人肠道病毒71型VP1和VP4的抗原融合表达及鉴定

目的:构建人肠道病毒71型(human enterovirus 71,EV71)VP1-VP4重组融合蛋白表达体系.方法:构建EV71 VP1-VP4重组融合蛋白原核表达载体转化大肠杆菌DH5α,诱导表达融合蛋白VP1-VP4,SDS-PAGE和Western blot法进行鉴定.用融和蛋白包被ELISA板检测41例已知血清.结果:重组片段VP1-VP4测序结果与设计目的片段序列相符,重组载体构建成功;SDS-PAGE显示融合蛋白约42.8kDa,与预期值一致;Westernblot提示该融合蛋白可以和EV71 VP1、VP4抗体特异性结合.融合蛋白包被ELISA板能准确检测出41例血清中16例EV71阳性血清,与CA16无交叉反应.结论:表达的EV71 VP1-VP4融合蛋白具有良好的抗原性,可作为EV71感染检测抗原,为EV71诊断试剂和疫苗的研究奠定实验基础.     

EV71 VP1黏膜疫苗制备及其诱导黏膜免疫的实验研究

摘要：目的研究表面展示肠道病毒71型（EV71）结构蛋白VP1的枯草芽孢杆菌芽孢制备疫苗的可行性及应用价值。方法以表面展示EV71 VP1蛋白的重组枯草芽孢杆菌及野生型同基因株枯草芽孢杆菌制备疫苗,并分别通过灌胃＋滴鼻途径免疫BALB／c小鼠（观察组和对照组各16只）,4周后摘眼球取血,脱臼处死小鼠收集肺泡及小肠冲洗液,采用ELISA方法检测血清、肺黏膜、肠黏膜中VP1特异性IgA抗体水平。结果枯草芽孢杆菌经培养及溶菌酶处理后均以芽孢形式存在;观察组血清及肺黏膜中VP1特异性IgA抗体水平均显著高于对照组（P均〈0．01）,但两组肠黏膜中抗体水平无显著差异。结论展示EV71结构蛋白VP1的枯草芽孢杆菌芽孢可成功制备疫苗,且能有效刺激机体产生特异性黏膜免疫反应;此为EV71疫苗的研制提供了新思路。     

JC病毒小包膜蛋白VP2抗原及鼠多克隆抗体的制备

目的 构建JC病毒小包膜蛋白VP2的原核表达载体,表达纯化VP2蛋白,并制备其抗体.方法 用PCR方法从患者脑脊液中扩增JC病毒小包膜蛋白VP2基因,测序正确后克隆入pET-32a(+)原核表达载体,转化BL21大肠埃希菌,用异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达该蛋白并纯化.纯化的VP2蛋白免疫BALB/c小鼠,制备鼠多克隆抗体.结果 将pET-32a(+)-VP2重组表达载体分别转化BL21大肠埃希菌,经IPTG诱导后,表达出相对分子质量为58.5×10~3左右的重组融合VP2蛋白.聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示,IPTG诱导6～10 h重组蛋白表达水平较高.Western印迹证实其具有良好的抗原性,且免疫BALB/c小鼠后成功制备了鼠多克隆抗体.结论 成功构建原核表达载体pET-32a(+)-VP2并获得纯化VP2融合蛋白,并制备JC病毒小包膜蛋白VP2抗体,为进一步对VP2蛋白的功能及JC病毒流行病学调查等研究奠定了坚实的基础.     

3株嗜吞噬细胞无形体AnkA蛋白原核表达及免疫原性差异性研究

目的 研究分析3株嗜吞噬细胞无形体AnkA蛋白的免疫原性。方法 利用原核表达PCR扩增了嗜吞噬细胞无形体Webster株,斯洛文尼亚1 567株,美国96HE58株ankA 基因部分序列,构建pET-30a-AnkA表达载体,转化至大肠杆菌BL21中,以IPTG诱导高效表达融合蛋白,经飞行质谱鉴定氨基酸序列,免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体。Western blot分析3株菌AnkA重组蛋白与免疫小鼠血清抗体相互间的免疫反应以及交叉反应性。同时检测3株菌AnkA重组蛋白与我国无形体病人血清抗体反应性。结果 表达的重组蛋白主要以可溶性形式存在,小鼠免疫获得高效价抗AnkA IgG抗体,3株菌重组蛋白免疫抗体间存在免疫交叉。3株菌重组蛋白与我国无形体病人血清抗体存在免疫反应。结论 成功原核表达并纯化了3株嗜吞噬细胞无形体AnkA蛋白,重组蛋白与我国无形体病人阳性血清存在免疫反应。3株嗜吞噬细胞无形体AnkA重组蛋白与免疫小鼠多克隆抗体间存在交叉反应。     

鹦鹉热衣原体噬菌体Chp1衣壳蛋白VP1的原核表达及多克隆抗体制备

目的原核表达并纯化鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci,Cps)噬菌体Chp1衣壳蛋白VP1的重组蛋白rVP11-190,并制备多克隆抗体。方法采用Clustal Omega在线软件对6株衣原体噬菌体VP1蛋白的氨基酸序列进行多重比对,确定Chp1VP1蛋白的保守区和特异区,并用DNAStar软件预测抗原表位。选择VP11-190与pET28a(+)载体连接构建原核表达载体pET28a-VP11-190,转化至E.coli BL21(DE3)中诱导表达,采用Ni-NTA亲和层析法纯化重组蛋白;用纯化的重组蛋白免疫ICR小鼠,制备免疫血清,ELISA法检测其抗rVP11-190的效价。结果构建的原核表达载体pET28(a)-VP11-190经IPTG诱导高效表达了相对分子质量约为30×103的重组蛋白。用该蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体血清,ELISA法测定免疫小鼠血清抗体效价为1∶12 800。结论成功原核表达并纯化了噬菌体Chp1衣壳蛋白VP11-190的重组蛋白,制备的鼠抗VP11-190多克隆抗体血清效价及特异性良好,为进一步分离鉴定鹦鹉热衣原体的噬菌体奠定了基础。     

埃博拉病毒VP40蛋白的原核表达及其抗体间接ELISA检测方法的建立北大核心CSCD

目的以埃博拉病毒(EBOV)VP40基因原核表达产物为抗原建立检测埃博拉出血热抗体的间接ELISA方法。方法在分析EBOV VP40基因稀有密码子(大肠埃希菌系统)的基础上去除5′和3′端稀有密码子,合成VP40基因,构建VP40蛋白原核表达载体pET22b-VP40,并转化至BL21(DE3)菌,在1.0mmol/L IPTG和37℃条件下诱导表达目的蛋白,经Ni-NTA亲和层析纯化后进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。以纯化蛋白为抗原,建立检测埃博拉出血热抗体的间接ELISA方法。结果成功构建重组质粒pET22b(+)-VP40,表达的VP40蛋白经SDS-PAGE鉴定分子质量单位为40ku,与预期值相符;Western blot检测证实VP40重组蛋白能被抗VP40单克隆抗体识别。以该蛋白为包被抗原建立监测埃博拉出血热抗体的间接ELISA方法,其敏感性和特异性均为100%。结论成功构建了pET22b(+)-VP的重组质粒,并诱导表达VP40蛋白。该蛋白具有免疫反应性,以该蛋白为抗原建立的ELISA方法具有较高的特异性和稳定性,可用于埃博拉出血热的诊断和流行病学调查。     

含弓形虫ROP1基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究Ⅲ.免疫鼠肌组织表达产物免疫酶法定位及血清IgG抗体测定

目的用所构建的弓形虫pcDNA3-ROP1真核表达重组质粒,经肌肉注射免疫小鼠,观察它在肌组织中的表达及不同免疫途径所诱导的体液免疫应答.方法碱裂解法大量制备pcDNA3-ROP1质粒,免疫BALB/c小鼠,每只鼠注射100ug, 两周后同量加强免疫一次,以pcDNA3空质粒及生理盐水组为对照.于免疫后第50天用间接免疫酶法检测注射局部肌组织重组蛋白的表达;ELISA法测定IgG抗体滴度.结果免疫鼠肌组织石蜡切片呈特异性阳性反应;血清IgG抗体90天后测定为阳性;皮下及肌肉不同免疫途径血清均显示阳性结果,无显著性差异.结论 pcDNA3-ROP1质粒DNA免疫小鼠后,肌组织内有重组蛋白表达,并能诱导机体产生IgG抗体.     

霍乱弧菌肠毒素B亚单位基因在大肠杆菌和双歧杆菌的表达

目的构建霍乱弧菌肠毒素B亚单位(Cholera toxin B subunit,CTB)基因的大肠杆菌表达重组质粒,并观察其在大肠杆菌和双歧杆菌中的表达。方法从pBI121质粒PCR扩增获得CTB基因片断,克隆到大肠杆菌载体pGEX-4T-1上,构建重组质粒,然后转化大肠杆菌DH5α和双歧杆菌。转化菌经IPTG诱导,然后用SDS-PAGE和Western blot方法鉴定表达的重组蛋白。结果构建了重组质粒pGEX-4T-CTB,CTB基因片段分子量约为376bp;在大肠杆菌中表达出35kD的霍乱弧菌B亚单位融合蛋白,经SDS-PAGE分析,相对分子量与文献相符,表达的蛋白约占细菌总蛋白的10%;在双岐杆菌中也能得到正确表达,表达量较大肠杆菌低,占细菌总蛋白约5%。Western blotting结果确认了该条带为CTB基因的产物。结论构建的重组质粒pGEX-4T-CTB能够在大肠杆菌及双歧杆菌中获得表达。     

弓形虫P30乳酸球菌口服疫苗诱导小鼠的体液免疫反应及保护性观察

目的观察弓形虫P30乳酸球菌口服疫苗在小鼠体内诱导的体液免疫反应,以及产生的保护性效果. 方法P30乳酸球菌口服免疫BALB/c小鼠,以gp42乳酸球菌组和生理盐水组为对照,4周内免疫7次,免疫结束后,分别收集各组小鼠血清,ELISA法检测血清中总抗体IgG和抗体亚类IgG1和IgG2a水平,同时用100个弓形虫RH株速殖子攻击各实验小鼠. 结果 P30乳酸球菌口服免疫小鼠组检测到了相应的抗体,抗体亚类IgG2a的生成量稍高于IgG1,两对照组均检测不到明显的相应抗体;攻击后,口服疫苗免疫组平均存活时间多于对照组4 d. 结论 P30乳酸球菌口服疫苗刺激小鼠产生了相应的抗体,诱导产生了偏向Th1型的免疫反应,且在小鼠体内发挥了部分保护作用.     

弓形虫P30乳酸球菌口服疫苗诱导小鼠的体液免疫反应及保护性观察

目的观察弓形虫P30乳酸球菌口服疫苗在小鼠体内诱导的体液免疫反应，以及产生的保护性效果。方法P30乳酸球菌口服免疫BAILB／c小鼠，以gp42乳酸球菌组和生理盐水组为对照，4周内免疫7次，免疫结束后，分别收集各组小鼠血清，ELISA法检测血清中总抗体IgG和抗体亚类IgG1和IgG2a水平，同时用100个弓形虫RH株速殖子攻击各实验小鼠。结果P30乳酸球菌口服免疫小鼠组检测到了相应的抗体，抗体亚类IgG2a的生成量稍高于IgG1，两对照组均检测不到明显的相应抗体；攻击后，口服疫苗免疫组平均存活时间多于对照组4d。结论P30乳酸球菌口服疫苗刺激小鼠产生了相应的抗体，诱导产生了偏向Th1型的免疫反应，且在小鼠体内发挥了部分保护作用。     

复苏促生长因子结构域及其突变体重组蛋白诱导小鼠免疫应答的研究

目的 评价复苏促生长因子结构域蛋白（Rpfd）及其突变体蛋白（Rpfd1、Rpfd2）等3种重组蛋白的免疫效能。 方法 2011年11月至2012年2月间,分别以本实验前期制备的重组蛋白Rpfd（A组）、Rpfd1（A1组）、Rpfd2（A2组）分别于0、2、4周免疫无特定病原体（SPF）级BALB/c小鼠,每组14只,并分别以BCG（B组）和生理盐水（C组）同期免疫同种小鼠各14只作为对照。第5周,每组取7只小鼠摘眼球取血,ELISA法检测血清特异性抗体、血清IFN-γ和IL-2表达水平;第8周,每组剩余7只小鼠用1×10⁵ CFU结核分枝杆菌标准株H37Rv感染小鼠,第9周检测感染后小鼠血清细胞因子IFN-γ和IL-2水平。 结果 （1）抗体水平：①Rpfd抗原包被。A1组刺激小鼠产生抗体A₄₅₀的检测值（0.990±0.272）高于B组（0.631±0.180）（t=4.635,P<0.05）;A2组（1.470±0.455）高于B组（t=6.634,P<0.05）。②Rpfd1抗原包被。A组刺激小鼠产生抗体A₄₅₀的检测值（1.030±0.304）高于B组（0.573±0.004）（t=5.276,P<0.05）;A1组（1.368±0.171）高于B组（t=17.20,P<0.05）;A2组（2.766±0.245）高于B组（t=31.643,P<0.05）;③Rpfd2抗原包被。A1组刺激小鼠产生抗体A₄₅₀的检测值（1.055±0.202）高于B组（0.538±0.100）（t=8.009,P<0.05）;A2组（1.605±0.544）高于B组（t=8.192,P<0.05）。（2） IFN-γ水平：①感染前。A组刺激小鼠产生IFN-γ水平［（553.47±132.00）pg/ml］高于B组［（385.28±129.07）pg/ml］（t=3.150,P<0.05）;②感染后。A1蛋白组刺激小鼠产生IFN-γ水平［（492.41±211.74）pg/ml］高于B组［（335.36±207.72）pg/ml］（t=2.874,P<0.05）;A2组［（543.09±223.07）pg/ml］高于B组（t=3.15,P<0.05）。（3）IL-2水平：①感染前。A组刺激小鼠产生IL-2水平［（1490.05±215.35）pg/ml］高于B组［（718.70±269.29）pg/ml］（t=7.763,P<0.05）;A1组［（1738.91±358.40）pg/ml］高于B组（t=7.903,P<0.05）;A2组［（2270.74±193.40）pg/ml］高于B组（t=16.308,P<0.05）;②感染后。A组刺激小鼠产生IL-2水平［（806.81±306.39）pg/ml］高于B组［（335.26±176.81）pg/ml］（t=4.627,P<0.05）;A1组［（1373.22±143.75）pg/ml］高于B组（t=15.90,P<0.05）。 结论 Rpfd、Rpfd1、Rpfd2蛋白具有启动宿主体液免疫功能及增强宿主细胞免疫功能的双重作用,可能成为预防及治疗Mtb感染的免疫新策略。     

尼莫地平联合环磷酰胺对缺血-再灌注大鼠的脑保护作用

目的探讨联合应用尼莫地平和环磷酸酰胺对脑缺血-再灌注损伤大鼠的神经保护作用。方法随机将48只成年雄性Wistar大鼠分为四组,即尼莫地平组、环磷酰胺组、联合用药组（尼莫地平＋环磷酰胺）及对照组,每组12只大鼠。应用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型;缺血后4h行再灌注。于缺血后再灌注前20min、再灌注后12、36h,经大鼠尾静脉缓慢推注给药（将尼莫地平、环磷酰胺溶于1.5ml等渗盐水中）。尼莫地平组：1mg/kg;环磷酰胺组：100mg/kg;联合用药组：尼莫地平0.5mg/kg＋环磷酰胺50mg/kg;对照组：等渗盐水1.5ml。大鼠脑缺血-再灌注后48h计算大鼠存活率,并进行神经功能缺损评分、脑血流量和脑梗死体积的测定。结果尼莫地平组、环磷酰胺组、联合用药组及对照组的各项测定结果：①大鼠存活比例分别为5/12、6/12、8/12及3/12。联合用药组与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。②四组大鼠神经功能缺损评分分别为4.39±0.20、4.27±0.67、3.65±0.47及4.67±0.71。尼莫地平组、环磷酰胺组与对照组比较,差异无统计学意义;联合用药组与其他三组比较,差异均有统计学意义（均P〈0.05）。③大鼠脑组织血流量分别为（96±23）、（113±39）、（139±44）及（79±41）%。三个用药组与对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0.01）。联合用药组与尼莫地平组、环磷酰胺组比较,差异亦有统计学意义（P〈0.01,P〈0.05）。④大鼠脑梗死体积分别为（261±55）、（183±58）、（104±54）及（384±59）mm3。尼莫地平组、环磷酰胺组与对照组比较,脑梗死体积缩小,但差异无统计学意义;联合用药组与其他三组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论尼莫地平与环磷酰胺联合应用,对脑缺血-再灌注损伤大鼠的脑保护作用效果优于单独用药。     

血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体致血管内皮炎性损伤的研究

目的观察血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）自身抗体（AT1-AA）长期作用下大鼠血管内皮是否会发生炎性损伤。方法以人工合成的人AT1R的细胞外第二环功能表位肽段（AT1R—ECⅡ）为抗原,主动免疫雌性Wistar大鼠9个月,建立AT广AA阳性的大鼠模型。血细胞涂片法检测大鼠血中血细胞变化情况,以激光共聚焦法检测大鼠血管内皮细胞细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的表达,以免疫组化法检测血管内皮细胞血管细胞间黏附分子-1（VCAM-1）的表达。结果主动免疫的Wistar大鼠（n=9）血清中产生了高滴度的IgG类AT1-AA,从免疫2个月开始直到免疫结束,抗体维持在较恒定的高水平[免疫9个月时光密度值与同期溶剂对照组比较,（1．79±0．26）比（0．43±0．15）,P〈0．01]。免疫结束时,同溶剂对照组相比,大鼠血中自细胞数目有升高趋势,血小板数量显著下降,而血红蛋白含量未变。大鼠胸主动脉内皮细胞ICAM-1[荧光值（2．97±0．50）比（1．63±0．48）,P〈0．05]和VCAM-1[平均光密度值M00（O．27±0．04）比（0．17±0．04）,P〈0．05]表达均显著上调。结论AT1-AA长期刺激可引起大鼠血管内皮细胞发生炎性损伤。     

抗血管紧张素Ⅱ1型受体抗体阳性孕鼠模型的制备

目的制备抗血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）抗体阳性的孕鼠模型,为先兆子痫疾病的自身免疫机制研究提供重要工具。方法以合成的人AT1R细胞外第二环肽段（AT1R—ECⅡ）为抗原主动免疫雌性Wistar大鼠,待雌鼠体内抗AT1R抗体达高峰后,将其与正常雄鼠（未免疫）交配,从而建立抗AT1R抗体阳性的孕鼠模型。用SA—ELISA法检测孕鼠妊娠中期血清中抗AT1R抗体的水平、免疫球蛋白类型及亚类。结果免疫雌鼠体内抗AT,R抗体滴度在4周时明显升高,8周时达高峰（A值为2．89±0．21,同期对照组A值为0．44±0．06,P〈0．01）;与正常雄鼠交配怀孕后14d时,免疫孕鼠血清中的抗AT1R抗体仍维持高滴度。该抗体属于IgG类免疫球蛋白,而非IgM及IgA类,在大鼠IgC的4个亚型（IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG2c）中,该血清抗体主要属于IgG2b亚型（A值为0．32±0．04,同期对照组A值为0．08±0．01,P〈0．01）,尚有极少部分属于IgG2a亚型（A值为0．10±0．01,同期对照组A值为0．07＋0．01,P〈0．05）。结论用主动免疫法可使孕鼠体内产生高滴度的抗AT,R抗体,且该抗体的亚型与先兆子痫患者体内的AT1受体自身抗体（AT1-AA）具有良好一致性,所以该造模方法可以作为从免疫学角度研究先兆子痫的一种工具。     

不同剂量结核病DNA疫苗的电转染免疫原性研究

目的 研究不同剂量结核病DNA疫苗电转染后的免疫原性.方法 40只BALB/c小鼠通过随机数字表法分为8组,每组5只.其中4组分别用100 μl生理盐水和10 μg、50 μg、100 μg结核分枝杆菌Ag85A DNA肌内注射免疫小鼠;另4组用100 μl生理盐水和10 μg、50 μg、100 μgAg85ADNA肌内注射加电转染免疫小鼠.每2周免疫1次,共3次.最后1次免疫后2周杀死小鼠.用ELISA方法检测小鼠脾细胞培养上清液中γ干扰素（IFN-γ）和白细胞介素4（interleukin 4,IL-4）水平;用流式细胞术检测小鼠外周血单个核细胞（PBMC）分泌IFN-γ的辅助性T细胞（helper T cell,Th）1细胞百分比、分泌IL-4的Th2细胞百分比,以及Th1与Th2的细胞比值.用SAS 9.2软件处理数据,实验数据以“-x±s”表示,对有关数据进行两因素析因设计的方差分析,两两比较采用t检验,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 免疫结束后2周,小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ水平,50 μg[（646.05±342.53） pg/ml]和100 μgAg85ADNA肌内注射组[（738.61±372.68） pg/ml]显著高于生理盐水组[（1.73±3.88）pg/ml]（f值分别为4.065、4.647,P值均＜0.05）和10 μg Ag85A DNA组[（87.83±120.82）pg/ml]（t值分别为3.513、4.094,P值均＜0.05）;10 μg Ag85A DNA电转染组[（357.06±105.18） pg/ml]显著高于生理盐水组（t=2.247,P＜0.05）,高于100 μg Ag85ADNA电转染组[（86.08±135.73） pg/ml],但差异无统计学意义（t=1.706,P＞0.05）;50 μg Ag85ADNA电转染组[（648.60±439.41）pg/ml]显著高于生理盐水组（t=4.081,P＜0.05）和100 μg Ag85A DNA电转染组（t=3.539,P＜0.05）.与直接肌内注射组IFN-γ水平[（87.83±120.82） pg/ml]比较,10 μg Ag85A DNA电转染组增高3倍[（357.06 pg/ml）/（87.83 pg/ml）]; 50 μg Ag85A DNA肌内注射组[（646.05±342.53） pg/ml]与电转染组[（648.60±439.41）pg/ml]比较,差异无统计学意义（t=-0.016,P＞0.05）;100 μg Ag85A DNA电转染组[（86.08±135.73）pg/ml]较肌内注射组[（738.61±372.68） pg/ml]降低88.35％（t=4.105,P＜0.05）.小鼠PBMC分泌IFN-γ的Th1细胞百分比,不同剂量Ag85A DNA肌内注射组[10 μg Ag85A DNA：（1.39±0.84）％;50 μg Ag85A DNA：（1.55±0.33）％;100 μg Ag85A DNA：（2.13±0.47）％]和DNA电转染组[10 μg Ag85A DNA：（1.42±0.47）％; 50 μg Ag85A DNA：（1.88±0.51）％; 100 μg Ag85ADNA：（1.43±0.68）％]均高于生理盐水组[（0.65±0.31）％]（t值分别为2.002、2.431、4.015、2.084、3.332和2.105,P值均＜0.05）,但不同剂量Ag85A DNA电转染组与肌内注射组之间差异均无统计学意义（t值分别为0.081、0.901和-1.91,P值均＞0.05）.小鼠PBMC分泌IL-4的Th2细胞百分比,不同剂量Ag85A DNA肌内注射组[10 μg Ag85A DNA：（1.42±1.18）％; 50 μg Ag85A DNA：（1.14±0.78）％; 100 μg Ag85A DNA：（1.24±0.76）％]和DNA电转染组[10 μg Ag85A DNA：（1.19±1.09）％; 50 μg Ag85A DNA：（2.06±0.96）％;100 μgAg85A DNA：（1.47±0.65）％]均显著低于生理盐水电转染组[（4.14±2.55）％]（t值分别为-3.392、-3.738、-3.616、-3.676、-2.599和-3.325,P值均＜0.05）,但不同剂量DNA肌内注射组与DNA电转染组之间差异无统计学意义（t值分别为0.284、-1.139和-0.292,P值均＞0.05）.结论 DNA电转染免疫可以增强低剂量DNA疫苗的免疫应答,使用少量的DNA疫苗就可以产生较好的免疫效果.     

冠状动脉粥样硬化性心脏病患者颈总动脉中内膜厚度与冠状动脉病变的关系

目的 探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）患者颈总动脉中内膜厚度与冠状动脉狭窄程度与狭窄范围的关系.方法 将211例怀疑冠心病的患者,根据冠状动脉造影结果,依有无狭窄及狭窄程度分为3组：A组（60例）为轻度狭窄组,狭窄程度＜50％;B组（97例）为中重度病变组,狭窄程度＞50％;对照组为54例冠状动脉造影阴性者.157例冠状动脉狭窄患者又依狭窄程度分为单支病变亚组（49例）、双支病变亚组（37例）、三支病变亚组（71例）.采用彩色多普勒声像仪测取颈总动脉中内膜厚度,并比较分析各组颈总动脉中内膜厚度.结果 对照组、A组、B组比较,颈动脉总中内膜厚度依次增高,对照组、A组、B组两两比较差异有统计学意义[（0.812 5±0.118 6）mm vs.（0.893 6±0.133 1）mm vs.（1.038 9±0.141 1）mm,P＜0.05].在以病变范围为基础的分组中,各亚组与对照组比较,颈动脉中内膜明显增厚,且两两比较差异有统计学意义（P＜0.05）;单支病变亚组与双支病变亚组比较,差异有统计学意义[（0.920 4±0.141 5）mm vs.（0.990 6±0.144 3）mm,P＜0.05],但双支病变组与三支病变组比较,差异无统计学意义[（0.990 6±0.144 3）mm vs.（1.031 7±0.149 6）mm,P＞0.05].结论 颈总动脉中内膜厚度能很好地反映冠状动脉狭窄程度,但无法很好地反映病变范围.     

主动脉窦部室性早搏与右心室流出道间隔部室性早搏心电图对比分析

目的：探讨主动脉窦部室性早搏（简称“室早”）和右心室流出道间隔部室早心电图特征的差别。方法选取12例右心室流出道间隔部室早（ A组）心电图作为对照,分析12例主动脉窦部室早（ B组）的心电图特征。结果与A组相比,B组V1、V2导联的R波时间指数增大[V1导联：（0．23±0．10） vs．（0．49±0．28）;V2导联：（0．24±0．12） vs．（0．57±0．23）;P均＜0．05]。 V1、V2导联的R／S波幅指数A组小于B组[ V1导联：（0．10±0．02） vs．（0．87±0．55）;V2导联：（0．21±0．14） vs．（1．13±1．49）,P均＜0．05]。 A组胸前导联R波移行在V3导联或其后,B组胸前导联R波移行在V1或V2导联。 A组V1、V2导联的R波移行指数小于B组[V1导联：（0．25±0．15） vs．（1．30±0．68）; V2导联：（0．31±0．20） vs．（1．71±1．14）, P均＜0．05]。结论主动脉窦部室早与右心室流出道间隔部室早在V1、V2导联R波时间指数、R／S波幅指数、胸前导联R波移行位置及移行指数上有明显的差别。     

肠系膜淋巴结Th1、Th17细胞在小鼠结肠炎模型发病中作用的研究

背景:大量研究表明细胞因子网络在溃疡性结肠炎(UC)的发病和疾病进程中起关键作用,但相关研究主要集中于肠黏膜免疫细胞方面。目的:探讨肠系膜淋巴结Th1、Th17细胞在模拟人类UC的小鼠DSS结肠炎模型发病中的作用。方法:C57BL/6小鼠饮用5%DSS溶液7 d诱导实验性结肠炎,实验过程中每天评估疾病活动指数(DAI)。于第8 d处死小鼠,ELISA法测定结肠组织IL-1β含量;分离肠系膜淋巴结细胞,以CD3/CD28单抗诱导淋巴细胞活化并以ELISA法测定细胞培养上清液中的Th1、Th17细胞因子含量,流式细胞术检测肠系膜淋巴结F4/80+CD11b+巨噬细胞和CD4+T细胞内Th1、Th17细胞因子表达。结果:结肠炎模型组DAI随实验进程而逐渐增加,于第7 d达峰值。与正常对照组相比,模型组结肠组织IL-1β蛋白表达显著上调(P<0.05),肠系膜淋巴结巨噬细胞浸润增加(P<0.001),淋巴细胞IL-17A分泌水平显著增高(P<0.05),IFN-γ分泌水平亦呈增高趋势(P>0.05),CD4+T细胞内IL-17A、IFN-γ表达显著上调(P<0.05)。结论:肠系膜淋巴结Th1、Th17细胞过度激活可能通过释放效应细胞因子诱导巨噬细胞等浸润、活化,参与介导小鼠DSS结肠炎模型的肠黏膜炎症反应和病理损伤。     

AAV—AS联合环磷酰胺治疗大鼠皮下胶质瘤效果观察

目的观察腺相关病毒为载体血管抑素重组质粒（AAV-AS）联合环磷酰胺（CTX）治疗大鼠皮下胶质瘤的效果。方法大鼠皮下抑制胶质瘤C6细胞,建立荷C6胶质瘤大鼠模型,当肿瘤体积达250～280mm3时,随机分为对照组、CTX组、AAV-AS组及联合组,分别腹腔内注射生理盐水、CTX、AAV-AS、CTX＋从V—AS。每隔3d测量肿瘤的长、短径计算体积;于22d后处死大鼠,采用免疫组化染色法标记抗CD31抗体计算瘤组织中的微血管密度（MVD）,TUNEL法测算肿瘤细胞凋亡指数（AI）。结果对照组肿瘤体积为（2060．339±82．028）mm3,MVD为（20±3）条／HP,AI为1．442±0．329;CTX组分别为（1763．867±124．237）mm3、（18±5）条／HP、1．719±0．464,AAV—AS组分别为（1229．910±141．646）mm3、（13±2）条／HP、3．653±0．238,联合组分别为（1098．320±70．880）mm3、（8±3）条／HP、3．886±0．361。联合组肿瘤体积和MVD与其他组比较,P均〈0．05;联合组AI与对照组及CTX组比较,P均〈0．05,但与AAV—AS组比较,P〉0．05。结论AAV-AS联合CTX治疗大鼠皮下胶质瘤,可减小肿瘤体积,降低血管密度,间接促进肿瘤细胞凋亡。