高效液相色谱法测定保健食品-复合营养素补充剂中维生素B1含量

摘要：目的建立一种简单、高效、抗基质干扰能力强的样品前处理结合高效液相色谱法（high performance liquid chromatography, HPLC）测定保健食品-复合营养素补充剂中维生素B1(vitamin B1,VB1)含量的分析方法。方法选取基质复杂的多种维生素矿物质片作为代表样品,通过创新性的设计酸性饱和乙二胺四乙酸二钠盐（ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt,EDTA）提取溶液结合超声提取前处理方法,充分络合各类矿物质元素并有效消除其他基质干扰,针对样品中的维生素B1进行高效率提取。提取液经滤膜过滤后,HPLC分离检测。结果此改进后的分析方法能够针对多种维生素矿物质片中维生素B1含量进行准确定量。维生素B1在浓度范围1.0237~204.7380 μg/mL内线性良好（r2=0.9999）;实际样品加标回收率达98.59%;相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)为0.61%（n=6）;方法定量限(limits of quantification, LOQ)为0.05 μg/mL。结论本方法简单、高效、抗基质干扰能力强、重现性好,适用于多种维生素矿物质片中的维生素B1的含量测定,同时也为复杂基质的保健食品-复合营养素补充剂中维生素B1的含量检测提供新的途径。     

高效液相色谱法测定配合与浓缩饲料中的叶酸含量

目的建立高效液相色谱紫外检测法测定配合与浓缩饲料中的叶酸含量。方法样品经0.1 mol/L碳酸钠溶液提取,利用EDTA对金属元素的螯合作用和甲醇沉淀蛋白的作用去除金属元素及大分子蛋白对叶酸测定的干扰,并通过阴离子交换柱净化富集,洗脱液浓缩定容后供高效液相色谱仪测定。结果叶酸在0.1~250.0μg/mL的浓度范围内具有良好的线性关系,样品回收率为81.6%~94.6%,相对标准偏差小于10%,检出限可达到0.1 mg/kg,定量限为0.3 mg/kg。结论本方法适用于配合与浓缩饲料中叶酸含量的测定。     

荧光法测定果蔬中叶酸含量的研究

目的：建立水果蔬菜中叶酸含量的荧光测定方法。方法：样品经NaOH提取后,在0.2mol/LHAcNaAc（pH=4.76）反应介质中被KMnO4氧化,空白以1mol/LH2SO4作为反应介质进行氧化,在λex=280nm、λem=445nm条件下测定。结果：叶酸浓度在6.0~90μg/L范围内与ΔIF呈线性关系,线性回归方程为ΔIF=778.24C＋1.1,r=0.9998;方法精密度为1.49%;对猕猴桃、苹果、梨、菠菜中叶酸含量进行测定,精密度为2.65%~9.95%,加标回收率为86.0%~107.5%,相对标准偏差为2.52%~8.73%。结论：本方法提取过程简单、灵敏度高、结果的精密度和准确度高,可用于水果蔬菜中叶酸的测定。     

高效液相色谱法测定叶酸片中叶酸含量

目的 :采用高效液相色谱法对叶酸片中叶酸的含量进行测定分析。方法 :以Symmetry C18作为色谱柱,参数设置为4.6×250mm,5.0μm,将甲醇-水-冰乙酸作为流动相,比例设计为40:60:0.1,流速设定为1.0ml/min,进样量设置为20μl,在检测波长254nm处进行检测分析。结果 :检测显示叶酸在20.06至182.78μg/ml范围内呈现良好的线性关系,r=0.9999,平均加样回收率为100.4%,RSD为1.04%.。结论 :高效液相色谱法进行叶酸片中叶酸含量测定不仅操作简便,且测量分析的准确度与精密性均比较高。     

高效液相色谱-质谱联用测定婴幼儿配方食品中叶酸的含量

建立了婴幼儿配方食品中叶酸含量的高效液相色谱-质谱联用测定方法。采用C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)进行分离,以5 mmol/L乙酸铵(含0.1%甲酸)溶液-甲醇为流动相梯度洗脱,柱温25℃,流速1.0 mL/min,进样量20μL,柱后分流比为1∶3,质谱采用多离子反应监测(MRM)方式进行检测,正离子模式,定量离子为m/z442.0→295.2。叶酸在0.001~2.500μg/mL的范围内线性关系良好(r=0.9989),该方法相对标准偏差(RSD)为2.6%~6.0%,回收率为83.9%~104.0%,检出限(S/N=3)和定量限(S/N=10)分别为1.0 ng/mL、3.3 ng/mL。该方法操作简便、灵敏度高、重复性好,可用于婴幼儿配方食品中叶酸的测定。     

玉米中5-甲基四氢叶酸提取方法的优化及高效液相色谱法定量分析

优化玉米中5-甲基四氢叶酸(5-methyl-tetrahydrofolate,5-MTHF)提取方法,评价高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)测定玉米5-MTHF含量的准确性。结果表明:优化最佳提取参数为叶酸提取液pH值为6.5,α-淀粉酶、蛋白酶、大鼠血清的添加量分别为12 U/mL、0.028 U/mL、14μL/mL,固相萃取净化柱收集洗脱液2.5 mL;HPLC法测定玉米中5-MTHF表明,在0.003～1.000μg/mL有良好的线性关系,相关系数为0.999 9,检出限为0.001μg/mL,定量限为0.003μg/mL,精密度为1.90%,样品加标平均回收率为104.57%;测定叶酸强化玉米(京科糯928)中5-MTHF与总叶酸含量分别为181.18μg/100 g与253.65μg/100 g(干质量),提取优化后的HPLC检测方法适用于玉米中5-MTHF与总叶酸的测定,可为其他强化谷物中叶酸含量的测定提供参考。     

高效液相色谱法测定保健食品多维康胶囊中叶酸的含量

目的建立高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定多维康胶囊中叶酸含量的方法。方法采用C₁₈(150mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以磷酸二氢钾-甲醇溶液为流动相,流速0.8 mL/min,检测波长254 nm,柱温30℃,进样体积10μL。结果叶酸的线性关系良好,相关系数为1.000;方法检出限为0.034μg/mL,定量限为0.091μg/mL;方法平均加标回收率为98.80%~104.17%,平均相对标准偏差为0.02%。结论该方法操作简单,灵敏度高,可作为保健食品多维康胶囊中叶酸的测定方法。     

高效液相荧光检测法测定柑橘中5-甲基四氢叶酸的含量

利用5-甲基四氢叶酸自身产生荧光的特性,建立高效液相荧光检测法来测定柑橘中5-甲基四氢叶酸的含量。使用ODS-C18反相色谱分离柱,流动相为6%乙腈,94%0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(pH3.0)作为流动相,流速1.0mL/min,柱温23℃,进样量为20μL,激发波长为290nm,发射波长为360nm。结果表明,5-甲基四氢叶酸在0.003μg/mL-0.1μg/mL有良好的线性关系,相关系数为0.9999,检出限为0.01ng/mL,样品测定的精密度为0.99%,样品加标平均回收率为96.6%。建立的高效液相荧光检测法具有良好的精密度和回收率,适合用于柑橘中5-甲基四氢叶酸的测定。     

高效液相色谱法测定保健食品中β-葡聚糖

目的建立高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)检测保健食品中β-葡聚糖含量。方法称取样品适量,在酸性条件下于135℃用微波消解仪提取15 min,取出水解液,用氢氧化钠溶液调节pH至6.5±0.2,用水定容至100 mL容量瓶中,摇匀后过滤。采用高效液相色谱法检测,根据葡萄糖标准品的色谱峰面积进行定量。结果葡萄糖浓度在0.01~0.16 mg/mL的范围内与峰面积的线性良好,相关系数为0.9998。3水平不同浓度葡萄糖标准品添加的回收率为97.4%~98.6%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为0.4%~0.9%。结论该方法操作简便、准确、重现性好,适用于保健食品中β-葡聚糖含量的快速测定。     

高效液相色谱-串联质谱法同时测定复合维生素片中的叶酸和生物素

目的建立高效液相色谱-串联质谱法同时定性和定量分析复合维生素片中叶酸和生物素的方法。方法样品用水溶液溶解,经Eclipse C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm)分离,流动相为0.1%甲酸溶液和乙腈梯度洗脱,流速0.2 ml/min,采用电喷雾离子源正离子模式,多反应监测(MRM)进行检测。结果叶酸和生物素在5 min内得到较好的分离。叶酸和生物素的线性范围分别为42~523和47~583 ng/ml,线性回归方程分别为y=1157.63x-6698.38(r~2=0.999 9)和y=207.93x-3052.26(r~2=0.998 2),低、中、高3个添加水平的回收率分别为99.9%~108.7%和90.1%~94.5%,相对标准偏差(RSD)均为1.0%(n=6),检出限分别为0.33和0.08μg/g。结论高效液相色谱-串联质谱法可靠、灵敏、准确,可用于复合维生素片中叶酸和生物素同时定性和定量分析。     

高效液相色谱法检测贝类中的乳酸和琥珀酸

研究探讨利用高效液相色谱测定贝类中乳酸和琥珀酸的样品处理方法和测定方法,结果显示:与乙醇沉淀法、国标法相比,流动相提取法更适合作为样品的提取方法,在检测条件中,流动相为pH2.5的2.0%NH4H2PO4,流速在1.0mL/min,波长为205nm为最优条件。此方法具有较好的线性、较高的准确度和精密度,加标实验回收率为94.0%～99.9%,相对标准偏差为0.09%～0.14%。也测定了两种贝类中乳酸和琥珀酸的含量。     

利用钛胶高效液相色谱法测定食品中叶酸含量

建立了利用钛胶高效液相色谱法测定食品中叶酸含量的方法。色谱条件:钛胶固定相(250mm×4.6mmi.d.,5μm),流动相为水:甲醇=70:30(v/v)、流动相中含磷酸盐(PBS)20mmol/L,流速0.9mL/min,柱温60℃,检测波长280nm。线性范围为5～25μg/mL,检出限1.9220μg/mL,回收率为92.7%～95.1%,RSD(n=8)<0.68%。应用于食品样品中叶酸的测定,结果满意。     

高效液相色谱法测定食品中的叶酸

在食品样品中加入体积分数 60 %高氯酸溶液去蛋白 ,过滤后进样检测叶酸。流动相选用pH 3 .5 ,体积分数 12 %的乙腈 ,浓度 5 0mmol/L的KH2 PO4溶液。流速为 1mL/min ,经ODSC 18柱分离 (柱温为 40℃ ) ,用质量分数 0 .5 %的过二硫酸钾溶液作柱后衍生剂 ,流速为 0 .3mL/min ,柱后反应温度为 60℃ ,经荧光检测器 (Ex :3 65nm ,Em :45 0nm)检测定量。实验结果表明 ,在 0 0 1～3 2 μg/mL的浓度范围内 ,线性良好 ,相关系数为 0 .9999;最低检出浓度为 0 .0 1μg/mL ;方法回收率为 98.1% ;变异系数为 2 3 %。     

叶酸的提取及抗氧化性研究

研究果蔬中叶酸的最佳提取条件及叶酸的抗氧化活性.以油菜,香菇,香蕉为原料,以提取温度、提取剂的浓度、提取时间为因素进行正交试验,确定最佳提取条件,用荧光光度法测定叶酸含量.采用Fenton体系、邻苯三酚自氧化体系,分别研究不同浓度的叶酸对羟自由基( ·OH)和超氧自由基(O2-·)的清除效果.结果表明果蔬中叶酸的最佳提...     

微生物法测定乳清蛋白粉类样品中的叶酸含量

目的 建立微生物法测定乳清蛋白粉类样品中叶酸含量的分析方法。方法 利用叶酸标准品制作叶酸标准曲线。将样品进行超声处理得到样品溶液。向试管中加入等体积的培养基和不同体积的样液,稀释至10mL,得到样品待测液。样品待测液和叶酸标准曲线溶液灭菌后,加入鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus casei spp.rhamnosus)CICC 6224菌悬液进行培养,将培养物混匀后测其吸光度值,根据标准曲线计算相应的叶酸含量,并进行方法的空白试验、检出限、精密度、重复性、稳定性及回收率试验。结果 在0.1010~1.0103ng/mL范围内,叶酸标准曲线呈现良好的线性,相关系数R_²=0.99373,符合GB/T27404-2008《实验室质量控制规范》的要求,该方法的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为3.8%(n=6),平均回收率为102.5%(n=9)。结论 该方法稳定准确,适合用于测定乳清蛋白粉类样品中的叶酸含量。     

试剂盒法快速检测婴幼儿乳粉中叶酸含量

目的 建立试剂盒法快速检测婴幼儿乳粉中叶酸的含量。方法 以Tris缓冲液稀释样品, 加入冻干的干酪乳杆菌测试菌球, 采用Costar 3599细胞培养板培养, 使用酶标仪测定结果。并同时检测了28批次婴幼儿乳粉叶酸的含量。结果 本试剂盒方法回收率为95%~105%, 定量检测限为0.050 ng/mL, 日间精密度为0.6%, 日内精密度为0.7%。采用试剂盒方法与GB 5413.16-2010试管法同时检测28批次婴幼儿乳粉中叶酸的含量, 检测结果无显著性差异(P=0.598), 乳粉中叶酸含量的合格率为100%。结论 该方法操作简单, 灵敏度高, 重现性好, 可用于测定婴幼儿乳粉中叶酸的含量。     

火焰原子吸收法测定叶酸片中铁含量的不确定度评估

目的 评定原子吸收法(atomic absorption spectrometry, AAS)测定叶酸片中铁含量测量结果的不确定度。方法 样品经过消解后稀释定容, 参照GB/T 5009.90-2016采用原子吸收光谱仪进行含量检测。通过对铁含量计算公式的分析, 对样品称量、消解液定容体积、标准曲线的拟合、标准溶液的配制、标准物质的纯度、测量的重复性及空白试剂等各个影响因素的不确定度分量进行计算及评估, 计算合成的不确定度。结果 该叶酸片中的铁含量为41.25 mg/kg, 在95%的置信概率下对其进行扩展不确定度为1.24 mg/kg。结论 可通过改进标准曲线的配制方式降低不确定度, 对叶酸片中铁含量的测定的方法转移提供了参考的检验区间。     

固相萃取-HPLC柱后氧化衍生荧光法测定运动营养食品中叶酸的含量

本文开发了固相萃取-HPLC柱后氧化衍生荧光法测定运动营养食品中叶酸含量的方法。分别考察了沉淀蛋白法、酶解蛋白法及固相萃取法的样品前处理方式及流动相的优化条件,最终选择反相弱阴离子交换Strata-X-AW固相萃取小柱纯化,Venusil MP C₁₈色谱柱分离,柱后衍生仪氧化衍生(5%过二硫酸钾溶液),以50 mmol磷酸二氢钾(pH3.5):乙腈=90:10(V/V)为流动相,再经荧光检测器进行检测。结果表明,在0.232~2.318 μg/mL范围内方法线性良好,R2=0.9971,进样量为10 μL,方法的仪器定量限为0.0774 μg/mL,灵敏度足以满足运动营养食品中叶酸的检测需要,方法回收率在96.98%~100.50%之间,标准品、样品溶液在8 h内稳定。本方法很好地解决复杂基质运动营养食品中叶酸的提取、净化除杂等问题。操作方便快捷,结果准确,线性范围广,灵敏度高,重现性、专属性、回收率及稳定性较为满意,能够满足日常运动营养食品中叶酸含量检测的需求。