学习记忆功能障碍与基底前脑胆碱能神经元改变的关系

目的:通过大鼠脑震荡模型观察基底前脑胆碱能神经元的改变,初步探讨脑震荡后学习记忆功能障碍与基底前脑胆碱能神经元改变的关系.方法:采用自制单摆式机械打击装置,建立脑震荡大鼠模型,用Morris水迷宫(MWM)实验评价学习记忆功能,用胆碱乙酰转移酶(ChAT)标记大鼠基底前脑的胆碱能细胞,并进行定量检测.结果:与对照组相比,脑震荡后1～7天进行MWM实验的大鼠在前3天找到平台的时间显著延长(P<0.05);与对照组相比,基底前脑内侧隔核(MSN)、斜角带核垂直支(VDB)ChAT阳性表达细胞数在脑震荡后明显减少(伤后1、2、4、8天组与对照组比较P<0.05).结论:基底前脑胆碱能神经元在脑震荡后明显减少,这可能与脑震荡后学习记忆功能损害有关.     

糖基化终末产物对大鼠基底前脑胆碱能神经元的损伤作用

目的 研究糖基化终末产物(AGE BSA)对原代培养的基底前脑胆碱能神经元形态、生存率、凋亡率、胆碱乙酰转移酶(ChAT)与乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的影响。在体外水平研究AGEs在阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)神经元缺失发生中的作用及其可能机制。方法 原代培养大鼠基底前脑胆碱能神经元,观察细胞生长变化,进行免疫荧光细胞化学鉴定;用300μg/mLAGE BSA以及糖基化终末产物受体(RAGE)中和抗体阻断处理原代培养的基底前脑胆碱能神经元,作用不同时间后置于倒置显微镜下观察细胞形态变化;采用MTT法检测神经元的存活率;采用流式细胞术检测神经元的凋亡率;经比色法检测ChAT和AchE的活性变化。结果 AGE-BSA干预胆碱能神经元72h后,细胞形态发生明显损伤性变化,细胞存活率明显降低,凋亡率增高,ChAT活性明显下降,AchE活性明显升高;RAGE中和抗体阻断组72h较之AGE-BSA组,细胞形态损伤变化较轻,生存率偏高,凋亡率较低,ChAT活性较高,AchE活性偏低,但比空白对照组生存率降低,凋亡率增高,ChAT活性明显下降,AchE活性明显升高。结论 糖基化终末产物作用72h可以引起胆碱能神经元的损伤,并造成ChAT活性下降和AchE活性明显升高,部分阻断其与特异性受体RAGE的结合可以减弱其损伤作用,提示糖基化终末产物通过其受体参与了对胆碱能神经元的损伤作用。     

慢性酒精中毒大鼠学习记忆及内侧隔核胆碱能神经元的变化

目的 研究酒精致大鼠学习记忆障碍与基底前脑内侧隔核胆碱能神经元变化的关系。方法 将24只雄性Wister大鼠随机均分成对照组和酒精中毒组．酒精中毒组大鼠隔日胃内注入含酒精（2．5g／kg）的蒸馏水2ml共90d，对照组则注入不舍酒精的蒸馏水2ml。然后采用Morris水迷宫扣免疫组织化学技术，分析大鼠基底前脑内侧隔核胆碱能神经元、海马星形胶质细胞数的变化扣学习记忆能力的关系。结果酒精中毒组大鼠Morris水迷宫潜伏期明显延长，基底前脑内侧隔核胆碱能神经元数目明显减少．海马星形胶质细胞数目反应性增生。结论 酒精致大鼠学习记忆能力障碍与基底前脑内侧隔核胆碱能神经元减少有关。     

六味地黄丸对老年大鼠学习记忆及基底前脑ChAT阳性神经元的影响

目的:观察六味地黄丸对老年大鼠学习记忆及基底前脑乙酰胆碱转移酶(ChAT)阳性神经元的影响.方法:将清洁级雄性SD大鼠分为青年对照组(3月龄)、老年对照组(24月龄)和老年用药组(24月龄),通过Morris水迷宫实验,比较其学习记忆能力,并运用免疫组织化学方法,检测基底前脑ChAT阳性神经元变化.结果:老年用药组平均逃避潜伏期自第3d起较老年对照组明显缩短,有极显著性差异(P＜0.01).老年用药组基底前脑ChAT阳性细胞数目与老年对照组相比,MSN内有显著性差异(P＜0.05);NBM内有极显著性差异(P＜0.01);VDB内两组之间无明显差异.结论:六味地黄丸可以改善自然衰老大鼠的空间学习记忆能力,机制可能与其保护基底前脑ChAT阳性神经元,增强中枢胆碱能系统功能有关.     

聪圣胶囊对去皮层血管大鼠行为学及前脑AchE、ChAT的影响

采用去大鼠脑皮层血管建立模型 ,AchE组化及ChAT免疫组化方法 ,研究聪圣胶囊对此模型皮质、海马以及大细胞基底核胆碱能神经元的影响。发现去脑皮层血管大鼠出现了明显的学习、记忆功能的损害。大鼠皮层损伤侧扣带皮质、海马CA1区AchE阳性纤维的分布明显稀疏 ,着色浅。损伤侧的大细胞基底核的AchE、ChAT阳性胆碱能神经元出现了明显萎缩。聪圣胶囊治疗组大鼠的学习、记忆功能明显改善 ,皮质、海马AchE阳性纤维分布较密集 ,着色加深。大细胞基底核AchE、ChAT阳性神经元的变性、萎缩明显减轻。说明聪圣胶囊对去皮层血管后造成的皮质、海马、大细胞基底核的损害具有明显的保护和治疗作用。通过上调胆碱能系统的功能改善学习、记忆功能。     

不同年龄组抑郁症模型鼠Meynert基底核形态学研究

q目的探讨不同年龄组抑郁症模型鼠中枢胆碱能系统神经毡突触超微结构及胆碱乙酰转移酶（ChAT）免疫组化变化情况,并探讨二者之间的关系。方法选择中枢胆碱能系统发源地Meynert基底核为观察对象,采用透射电镜从形态学上观察Meynert基底核神经毡突触的变化,应用ChAT免疫组化观察胆碱能神经元的变化。结果透射电镜观察显示,模型组突触囊泡数量较对照明显减少,且与年龄呈正相关。突触囊泡分布不均匀,聚集于激活的突触带附近,各年龄模型组CqchAT免疫反应与对照组相比明显增强,且与年龄呈正相关。结论抑郁症模型鼠中枢胆碱能系统发源地Meynert基底核神经毡突触囊泡明显减少,而ChAT免疫反应阳性细胞明显增多,差异有统计学意义（P〈0．01）。     

HHcy大鼠学习记忆能力和基底前脑ChAT的变化及早期叶酸干预

目的 观察高同型半胱氨酸血症(HHcy)对大鼠学习记忆能力和基底前脑胆碱乙酰基转移酶（ChAT）的影响及早期叶酸(FA)干预的作用。方法 将Wistar大鼠随机分为对照组、HHcy组和FA组,对照组给予饮用水,在HHcy组饮用水中添加蛋氨酸（1.0g/kg/d）,在FA组饮用水中添加蛋氨酸（1.0g/kg/d）并予FA（0.4mg/kg/d）灌胃,共进行8周,测定各组血浆同型半胱氨酸（Hcy）、FA的基础浓度及实验满8周时的浓度,Morris水迷宫实验评估各组的学习记忆能力,并对大鼠基底前脑进行ChAT的免疫组化实验,对其灰度值进行分析。结果 HHcy组的学习记忆能力较对照组和FA组均减退（P均＜0.01),经灰度分析比较后显示HHcy组基底前脑隔内侧核、Meynert’s基底核ChAT阳性细胞的表达与其余两组的差异具有统计学意义（P＜均0.01)。结论 过量的蛋氨酸饮食可致HHcy,影响学习记忆能力,HHcy影响学习记忆能力考虑与基底前脑核团的胆碱能神经元的减少有关; 早期补充叶酸可降低血浆Hcy水平,改善HHcy对学习记忆能力的影响。     

复方千层塔合剂对阿尔茨海默病大鼠胆碱能系统的影响

目的 通过观察复方千层塔合剂对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马神经递质的影响,研究本方的作用机理.方法 将Wistar大鼠随机分为6组,将神经毒物IBO定位注射至大鼠胆碱能神经元聚集的Meynert基底核,建立胆碱能损伤的痴呆动物模型,并选择海马组织胆碱乙酰转移酶(ChAT)活性作为观察指标.结果 复方千层塔合剂(高、低剂量组)大鼠海马区ChAT活性增加明显高于模型组,且高剂量组接近空白组水平.结论 复方千层塔合剂对中枢胆碱能损伤具有修复作用,从而达到改善学习记忆的目的.     

束缚-浸水应激对大鼠疑核胆碱能及儿茶酚胺能神经元活动的影响

目的 研究束缚-浸水应激(RWIS)大鼠疑核(NA)中胆碱能、儿茶酚胺能神经元的活动情况。方法 随机将10只雄性Wistar大鼠分为对照组和应激组(RWIS组),采用Fos、胆碱乙酰转移酶(ChAT)或酪氨酸羟化酶(TH)免疫组织化学双标技术,统计对照组和应激组Fos、ChAT或TH单标阳性神经元以及Fos+ChAT或Fos+TH双标阳性神经元数目。结果 NA中ChAT免疫阳性神经元胞体呈梭形或多角形,有较多的TH阳性终末。与对照组相比,RWIS组大鼠NA大量神经元表达Fos(P<0.05);RWIS组Fos+ChAT双标阳性神经元数目也较对照组显著增加(P<0.05),占ChAT免疫阳性神经元的比例在对照组和RWIS组中分别为7.5%、29.8%(P<0.01)。结论 NA中胆碱能神经元参与RWIS调控过程,而这些神经元可能接受其他核团儿茶酚胺能神经元的纤维投射。     

束缚-浸水应激对大鼠迷走背核胆碱能神经元活动的影响

目的研究束缚-浸水应激(RWIS)大鼠迷走神经背核(DMV)中胆碱能神经元的活动情况。方法随机将10只雄性Wistar大鼠分为对照组和应激组,采用Fos和胆碱乙酰化酶(ChAT)免疫组织化学双标技术,统计对照组和应激组Fos、ChAT、Fos/ChAT双标阳性神经元数目。结果与对照组相比,应激组大鼠DMV大量神经元表达Fos,Fos阳性神经元主要集中于DMV尾段和吻段(P<0.01);ChAT阳性神经元主要分布于DMV中段和尾段,应激组大鼠DMV中单位面积内ChAT阳性神经元数目减少(P<0.01);Fos/ChAT双标阳性神经元的分布与Fos阳性神经元分布情况相似,RWIS组Fos/ChAT双标阳性神经元数目显著增加(P<0.01),Fos/ChAT双标阳性神经元占ChAT阳性神经元的比例在对照组和RWIS组中分别为7.17%、21.12%(P<0.01)。结论 DMV中胆碱能神经元参与RWIS调控过程。     

Animal model of vascular dementia and its cholinergic mechanism

Vasculardementia(VD),oneofmajortypesofseniledementia,inflictsmoreandmoreoldpeopleallovertheworld,andhasbeenregardedasanimportantmedicalandsocialproblem.Recently,widespreadat-tentionhasbeenpaidtoitsprevention.However,theexactpathogenicmechanismofVDremainsunclear,andareliableanimalmodelofVDhasnotyetbeenestablished,whichsignificantlypreventsthefurtherstudyofthisproblemwithanimalexperiment.Recentstudiessuggestthatchronichypoperfusionofcerebralbloodflow(CBF)oftheforebrainmaybeoneofthemajorcause…     

旺拉提取物对胆碱能损伤大鼠脑胆碱酯酶的影响

【目的】研究藏药旺拉提取物对胆碱能损伤大鼠脑胆碱酯酶活性和表达的影响。【方法】采用基底前脑注射鹅蒿蕈氨酸的方法建立胆碱能损伤大鼠模型。实验动物分为假手术组、模型组、CE 5 mg/kg组,连续灌胃给药28 d。取大鼠脑额叶皮层、基底前脑区,观察大鼠脑病理改变,化学法测定胆碱酯酶和乙酰胆碱酯酶活性,免疫组化染色法检测乙酰胆碱酯酶表达。【结果】与假手术组相比,模型组大鼠脑额叶皮层、基底前脑神经元细胞发生坏死等病理变化,胆碱酯酶和乙酰胆碱酯酶活性明显下降(P<0.05),乙酰胆碱酯酶表达水平下降[P<0.05,脑额叶皮层乙酰胆碱酯酶的累积光密度为(4.6±0.4)×104,基底前脑乙酰胆碱酯酶的累积光密度为(2.5±0.2)×104]。与模型组大鼠比,CE 5 mg/kg可抑制胆碱能损伤大鼠脑的病理改变,对乙酰胆碱酯酶和胆碱酯酶活性影响不大,但可明显提高乙酰胆碱酯酶的表达水平[P<0.05,脑额叶皮层乙酰胆碱酯酶的累积光密度为(6.2±0.4)×104,基底前脑乙酰胆碱酯酶的累积光密度为(3.2±0.2)×104]。【结论】CE对胆碱能神经系统有一定的保护作用,这可能是CE改善学习记忆能力的途径之一。     

Selective loss of basal forebrain cholinergic neurons in APP770 transgenic mice

Objective To determine whether cholinergic neurons in the basal nucleus magnocellularis (N BM) and the medial septum are affected in transgenic mice overexpressing human a myloid precursor protein 770 (APP₇₇₀).
Methods Eight age groups, from 3 months old to 10 months old, of either heterozygous tra nsgenic or non-transgenic mice were used for choline acetyltransferase (ChAT) s taining using immunohistochemistry. The number of ChAT-positive neurons was co unted on the MCID Image Analysis System. Neurons in the cerebral cortex and are a CA1 of hippocampus were also stained with cresyl violet and counted using opti cal dissector technique.
Results There is no change in the number of forebrain cholinergic neurons in the transge nic mice up to 9 months of age. A loss of these cholinergic neurons starts in 9 months old transgenic mice, with a further decrease in the number of NBM and me dial septum neurons in 10-month-old transgenic mice. On the other hand, the n umber of neurons in the cerebral cortex and hippocampal area CA1 remained unchanged.
Conclusion These results demonstrate a selective loss of basal forebrain cholinergic neuron s in APP₇₇₀ transgenic mice.     

脑震荡后大鼠学习记忆功能的变化及机制初探

目的:评价脑震荡大鼠的学习记忆功能,观察大脑皮层神经元的组织学变化,初步探讨脑震荡大鼠认知功能障碍与大脑皮层神经元的关系.方法:大鼠随机分为对照组和脑震荡后1、2、4、8天组,应用自制单摆式机械打击装置建立脑震荡大鼠模型,用Morris水迷宫试验评价空间学习记忆功能,在光镜下观察大脑皮层的神经元并对坏死神经元进行计数.试验数据用SPSS12.0统计软件处理.结果:与对照组相比,脑震荡后8天组大鼠1至3天找到平台的时间显著延长(P＜0.05).脑震荡后,大脑皮层坏死神经元呈逐渐增加趋势,2d达顶峰,然后逐渐减少,差异有显著性.结论:①大鼠脑震荡后早期存在认知功能障碍;②大鼠脑震荡后大脑皮层出现程度不等的神经元坏死;③大鼠脑晨荡后的认知功能障碍可能与大脑皮层神经元坏死有关.     

老年性学习记忆减退大鼠基底前脑NOS神经元的形态变化

用Ｍｏｒｉｓ水迷宫行为检测方法，以青年组平均逃避潜伏期加２倍标准差为下限，加１倍标准差为上限将老年大鼠分为学习记忆减退组和学习记忆正常组。取受试大鼠的前脑冰冻切片，行尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅａｄｅｎｉｎｅｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ＮＡＤＰＨ）组化染色。结果显示：３７．５％的老年鼠为学习记忆减退鼠。与青年鼠相比，老年学习记忆减退鼠基底脑一氧化氮合酶（ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ＮＯＳ）神经元胞体萎缩，着色变淡，突起减少。而老年学习记忆正常鼠基底脑内ＮＯＳ神经元形态正常。ＩＢＡＳ图象分析表明老年学习记忆减退鼠基底前脑各核团ＮＯＳ神经元数、细胞面积和灰度值较青年鼠明显下降（Ｐ＜０．０１）。而老年学习记忆正常鼠上述指标无明显改变。受试大鼠逃避潜伏期与基底前脑ＮＯＳ神经元数量呈负相关。上述结果提示，老年大鼠学习记忆能力减退存在着明显的个体差异。老年学习记忆减退大鼠基底前脑ＮＯＳ神经元发生严重的退变，这可能是老年性学习记忆减退的神经机制之一。     

慢性脑缺血对大鼠海马微血管构筑及胆碱乙酰基转移酶蛋白表达的影响

目的：探讨慢性脑缺血致大鼠海马胆碱能神经元损伤的作用,初步阐明其作用机制。方法：选取90只健康成年雄性SD大鼠,随机分为假手术组（30只）和实验组（60只）。实验组大鼠采用结扎双侧颈总动脉的方法,建立慢性脑缺血模型;假手术组大鼠颈部正中切口,分离双侧颈总动脉,不做结扎。分别于术后第7、14和21天随机各取假手术组大鼠10只、实验组大鼠20只处死取材。免疫组织化学SP法观察海马神经元胆碱乙酰基转移酶（ChAT）蛋白表达水平的动态变化,单宁酸-氯化铁媒染法观察大鼠海马微血管构筑的动态变化,采用MiVnt图像分析系统定量分析免疫组织化学阳性结果、大鼠海马水平部的微血管密度（MVD）和微血管面积密度（MVA）。结果：实验组大鼠海马神经元ChAT的表达水平较假手术组大鼠明显降低（P<0.05);且随缺血时间的延长,ChAT的表达水平逐渐降低,实验组14 d时大鼠ChAT的表达水平明显低于实验组7 d时（P<0.05),实验组21 d时明显低于实验组14和7 d（P<0.05）。实验组各时间点大鼠海马的MVA和MVD均较假手术组明显降低（P<0.05）。随着造模时间的延长,MVA逐渐降低,实验组14和21 d时大鼠的MVA明显低于实验组7 d时（P<0.05）;随着造模时间的延长,MVD也逐渐降低,实验组14和21 d时的MVD明显低于实验组7 d（P<0.05）,实验组21 d时明显低于实验组14 d（P<0.05）。结论：慢性脑缺血可致大鼠海马MVA、MVD及ChAT蛋白的表达水平进行性下降,进而导致学习和记忆功能障碍逐渐加重,这可能是血管性痴呆发生的原因之一。     

银杏叶提取物对切割海马伞大鼠隔区胆碱能神经元的保护作用

目的：研究银杏叶提取物对切割海马伞大鼠隔区胆碱能元的保护作用。方法：实验组和对照组动物在切割海马伞前后分别用银杏叶提取物和蒸馏水灌胃，术后第4周灌注固定，取隔区切片进行Nissl染色及胆碱乙酰转移酶（ChAT)免疫组化染色，显微镜下记数切割海马伞侧内侧隔核和斜角带垂直支ChAT阳性神经元数目。用CMM－301图像分析系统对切割海马伞侧隔区ChAT阳性神经元的面积、周长等指标进行分析处理，用t检验作统计学分析。结果：实验组切割海马伞侧隔区的ChAT阳性神经元数明显多于对照组（P＜0．01），其神经元的胞体面积及周长指标实验组均好于对照组（P均＜0．01）。结论：银杏叶提取物对切割海马伞大鼠的隔区胆碱能神经元具有保护作用。     

Aβ1-42对大鼠基底前脑神经元KATP通道各亚基蛋白表达的影响

目的研究β淀粉样蛋白（Aβ_1-42）对原代培养基底前脑胆碱能神经元ATP敏感性钾通道（KATP）各亚基蛋白表达的影响,探讨阿尔茨海默病发病的细胞毒性分子机制。方法 运用细胞原代培养的方法培养大鼠基底前脑胆碱能神经元并进行鉴定, 用2μmmol/L的Aβ_1-42对原代培养细胞进行干预, 免疫荧光双染及免疫印记观察干预后不同时间(分别为0, 24, 72h)细胞KATP通道各亚基Kir6.1、Kir6.2和SUR1、SUR2蛋白表达水平的变化。结果与正常对照组比较,Aβ_1-42作用胆碱能神经元24h后, KATP通道亚基Kir6.1及SUR2蛋白表达显著增多(P<0.05),而亚基Kir6.2及SUR1蛋白表达无明显变化。但Aβ_1-42作用时间达72h后, KATP通道各个亚基蛋白表达均显著升高(P<0.05)。 结论 Aβ_1-422作用胆碱能神经元不同的时间段（24h和72h）,细胞KATP通道各亚基蛋白表达有不同程度的增加,且增加速度不一致。可能由此改变KATP通道的结构和功能,从而影响Aβ_1-42的神经细胞毒性作用。