基因表达谱芯片在筛选胃腺癌相关基因中的应用

目的：应用基因表达谱芯片筛选胃腺癌相关基因,并对这些基因的功能进行初步分析。方法：按一步法抽提胃腺癌和对照胃（正常）组织的RNA并纯化mRNA;将12800条人类基因PCR产物按微矩阵排列点样于化学涂层的载玻片上,制成基因芯片;将等量的对照胃和胃腺癌组织mRNA分别逆转录合成荧光分子掺入的cDNA一链做探针,混合后杂交上述基因芯片。经严格洗片后扫描荧光信号图像,计算机分析后比较两种组织中差异表达的基因。结果：在12800条基因中,胃腺癌与正常胃组织间存在差异表达的基因。在所检测的5例临床标本中均存在显差异表达的基因共27条（0．21％）,其中上调的11条（0．086％）,下调的16条（0．125％）,下调的基因中有2条为新基因。结论：微矩阵基因芯片在筛选胃腺癌发生相关基因的改变时、具有快速、高通量、高敏度等特点,胃腺癌基因差异表达谱的分析为胃癌的诊治提供了新的思路和线索。     

神经生长因子对脊髓神经元损伤后c—fosmRNA表达的影响

探讨神经生长因子（ＮＧＦ）对脊髓神经元保护作用的机制。采用Ａｌｅｎ′ｓ法制成大鼠Ｔ８脊髓损伤模型,用原位杂交方法检测神经元ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ的表达。结果：脊髓损伤后神经元ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ表达较正常对照未损伤神经元显著增加,表达高峰出现在损伤后１ｈ;神经生长因子能显著抑制损伤后神经元ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ的异常表达。结论：神经生长因子对损伤后神经元保护作用机制,可能是其抑制了ｃ－ｆｏｓ基因异常表达,保护了神经元     

肺癌与非恶性疾病患者的肺组织c-fos、c-jun基因表达研究

探讨ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ癌基因与肺癌的关系。方法：采用ＰＴ－ＰＣＲ方法检测肺癌与非恶性肺疾病患者病变组织及正常肺组织中ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ ｍＲＮＡ表达。结果：ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ ｍＲＮＡ在两患者病变组织中的表达均明显高于正常组织（Ｐ〈０．００１）,在肺癌组织中的表达又高于肺良性肿块组织（Ｐ〈０．０５）。而且在小细胞肺癌和腺癌组织表达强于鳞癌组织（Ｐ〈０．００１）。结果：ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊ     

电针和福尔马林诱发大鼠脑c—fos基因表达研究

目的：从分子水平探讨电针镇痛的机理。方法：采用ＲＮＡ斑点杂交技术比较电针与福尔马林刺激时大鼠脑内ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ表达的改变,并观察吗啡对ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ表达的影响。结果：电刺激具有明显的镇痛作用。电针和福尔马林刺激后均可诱发ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ表达增强。吗啡能明显抑制福尔马林诱导ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ表达,而对电针诱导的ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ表达则无明显影响。结论：ｃ－ｆｏｓ基因可能参与痛觉调     

实验性运动病大鼠脑细胞c—fos基因表达

取ＳＤ大鼠１６只分为两组，其中一组按Ｃｒａｍｐｔｏｎ的方法进行旋转刺激诱导运动病；而另一非旋转组作为对照。用原位杂交和免疫组化方法、图像分析技术对旋转刺激组大鼠及对照组大鼠大脑皮质、脑干和小脑皮质中ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ、Ｆｏｓ蛋白含量变化进行定位、定量研究。结果表明，旋转刺激三种组织后ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ、Ｆｏｓ蛋白含量均有增加，推测应激反应基因ｃ－ｆｏｓ的表达参与运动病的发生和发展。     

AR与cyclinD1、p16在喉鳞癌发病中作用及其相互关系

目的：探讨雄激素受体（ＡＲ）与细胞周期蛋白Ｄ１（ｃｙｃｌｉｎＤ１）、ｐ１６基因三者在喉鳞癌中的作用及相互关系。　方法：　应用ＡＲ、ｃｙｃｌｉｎＤ１、ｐ１６单克隆抗体，通过免疫组化Ｓ－Ｐ法检测４４例喉鳞癌和１１例癌旁组织中的ＡＲ、ｃｙｃｌｉｎＤ１、ｐ１６的表达。　结果：　ＡＲ、ｃｙｃｌｉｎＤ１、ｐ１６在喉鳞癌上皮组织中阳性表达分别是６８．２％，５６．８％，５２．３％，与癌旁正常组织对照，两者差异有显著性（Ｐ　＜０．０５），ＡＲ与ｃｙｃｌｉｎＤ１的表达呈正相关，同样ｃｙｃｌｉｎＤ１与ｐ１６的表达呈正相关，而ＡＲ与ｐ１６之间无相关性，同时发现ＡＲ、ｃｙｃｌｉｎＤ１、ｐ１６的阳性表达与临床及病理分级无相关性（Ｐ　＞０．０５）。结论：ＡＲ、ｃｙｃｌｉｎＤ１、ｐ１６蛋白阳性表达在喉鳞癌的发生和发展中起重要作用。ＡＲ在喉鳞癌上皮细胞的阳性表达可作为诊断喉鳞癌的辅助指标。     

喉癌和疗敏感性与Bcl—2基因表达

分析喉癌Ｂｃｌ－２基因表达及其与放疗敏感性的相互关系。方法：采用抗Ｂｃｌ－２基因蛋白单克隆抗体，采用免疫组织化学ＤＡＣＯ ＣＳＡ Ｓｙｓｔｅｍ法染色技术，对７３例喉鳞癌组织标本进行分析研究。     

mRNA—cDNA高敏感性原分子杂交技术

目的 探讨效果更加满意的核酸分子杂交技术的方法。方法 采用原位分子杂交技术结合免疫组化ＳＰ法,在人肝癌组织石蜡切片上显示ｃ－ｍｙｃ和Ｎ－ｒａｓ基因的ｍＲＮＡ。结果：ｃ－ｙｃｙ ｍＲＮＡ和Ｎ－ｒａｓ ｍＲＮＡ杂交信号呈红色,清晰可见于细胞浆内,背景浅淡,效果满意。结论：此方法与以往的原位杂交方法相比,能明显放大杂交信号,提高检测的敏感性和稳定性。     

电针和福尔马林诱发大鼠脑c-fos基因表达研究

目的：从分子水平探讨电针镇痛的机理,方法：采用ＲＮＡ 斑点杂交技术比较电针与福尔马林刺激时大鼠脑内ｃ ｆｏｓ ｍＲＮＡ 表达的改变,并观察吗啡对ｃ ｆｏｓ ｍＲＮＡ 表达的影响。结果：电针刺激具有明显的镇痛作用。电针和福尔马林刺激后均可诱发ｃ ｆｏｓ ｍ ＲＮＡ表达增强。吗啡能明显抑制福尔马林诱导ｃ ｆｏｓ ｍＲＮＡ 表达,而对电针诱导的ｃ ｆｏｓ ｍ ＲＮＡ表达则无明显影响。结论：ｃ ｆｏｓ 基因可能参与痛觉调制,电针镇痛并不等同于伤害性刺激。     

基因表达谱芯片发现36条喉鳞癌相关基因

目的：研究探讨喉鳞癌发生、发展中相关基因群的表达和初步功能。方法：按微矩阵排列的4096种全长基因PCR产物制成BioDoor4096型微矩阵表达谱芯片;采用条件优化的一步法抽提喉鳞癌及正常组织总RNA,用Qiagen公司Oligotex mRNA离心柱分离纯化两种组织的mRNA;经逆转录合成荧光分子（Cy3/Cy5)掺入的cDNA一链制备表达谱探针,芯片杂交和严格洗片后,用SanArray3000荧光扫描仪扫描芯片荧光信号图像,利用计算机分析肿瘤及正常组织中差异表达的基因。对所获得的基因进行分子生物信息学分析。结果：在4096种基因中,喉鳞状细胞癌与正常组织间存在差异表达的基因。在所检测的4对临床标本中,发现有差异表达的基因36条（0．88％）。生物信息学分析显示,该36条差异表达基因与肿瘤的发病机制可能存在相关性。结论：喉鳞状细胞癌的发生、发展中存在多因素表达调控的改变,对于相关基因群的研究有助于认识肿瘤发病机制。     

肿瘤转移相关基因的表达谱研究

目的：运用基因表达谱芯片技术对肿瘤转移相关基因的表达谱进行研究。方法：对临床切除的肝癌和胰腺癌组织及相应的对照正常组织进行总ＲＮＡ抽提,纯化后的ｍＲＮＡ进行逆转录制备杂交探针,应用ＢｉｏＤｏｏｒ４０９６和ＢｉｏＤｏｏｒ１２８００的全长基因ＤＮＡ芯片筛选与肝癌和胰腺癌转移相关的基因。杂交后的信号用ＳｃａｎＡｒｒａｙ３０００扫描,结果用ＩｍａＧｅｎｅ３．０软件分析。结果：对肝癌和胰腺癌基因表达谱进行分     

喉鳞癌组织与相邻正常黏膜的基因表达谱差异

目的:研究喉鳞癌组织与相邻正常黏膜的基因表达谱差异。方法:对2例经病理证实的喉鳞状细胞癌标本和邻近的正常黏膜组织标本与基因表达谱芯片进行杂交,利用激光共聚焦荧光检测系统扫描芯片杂交信号,获得样品中基因序列及表达信息。结果:对比2例喉癌和邻近正常组织的基因表达图谱,发现癌组织和正常组织存在差异表达,2例标本重复出现且差异表达的基因共74个,其中喉癌组织表达上调的基因(R 5)27个,表达下调的基因(0相似文献   

基因表达谱芯片检测肺鳞癌与正常肺组织差异表达的基因

目的：用基因芯片技术探讨肺鳞癌异常基因的表达。方法：提取肺鳞癌组织及正常肺组织的RNA,分别用Cy5-dCTP或Cy3-dCTP标记,再与4096点基因芯片杂交,筛选肺鳞癌组织和正常肺组织表达差异的基因。结果：肺鳞癌组织与正常肺组织表达差异基因225条,其中癌组织中上调基因为116条．下调基因109条;差异极显著性基因37条,表达上调24条,下调13条。结论：多基因参与肺鳞癌发病,基因芯片技术是肺癌基因筛选的有效方法。     

应用基因表达谱技术研究人脑动脉瘤细胞信号传导相关基因

应用基因芯片分析人脑动脉瘤基因表达谱 ,分析细胞信号传导相关基因的差异表达。提取 4例人脑动脉瘤标本及作为正常对照的人颅底动脉环标本总RNA、mRNA ,进行线性扩增 ,通过逆转录的方法标记、制成cDNA探针 ,探针与84 6 4点基因表达谱芯片杂交 ,扫描芯片荧光信号图像 ,分析比较差异表达的基因。结果 :在 84 6 4条基因中 ,有 15条细胞信号传导相关基因表达有显著差异 ,其中表达上调 13条 ,表达下调 2条。提示 :差异表达的细胞信号传导相关基因及其参与的病理过程与脑动脉瘤的病理发生有关。     

基因芯片筛选喉鳞状上皮细胞癌相关基因的初步研究

目的:应用基因芯片技术进行喉鳞状上皮细胞癌相关基因表达谱差异分析,筛选喉鳞状上皮细胞癌相关基因.方法:从4例喉鳞状上皮细胞癌中相同患者体内取喉鳞状细胞癌组织和癌旁正常组织,应用含有人类全基因组的基因芯片进行分析.结果:在4例喉鳞状上皮细胞癌中共同基因表达显著差异的有349条,其中112条表达上调,237条表达下调.结论:基因芯片能提供大量喉癌相关基因表达谱的信息,分析这些差异表达的基因能够阐明喉鳞状上皮细胞癌复杂的生物学特性与基因表达之间的内在联系,并识别肿瘤的标记物,为进一步研究喉鳞状上皮细胞癌发生、发展相关基因打下基础.     

常染色体显性遗传多囊肾差异表达基因的研究

目的:应用表达谱芯片研究常染色体显性遗传多囊肾病(ADPKD)与正常肾组织基因表达的差异,探讨此病的致病因素及可能的治疗途径.方法:等量的人正常肾和ADPKD肾组织的mRNA分别用Cy3和Cy5逆转录荧光标记,制作cDNA探针,混合后与4 096点人cDNA表达谱芯片进行杂交,ScanArray4000扫描仪扫描芯片荧光信号图像,数字化处理和分析后比较两种组织基因表达谱的差异.RT-PCR法验证其中4条基因表达水平.结果:在ADPKD肾组织与正常肾组织中存在463条差异表达基因,其中206条基因在多囊肾组织中高表达,特别是细胞周期素D2(cyclin D2)、基质金属蛋白酶1(MMP1)、组织金属蛋白酶抑制因子1(TIMP1)、成纤维细胞活化蛋白基因等;257条基因在多囊肾组织中低表达,特别是蛋白磷酸酶1A、酸性磷酸酶1基因等.RT-PCR法验证的4条基因表达水平与芯片结果相一致.结论: ADPKD病理改变可能与细胞周期蛋白、MMPs以及各种生长因子相关基因的上调有关,钙调素抑制剂和MMPs抑制剂可能会对其有一定的治疗作用.     

糖尿病性心肌病大鼠心肌组织中能量代谢相关基因的表达及其意义

目的：比较正常大鼠和糖尿病心肌病大鼠心肌组织中基因表达的差异，探讨糖尿病性心肌病的发病机制。方法：（1）实验大鼠分为两组（正常对照组和糖尿病心肌病组）；（2）从心肌组织中抽提mRNA，经逆转录分别用Cy3,Cy5荧光标记，获得两组动物来源的cDNA探针；（3）cDNA 探针与基因表达谱芯片杂交，结果经扫描后并用软件进行统计分析。结果：能量代谢相关基因表达水平在糖尿病心肌病组明显下调，结论：能量代谢障碍可能在糖尿病性心肌病发病机制中起重要作用。     

Development of gene microarray in screening differently expressed genes in keloid and normal-control skin

Background Keloid is an intricate lesion that is probably regulated by many genes. In this study, the authors used the technique of complementary DNA (cDNA) microarray to analyse abnormal gene expression in keloids and normal control skins.Methods The polymerase chain reaction (PCR) products of 8400 genes were spotted in an array on chemical-material-coated-glass plates. The DNAs were fixed on the glass plates. The total RNAs were isolated from freshly excised human keloid and normal control skins, and the mRNAs were then purified. The mRNA from both keloid and normal control skins were reversely transcribed to cDNAs,with the incorporation of fluorescent dUTP, for preparing the hybridisation probes. The mixed probes were then hybridised to the cDNA microarray. After thorough washing, the cDNA microarray was scanned for differing fluorescent signals from two types of tissues. Gene expression of tissue growth factor-β1 (TGF-β1) and of c-myc was detected with both RT-PCR and Northern blot hybridisation to confirm the effectiveness of cDNA microarray.Results Among the 8400 human genes, 402 were detected with different expression levels betweenkeloid and normal control skins. Two hundred and fifty genes, including TGF-β1 and c-myc, were upregulated and 152 genes were down-regulated. Higher expressions of TGF-β1 and c-myc in keloidwere also revealed using RT-PCR and Northern blot methods.Conclusion cDNA microarray analysis provides a powerful tool for investigating differential gene expression in keloid and normal control skins. Keloid is a complicated lesion with many genesin volved.