星形胶质细胞条件培养液对体外海马神经元促生长作用的研究

目的：研究不同浓度的星形胶质细胞（AS）条件培养液对新生大鼠海马神经元生长活性的影响。方法：进行新生大鼠海马神经细胞的原代培养，AS条件培养液的制备，通过测量海马神经细胞胞体直径和轴突长度及应用MTT法观察AS条件培养液对海马神经细胞生长活性的影响。结果：AS条件培养液能明显促进海马神经细胞胞体直径及轴突长度的增加，增强海马神经细胞内琥珀酸脱氢酶的活性，而且以高浓度的AS条件培养液作用最为显。结论：AS条件培养液对体外培养的新生大鼠海马神经元有明显的促生长作用。     

胎鼠海马神经细胞的原代培养及鉴定

目的建立较理想的SD大鼠胎鼠海马神经细胞体外原代培养方法。方法孕18 d(E18)SD大鼠的胎鼠,采用胰酶消化和机械分离相结合的方法进行海马神经元的原代无血清培养。结果在体外培养条件下神经细胞结构特征明显化,并能形成典型的神经细胞网络。结论该培养技术是海马神经细胞体外培养的理想方法。     

谷氨酸对原代培养海马神经细胞兴奋毒作用的研究

为更清楚地了解药物对神经元的损伤和保护作用，在体外对新生大鼠（０－１ｄ）海马神经细胞进行原代培养，建立了谷氨酸对原代培养海马神经细胞兴奋性神经毒损伤模型。通过检测神经细胞乳酸脱氢酶泄漏率和相关显微镜下对神经细胞形态变化的观察，发现只有发育成熟的神经元对谷氨酸兴奋毒损伤最敏感，神经元的兴奋毒损伤对谷氨酸在一定范围内有剂量信赖性或接触时间依赖性关系，提示谷氨酸通过与其受体结合造成神经元兴奋毒损伤。     

谷氨酸对原代培养海马神经细胞兴奋毒作用的研究

为更清楚地了解药物对神经元的损伤和保护作用，在体外对新生大鼠（０～１ｄ）海马神经细胞进行原代培养，建立了谷氨酸对原代培养海马神经细胞兴奋性神经毒损伤模型。通过检测神经细胞乳酸脱氢酶泄漏率和在相差显微镜下对神经细胞形态变化的观察，发现只有发育成熟的神经元对谷氨酸兴奋毒损伤最敏感，神经元的兴奋毒损伤对谷氨酸在一定范围内有剂量依赖性或接触时间依赖性关系，提示谷氨酸通过与其受体结合造成神经元兴奋毒损伤。     

狂犬病病毒街毒株对体外培养小鼠海马神经元的损伤作用及其机制

目的：探讨狂犬病病毒街毒株（RV）感染神经细胞的形态学表现,揭示狂犬病病毒致神经功能异常的机制。方法：体内实验,20只C57/BL小鼠随机分为实验组和对照组,每组10只,实验组小鼠脑内接种30 μL　RV病毒液（10TCID50）,对照组小鼠脑内接种等量细胞维持液,利用抗RV抗体检测病毒抗原在小鼠脑组织的分布。体外实验,培养原代海马神经细胞,培养1周后,感染狂犬病病毒,免疫荧光检测感染72、96和120 h后病毒的增殖情况。结果：体内实验,狂犬病病毒感染4 d后,在海马CA1区锥状神经元胞体和树突中均能检测到狂犬病毒抗原;狂犬病病毒感染7 d后,仅在海马CA1区胞体中检测到狂犬病病毒抗原。体外实验,狂犬病RV感染体外培养的原代神经细胞120 h后,感染的神经元数量最多,且感染的神经元树突数量减少。结论：狂犬病RV可感染、损伤海马CA1区树突,从而引起小鼠神经功能异常。     

花生四烯酸和二十二碳六烯酸对海马神经细胞生长发育的影响

目的：观察不同浓度花生四烯酸（AA）和（或）二十二碳六烯酸（DHA）对体外培养海马神经细胞生长发育的影响。方法：无血清培养液中分别加入不同剂量的AA和（或）DHA，采用噻唑蓝比色试验（MTT法）反映各组海马神经细胞存活状况，神经元特异性烯醇化酶（NSE）染色鉴定神经细胞，图像分析技术测量神经细胞的胞体大小和突起长度。结果：培养液中分别添加AA为4－8μmol/L,DHA为2－8μmol／L时，神经细胞活力高于对照组；当培养液中AA和DHA总浓度为4μmol/L，比例为2：1或4：1时，神经细胞的活力，胞体面积，最大长径，最大短径和平均突起长度均显高于单一添加4μmol/LAA，4umol/L DHA和对照组。结论：AA，DHA均具有促进体外培养海马神经细胞生长发育的作用。与单独添加AA，DHA相比，AA和DHA共同作用的促海马神经细胞生长发育作用更好。     

SD乳鼠海马神经细胞原代培养方法的探讨

目的 寻求一种简单、廉价的原代SD乳鼠海马神经细胞培养方法.方法 采用胰蛋白酶消化法制备游离海马神经细胞悬液,进行培养.结果 通过多次探索、观察、成功的进行了原代海马神经细胞培养.结论 本方法适合一般实验室开展海马神经细胞培养.     

原代海马神经细胞体外培养的纯化与鉴定

目的 建立原代海马神经细胞体外培养纯化及鉴定的优选方法.方法 取新生Wistar乳鼠,分离海马后在体外采用含血清结合无血清法进行培养,并用NSE、GAP-43、MAP2等海马神经细胞特异抗体经免疫细胞化学方法鉴定细胞性质及纯度.结果 接种24 h后细胞全部贴壁,并长出突起,随时间增加,突起延长并交错形成网络,至第7～8天神经元形态最为成熟饱满,随后逐渐出现细胞老化,神经元最长可生存4周.经鉴定,海马神经元纯度达96%以上.结论 体外采用含血清和无血清法相结合进行原代海马神经细胞培养,细胞纯度高,杂细胞少,可为神经疾病体外研究提供必要细胞基础.     

原代培养神经细胞的乙酰胆碱脂酶染色技术

原代培养神经细胞的乙酰胆碱脂酶染色技术包峰，高杰，李永明（脑研究所神经解剖研究室）关键词原代培养，神经元，乙酰胆硷脂酶类，染色体外培养神经细胞是神经学研究的重要手段之一。培养神经细胞的乙酰胆碱脂酶（Ａｃｅｔｙｌ－ｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ，ＡｃｈＥ...     

体外培养海马神经干细胞的分化及超微结构观察

目的：研究胎鼠海马神经干细胞（NPCs）体外培养方法、了解其分化及超微结构特点．方法：分离胎鼠海马NPCs,应用机械分离法将海马组织制成单细胞悬液,用含有bFGF和EGF的无血清培养基培养,传代后用含血清培养基促分化,免疫细胞化学方法对NPCs及其分化后的子代神经细胞进行鉴定,并在电镜下观察分化后细胞的形态结构特征．结果：海马NPCs在无血清培养基中悬浮成球,贴壁后,细胞逐渐从细胞球向周围迁移分化．体外培养胎鼠海马NPCs表达巢蛋白（nestin）,在体外可诱导分化产生分别表达Tuj-1和GFAP的神经细胞．电镜观察到分化后的神经细胞及突起相互间排列、具有各种细胞器结构,可见细胞间紧密连接,完整的突触结构．结论：采用无血清培养基中加入特定生长因子的培养技术,可培养出在体外稳定增殖并有多向分化潜能的大鼠胚胎NPCs．     

”微岛“原代培养新生大鼠中脑腹侧多巴胺能神经元

目的 探讨“微岛”原代培养中脑腹侧多巴胺能神经元的方法,研究不同培养液维持多巴胺能神经元存活和生长的效果,及多巴胺能神经元与其他神经元在“微岛”上的共培养,为多巴胺能神经元的相关研究提供一种新的细胞模型。方法 利用神经细胞不能粘附于琼脂糖上生长的原理,先用琼脂糖制成非粘附性底物,再将胶原喷洒其上形成粘附性的“岛”样底物,接种神经胶质细胞形成微岛样饲养层后,将大鼠中脑腹侧神经元接种于“微岛”上生长。结果 中脑腹侧多巴胺能神经元可在“微岛”上生长,即使单个神经元也生长良好。在共培养时,能与其他神经元形成突触联系。结论 确定适于“微岛”原代培养中脑腹侧多巴胺能神经元的培养条件,该培养法可为多巴胺能神经元的相关研究提供一种新的细胞模型。     

用微环境小室培养相对单一的海马原代神经细胞

采用我室自己创建的相对恒定微环境小室培养法，对新生大鼠海马进行了原代分离培养。在不用抑制胶质细胞生长的药物情况下，成功地得到了相对单一的神经细胞培养物和单神经元网络，为进一步开展神经生物学研究，提供了很好的体外模型。     

睫状神经营养因子对N-甲基-D-天冬氨酸引起海马神经元内钙离子浓度升高的影响

①目的　研究睫状神经营养因子 (CNTF)对谷氨酸 (Glu)受体激动剂N 甲基 D 天冬氨酸 (NMDA)引起的海马神经元内游离Ca2 + 浓度 ([Ca2 + ]i)升高的影响 ,并探讨G蛋白是否参与此作用。②方法　原代培养海马神经元 ,用活细胞内荧光探针Fura 2 /AM实时检测应用CNTF和G蛋白抑制剂百日咳毒素 (PTX)后由NMDA引起的海马神经元 [Ca2 + ]i 的变化。③结果　用CNTF孵育经NMDA刺激的海马神经元后 ,细胞内 [Ca2 + ]i 升高的程度较单独NMDA刺激细胞引起的 [Ca2 + ]i 升高程度低 (t=2 .97～ 4 .86 ,P <0 .0 5 ) ,加入PTX可减弱CNTF的抑制作用。④结论　G蛋白可能参与CNTF调节NMDA引起的海马神经元内 [Ca2 + ]i 升高的快速作用途径     

大鼠皮层神经元原代培养方法的改进

目的:建立一种简单、较理想的新生大鼠皮层神经元体外原代培养方法.方法:采用低浓度、短时间胰酶消化和机械分离相结合的方法制备皮层神经元悬液,进行培养.结果:在体外培养条件下神经元结构特征明显,并能形成典型的神经元网络.结论:本方法适合普通实验室进行大鼠皮层神经元体外培养.     

新生大鼠脊髓神经干细胞的分离培养及鉴定

目的　从新生大鼠的脊髓中分离培养神经干细胞并观察其增殖和分化能力。方法　采用细胞培养技术结合间接免疫荧光细胞化学法。结果　分离的细胞生长旺盛 ,单克隆化生成的细胞团 ,BrdU掺入呈强阳性。分离培养获得的细胞团呈Nestin强阳性 ,至今已在体外连续传代 8个月。培养的细胞团经 1%小牛血清诱导可分化为神经元和星形胶质细胞。结论　成功分离培养了新生大鼠脊髓神经干细胞     

大鼠皮质神经元的体外培养和纯化

目的：探讨大鼠皮质神经元分离纯化的有效方法。方法：取胎鼠大脑皮质细胞，分别在不同的培养液中进行原代培养，利用相差显微镜对培养的细胞进行动态观察；并以免疫细胞化学技术对神经元进行染色。结果：在相差显微镜下可见加用N2添加剂和胎牛血清培养的神经元生长良好，胞体形态多样，突起数目多，长度长，与邻近神经元的胞体或突起形成接触，而胶质细胞则大量死亡，神经元纯化率达94％以上，未加用N2添加剂培养的神经元胶质细胞大量存在，神经元纯化率达50％左右。结论：N2添加剂和胎牛血清联合应用可使大鼠皮质神经元得到良好的生长和有效纯化。     

人脑神经干细胞的分离培养和鉴定

目的 探讨人脑神经干细胞的分离培养和鉴定方法。方法 采用无血清培养液从人胚胎脑皮质分离和培养神经干细胞，并应用免疫荧光技术进行细胞自我更新能力、巢蛋白表达和多向化潜能的鉴定。结果 鉴定表明从人胚胎脑皮质分离培养的细胞具有神经干细胞的特征，并可在体外增殖，经诱导可分化为神经元、星型胶质细胞和少突胶质细胞。结论 从人胚胎脑皮质成功分离培养了神经干细胞，它是研究细胞诱导分化的良好模型。     

深低温长期保存兔角膜内皮细胞体外培养的实验研究

①目的观察深低温保存后兔角膜内皮细胞的活性。②方法将深低温保存兔角膜与新鲜兔角膜进行内皮细胞体外培养对比观察。③结果在培养７ｄ内,深低温保存的角膜内皮细胞较新鲜角膜内皮细胞滞后１～２ｄ生长,１４ｄ以后二者逐渐趋于一致。④结论经深低温长期保存的兔角膜内皮细胞仍保持良好的生长活性