Survivin反义寡核苷酸抑制肝癌移植瘤生长的作用

目的:检测Survivin反义寡核苷酸(ASODN)在人肝癌耐药细胞株裸鼠皮下移植瘤中的表达情况．方法:将30只裸鼠建立人肝癌耐药细胞系 SMMC-7721／ADM皮下移植瘤模型,随机分成6组:空白对照组(A)、脂质体转染对照组 (B)、正义链对照组(C)、200(D)、400(E)和 600 μg/L(F)反义链组(ASODN组),用不同的转染液注射后2,4,8,12,16,20 d,用逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)和Western blot蛋白免疫印迹法检测治疗后各组肿瘤组织中Survivin mRNA和蛋白表达的变化．结果:注射后20 d,ASODN组肿瘤细胞生长明显抑制,空白对照组、脂质体转染对照组和正义链对照组裸鼠的mRNA和蛋白表达无明显差异,而ASODN组mRNA和蛋白表达随着时间和浓度的增加,Survivin表达减弱,E,F组与其余个组(A,B,C,D)相比有显著差异(mRNA: 0．33±0．04,0．28±0．03 vs 0．82±0．02,0．78± 0．05,0．72±0．04,0．57±0．03,P<0．05;蛋白: 34．9±3．89,21．2±3．65 vs 72．14±6．53,69．31 ±5.34,68．29±4．98,53．8±5．23,P<0．05)．结论:Survivin反义寡核苷酸能够下调 Survivin mRNA和蛋白的表达,抑制裸鼠皮下移植瘤的生长．     

乙酰肝素酶反义寡核苷酸对肺癌A-549细胞侵袭力的抑制作用

目的 探讨乙酰肝素酶(heparanase,HPSE )反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对人肺癌A-549细胞侵袭力的抑制作用.方法 设计合成互补于HPSE mRNA起始密码区的HPSE ASODN,以阳离子脂质体Lipofectin包埋后转染人肺癌A-549细胞进行培养,采用流式细胞分析技术和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肺癌A-549细胞HPSE蛋白及其mRNA表达的变化;以Matrigel细胞侵袭试验对HPSE AS-ODN对肺癌A-549细胞侵袭的抑制进行检测.结果 ASODN各组与正常对照组和脂质体组比较及ASODN各组间比较HPSE mRNA和蛋白的表达及细胞侵袭力均受到明显抑制 (P<0.01);ASODN在终浓度为100、200、400 nmol/L时对肺癌A-549细胞侵袭力的抑制率分别为55.6%、82.3%和91.2%.结论 HPSE ASODN通过下调HPSE mRNA和蛋白的表达可显著抑制肺癌A-549细胞的侵袭力,并呈剂量依赖性.     

肝癌组织乙酰肝素酶的表达及其与微血管密度的关系

目的观察乙酰肝素酶（Hpa）在肝癌组织中的表达,并探讨其与微血管密度（MVD）的关系。方法采用RT-PCR法检测47例原发性肝癌组织、癌旁组织1（A组）和癌旁组织2（B组）Hpa mRNA水平;采用免疫组织化学法检测肝癌组织Hpa蛋白和CD34表达水平,并分析Hpa蛋白与肝癌临床病理特征的关系,以及Hpa mRNA水平与MVD值的相关性。结果在不同直径和分化程度、不同临床分期、是否转移复发、AFP水平和有无门脉癌栓等肿瘤组织,Hpa蛋白表达存在明显的差异（P<0.05）;肝癌组织Hpa mRNA水平（0.793±0.184）和MVD值（34.5±12.2）均明显高于A组和B组（P<0.05）,而A组Hpa mRNA水平（0.577±0.145）和MVD值（22.2±10.7）又明显高于B组[（0.384±0.117）和（14.7±7.4）,P<0.05];各组Hpa mRNA水平与MVD值呈正相关（r=0.627,P<0.05）。结论Hpa在肝癌的生长、侵袭和血管生成中发挥着重要作用。     

启膈散及其拆方对人食管癌Eca109细胞裸鼠移植瘤血管生成的抑制作用

目的:探讨启膈散及其拆方抑制肿瘤血管生成的作用和机制.方法:取对数生长期的人食管癌EC9706细胞.接种于裸鼠右胁皮下制备荷瘤裸鼠模型.自接种后第2天开始,每天用40倍成人剂量的启膈散全方及其活血和化痰两个拆方水煎液灌胃给药,连续60 d.用免疫组化方法检测移植瘤中Fac-Ⅷ因子相关抗原标记的微血管密度(MVO)和VEGF的表达,Western blot方法检测肿瘤组织EGFR、PDGFR、VEGF及PLC-γ1蛋白表达.结果:各用药组肿瘤MVD与模型组相比明显降低(36.43±4.16,40.29±2.87 42.43±3.04 vessels/ram2 vs 48.57±7.45 vessels/mm2.P<0.05或0.01).各组肿瘤MVD值与VEGF表达量呈正相关(r=0.712.P=0.0005).各用药组肿瘤EGFR、PDGFR、VEGF、PLC-γ1蛋白表达与模型组相比明显降低.启膈散及其拆方抑制裸鼠移植瘤MVD及EGFR、PDGFR、VEGF、PLC-γ1蛋白表达的作用以全方组最好,活血组次之.结论:启膈散及其拆方能够抑制肿瘤血管生成.其作用机制与抑制EGFR、PDGFR、VEGF及LPLC=γ1蛋白表达相关.     

survivin反义寡核苷酸对胰腺癌荷瘤裸鼠的治疗作用

目的：探讨survivin反义寡核苷酸对胰腺癌荷瘤裸鼠的治疗作用．方法：构建胰腺癌荷瘤裸鼠模型,采用瘤内注射方式,每只注射survivin反义寡核苷酸(ASODN)40g/200L,对裸鼠进行干预治疗．观测裸鼠肿瘤生长情况及瘤体质量、病理形态：应用RT-PCR检测肿瘤的survivin mRNA变化：应用caspase-3试剂盒检测caspase-3活性：免疫组织化学法检测肿瘤增殖指数(PI)和微血管密度(MVD)．结果：治疗20d后,survivin ASODN治疗组的平均体积(427．34±12．44mm~3)明显小于对照组(703．56±12．51mm~3)和正义组(687．59±12．44mm~3)(P＜0．01)；治疗组瘤重(0．57±0．06g)也显著低于对照组(1．16±0．12g)和正义组(1．07±0．10g)(P＜0．01),抑瘤率为50．86％．survivin ASODN治疗组survivin mRNA与对照组和正义组相比降低了约50％：survivin ASODN治疗组肿瘤的caspase-3相对活性明显高于对照组和正义组(0．040±0．018 vs 0．006±0．001,0．007±0．002,P＜0．01)：survivin ASODN治疗组的PI(28．33±2．16)明显低于对照组(35．17±3．71)和正义组(34．33±3．27)(P＜0．01)；sHrvivin ASODN组MVD(15．50±3．08)明显低于对照组(21．33±2．94)和正义组(20．67±2．16)(P＜0．01)；而对照组和正义组PI和MVD均无显著性差异(P＜0．05)．结论：survivin ASODN可显著抑制荷胰腺癌裸鼠的肿瘤生长,其作用机制可能是通过提高caspase-3活性来诱导细胞凋亡,通过抑制肿瘤细胞的增殖和新生血管的形成来发挥抗肿瘤效应．     

过表达转录因子21对肺癌细胞裸鼠成瘤的影响

目的探讨转录因子(TCF)21对肺癌细胞裸鼠成瘤的影响。方法选取人肺癌细胞SPC-A1,细胞转染TCF21过表达载体(过表达组)和空载体(空载体组),设置对照组,对照组中只加入转染试剂,培养48 h,Western印迹检测细胞中TCF21的表达水平。将过表达TCF21的肺癌细胞接种到裸鼠皮下,分别在5、10、15、20 d测量肿瘤的长径和短径,计算肿瘤体积并绘制肿瘤生长曲线。在20 d时,取出肿瘤,称量肿瘤重量,并计算瘤重抑瘤率,同时Western印迹检测肿瘤组织中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3、TCF21表达水平。结果过表达组肺癌细胞中TCF21水平明显高于对照组(P<0.01)。过表达组肿瘤生长与对照组相比明显受到抑制(P<0.01)。空载体组和过表达组的抑瘤率分别为(7.52±0.07)%和(72.24±0.61)%,且过表达组肿瘤重量明显低于对照组(P<0.01)。过表达组肿瘤组织中Cleaved Caspase-3、TCF21表达水平明显高于对照组,而Bcl-2水平明显低于对照组(均P<0.01)。结论 TCF21能够抑制肺癌细胞的裸鼠成瘤能力。     

RNA干扰对肝素酶在肝癌细胞中表达及其肿瘤生长抑制的作用

目的:采用RNA干扰(RNAi)技术抑制肝癌细胞系HepG2肝素酶(Hpa)的表达,体内观察其对肿瘤生长的抑制作用.方法:以脂质体介导的方法将构建的2个抗Hpa短发卡式RNA(Hpa-shRNA)真核表达载体稳定转染人肝癌细胞株HepG2(高表达Hpa),并设空载体对照组;流式细胞技术鉴定转染稳定性,Western blot及RT-PCR检测肝素酶蛋白和mRNA表达;将干扰组和对照组的肿瘤细胞皮下接种裸鼠,比较各组肿瘤的体质量和体积大小,免疫组化法检测肝素酶在肿瘤组织的表达.结果:与空载体组相比,干扰后的HepG2细胞中Hpa mRNA和蛋白表达明显降低,干扰组裸鼠的肿瘤生长速度明显变慢,统计结果表明干扰组在抑制肿瘤生长方面与空载体组、空白对照组存在显著差异(P＜0.05),两干扰组无显著差异(P＞0.05).结论:应用RNAi技术沉默Hpa基因可以有效下调肝癌肿瘤细胞中Hpa mRNA及蛋白的表达,抑制体内肿瘤生长.     

血管内皮细胞生长因子反义寡核苷酸对小鼠Lewis肺癌生长和转移的抑制作用

目的探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)反义寡核苷酸对小鼠Lewis肺癌生长和转移的抑制作用。方法复制小鼠Lewis肺癌模型24只,随机分为对照组、VEGF反义寡核苷酸(ASODN)组、VEGF错义寡核苷酸(MSODN)组,每组8只,接种肿瘤细胞24h内分别给予生理盐水、VEGF-ASODN、VEGF-MSODN皮下注射,隔日一次,共15次。检测皮下移植瘤的变化和肺转移率,并用免疫组织化学的方法检测肿瘤组织微血管密度(MVD),及用Western blot的方法检测肿瘤组织VEGF蛋白表达。结果ASODN组和MSODN组的抑瘤率分别为47.34%和7.28%,具有显著差异(P<0.01);ASODN组肺转移率为37.5%,低于MSODN组(75.0%)和对照组(87.5%);ASODN组MVD为12.29±2.06,低于MSODN组(17.38±3.24)和对照组(20.14±3.90)(P<0.05);且ASODN组VEGF蛋白表达亦明显减弱。结论VEGF-ASODN可抑制小鼠Lewis肺癌的生长和转移,为肺癌的治疗提供新的方法。     

一氧化氮合酶抑制剂对大肠癌裸鼠移植瘤的抗血管生成作用

目的:观察一氧化氮合酶抑制剂N-硝基精氨酸甲酯(L-NAME)对大肠癌细胞的抑制作用,以及对移植瘤内血管生成的影响.方法:建立大肠癌裸鼠移植瘤模型再随机分为生理盐水对照组(n=6,0.2 mL)、L-NAME组(n=6,1.5 mg/kg)、5-FU组(n=6,5 mg/ kg)、L-NAME 5-FU联合组(n=6,L-NAME 1.5 mg/kg,5-FU 5 mg/kg),皆以灌胃方式给药,3次/wk,共2 wk.测量各组肿瘤体积,观察L-NAME的体内抗瘤作用.采用免疫组化方法观察移植瘤的微血管密度(MVD),用Western blot方法检测肿瘤组织VEGF蛋白的表达.结果:L-NAME,5-FU,L-NAME 5-FU组抑瘤率分别为34.1%、46.0%、74.1%,与对照组比较,有显著性差异(P<0.01),联合治疗组与L-NAME,5-FU组比较,差异也有显著性(P<0.01);MVD值对照组为28.9±2.7,L-NAME组为16.2±3.1,与对照组比较,差异有显著性(P<0.05);L-NAME组移植瘤VEGF蛋白的表达(113.14±2.34),与对照组(98.56±1.76)相比,明显减弱(P<0.05).结论:L-NAME具有抑制肿瘤新生血管生成的作用,可抑制大肠癌裸鼠移植瘤的生长;和5-FU联合具有协同抗肿瘤作用.     

雷公藤内酯醇抑制胰腺癌细胞生长及血管生成的实验研究

目的 探讨雷公藤内酯醇(TL)对胰腺癌细胞生长及肿瘤新生血管生成的抑制作用.方法 采用CCK-8试剂盒检测TL对胰腺癌SW1990细胞的生长抑制作用;采用TUNEL法检测TL对细胞凋亡的诱导作用;观察尾静脉注射TL对裸鼠移植瘤生长抑制作用和对瘤组织VEGF表达、微血管密度(MVD)的影响.结果 TL呈浓度和时间依赖性抑制SW1990细胞增殖,160 mg/ml的TL干预SW1990细胞24 h,细胞抑制率达50.6%,细胞凋亡率从对照组的9.6%升高到45.1%(P<0.01);TL0.5 mg/kg体重瘤内注射对移植瘤的抑瘤率达89.9%,瘤组织VEGF表达减少,MVD从36.25±8.64减少到9.87±3.34(P<0.01).结论 TL可显著抑制胰腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡;通过抑制肿瘤新生血管生成可抑制裸鼠SW1990细胞移植瘤的生长.     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.