肾消通络方对自发性糖尿病db/db小鼠肾脏炎性损伤及MCP-1、TNF-α水平的影响

目的探讨肾消通络方对自发性糖尿病db/db小鼠肾脏炎性损伤及MCP-1、TNF-α水平的影响。方法将24只db/db小鼠和同背景的8只正常db/m小鼠随机分为西药组(db/db)、模型组(db/db)、中药组(db/db)、正常组(db/m),每组8只,中药组灌胃给予26.8 g/kg肾消通络方,西药组灌胃给予0.3 g/kg吗替麦考酚酯,模型组、正常组灌胃给予同体积1%羧甲基纤维素钠溶液,每天1次,连续8周。ELISA检测血清MCP-1、TNF-α水平,Western blot检测肾脏TLR4通路蛋白TLR4、MyD88、NF-κB p65和炎性因子MCP-1、TNF-α水平。结果与正常组比较,模型组小鼠肾脏和血清MCP-1、TNF-α水平升高(P<0.01),肾脏TLR4通路蛋白表达增加(P<0.01);与模型组比较,中药组、西药组小鼠肾脏和血清MCP-1、TNF-α水平降低(P<0.01),肾脏TLR4通路蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论肾消通络方能下调小鼠肾脏炎性因子MCP-1、TNF-α水平,减轻肾脏炎性损伤,可能与抑制炎症通路TLR4/NF-κB p65的信号转导有关。     

肾消通络方对糖尿病db/db小鼠肾脏TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的:观察肾消通络方对自发性2型糖尿病动物模型db/db小鼠肾脏TLR4/NF-κB信号通路的影响,探讨肾消通络方对db/db小鼠肾脏的保护作用和机制。方法:将24只SPF级8周龄的雄性db/db小鼠随机分为中药组、西药组、模型组,每组8只;另取8只同遗传背景野生型正常db/m小鼠为正常组,连续治疗8周。于治疗前与治疗后每隔2周检测空腹血糖,每隔4周收集24h尿液,用于检测24h尿微量白蛋白水平。给药8周后处死小鼠,摘眼球取血,用于检测血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)水平;分离肾脏,放入4%多聚甲醛中固定,用于后续病理检测。HE和PAS染色观察肾组织病理改变;免疫组织化学法检测肾组织中Toll样受体4(TLR4)、核转录因子-κBp65(NF-κB p65)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠空腹血糖、Scr、BUN、24h尿微量白蛋白显著升高(P<0.01);肾组织结构排列紊乱,肾小球肥大,基底膜增厚,系膜细胞增生、毛细血管管腔变窄;肾组织TLR4、NF-κB p65、MCP-1蛋白表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,中药组和西药组血清Scr、BUN、24h尿微量白蛋白均显著降低(P<0.01);肾脏病理改变减轻;TLR4、NF-κB p65、MCP-1蛋白表达显著减弱(P<0.01)。结论:肾消通络方能够抑制db/db小鼠肾脏炎症因子的表达从而减轻肾脏损害,其机制可能与下调TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白表达有关。     

益气活血通络方对db/db小鼠胰腺组织JNK信号通路及IL-1β、TNF-α表达的影响

目的:观察益气活血通络方对db/db小鼠胰腺组织c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路及炎症因子表达的影响,探讨益气活血通络方对胰岛细胞炎性损伤的保护作用及其机制。方法:用自发性2型糖尿病C57BL/Ks J-db/db小鼠为动物模型,将db/db小鼠随机分成模型组、硫辛酸组(0.078g/kg)、益气活血通络方6.4、3.2、1.6g/kg剂量组,另取10只db/m小鼠为正常对照组,连续灌胃给药8周,模型组给予生理盐水。药前、药后4周和8周测定小鼠血糖。实验结束后,摘取胰腺组织,HE染色法观察病理变化,ELISA法检测小鼠胰腺组织胰岛素含量,Western bloting与免疫组织化学法检测IL-1β、TNF-α、JNK、p-JNK蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组胰岛细胞出现严重的病理性损伤,药后4周和8周血糖、胰腺组织中IL-1β、TNF-α、P-JNK蛋白的表达水平明显高于正常组;与模型组比较,益气活血通络方组胰岛细胞病理损伤程度减轻,血糖降低,胰腺组织胰岛素含量升高,胰腺组织IL-1β、TNF-α、P-JNK蛋白表达水平显著下降。结论:益气活血通络方能够减轻db/db小鼠胰岛细胞损伤,可能与降低炎症因子表达,抑制JNK信号通路过度激活有关。     

益气活血通络方通过调控NF-κB信号通路保护db/db小鼠坐骨神经作用机制研究

目的从NF-κB介导的信号通路角度探讨益气活血通络方对糖尿病坐骨神经损伤的保护作用机制。方法将7周龄db/db小鼠40只随机分为模型组、硫辛酸组(0.078g/kg)和益气活血通络方高、中、低剂量组(6.4、3.2、1.6g/kg),另设db/m正常组,每组8只。适应性饲养1周后,灌胃给药,每天1次,连续8周,并监测小鼠空腹血糖(FBG)变化。末次给药结束后,测定运动神经传导速度(MNCV)和足底热敏反应时间;取坐骨神经,观察超微组织结构改变,Western Blot法检测NF-κBp65、IKKβ、IκB-α、IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达。结果正常组小鼠坐骨神经组织结构正常,模型组小鼠坐骨神经损伤明显,髓鞘板层分离、排列紊乱,益气活血通络方各组和硫辛酸组小鼠坐骨神经组织结构损伤明显减轻。与正常组比较,模型组小鼠FBG升高,MNCV减慢,足底热敏反应时间延长,坐骨神经组织NF-κBp65、IKKβ、IκB-α、IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达均升高(P0.01)。与模型组比较,益气活血通络方各组和硫辛酸组小鼠FBG降低,MNCV增快,足底热敏反应时间缩短,坐骨神经组织NF-κBp65、IKKβ、IκB-α、IL-1β、IL-6、TNF-α的蛋白表达水平下降(P0.01,P0.05)。益气活血通络方降低FBG,增快MNCV,缩短足底热敏反应时间,下降坐骨神经组织NF-κBp65、IKKβ、IκB-α、IL-1β蛋白表达水平的作用效应与用药剂量具有相关性(r值分别为0.477、0.567、0.695、0.868、0.998、0.999、0.967;P0.01,P0.05)。结论益气活血通络方可通过抑制NF-κB信号通路的激活,减少炎性细胞因子的生成,减轻db/db小鼠坐骨神经的损伤。     

桑叶水提物对db/db糖尿病小鼠肾脏的保护作用及其机制

目的 观察桑叶水提物（MLE）对db/db糖尿病小鼠肾脏的保护作用,并探讨其机制。方法 24只雄性C57BLKS/JGpt-Leprdb/Leprdb（db/db）小鼠按空腹血糖（FBG）值随机分为模型组、二甲双胍组、桑叶水提物低剂量（MLE-L）组和桑叶水提物高剂量（MLE-H）组,每组6只;另设6只C57BLKS/JGpt同窝野生型（m/m）小鼠作为正常组。各给药组小鼠灌胃相应药物,正常组和模型组小鼠均给予等体积去离子水,每日灌胃1次,连续给药8周。测定小鼠体质量、双侧肾脏绝对重量、FBG,并进行口服葡萄糖耐量实验（OGTT）,苏木素-伊红染色、过碘酸雪夫染色观察肾脏组织病理变化,检测血清肌酐（SCr）、血清尿素氮（BUN）含量,酶联免疫吸附测定法检测血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）和尿微量白蛋白（U-mAlb）含量,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肾组织Toll样受体4（TLR4）、髓样分化因子88（MyD88）、核转录因子-κB p65（NF-κB p65）蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组小鼠体质量、肾脏绝对重量、FBG、OGTT曲线下面积（AUC）显著升高（P<0.01）,SCr、BUN、U-mAlb含量显著升高（P<0.01）,血清TNF-α、IL-6含量显著升高（P<0.01）,肾组织出现肾小球基底膜增厚,炎性细胞浸润明显,肾组织TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较,各给药组小鼠体质量差异无统计学意义;MLE-H组、二甲双胍组小鼠肾脏绝对重量明显降低（P<0.05,P<0.01）;第4~8周二甲双胍组、MLE-L组、MLE-H组FBG明显降低（P<0.05,P<0.01）;MLE-H组、二甲双胍组小鼠AUC显著降低（P<0.01）,MLE-L组小鼠AUC呈下降趋势,差异无统计学意义;MLE-H组、二甲双胍组小鼠SCr、BUN、U-mAlb含量显著降低（P<0.01）,MLE-L组小鼠SCr、U-mAlb含量显著降低（P<0.01）;MLE-H组、二甲双胍组小鼠血清TNF-α、IL-6含量显著降低（P<0.01）;各给药组小鼠肾组织病变均得到不同程度改善;MLE-H组小鼠肾组织TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）。结论 桑叶水提物可改善db/db糖尿病小鼠肾组织结构和功能,其机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。     

虎杖苷对糖尿病肾病小鼠AMPKα1/TLR4信号通路的影响

目的观察虎杖苷（PD）对糖尿病肾病（DN）模型小鼠腺苷酸活化蛋白激酶α1/Toll样受体4（AMPKα1/TLR4）信号通路的影响。方法采用SPF级雄性KK-Ay小鼠，经高脂饲料诱导3周建立DN模型，将30只模型成功KK-Ay小鼠随机分为模型组，阳性药组，PD高、中、低剂量组，每组6只，将6只雄性 C57BL/6J小鼠设为正常组。正常组及模型组予去离子水10 mL/（kg·d），阳性药组予缬沙坦13.33 mg/（kg·d），PD各组分别予PD 13.33、6.67、3.33 mg/（kg·d）剂量灌胃。各组小鼠每日灌胃1次，连续干预治疗12周后留取血清及肾组织标本。以RT-PCR技术检测肾组织AMPKα1、TLR4、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、IL-18 mRNA转录水平；Western Blot技术、免疫组化技术检测肾组织AMPKα1蛋白表达水平；ELISA技术检测血清MCP-1、IL-18蛋白表达水平。结果与正常组比较，模型组小鼠AMPKα1 mRNA转录及蛋白表达水平上调（P<0.01），TLR4 mRNA转录上调（P<0.01），IL-18、MCP-1 mRNA转录及蛋白表达水平下调（P<0.01）。与模型组比较，各治疗组AMPKα1 mRNA转录及蛋白表达水平上调（P<0.01， P<0.05），各治疗组TLR4、IL-18 mRNA转录下调（P<0.01），阳性药及PD高剂量组IL-18蛋白表达水平下调（P<0.01， P<0.05），各治疗组MCP-1 mRNA转录及蛋白表达水平均下调 （P<0.01）。与PD高剂量组比较，PD中剂量组IL-18 mRNA转录水平上调（P<0.01），PD低剂量组IL-18、MCP-1 mRNA转录表达水平上调（P<0.01），PD中剂量组AMPKα1蛋白表达下调（P<0.05），PD低剂量组AMPKα1、IL-18蛋白表达下调（P<0.01， P<0.05）。与PD中剂量组比较，PD低剂量组IL-18、MCP-1 mRNA转录水平上调（P<0.05， P<0.01），PD低剂量组AMPKα1蛋白表达下调（P<0.01）。结论PD下调IL-18、MCP-1等促炎因子过表达，减轻DN免疫炎性损伤，可能与调节AMPKα1/TLR4信号通路相关。     

马黛通络饮对小鼠动脉粥样硬化血管内皮损伤的保护作用

目的:研究马黛通络饮对动脉粥样硬化(AS)小鼠模型血管内皮损伤的保护作用机制。方法:选取5周龄雄性AopE-/-鼠48只,随机分为模型组、辛伐他汀组和马黛通络饮高、低剂量组,相同遗传背景C57BL/6J雄性小鼠为正常对照组,共5组,每组12只。除正常对照组外,其余各组给予高脂饲料喂养4周造模,马黛通络饮高、低剂量组每天给予马黛通络饮煎剂20 g/(kg·d)、10 g/(kg·d)灌胃,辛伐他汀组每天给予辛伐他汀稀释液0.01 g/(kg·d)灌胃,正常对照组和模型组灌胃等体积的生理盐水。连续灌胃8周后,采用ELISA法检测各组小鼠主动脉组织中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、内皮源型一氧化氮合酶(eNOS)水平,Western blot法检测核转录因子-κB(NF-κB)的水平。结果:与正常对照组比较,模型组、辛伐他汀组、马黛通络饮低剂量组、马黛通络饮高剂量组小鼠主动脉组织中的TNF-α、IL-6、ICAM-1、VCAM-1、MCP-1、NF-κB水平显著升高,eNOS显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,辛伐他汀组、马黛通络饮低剂量组、马黛通络饮高剂量组小鼠主动脉组织中的TNF-α、IL-6、ICAM-1、VCAM-1、MCP-1、NF-κB显著降低,eNOS显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:马黛通络饮通过抑制NF-κB信号通路的活性,降低Apo E基因敲除小鼠主动脉内TNF-α、IL-6、ICAM-1、VCAM-1、MCP-1等炎性因子、黏附分子、趋化因子水平,增加了eNOS的表达,达到抑制炎症浸润、保护血管内皮的作用。     

糖肾方改善db/db小鼠脂代谢紊乱与巨噬细胞活化分型的实验研究

肥胖、脂代谢紊乱及其相关代谢疾病,包括非酒精性脂肪肝(NAFLD)是公认的重要危险因素,患病人数逐年增加,已成为严重危害人类健康的慢性疾病之一。该研究主要探究糖肾方对C57BLKS/J db/db(db/db)小鼠脂代谢紊乱与巨噬细胞活化分型的作用及机制。8周龄雄性自发性糖尿病肥胖db/db小鼠与同源不发病db/m小鼠,随机分为正常对照组(db/m)、模型组(db/db)、糖肾方给药组(db/db+TSF),连续喂养12周后处死动物,留取组织标本备用。油红O染色检测肝脏脂滴沉积,免疫组织化学法检测肝脏巨噬细胞活化分型标记物CD68,F4/80的表达变化;荧光定量PCR法检测白色脂肪组织巨噬细胞活化标记物Mrc1,Arg1,TNF-α等m RNA表达。研究发现与正常对照组相比,模型组小鼠肝组织脂质沉积增多,TSF干预后脂质沉积显著减少;db/db小鼠肝脏组织CD68和F4/80的表达增加,TSF干预后可显著抑制其表达水平;此外,与正常对照组相比,db/db小鼠白色脂肪组织巨噬细胞活化标记物Mrc1,Arg1和TNF-αm RNA表达增加,TSF干预后TNF-α显著下降,但Mrc1,Arg1无显著差异。结果表明中药糖肾方可减轻db/db小鼠肝脏脂肪变,改善血脂异常,其机制可能与其调节巨噬细胞活化有关。     

糖肾方对db/db小鼠肾脏纤维化的保护作用

目的:观察糖肾方(Tang Shen Fang,TSF)对于自发性2型糖尿病肾病db/db小鼠肾脏纤维化的保护作用。方法:8周龄雄性db/db小鼠随机分为2组,分别为模型组(db/db)和观察组(db/db+TSF),每组9只;8周龄雄性db/m小鼠为正常对照组(db/m),顺应性喂养2周后,给予糖肾方干预12周,处死小鼠,分离小鼠肾脏用于后续检测。利用PAS和Masson染色观察肾脏病理;利用Western Blotting、Real-time PCR和免疫组化等技术检测肾脏组织纤维化TGF-β1/Smad3通路以及miRNA21和miRNA29b的表达。结果:糖肾方可以改善db/db小鼠尿微量白蛋白水平,减轻小鼠肾脏损伤;Western Blotting、Real-time PCR和免疫组化结果显示,糖肾方可下调db/db小鼠肾脏中纤维化标志分子TGF-β1、Smad3、CollagenⅠ和Fibronectin的表达;下调db/db小鼠肾脏miRNA 21的表达,上调miRNA 29b的表达。结论:糖肾方可作用于TGF-β1/Smad3信号通路抑制肾脏纤维化。     

糖宁通络胶囊对db/db小鼠高血糖症以及视网膜肾脏病变的疗效研究

目的：探索糖宁通络胶囊对2型糖尿病动物模型db/db小鼠高血糖症以及视网膜肾脏病变的影响。方法：将8周龄db/db小鼠分为5组,分别为模型组,二甲双胍组（0.14 g·kg-1）,糖宁通络胶囊高剂量组（1.8 g·kg-1）,糖宁通络胶囊中剂量组（0.9 g·kg-1）和糖宁通络胶囊低剂量组（0.45 g·kg-1）,以同窝野生型小鼠为正常对照组。每天灌胃给药1次,连续20周。检测空腹血糖和葡萄糖耐量,并检测血清糖化血红蛋白水平,观察糖宁通络胶囊对db/db小鼠高血糖症的影响;采用4Doct荧光血管造影仪器检测视网膜微血管瘤,观察糖宁通络胶囊对db/db小鼠视网膜病变的影响;使用试剂盒检测尿蛋白水平、BUN和CRE,观察糖宁通络胶囊对db/db小鼠肾脏功能病变的影响。结果：糖宁通络胶囊显著降低db/db小鼠空腹血糖和糖化血红蛋白水平,显著增加葡萄糖耐量,明显减少微血管瘤数量,并显著减少尿蛋白、BUN和CRE水平。结论：糖宁通络胶囊具有显著的降血糖作用以及对糖尿病视网膜和肾脏并发症的预防作用。     

补肾活血方对帕金森病模型小鼠TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的探讨补肾活血方对帕金森病(PD)模型小鼠神经炎症的抑制效应及其机制。方法将36只雄性C57/BL小鼠随机分为3组(正常组、模型组、中药组),每组12只。模型组和中药组小鼠采用腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)法建立PD模型,造模成功后中药组予补肾活血方灌胃治疗14天(0.3 mL/d),同时正常组和模型组予等量生理盐水灌胃。选择爬杆试验和Morris水迷宫试验评估小鼠行为学变化。采用Western Blot法检测各组小鼠黑质致密部Toll样受体4(TLR4)、NF-κB p65、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和Caspase-3蛋白表达,并用免疫组化法测定各组小鼠脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)的阳性表达水平。结果与正常组比较,模型组小鼠在爬杆实验中转向时间和爬下时间均增加(均P<0.01),在水迷宫实验中逃避潜伏期延长(P<0.01),穿越平台次数减少(P<0.01);与模型组比较,中药组小鼠爬下时间减少(P<0.01),逃避潜伏期缩短(P<0.01),穿越平台次数增加(P<0.01)。与正常组比较,模型组小鼠TH阳性神经元数目减少(P<0.01),信号通路蛋白TLR4、NF-κB p65、炎症因子IL-6、TNF-α及凋亡蛋白Caspase-3的表达水平均升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,中药组小鼠TH阳性神经元数目增加(P<0.05),TLR4、NF-κB p65、IL-6、TNF-α及Caspase-3的表达均下调(P<0.05)。结论补肾活血方能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,进而降低炎性因子和Caspase-3蛋白表达,减轻炎症反应,抑制细胞凋亡,减少DA能神经元损伤。补肾活血方对PD模型小鼠具有神经保护作用,并能够改善PD小鼠运动协调及学习记忆能力。     

三七皂苷Fc对糖尿病db/db小鼠肾组织α-dystroglycan表达的影响

目的:研究三七皂苷Fc对2型糖尿病db/db小鼠肾脏足细胞的保护作用及机制。方法:8周龄雄性db/db及其同窝对照db/m小鼠分为db/m对照组,db/db模型组及db/db模型+三七皂苷Fc治疗组,每组5只。三七皂苷Fc组给予三七皂苷Fc 5 mg/(kg·d)橄榄油溶液灌胃,db/m对照组,db/db模型组给予等量橄榄油灌胃,连续8周。分别采用HE染色法(Hematoxylin-Eosin staining)和PAS染色法(Periodic Acid-Schiff staining)检测肾脏病理损伤;采用透射电镜观察小鼠肾组织足细胞超微结构。免疫组织化学方法检测肾组织足细胞黏附分子α-dystroglycan表达。结果:与db/db模型组比较,三七皂苷Fc组可明显改善肾脏病理损伤及足细胞足突融合。此外,三七皂苷Fc还可明显上调db/db小鼠肾组织α-dystroglycan表达。结论:三七皂苷Fc可上调2型糖尿病db/db小鼠肾组织α-dystroglycan表达,改善足细胞损伤,从而降低尿蛋白,延缓DN进展。     

消瘀泄浊饮介导PI3K/Akt/mTOR信号通路改善糖尿病肾病小鼠肾纤维化

目的:探讨消瘀泄浊饮对糖尿病肾病(DN)小鼠肾纤维化的影响。方法:60只糖尿病模型(db/db)小鼠制备DN模型,设阳性对照组[16mg/(kg·d)厄贝沙坦],消瘀泄浊饮低、中、高剂量组(XXD-L、XXD-M、XXDH)[7.5、15、30g/(kg·d)],DN组(等体积生理盐水),12只db/m小鼠设为正常组(等体积生理盐水),连续灌胃给药8周。检测空腹血糖浓度、尿肌酐(Ucr)、血尿素氮(BUN)、肾脏指数、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)水平。HE、Masson染色观察小鼠肾脏病理变化及纤维化程度。Western Blot检测肾组织PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达水平。结果:与正常组比较,DN组空腹血糖、BUN、MDA水平、肾脏指数显著升高(P<0.01),Ucr水平、SOD活性显著降低(P<0.01)。与DN组比较,阳性对照组与消瘀泄浊饮组可不同程度降低空腹血糖、BUN、MDA水平、肾脏指数(P<0.05或P<0.01),升高Ucr水平、SOD活性(P<0.05或P<0.01)。HE、Masson染色结果显示给药组可减小肾小球体积,减轻纤维组织增生症状,改善程度从高到低依次为阳性对照组、XXD-H组、XXD-M组。Western bolt检测结果显示消瘀泄浊饮可下调p-Akt、p-mTOR、p-PI3K、转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达水平,高剂量消瘀泄浊饮作用最显著。结论:消瘀泄浊饮可有效改善DN小鼠肾纤维化,其可能是通过下调TGF-β1蛋白表达水平、抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路发挥抗肾纤维化作用。     

马黛通络饮对动脉粥样硬化小鼠血管内皮损伤的保护作用

目的:研究马黛通络饮对动脉粥样硬化(AS)小鼠模型血管内皮损伤的保护作用机制。方法:选取5周龄雄性AopE-/-鼠48只,随机分为模型组、辛伐他汀组和马黛通络饮高、低剂量组,相同遗传背景C57BL/6J雄性小鼠为正常对照组,共5组,每组12只。除正常对照组外,其余各组给予高脂饲料喂养4周造模,马黛通络饮高、低剂量组每天给予马黛通络饮煎剂20 g/(kg·d)、10 g/(kg·d)灌胃,辛伐他汀组每天给予辛伐他汀稀释液0.01 g/(kg·d)灌胃,正常对照组和模型组灌胃等体积的生理盐水。连续灌胃8周后,采用ELISA法检测各组小鼠主动脉组织中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、内皮源型一氧化氮合酶(eNOS)水平,Western blot法检测核转录因子-κB(NF-κB)的水平。结果:与正常对照组比较,模型组、辛伐他汀组、马黛通络饮低剂量组、马黛通络饮高剂量组小鼠主动脉组织中的TNF-α、IL-6、ICAM-1、VCAM-1、MCP-1、NF-κB水平显著升高,eNOS显著降低,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。与模型组比较,辛伐他汀组、马黛通络饮低剂量组、马黛通络饮高剂量组小鼠主动脉组织中的TNF-α、IL-6、ICAM-1、VCAM-1、MCP-1、NF-κB显著降低,eNOS显著升高,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:马黛通络饮通过抑制NF-κB信号通路的活性,降低Apo E基因敲除小鼠主动脉内TNF-α、IL-6、ICAM-1、VCAM-1、MCP-1等炎性因子、黏附分子、趋化因子水平,增加了eNOS的表达,达到抑制炎症浸润、保护血管内皮的作用。     

红芪多糖对db/db小鼠肾组织血管内皮生长因子、色素上皮细胞衍生因子表达的影响

目的探讨红芪多糖(HPS)对糖尿病肾病(DN)db/db小鼠肾脏的保护机制。方法以12周龄雄性db/m小鼠10只作为正常组,同周龄雄性db/db小鼠50只随机分为HPS高、中、低剂量组和依那普利组、模型组,每组10只。HPS高、中、低剂量组分别给予HPS 400、200和100mg/(kg·d)灌胃;依那普利组给予依那普利10mg/(kg·d)灌胃;模型组、正常组给予等量生理盐水灌胃;各组均连续灌胃8周。采用免疫组织化学法和免疫印迹法检测各组小鼠肾组织血管内皮生长因子(VEGF)与色素上皮细胞衍生因子(PEDF)蛋白表达;RT-PCR法检测各组小鼠肾组织VEGF与PEDF mRNA表达。结果模型组较正常组VEGF mRNA及蛋白表达均上调(P0.01),PEDF mRNA及蛋白表达均下调(P0.01);与模型组比较,除HPS低剂量组外(P0.05),其余各给药组VEGF mRNA及蛋白表达均下降(P0.05或P0.01),PEDF mRNA及蛋白表达均上升(P0.05或P0.01)。结论 HPS可通是过调节db/db小鼠肾组织中VEGF、PEDF蛋白和mRNA的表达,从而起到保护DN小鼠肾脏的作用。     

基于JAK2/STAT3信号通路探讨红芪多糖对糖尿病肾病db/db小鼠作用机制

目的：观察红芪多糖对糖尿病肾病db/db小鼠Janus激酶2(JAK2)/信号转导及转录激活因子3(STAT3)信号通路的影响。方法：将50只db/db小鼠按体质量随机分为模型组、厄贝沙坦组、红芪多糖高、中、低剂量组,每组10只;另取10只C57BL/6小鼠作为正常组。正常组和模型组给予5 mL·kg^-1蒸馏水,厄贝沙坦组给予22.75 mg·kg^-1厄贝沙坦悬溶液,红芪多糖高、中、低剂量组分别给予200、100、50 mg·kg^-1红芪多糖悬溶液,6组小鼠每日灌胃1次,连续给药12周。检测各组小鼠尿酸(UA)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC),过碘酸雪夫反应(PAS)、马松(Masson)染色观察肾脏组织病理变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)、实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肾脏中JAK2、STAT3、细胞信号转导抑制因子3(SOCS3)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白及mRNA的表达水平。结果：治疗12周后,与正常组比较,模型组小鼠肾脏组织病理超微结构病变显著,其UA、...     

石斛合剂对糖尿病肾病小鼠TNF-α及IL-6表达的影响

目的:观察石斛合剂对db/db糖尿病小鼠肾组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)表达水平的影响。方法:选用11~12周龄雄性db/db小鼠,按空腹血糖及体质量随机分成模型组、格列吡嗪治疗组、石斛合剂低剂量组和高剂量组,db/m小鼠为正常组。连续灌胃给药8周。检测小鼠体质量及24 h尿蛋白定量;苏木素-伊红(HE)染色观察肾组织病理形态改变;通过酶联免疫吸附测定(ELISA)检测小鼠血清及肾组织TNF-α,IL-6的含量;分别应用免疫组织化学染色和蛋白免疫印迹法(Western bolt)检测肾组织中TNF-α,IL-6蛋白的表达。结果:石斛合剂能明显降低db/db小鼠的体质量(P0.05,P0.01)及24 h尿蛋白定量(P0.05,P0.01)。HE染色结果显示模型组小鼠肾小球体积增大,系膜基质增多,系膜区增宽,肾小管上皮细胞空泡变性;与模型组相比,各治疗组肾小球基底膜变薄,系膜细胞增生情况减轻,细胞外基质减少,肾小管结构基本恢复正常。免疫组织化学,ELISA和Western bolt结果表明,与正常组比较,模型组小鼠TNF-α,IL-6的表达均显著增加(P0.01);与模型组比较,各治疗组TNF-α,IL-6的表达均明显减少(P0.05,P0.01),但仍高于正常组。结论:石斛合剂可能通过下调TNF-α及IL-6的表达减轻肾组织内的炎症反应,改善db/db小鼠的肾脏损害,从而延缓DN的进展。     

糖肾清2号方对糖尿病肾病小鼠AMP激活蛋白激酶信号通路的影响

目的观察糖肾清2号方对糖尿病肾病模型小鼠AMP激活蛋白激酶(AMPK)信号通路的影响。方法采用自发性2型糖尿病模型KK-Ay小鼠,予高脂饲料诱导3周诱导糖尿病肾病模型。造模成功的小鼠随机分为模型组,阳性药组,中药大、中、小剂量组,以C57BL/6J小鼠设为正常组,每组各6只。正常组及模型组予去离子水0.1 mL/(10 g·d),阳性药组予缬沙坦13.33 mg/(kg·d),中药大、中、小剂量组分别按照糖肾清2号方生药量40.66、20.33、10.17 g/(kg·d)剂量灌胃。各组小鼠每日灌胃1次,连续干预治疗12周后取血清及肾脏。采用RT-PCR技术检测肾脏组织AMPK-α1、NF-κB P65、TNF-α、IL-6 mRNA转录水平。Western blot技术、免疫组化法测定肾脏组织AMPK-α1、NF-κB P65蛋白表达水平。ELISA法检测血清TNF-α、IL-6蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组AMPK-α1 mRNA转录水平及蛋白表达水平明显下调(P0.01),NF-κB P65、IL-6、TNF-αmRNA转录水平及蛋白表达水平明显上调(P0.01)。与模型组比较,中药大、中、小剂量组AMPK-α1 mRNA及蛋白表达均有上调(P0.05,P0.01),NF-κB P65、IL-6、TNF-αmRNA及蛋白表达水平均明显下调(P0.05,P0.01)。与阳性药组比较,中药各组AMPK-α1 mRNA转录水平及蛋白表达水平明显下调(P0.01),NF-κB P65、TNF-α、IL-6 mRNA水平均明显上调(P0.01),NF-κB P65、IL-6蛋白表达水平均明显上调(P0.05,P0.01);中药大、中剂量组TNF-α蛋白表达水平明显下调(P0.05)。结论糖肾清2号方对肾脏的保护作用可能与激活AMPK-α1活性,间接抑制NF-κB活性从而抑制炎症反应有关。     

茯苓多糖对db/db小鼠肾脏保护作用及其对p38 MAPK/PPAR-γ信号通路的影响

目的:探讨茯苓多糖对db/db小鼠的肾脏保护作用及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)/过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)信号通路的调控作用。方法:6只C57BL/KsJ-db/+小鼠作为正常对照组,28只db/db小鼠随机分为模型组、茯苓多糖低剂量组、茯苓多糖高剂量组、阳性药组(厄贝沙坦),每组6只,连续给药8周。每2周检测1次FBG;8周末,眼内眦取血,生化法检测血清肌酐(SCr)和尿素氮(BUN);麻醉处死,取双肾,称重,计算肾脏指数;HE染色,光镜观察肾组织病理变化;Western blot法检测肾组织p-p38 MAPK、p38 MAPK和PPAR-γ的表达。结果:与正常组相比,模型组小鼠FBG、血清SCr及BUN水平、肾脏指数升高(P0.05);与模型组相比,茯苓多糖组小鼠FBG水平显著降低、血清SCr及BUN水平、肾脏指数降低(P0.05);HE染色结果显示模型组小鼠肾脏出现明显病理损伤,茯苓多糖组能改善小鼠肾脏损伤;Western blot结果显示随着茯苓多糖浓度的升高,肾组织p-p38 MAPK水平逐渐降低,PPAR-γ水平逐渐升高。结论:茯苓多糖能明显改善db/db小鼠肾脏损伤,其机制可能与p38 MAPK磷酸化受到抑制及PPAR-γ通路被激活有关。     

基于TLR4/NF-κB信号通路的降尿酸方对尿酸性肾病大鼠肾功能和尿酸盐结晶的影响

目的从TLR4/NF-κB信号通路观察降尿酸方对尿酸性肾病(UAN)大鼠肾功能和尿酸盐结晶的影响,探讨其作用机制。方法 32只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、别嘌醇组和降尿酸方组,每组8只。采用氧嗪酸钾(1.5 g/kg)和腺嘌呤(0.1 g/kg)混合液灌胃构建UAN大鼠模型,别嘌醇组和降尿酸方组分别按25 mg/kg、16 g/kg灌胃,给药体积10 mL/kg,正常组和模型组予等体积蒸馏水灌胃。4周后检测大鼠血尿酸(SUA)、血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、24 h尿蛋白(UTP);ELISA检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量;HE和Masson染色观察肾组织病理变化,六胺银染色观察肾组织尿酸盐结晶沉积情况,透射电镜观察肾组织超微结构;Western blot检测肾组织Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)p65、TNF-α蛋白表达;免疫组化检测肾组织TNF-α蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠SUA、SCr、BUN、24 h UTP水平明显升高(P0.01,P0.05),血清TNF-α和IL-6含量明显增加(P0.01),肾组织损伤严重,并有大量尿酸盐结晶沉积,TLR4、NF-κBp65、TNF-α蛋白表达升高(P0.01,P0.05);与模型组比较,降尿酸方组和别嘌醇组大鼠SUA、BUN、24hUTP水平明显降低(P0.01,P0.05),血清TNF-α和IL-6含量明显减少(P0.01),肾组织损伤有所改善,尿酸盐结晶减少,TLR4、NF-κB p65、TNF-α蛋白表达明显降低(P0.05)。TNF-α免疫组化结果与Westernblot一致。结论降尿酸方能改善UAN大鼠肾功能,减少尿酸盐结晶沉积,减轻肾脏炎症,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路相关。