啤酒酵母HD34-1乙醇脱氢酶活性的研究

菌株HD34-1是将B.sub的乙醇脱氢酶(ADH)基因转入啤酒酵母HD34而构建的无醇啤酒酵母工程菌株,该菌株的ADH基因受Gal启动子的控制,因此为了考察该菌株ADH基因的表达情况,本研究设计了半乳糖和乙醇的浓度梯度进行发酵试验并测定了相应条件下的的ADH活性,结果表明2%的半乳糖浓度,诱导16h最适宜ADH基因的表达。     

超声波法辅助提取啤酒废酵母中乙醇脱氢酶工艺研究

以啤酒酵母为原料,采用超声辅助的方法辅助提取乙醇脱氢酶,实验考察了料液比、超声波功率、超声时间和提取液浓度对乙醇脱氢酶提取效果的影响,进一步通过L9（3^3）正交试验对乙醇脱氢酶的提取工艺进行了优化,得到了最优提取工艺为pH值8．0、超声功率300W、超声时间10min,在此条件下所得的ADH活力可达1806U／mL。     

食醋生产中醋酸菌的乙醇脱氢酶活性研究

本文对醋酸发酵过程中醋酸菌乙醇脱氢酶（ADH）活性与产酸速率，产酸浓度的相关性进行了研究。运用检测发酵过程中ADH活力的变化，可感知菌体的发酵能力。     

拐枣水浸提液对嗜酒大白鼠体重增加和血液中乙醇、丙二醛含量及乙醇脱氢酶活性的影响

设计正常饲养、低剂量、高剂量和模型对照4个试验组,研究拐枣水浸提液对嗜酒30d的大白鼠体重增加,血液中乙醇含量、丙二醛(MDA)含量及乙醇脱氢酶(ADH)活性的影响.结果表明:在体重增加方面,高剂量和低剂量试验组比模型对照组非常显著性升高(P＜0.01);在血液中丙二醛(MDA)含量和乙醇脱氢酶(ADH)活性方面,与模型对照组相比,高剂量试验组大白鼠血液中的丙二醛(MDA)含量非常显著差性降低(P＜0.01),而乙醇脱氢酶(ADH)活性非常显著性升高(P＜0.01);在血液中乙醇浓度方面,两个拐枣提取液试验组中大白鼠血液的乙醇含量均低于模型对照组.试验结论:拐枣水浸提液对大白鼠的长期嗜酒产生的功能损伤具有一定保护作用.     

酿酒酵母产乙醇脱氢酶发酵条件的研究

选择了一株酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)As2.399,通过单因素和正交实验得到酿酒酵母产乙醇脱氢酶(Alcohol Dehydrogenase,ADH)的最优发酵条件。结果表明:产ADH的最优培养条件是温度为25℃、pH为5、通气量为250mL、接种量为7%,液体发酵培养中pH对ADH活性的影响最大。      

不同代数啤酒酵母对胞内代谢关键酶活性的影响

对不同代数啤酒酵母在丙酮酸激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、异柠檬酸脱氢酶、乙醇脱氢酶的酶活性特征方面的差异进行了比较分析,发现酵母在不断传代过程中,胞内代谢关键酶的活性均呈现一定变化,而丙酮酸激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶和乙醇脱氢酶变化最为明显,并且与酵母活力有着紧密的联系,当3种酶活性高时,酵母活力旺盛,代谢物质的量较为协调.     

明胶载体固定化乙醇脱氢酶技术研究

以明胶为载体,戊二醛为交联剂,采用包埋-交联联用法制备了明胶固定化乙醇脱氢酶。结果表明:以15%明胶为载体、4%戊二醛为交联剂、1g明胶固定1mL乙醇脱氢酶制备的固定化酶,其酶活力回收率达52.47%,所得固定化乙醇脱氢酶连续使用10次后相对活力为52.89%。     

利用基因敲除技术破坏酿酒酵母乙醇脱氢酶Ⅱ基因的初步研究

文中采用醋酸锂转化法，将一段目的基因转入到酵母体内，破坏酵母乙醇脱氢酶Ⅱ基因的表达。通过对目的基因的扩增和乙醇脱氢酶Ⅱ酶活检测验证基因敲除情况，并通过传代抗性试验验证突变株遗传稳定性良好。     

乙醇胁迫对啤酒酵母生长及蛋白表达的影响

研究了乙醇胁迫对啤酒酵母生长的影响,应用光镊拉曼光谱(LTRS)技术获得并分析酵母单细胞拉曼光谱,从分子水平分析酿酒酵母细胞内的蛋白质组变化。结果表明乙醇可抑制酵母生长,随着乙醇浓度的提高,酵母细胞直径变小、稳定期推迟、生物量和蛋白质含量也呈减少趋势;通过光镊拉曼光谱分析可了解酵母细胞内的乙醇浓度和生化组成的相对含量等信息;在不同乙醇浓度下,采用SDS变性凝胶电泳(SDS-PAGE)共检测到22个明显的差异条带,并对其中7个差异条带进行质谱鉴定,发现这7个差异蛋白的功能主要与端粒稳定性、细胞自溶及代谢相关;不同乙醇浓度可诱导酵母特定蛋白质表达发生变化,如HSP104等蛋白质,说明这些蛋白质所参与的代谢途径在啤酒酵母乙醇耐性中具有普遍作用。     

嗜热厌氧乙醇杆菌组氨酸融合双活性乙醇脱氢酶的克隆、表达和酶学性质

乙醛脱氢酶和乙醇脱氢酶是嗜热厌氧乙醇菌Thermoanaerobacter ethanolicus乙醇代谢途径中的关键酶。根据高同源性的NADP(H)依赖型Ⅱ型乙醇脱氢酶(S-ADH)的序列设计引物,从T.ethanolicusJW200基因组中PCR扩增出编码S-ADH的基因,插入带组氨酸标签的pET-20(b),测序获得基因大小为1 059 bp,并在大肠杆菌JM109(DE3)中表达。表达产物经Ni亲和柱提纯达电泳纯。带组氨酸标签的重组NADP(H)依赖型乙醇脱氢酶具乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶双活性,能将乙酰辅酶A转化成乙醇.带组氨酸标签的重组酶酶学性质为乙醛脱氢酶活性最适值为pH 8.4,最适温度70℃;乙醇脱氢酶活性正、逆反应分别最适pH 8.0,最适T 55℃;最适pH8.9,最适为T 60℃。以乙酰辅酶A(Aceyl-CoA)为底物,该酶的Km为3.32 mmol/L,Vmax为12.5μmol/(min.mg)。T.ethanolicusJW200中双活性S-ADH的首次发现,建立了该菌乙醇代谢途径中从乙酰辅酶A到的乙醇的另一条通路。     

醋酸杆菌产乙醇脱氢酶发酵条件的研究

选择一株醋酸杆茵Acetobacter sp.CCTCC M209061,通过单因素和正交实验确定醋酸杆菌产乙醇脱氢酶(Alcohol Dehydrogenase,ADH)的最优发酵条件.结果表明,产ADH的最优培养条件为温度30℃、pH值6.0、通气量为100 mL/250 mL、接种量为8%,在此条件下发酵培养24 h,发酵液酶活可达0.340 U/mL.     

荸荠提取物对乙醇脱氢酶活性的影响

探讨荸荠提取物对乙醇脱氢酶(ADH)活性的影响及其对小鼠急性酒精中毒的改善作用。以乙醇脱氢酶为作用靶点,采用瓦勒-霍赫法(ValleHoch)检测不同荸荠提取物对乙醇脱氢酶活性的影响。将雄性昆明小鼠随机分成5组,检测小鼠酒后不同时间点血液和肝脏中乙醇脱氢酶活性变化。同时利用气相色谱(GC-FID)测定不同时间点小鼠血清中乙醇浓度。结果表明,荸荠水提物对乙醇脱氢酶活性有显著激活作用,当浓度为0.5 g/m L时,对乙醇脱氢酶的激活率为45.2%。而荸荠醇提物对乙醇脱氢酶有显著抑制作用。通过口灌给予不同浓度荸荠水提取物后,小鼠血清中ADH活性在灌胃后0.5 h~1.5 h内达到高峰,小鼠酒后肝脏中ADH活性在0.5 h~2.5 h内达到峰值,与模型组趋势一致。模型组和荸荠水提物灌胃组小鼠血液中乙醇浓度均在乙醇灌胃后0.5 h达到峰值,但模型组小鼠血液中乙醇峰浓度较荸荠提取物灌胃组高。在0.5 h~12 h内,模型组和水提取物组小鼠血液中乙醇浓度均呈下降趋势。乙醇在模型组和水提物灌胃组小鼠体内消除半衰期分别为7.41、5.63、3.02、2.56 h,表明水提物灌胃能明显增强小鼠体内乙醇的消除能力。结论:荸荠水提取物对ADH具有显著激活作用,同时显著增强小鼠血液和肝脏中ADH活性。     

壳聚糖—硅胶复合载体固定化乙醇脱氢酶技术研究

为提高乙醇脱氢酶使用率,以涂敷壳聚糖的硅胶为载体、戊二醛作为交联剂,采用吸附法与交联法相结合方法对乙醇脱氢酶进行固定化,并以酶活力、相对酶活、活力回收率为指标;结果表明:以制备复合硅胶为载体,选择1%戊二醛为交联剂,载体与酶以1∶1(w/v)比例振荡交联2 h,酶活力回收率可达75%,重复使用10次后,酶活力仍可保留28%以上。     

酿酒酵母乙醇脱氢酶Ⅱ基因反义干扰及对乙醇发酵的影响

通过构建酿酒酵母沉默表达载体PURH-ADH2,使ADH2基因在PGK强启动子、CYC1终止子在特定区域内进行干扰和表达。采用Bam HI和Xmal I限制性内切酶对SADH2基因和PURH质粒进行双酶切,构建反义重组表达质粒PURH-SADH2,通过高效酵母转化法和电转法将重组质粒组件转化至酿酒酵母SY01细胞中,获得阳性克隆菌株JY01。酿酒酵母JY01突变菌株与出发菌株SY01和Y01发酵试验结果相比,JY01甘油脱氢酶酶活比出发菌株Y01与SY01分别下降了16.31%和13.5%;当酿酒酵母Y01、SY01和JY01菌株发酵36~60 h时,JY01菌株甘油含量相比Y01分别下降了16.34%、14.25%、14.89%;当酿酒酵母突变菌株发酵48 h时,Y01、SY01和JY01的乙醇浓度分别为6.243 g/100 m L、7.145 g/100 m L和7.288 g/100 m L,酿酒酵母JY01发酵液乙醇量比比原始菌株Y01乙醇含量提高了14.33%。结果表明通过反义干扰ADH2基因5’UTR序列,能有效干扰酵母工程菌株ADH2转录与表达,削弱甘油积累途径,促进乙醇代谢途径。     

啤酒酵母免疫活性β-葡聚糖的研究

论述了β-葡聚糖的结构、生物活性以及在食品、化妆品和饲料工业的应用,并对产品进行市场预测和展望。      

啤酒酵母免疫活性β-葡聚糖的研究

论述了β-葡聚糖的结构、生物活性以及在食品、化妆品和饲料工业的应用,并对产品进行市场预测和展望.     

醋酸菌产乙醇脱氢酶发酵条件的研究

该研究对醋酸菌（Acetobacter pomorum）产乙醇脱氢酶（ADH）的发酵培养基的碳源和氮源进行了优化。采用单因素试验和响应面试验考察发酵温度、发酵时间、起始pH及接种量对乙醇脱氢酶比酶活的影响。在单因素试验的基础上,采用响应面试验进行发酵条件优化。结果表明,最佳发酵培养基配方为葡萄糖0.8%,酵母浸膏粉1.2%;最佳发酵工艺为发酵温度35 ℃、发酵时间72 h、起始pH 6.0、接种量6%。在此工艺条件下,ADH的比酶活为7 284 U/mg,与预测值（7 320 U/mg）的相对误差为0.49%。     

脂肪酶催化拆分1-(4-甲氧基苯基)乙醇的研究

研究筛选了多种脂肪酶对1-(4-甲氧基苯基)乙醇对映体进行酶法催化拆分,表明来自洋葱假单胞茵脂肪酶(PS IM)在催化拆分中表现出了最高的活力和立体选择性,一种来自小麦胚芽的脂肪酶(WGL)在催化的过程中表现出了与其它脂肪酶相反的选择性.研究了有机溶剂体系中温度和水活度对PS IM催化拆分效果的影响,表明35C是最佳温度,水活度0.69为最佳水活度,在此条件下,转化率和对映体选择性分别达到很好的效果(C 50%,eep99%,ees99%).     

米根霉乙醇脱氢酶粗酶液的特性研究

米根霉细胞中乙醇脱氢酶(ADH)催化丙酮酸向乙醇支路的转化,导致丙酮酸向乳酸转化通量减少,降低了乳酸转化率。本文初步从米根霉菌丝体中提取制备ADH粗酶液,并研究其酶学特性,结果表明,ADH粗酶液体系反应的最适温度为25℃,温度高于30℃将降低ADH活力。ADH催化体系pH值对其活力有很大影响,最适pH值在7.5左右,高于或低于此值,反应速度均很快下降。在反应体系中添加0.1μmol的EDTA、Mg2+、Ca2+或Zn2+,对该酶都有一定的抑制作用。ADH以乙醛为底物的米氏常数Km为6.90×10-4mol/L。     

啤酒酵母中β-(1→3)-D葡聚糖的研究

叙述了啤酒酵母中碱不溶性β-(1→3)-D葡聚糖的结构特点和生物活性,对β-(→3)-D葡聚糖的提取工艺以及衍生化方法进行比较,并论述了β-(1→3)-D葡聚糖在水产养殖中的应用前景。