喉癌患者树突状细胞体内诱导高效而特异的抗喉癌免疫

目的 探讨健康人外周血树突状细胞（DCs）在体内能否诱导出高效而特异的抗喉癌免疫应答。方法 从喉癌患者外周血诱导DCs回输荷瘤鼠，或DCs免疫后用癌细胞攻击。流式细胞术检测两组DCs的表面分子表达，MTT法检测其细胞毒作用．观察其免疫治疗及免疫保护作用。结果 （1）健康人外周血贴壁PBMCs经细胞因子诱导后可获大量DCs-纯度达70％以上。流式细胞术分析显示：两组DCs均高表达CD86、CD40、CD83、HLA—DR、CD54．负载抗原后的Db表达稍有下降．但两者差异无统计学意义（P〉0．05）。（2）负载抗原的DCs能诱导同种异体T淋巴细胞增殖分化为CTLs．经MTT检测实验组的OD值为（0．57±0．12），与对照组相比．差异有统计学意义（t=12．55．P〈0．01）。经过负载抗原的DCs诱导的CTLs可特异性抑制和杀伤Hep-2细胞，差异有统计学意义（P〈0．01）。（3）免疫保护实验：与对照组、未负载抗原D氏组、抗原粗提物组小鼠相比，负载抗原DCs组的成瘤率低（84％）、潜伏期长[（14±3）d，P〈0．01]、肿瘤体积及重量小（P〈0．01）。（4）免疫治疗实验：与其他三组相比．负载抗原DCs组的肿瘤体积及重量较小（P〈0．01）。结论 用GM—CSF及IL-4从人外周血诱导的DCs能有效提呈Hep-2喉癌抗原给T淋巴细胞，并且在体内诱导出高效而特异的抗肿瘤免疫，有望成为有效的肿瘤特异性免疫治疗新途径。     

小鼠树突状细胞体外培养的实验研究

目的研究体外大量扩增小鼠树突状细胞(DCs)的实验方法。方法用细胞因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-4(IL-4)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)]组合体外诱导培养DCs,混合淋巴细胞实验检测DCs的免疫刺激活性。结果培养6-8 d,细胞表面有大量毛刺状突起生长,即DCs;该DCs具有很强的刺激T淋巴细胞增殖的能力,且在T细胞与DCs比值为10∶1时最强。结论 TNF-α、IL-4、GM-CSF组合是诱导体外扩增DCs的较佳方法。     

支气管哮喘患者外周血单核细胞因子Th1/Th2失衡的检测

目的观察支气管哮喘患者在发病期是否存在Th1／Th2失衡。方法用酶联免疫吸附试验（ELISA）分别检测三组（哮喘发作组、哮喘缓解组及健康对照组，每组17例）外周血单核细胞（PBMC）产生的肿瘤坏死因子γ（IFN-γ）、白细胞介素4（IL-4）。结果与健康对照组比较哮喘急性发作组患者PBMC产生的IFN-γ[（139．6±13．0）pg／L]明显降低（P〈0．01），而IL-4[（114．7±20．8）pg／L]水平增高（P〈0．01），哮喘缓解组两种细胞因子水平与健康对照组差异无统计学意义。结论支气管哮喘急性发作期存在着Th1／Th2失衡。     

吗啡抑制人外周血TNF-α和IL-6的表达的研究

目的：研究吗啡对人外周血中肿瘤坏死因子－α（TNF-α）和白细胞介素－6（IL－6）含量的影响，探讨其对免疫炎症反应的可能机制。方法：全血收集在试管内，分装在EP管中，每管取100μl全血。实验分为吗啡200mg.L^-1组（A1组）、吗啡2mg.L^-1组（A2组）、吗啡200mg.L^-1＋脂多糖（LPS）（B1组）、吗啡2mg.L^-1组＋LPS（B2组）、对照组（C1组）和LPS组（C2组）共6组（n=7）。各组加入上述试剂，用PBS补齐体积后，在37℃下孵育6h。用ELISA检测血清中TNF－α和IL－6含量。结果：单独药物组（A1和A2组）TNF－α的浓度分别为240和251ng.L^-1与空白对照组（C1组，TNF－α的浓度为279ng.L^-1）比较，无显的统计学意义（P＞0．05）；IL－6的浓度分别为444、490和561ng.L^-1，亦无统计学意义（P＞0．05），激活组（B1和B2组）和LPS组（C2组）分别为490、534和1226ng.L^-1（TNF－α）；1177、1310和1563ng.L^-1（IL－6）。且B1组低于B2组。结论：吗啡对静息状态下TNF－α的表达无影响，但可抑制LPS诱导的TNF－α表达，且高剂量的吗啡对LPS诱导的TNF－α的抑制作用大于低剂量吗啡的作用。     

胎儿来源的树突状细胞诱导抗膀胱癌效应的研究

目的：研究胎儿来源的树突状细胞（DC）体外诱导抗膀胱癌的特异性细胞免疫的效果.方法：从胎儿骨髓获得单个核细胞,经粒细胞-单核细胞集落刺激因子（GM-CSF）、IL-4和TNF-α诱导产生DC.利用50%～70%硫酸铵饱和沉淀法获取膀胱癌细胞系EJ含热休克蛋白（HSP）成分的细胞溶解物,以该抗原负载DC,激活胎脾细胞产生肿瘤特异性的细胞杀伤性T淋巴细胞（CTL）.利用IL-2刺激胎脾细胞产生LAK细胞.应用MTF法分别检测CTL和LAK细胞对EJ细胞的杀伤效应.结果：胎儿骨髓可诱导出功能成熟的DC,高表达CD1a、CD86、HLA-DR和CD83.负载EJ抗原的DC可诱导产生CD8＋CTL.其对EJ细胞的杀伤作用明显强于LAK细胞.结论：含HSP成分的肿瘤细胞溶解物负载胎儿来源的DC,体外可诱导出更强的特异性抗肿瘤免疫应答.     

树突状细胞诱导的淋巴因子激活的杀伤细胞对肺癌细胞系A549的体外杀伤作用

目的:探讨负载肺癌抗原的树突状细胞(dendritic cells,DC)诱导淋巴因子激活的杀伤(LAK)细胞对肺癌细胞A549的杀伤作用.方法:采用肺癌患者外周血单个核细胞(PBMC)经rhGM-CSF、rhIL-4、rhTNF-a诱导和肿瘤冻融抗原刺激诱导获得的DC与LAK细胞按1:20比例共培养2 d,获得Ag-DC-LAK细胞作效应细胞,分别用Ag-Dc-LAK、DC-LAK、Ag-LAK和LAK对肺癌细胞系A549细胞进行杀伤实验.结果:以30μg/mL蛋白的肿瘤抗原负载的DC其表型CD1a、CD80、CD86、HLA-DR均显著升高(P<0.05),高于单纯细胞因子诱导成熟的DCs表型,由其刺激增殖的LAK细胞对肺癌细胞A549杀伤率为(71±5)%,明显高于对照组(P<0.05).结论:经肿瘤抗原刺激诱导成熟的DC可有效传递抗原,增加T细胞对肿瘤细胞的杀伤作用.     

树突状细胞诱导的淋巴因子激活的杀伤细胞对肺癌细胞系A549的体外杀伤作用

目的:探讨负载肺癌抗原的树突状细胞(dendritic cells,DC)诱导淋巴因子激活的杀伤(LAK)细胞对肺癌细胞A549的杀伤作用.方法:采用肺癌患者外周血单个核细胞(PBMC)经rhGM-CSF、rhIL-4、rhTNF-a诱导和肿瘤冻融抗原刺激诱导获得的DC与LAK细胞按1:20比例共培养2 d,获得Ag-DC-LAK细胞作效应细胞,分别用Ag-Dc-LAK、DC-LAK、Ag-LAK和LAK对肺癌细胞系A549细胞进行杀伤实验.结果:以30μg/mL蛋白的肿瘤抗原负载的DC其表型CD1a、CD80、CD86、HLA-DR均显著升高(P<0.05),高于单纯细胞因子诱导成熟的DCs表型,由其刺激增殖的LAK细胞对肺癌细胞A549杀伤率为(71±5)%,明显高于对照组(P<0.05).结论:经肿瘤抗原刺激诱导成熟的DC可有效传递抗原,增加T细胞对肿瘤细胞的杀伤作用.     

乌苯美司体外对人单核细胞功能的活化作用

观察了国产乌苯美司（乌比美克）体外对人单核细胞功能的影响：①０．０１￣１００μｇ／ｍｌ乌苯美司能直接诱导人单核细胞生成ＩＬ－１；②经０．１μｇ／ｍｌ乌苯美司作用４ｈ后，人单核细胞即开始分泌ＩＬ－１，２４ｈ达到高峰，以后逐渐下降；③经１０￣１００μｇ／ｍｌ乌苯美司预处理，单核细胞可促进ＮＫ细胞活性，而经０．０１￣０．１μｇ／ｍｌ乌苯美司处理，单核细胞则抑制ＮＫ细胞活性。     

树突状细胞与肿瘤的免疫治疗

肿瘤具有抗原性,这为肿瘤的免疫治疗提供了理论依据。然而肿瘤却可以逃避宿主的免疫监视,致使用自体肿瘤细胞制备的瘤苗进行免疫治疗在很多情况下效果不理想。造成这些现象的主要原因是:(1)肿瘤细胞主要组织相容抗原复合物(Major Histocompatibility Complex,MHC)分子表达下调。(2)肿瘤细胞缺乏活化淋巴细胞所需的粘附分子(ICAMs,IFA_3)和协同刺激分子(B7)。(3)荷瘤宿主的抗原提呈细胞(Antigen Presenting Cells,APC)提呈抗原能力存在缺陷。因此肿瘤抗原不能被有效地提呈给T淋巴细胞并产生相应的抗肿瘤免疫。如何提高肿瘤的免疫原性并有效     

粒细胞集落刺激因子动员的外周血干细胞悬液诱导培养树突状细胞的研究

目的　研究粒细胞集落刺激因子 (G CSF)动员的外周血干细胞 (PBSC)悬液中单核细胞和造血干/祖细胞分别诱导培养的树突状细胞 (DC)的特性 ,探讨临床应用PBSC悬液诱导DC的前景。方法　健康供者经G CSF动员后采集PBSC ,分两种方法诱导培养树突状细胞 :①贴壁细胞 (单核细胞 )经粒—单核细胞集落刺激因子 (GM CSF) +白细胞介素 4 (IL 4 )培养 2周 ,培养结束前 4 8、2 4h分别加入肿瘤坏死因子 (TNF α)、布雷菲德菌素 (brefeldinA ,BFA ) ;②非贴壁细胞 (含CD34+细胞 ) ,加入Flt3Ligand(FL) +干细胞因子 (SCF) +GM CSF +IL 4培养 1周 ,再按前一种方法继续培养 2周。培养结束后 ,流式细胞仪分析细胞表型和胞质 (c)IL 10 +(PE标记 )、cIL 12 (P4 0 ) +(TC标记 )细胞。结果　新鲜标本含CD14 +细胞 ( 18 4± 8 6 ) % ,CD34+细胞 ( 0 9± 0 4 ) %。以PBSC悬液中的 2× 10 6单个核细胞为起始细胞 ,前一种培养方法获得 ( 1 6± 0 6 )× 10 5细胞 ,细胞表型 :CD11c+( 97 3± 5 2 ) % ,CD86 +( 88 2± 6 8) % ,CD83+( 5 9 6± 8 4 ) % ,HLA DR+( 96 5± 7 1) % ,CD1a+( 36 6±7 5 ) % ,cIL 12 (P4 0 ) +( 15 9± 5 1) % ,cIL 10 +( 1 2± 0 4 ) % ;后一种培养方法获得 ( 1 2± 0 4 )× 10 6细胞 ,细胞表型     

人脑胶质瘤树突状细胞疫苗的临床应用

目的探讨人脑胶质瘤树突状细胞(DC)疫苗的临床疗效。方法采集患者胶质母细胞瘤手术标本,用热休克诱导肿瘤细胞凋亡,制备符合临床应用的人脑胶质瘤DC疫苗。25例脑胶质瘤患者分为C组(12例)和DC组(13例):C组采用传统的手术及术后放化疗治疗;DC组加用DC疫苗。比较两组肿瘤局部控制率(LCR)、生存时间和生活质量的Karnofsky评级,记录并发症。结果随访2年。治疗结束后9个月时,DC组肿瘤LCR明显高于C组(69.2%vs.25.0%)(P<0.05)。DC组治疗结束后6个月及9个月的Karnofsky评级优于C组。DC组1、2年生存率明显高于C组(69.2%、7.7%vs.41.7%、0)(P<0.05)。DC组的肿瘤复发时间为(11.92±25.31)个月,明显晚于C组的(7.75±4.16)个月(P<0.05)。疫苗接种期间,患者均未出现恶心、呕吐、头痛症状,未观察到关节炎、支气管炎等自身免疫性疾病的发生。结论脑胶质瘤DC疫苗联合术后放化疗,为脑胶质母细胞瘤提供一种更有效的治疗方法。     

特应性皮炎患儿外周血DC1／DC2亚群的检测及临床意义

目的:探讨特应性皮炎(AD)患儿外周血树突状细胞亚群(DC1/DC2)的其临床意义。方法:采用免疫荧光三标记流式细胞术检测38例AD患儿外周血DC亚群(DC1/CD11c+和DC2/CD123+),并以35例正常儿童作为对照。结果:AD患儿外周血CD123+DC百分率(1.28±0.59)%,比对照组(0.69±0.25)%明显增高(P<0.05),CD11c+DC百分率(2.81±1.44)%与对照组(2.56±0.78)%相比,差异无显著性(P>0.05);AD患儿CD11c+DC和CD123+DC与疾病严重程度无关(P>0.05)。结论:特应性皮炎患儿外周血中DC2亚群占优势,导致Th1/Th2细胞向Th2类方向偏移,可能与特应性皮炎的发病机制有关。     

慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞状况的初步研究

目的 研究慢性乙型肝炎(慢性乙肝)患者外周血树突状细胞(DCs)的状况。方法 外周血单个核细胞，在含重组人白细胞介素4(rhIL-4)(500U／m1)和重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)(100ng／m1)完全培养基中培养诱导出DCs。在显微镜下观察DCs生长状况，并采用直接计数法以了解DCs的增殖速度。采用LDH法检测DCs诱导的细胞毒性T细胞(CTL)杀伤能力。以MTT法检测DCs刺激同种异体混合淋巴细胞反应的能力。结果 慢性乙肝患者外周血单个核细胞中通过诱导培养所产生的DCs的细胞数量明显少于正常人群；慢性乙肝患者的DCs的增殖速度与正常人DCs无显著性差异，但细胞发育不良。慢性乙肝患者的DCs诱导CTL杀伤作用的能力明显弱于正常人；并且在经过体外培养3、6、9天后，慢性乙肝患者的DCs刺激同种异体混合淋巴细胞反应的能力均显著低于同培养时段的正常人DCs。结论 慢性乙肝患者体内的DCs不仅细胞数量明显少于正常人，而且发育不良、功能低下。这可能是导致慢性乙肝患者抗HBV特异性免疫功能低下的重要原因之一。     

Efficacy and safety of dendritic cell vaccines for patients with glioblastoma: A meta-analysis of randomized controlled trials

BackgroundDendritic cell (DC)-based vaccination has been suggested to be promising for glioblastoma. However, the evidence in randomized controlled trials (RCTs) is inconsistent. We aimed to systematically evaluate the efficacy and safety of DC vaccine for glioblastoma via a meta-analysis of RCTs.MethodsRelated randomized controlled trials (RCTs) were identified via a search of PubMed, Embase, and Cochrane’s Library. We used a random-effect model to pool the results.ResultsSix phase II RCTs with 347 patients with newly diagnosed or recurrent glioblastoma that underwent conventional treatments were included. Compared to the control group with placebo or blank treatment, DC vaccine was associated with significantly improved overall survival in patients with glioblastoma (hazard ratio [HR]: 0.69, 95% confidence interval [CI]: 0.49 to 0.97, p = 0.03) with moderate heterogeneity (p for Cochrane’s Q test = 0.07, I² = 51%). A trend of improved progression-free survival was also detected in patients allocated to the DC vaccine group compared to those in the control group (HR: 0.76, 95% CI: 0.56 to 1.02, p = 0.07), with no significant heterogeneity (I² = 0%). Moreover, the incidence of adverse events was not significant between patients treated with DC vaccine or control (odds ratio = 1.52, 95% CI: 0.88 to 2.62, p = 0.14; I² = 0%).ConclusionsEvidence based on phase II RCTs suggests that DC vaccine may improve the survival of patients with glioblastoma. Large-scale RCTs are needed to validate the findings and determine the optimal regimens for DC vaccine.     

鸡尾酒法体外培养人外周血来源的树突状细胞

目的 探讨从健康人外周血中体外诱导培养成熟树突状细胞(DC)的方法.方法 用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞(PBMC),再用贴壁法获取单核细胞后加入人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和IL-4,培养6 d后分组:Ⅰ组为对照组,仅含上述细胞因子;Ⅱ组加入多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸(Poly I∶C);Ⅲ组加入钙离子载体(CI)A23187;Ⅳ组加入Poly I∶C和CI A23187.第8天收获细胞,显微镜下观察形态,流式细胞术检测DC表型,体外同种混合淋巴细胞反应检测DC刺激T细胞的增殖活性.结果 Ⅳ组细胞形态学观察可见典型DC特征,荧光激活细胞分离器(FACS)检测高表达CD83、CD80、CD86和CD40;混合淋巴细胞反应(MLR)表明Ⅳ组细胞具有较强的刺激T细胞增殖能力.结论 PBMC体外经过细胞因子序贯、联合诱导培养能够获得大量功能成熟的DC.     

树突状细胞疫苗注射治疗慢性乙型肝炎后外周血T细胞亚群的变化

目的研究轻度慢乙肝患者经树突状细胞疫苗治疗后外周血中T细胞亚群的改变。方法32例轻度慢乙肝患者,每次注射>106乙肝疫苗冲击树突状细胞,1次/月,共12次。于治疗前后利用流式细胞仪测定患者外周血中T细胞亚群。结果在树突状细胞疫苗治疗后有应答反应的20例患者中可见CD4+T细胞和CD8+CD28+T细胞明显增加,而CD8+T细胞和CD8+CD28-T细胞显著降低。结论树突状细胞疫苗有可能活化慢乙肝患者的免疫反应,对其治疗有一定疗效。     

胃癌患者外周血树突状细胞的体外扩增、鉴定及内吞能力测定

目的 探讨胃癌患者外周血诱导扩增树突状细胞(DCs)的方法,观察其形态、表型、内吞及递呈抗原能力.方法 从胃癌患者外周血中分离单个核细胞(PBMNCs),在重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、白细胞介素4(IL-4)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的诱导下培养扩增树突状细胞.光学显微镜观察其体外培养过程中的形态特征,流式细胞仪(FACS)分析其表型特征,混合淋巴细胞反应(MLR)检测其功能,辣根过氧化酶(HRP)内吞实验检测其群体内吞能力.结果 PBMNCs经过rhGM-CSF、IL-4和TNF-α诱导培养9 d后,具典型的DCs形态,细胞表型为主要组织相容性复合体-2(MHCⅡ)类分子(HLA-DR)(69.70±6.12)%、CD80(65.32±5.19)%、CD86(71.65±7.61)%、CD1a(58.65±3.28)%和CD14(16.82±1.25)%,具有极强的激发MLR的能力,显示成熟DCs的特征.DCs群体的内吞能力约在培养第6天达高峰,之后有明显下降.结论 该方法是一种可靠的诱导、扩增DCs的方法,在其具有活跃的内吞能力时,肿瘤抗原致敏可作为胃癌生物治疗的手段之一.     

灵芝菌丝体多糖通过增强小鼠巨噬细胞功能诱导HL-60细胞凋亡

目的探讨灵芝菌丝体粗总多糖（ＭＧＬＰ１）、总多糖（ＭＧＬＰ２）作用的小鼠腹腔巨噬细胞培养上清对ＨＬ－６０细胞凋亡的影响。方法ＭＧＬＰ１、ＭＧＬＰ２作用于小鼠腹腔巨噬细胞,生物法检测培养上清中ＴＮＦ－α的活性;再将共培养上清（ＭＧＬＰ１－ΜΦ－ＣＭ、ＭＧＬＰ２－ΜΦ－ＣＭ）作用于ＨＬ－６０细胞,ＭＴＴ法检测ＭＧＬＰ１－ΜΦ－ＣＭ、ＭＧＬＰ２－ΜΦ－ＣＭ对ＨＬ－６０细胞增殖的抑制作用;琼脂糖凝胶电泳法和流式细胞检测法定性定量检测它们对ＨＬ－６０细胞凋亡的诱导作用。结果ＭＧＬＰ１、ＭＧＬＰ２作用于腹腔巨噬细胞后,可以明显增强培养上清中ＴＮＦ－α的活性;其共培养上清可以明显地抑制ＨＬ－６０细胞的增殖并诱导该细胞凋亡（Ｐ＜０．０１）。结论ＭＧＬＰ１、ＭＧＬＰ２可以通过小鼠腹腔巨噬细胞,促进ＴＮＦ－α分泌,诱导ＨＬ－６０细胞凋亡。     

In vitro detection of contact allergens: Development of an optimized protocol using human peripheral blood monocyte-derived dendritic cells

Allergic contact dermatitis is a delayed T-cell mediated allergic response associated with relevant social and economic impacts. Animal experiments (e.g. the local lymph node assay) are still supplying most of the data used to assess the sensitization potential of new chemicals. However, the 7th amendment to the EU Cosmetic Directive will introduce a testing ban for cosmetic ingredients after 2013. In vitro alternative methods are thus being actively developed. Although promising results have been obtained with cell lines, their reduced functionality and inherent genomic instability led us to reinvestigate the use of peripheral blood monocyte-derived dendritic cells (PBMDCs) for the establishment of a reliable in vitro sensitization test. To solve the issues associated with the use of primary cells, the culture and exposure conditions (cytokine concentrations, incubation time, readout, pooled vs. single donors and cytotoxicity) were re-assessed and optimized. Here we propose a stable and reproducible protocol based on PBMDCs. This should allow a wider acceptance of PBMDCs as a reliable test system for the detection of human skin sensitizers and the inclusion of this protocol in an integrated testing strategy.