草鱼生长激素单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及鉴定

用经草鱼生长激素(gcGH)免疫的BALB/c小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(Sp2/O-Ag14)融合,经3次克隆化培养和ELISA筛选,得到7株阳性杂交瘤细胞株,其中2株为强阳性。交叉试验表明,这些杂交瘤细胞株所分泌的单克隆抗体(McAb)同大鳞大马哈鱼生长激素(sGH)、大鳞大马哈鱼促性腺激素(sGTH)及牛生长激素(bGH)均不起反应。小鼠腹水McAbs滴度高达1:1280000。受体-gcGH-McAb夹心试验表明,McAb确与有活性的gcGH有特异反应。用间接ELISA方法可检测到浓度为0.125#g/ml的gcGH。     

小鼠杂交瘤细胞系的建立及抗兔IgG单克隆抗体的应用

经三次免疫一次细胞融合,得到分泌抗兔IgG的杂交癌细胞克隆27个。细胞融合率100％,阳性孔率4％。经筛选和克隆化培养建立了杂交瘤细胞系3C8E4和6A3H6,其免疫球蛋白分别为IgG2a和IgG3。3C8E4腹水抗体滴度超过1：1024000。 3C8E4除和兔IgG有反应外,还和人与马IgG有反应;6A3H6只和兔IgG有反应,与其它七种动物和人lgG无交叉反应。经用过碘酸盐法将3C8E4 Mab和辣根过氧化物酶标记,制得酶标抗体,当使用浓度为1：10000时,其OD>2．0。用该酶标记抗体ELISA法检测植物病毒PVX、PVY、TEV和 TuMV效果良好。     

研制确定特异性兔单克隆抗体的稳定的兔-鼠杂交瘤

<正> 杂交瘤技术现已达到可制备抗大多数抗原的单克隆抗体的程度。可是,某些免疫原在小鼠体内免疫应答较差,并且通常很难得到具有确定表位特异性的高亲和力鼠单克隆抗体。这些问题通过曾报道的为数不多的分泌抗A群链霉菌(GAS)特异单克隆抗体的鼠杂交瘤而有所反映。     

杂交瘤技术和单克隆抗体的专利问题

单抗药物代替重组蛋白药物已成为生物技术药品中的主导产品。上世纪80年代末以来,利用基因工程手段构建嵌合抗体或人源化抗体为发展治疗性单抗药物带来突破。上世纪90年代,美国旧金山南部的ＧｅｎｅｎｔｅｃｈＩｎｃ.开发了治疗乳腺癌的新药Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ,1998年11月该药物上市。该药物也是治疗其他疾病的辅助药物。2000年第一季度,该药的销售收入达到6870万美元。90年代中,美国Ｇｅｎｅｔｅｃｈ、ＩＤＥ?...     

分泌抗马铃薯Y病毒单克隆抗体的大鼠杂交瘤细胞系的建立及抗体稳定性测定

用大鼠的骨髓瘤细胞系(1R983)与经马铃薯Y病毒(PVY)免疫的大鼠(LOU／c)脾细胞融合,建立了3类分泌抗该病毒株系特异性单克降抗体(McAB)的杂交瘤细胞系。其一对 PVYn具有特异性反应,其二对PVYo。具有特异性反应;其三对PVY n和PVYn。均产生反应。经用ELIAA双抗体夹心法和ELlsA间接法检测,上述(McAb)同TMv、CMV、TEV,AMV、 TuMV、PLRV,PVX七种植物病毒均不产生交叉反应。对上述杂交瘸纲胞系和McAb的生 物学特性及理化特性进行了鉴定。     

杂交瘤单克隆抗体研制中细胞的冻存与复苏

细胞的冻存与复苏是杂交瘤单克隆抗体(MCAb)研制中的一个重要环节.如果这个问题不解决,不但融合得不到成功,而且得到有价值的杂交瘤也会丧失掉.一、细胞的冻存在液氮中冷冻是保存杂交瘤细胞(或骨髓瘤细胞)最好的方法.在MCAb的研制中,一旦测得较有价值的阳性孔,就要一面进行克隆化,一面扩大培养,并冻存起来,以防体     

连续灌流培养杂交瘤细胞生产单克隆抗体

自 2 0世纪 70年代以来 ,工程抗体在基础医学研究、临床诊断和治疗 ,以及免疫预防等领域中的广泛应用 ,大大促进了其产业化的进程。目前工业化生产单克隆抗体的主要方法是通过发酵罐、中空纤维和固定床等生物反应器培养系统 ,以微载体、微包囊法在体外大规模高密度培养杂交瘤细胞 ,再通过相关的纯化手段浓缩纯化制备抗体[1 ,2 ] 。就操作方式而言 ,一般采用两个基本策略 :①大容量高密度的悬浮培养 ,最多采用的是搅拌式气升式生物反应器 ,通过微载体依托细胞相对固定化 ,降低了搅拌培养时对细胞的剪切力 ,提高细胞的密度和稳定性及生产率。…     

RESULTS OF AN ATTEMPT TO OBTAIN PYRENOIDS OF ZYGNEMA BY BULK-ISOLATION METHODS1,2

Filaments of Zygnema were blended 3 min in a buffered sucrose solution, and a pyrenoid-rich cell fraction was obtained by filtration through a 10-μ filter. The filtrate was placed on a 35%/40%/50% (wt/wt) discontinuous sucrose density gradient and was spun at approximately 50,000 × g for 1/2–1 hr. Pyrenoids, which were collected at the 40%/50% interface, appeared with light microscopy to be firm, intact, spherical, colorless refractive bodies. Although in situ pyrenoids stained with propionocarmine, isolated pyrenoids would not stain, indicating a change in the chemical properties of pyrenoids during the isolation procedure.     

一种改良制备磷酸钙-DNA共沉物的方法

一个基因被克隆后,人们总希望将其导入不同类型细胞内,以研究基因调控、基因表达、分离特定蛋白质产物等。要完成这些目的,都必须将ＤＮＡ有效地导入细胞。磷酸钙法是当前较为常用的将ＤＮＡ导入真核细胞的方法之一。此法成功的关键在于制备理想的磷酸钙—ＤＮＡ共沉物...     

引导呼吸提高急性缺氧耐力的探讨

我们推导了一个为达到一定的P_(AO_2)所需要的计算公式。据此对被试者制定了在5km高度上P_(AO_2)=5.9kPa和在7km高度上P_(AO_2)=4.4kPa的引导呼吸曲线。引导被试者有意识地控制呼吸,使呼吸频率和幅度尽量同引导曲线一致。结果表明,引导呼吸同自然呼吸相比,被试者的和Sao_2有显著提高。心电图T波幅度降低较少,在5km降低了循环功能障碍发生率,在7km降低了意识障碍发生率,减轻了缺氧症状。     

脏器微血管对荧光素钠通透性的实验方法

大鼠颈动脉注射１％ＦｌＮａ,荧光显微镜下活体观察肠系膜微血管血流状态及ＦｌＮａ的渗出情况,并在不同时间点经股动脉采血,测定血浆内ＦｌＮａ浓度随时间的变化,利用组织匀浆测定不同脏器中ＦｌＮａ的分布,再辅以冰冻切片进行观察。活体观察发现,ＦｌＮａ注入体内后,经微血管迅速向周围组织渗出,最后汇集于淋巴管,血浆及组织匀浆ＦｌＮａ浓度的测定表明,ＦｌＮａ浓度随时间的变化呈指数衰减,各脏器ＦｌＮａ的分布极不相同。冰冻切片也显示了同样的分布差别。这些结果表明,我们所建立的方法可直观、定量地反映ＦｌＮａ在微血管的通透情况。     

相对速率检验方法与实用程序

相对速率检验是检验分子钟假设正确与否的一种有效工具。本文简要介绍了该方法的基本原理,提出了一种新的序列差异计算矩阵,并应用Ｖｉｓｕａｌ Ｂａｓｉｃ语言编制了一个相对速率检验程序。     

MEASURING SELECTION ON REACTION NORMS: AN EXPLORATION OF THE EUROSTA-SOLIDAGO SYSTEM

The sensitivity of genotypic expression to the environment can be depicted as the reaction norm, which is defined as the array of phenotypes produced by a single genotype over a range of environments. We studied selection on reaction norms of the gall-inducing insect Eurosta solidaginis (Diptera; Tephritidae), which attacks tall goldenrod Solidago altissima (Compositae). Gall size was treated as a component of insect phenotype and attributes of the host plant as environmental influences on gall development. Genetic differences in the response of gall size to plant lag time (the number of days before a plant responds to the gall maker) were examined. Reaction norms for full-sib families of flies were quantified as linear functions; the elevation of the function denoted gall size produced by the family averaged across all plants, and the function's slope denoted family sensitivity to lag time. Expected fitness of each family was regressed over reaction norm elevation and slope to yield selection gradients on these reaction norm parameters. Directional selection on gall size averaged across environments is four times stronger than selection on sensitivity. Yet, genetic variation for sensitivity contributes more than twice as much to gall phenotypic variance as family mean gall size. Our results suggest that selection on environmental sensitivity will be weak for populations restricted to a narrow segment of an environmental gradient, but strong for broadly distributed species.