hydrogen peroxide (H₂O₂)-induced injury in rat vascular smooth muscle cells (VSMC) in vitro.

Methods

VSMC proliferation was assayed by cell counting and measurement of cell viability using the 3-(4, 5-dimethylthiazol -2yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) method and protein content was measured by the Bradford method. The nitric oxide (NO) level was detected by an assay kit. The endothelin-1 (ET-1) level was measured by ELISA. The protective effects of DF and its active ingredients on H₂O₂-induced cell injury was evaluated in terms of cell viability (MTT assay), superoxide dismutase (SOD) activity and malondialdehyde (MDA) levels. Hydroxyl free radicals generated by the Fenton reaction was detected with the spin-trapping technique on an electron spin resonance spectrometer.

Results

The results suggest that DSS, CT, FA and DF inhibited VSMC proliferation by increasing the NO level and decreasing the ET-1 content. In rat VSMCs exposed to H₂O₂, FA, DSS, CT and the six formulations of DF increased cell viability and SOD activity, and reduced the levels of MDA and hydroxyl free radicals. These effects of FA, DSS and CT occurred in a dose-dependent manner. Of the six formulas, DF 4 and DF 5 had the more significant activities. The effects of DF were much greater than those of the individual ingredients, even though the concentrations of these ingredients in the DF formulas were much lower than the doses of the individual ingredients used in each study, indicating markedly synergistic effects of DSS, CT and FA in DF on rat VSMCs.

Conclusions

these findings provide a pharmacological foundation for the clinical use of DF in the prevention and treatment of hyperlipidemia and atherosclerosis relevant to endothelial cell proliferation and damage.