腺病毒介导的p53基因治疗肝癌的给药途径研究进展

目前腺病毒介导的p53基因(rAd/p53)治疗肝癌主要的给药方式有选择性肝动脉给药、经门静脉给药、瘤内注射以及静脉给药等.就应用rAd/p53的安全性及不同给药途径进行综述.     

重组人p53腺病毒制品治疗原发性肝癌的进展

近几年来,利用抑癌基因治疗原发性肝癌逐渐成为研究的热点之一,重组人p53腺病毒(rAd-p53)制品治疗原发性肝癌也越来越受到高度关注。本文通过总结近几年这方面的研究进展,以评价其临床应用价值与发展前景。     

p53基因治疗肿瘤的研究进展

ｐ5 3被称为“基因组卫士” ,在机体组织细胞的生长发育分化等过程中起重要作用。其主要生物学功能是维持细胞基因组的稳定 ,负调节细胞生长 ,诱导细胞凋亡。研究发现人类恶性肿瘤中至少有 5 0 %发生了ｐ5 3基因改变 ,因此以ｐ5 3基因治疗肿瘤的研究发展非常迅速。最近 ,有学者引入介入技术经肿瘤供血动脉直接灌注重组ｐ5 3,为ｐ5 3基因治疗肿瘤开辟了一条新途径。笔者就肿瘤中ｐ5 3基因突变情况以及ｐ5 3基因治疗的研究进展予以综述。一、ｐ5 3基因及其产物的结构和特性ｐ5 3是一种重要的抑癌基因 ,是目前抑癌基因研究中最令人瞩目者。人类…     

腺病毒介导的p16和p53的联合应用对胆管癌细胞QBC939的生长抑制作用

为研究p16和p53基因的联合应用对胆管癌细胞的作用,将重组体腺病毒p16、p53、p16联合p53转移到人胆管癌细胞QBC939,对p16、p53基因的表达,细胞的生长抑制及机制进行了分析。RT－PCR显示在胆管癌QBC939细胞系中p16呈低表达,p53不表达,重组体腺病毒能介导p16和p53等外源基因在胆管癌QBC939细胞系中高效表达,两者联合应用能明显抑制QBC939细胞的生长和集落形成。流式细胞计数证实其能诱导,QBC939细胞发生明显半调并导致其发生G1期阻滞,本研究显示p16及p53基因通过诱导肿瘤细胞凋亡及G1期阻滞在肿瘤的基因治疗方面发挥作用,两者联合应用具有协同作用。     

重组腺病毒p53基因联合TACE介入治疗原发性肝癌的探讨

目的探讨重组腺病毒p53基因(rAd-p53)联合肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗原发性肝癌的疗效及安全可行性。方法对临床明确诊断为原发性肝癌的16例患者,采用动脉途径rAd-p53+TACE联合介入治疗,治疗30 d后按照2001年《肝癌介入治疗规范化条例(草案)》标准进行疗效评价。结果明显好转5例,好转6例,稳定4例,进展或恶化1例,除出现部分病人腹痛,发热,轻微恶心,咳嗽及短期内一过性丙氨酸和天冬氨酸氨基转氨酶升高外,未出现其他不良反应及并发症。结论动脉途径rAd-p53联合TACE治疗原发性肝癌是安全可行的,近期疗效满意。     

腺病毒介导人p53抑癌基因对肝癌细胞系HepG2生物学行为的影响

研究腺病毒介导入野生型Ｐ５３抑制肝癌细胞系ＨｅｐＧ２生物学行为的影响。构建含人野生型Ｐ５３抑癌基因的生组腺病组载体，导入肝癌细胞系ＨｅｐＧ２后，分别用光镜，电镜ＴＵＮＥＬ法检测细胞凋亡发生和在裸鼠体内的成瘤性改变。     

动脉灌注p53基因治疗晚期肝癌的初步临床应用

目的 初步观察动脉灌注p53基因治疗晚期肝癌的疗效.方法 晚期肝癌30例,治疗组14例,对照组16例.根据造影表现决定灌注药物的靶动脉,治疗组在靶动脉注入p53基因,每次用1012VP,加羟基喜树碱20 mg,每周1次,连用3周为1疗程,14例患者分别接受1～4疗程的治疗.对照组给予羟基喜树碱20 mg肝动脉灌注.结果 治疗组生存期最小14 d,最长405 d,平均238.1 d.对照组生存期最小18 d,最长167 d,平均80.7 d.两者相比较,P＜0.05,有显著差异.结论 p53基因治疗晚期肝癌有效.     

腺病毒载体介导mIL-12基因治疗联合放射治疗小鼠肝癌的研究

目的：观察腺病毒介导白介素－12基因治疗联合放射治疗协同抗小鼠肝癌作用。方法：荷肝癌动物模型,肿瘤局部γ射线照射后,瘤内注射AdmIL-12腺病毒,取组织标本进行ELISA及CTL活性检测,免疫组化染色等分析。结果：联合治疗小鼠肿瘤生长受到抑制,体积明显缩小,并可使50％的小鼠肿瘤完全染色等分析。结果：联合治疗小鼠肿瘤生长受到抑制,体积明显缩小,并可使50％的小鼠肿瘤完全消退,疗效显著优于单纯照射组和瘤内注射AdmIL-12及其其他对照组（P＜0．01）。而单纯瘤内注射AdmIL-12组的疗效并不优于单纯照射组（P＞0．05）。联合治疗组小鼠血清和脾细胞的培养上清中可见INF-γ水平的显著提高,并诱导产生特异性的CTL活性。免疫组化结果显示,联合治疗组肿瘤组织中见有大量CD4^ 、CD8^ 阳性淋巴细胞的浸润。结论：腺病毒介绍导白介素12基因治疗与放射治疗的联合具有协同抗肿瘤作用,并诱导产生特异性抗肿瘤免疫反应。     

辐射联合外源性野生型p53基因对不同p53状态的黑色素瘤细胞系的生物学效应

目的研究辐射结合腺病毒（Ad CMV）载体介导的p53基因转导对不同p53状态的人黑色素瘤细胞系基因转移效率、凋亡和辐射敏感性的影响。方法用复制缺陷的重组腺病毒载体（AdCMV-p53）介导入p53基因转导1Gy X射线预照射的黑色素瘤细胞系A375（wt p53）和WM983a（mu p53），RT-PCR检测mRNA水平，流式细胞仪测定细胞周期阻滞及外源性P53蛋白表达情况，Tunel法检测细胞凋亡，克隆形成率测定辐射后细胞存活率。用携带报道基因的复制缺陷重组腺病毒载体AdCMV-GFP作为对照。结果1Gy X射线照射可较高地增加AdCMV-p53对A375和WM983a细胞系的基因转导效率，转导的外源性野生型p53可在两种细胞中高效表达，并诱导细胞周期G1期阻滞；单纯转导p53对A375（wt p53）细胞无明显诱导凋亡和生长抑制效应，但可部分诱导WM983a（mu p53）细胞凋亡；而转导p53基因48h后给予X射线辐射，两种细胞的克隆存活率较其对照组均明显减低，外源性p53基因对WM983a（mu p53）细胞的辐射增敏作用较A375（wt p53）细胞明显。结论外源性野生型p53基因过表达可增加黑色素瘤细胞系A375和WM983a的辐射敏感性，但对WM983a细胞系的辐射增敏作用高于A375细胞系。表明p53是基因治疗黑色素瘤较好的候选基因。     

人类腺病毒载体介导的基因治疗研究进展与展望

人类腺病毒（Ａｄ）基因治疗载体的独特优点在于，具有携带大片段ＤＮＡ的潜力，很高的体外培养增殖滴度，能感染分裂期后的非复制性细胞，适于感染原位组织，尤其是肺脏等。研究证实，Ａｄ能将外源基因转移到小鼠肝脏和肺上皮、棉鼠气管上皮、大鼠和小鼠脑细胞、人内皮细胞或肌肉组织中，并获得成功表达。因此，Ａｄ载体作为有效的基因治疗载体愈来愈受到重视，如今已成为科技前沿领域的一大研究热点和重点。本文举例介绍了人类腺病     

p53基因治疗恶性肿瘤的现状与趋势

恶性肿瘤的治疗包括手术、放疗、化疗和生物治疗 ,基因治疗是生物治疗的主要内容 ,该领域的研究正方兴未艾 ,p53基因治疗恶性肿瘤越来越受到人们的重视。本文对p53基因的结构和功能以及该基因治疗恶性肿瘤的现状和趋势作一综述。1　p53基因治疗恶性肿瘤的理论依据　　p53基因是     

经导管动脉注入脂质体介导的p53基因治疗肝癌的实验研究

目的 以兔VX2肝癌模型为对象,探讨经导管动脉注入脂质体介导的p53基因治疗肝癌的可行性及转染和表达情况.方法 将pCMV-myc-p53质粒、阳离子脂质体LipofectAMINE以及pCMV-myc-p53和LipofectAMINE的复合体分别注入兔VX2肝癌模型的肿瘤供血动脉,并提取肿瘤组织蛋白,采用蛋白印迹法及免疫组化检测基因转染及其表达.以不同量的pCMV-myc-p53与LipofectAMINE形成的复合体分别注入兔VX2肝癌模型的肿瘤供血动脉内,同法检测基因的转染及其表达.结果 脂质体介导的p53基因经动脉途径成功转染了兔VX2肝癌模型的肿瘤组织并进行表达,其转染效率明显高于单纯基因导入,基因的量与转染效率之间存在量效关系.结论 经动脉途径导入脂质体介导的p53基因治疗肝癌是可行、有效的,具有广阔的应用前景.     

p53基因与原发性肝癌放疗关系研究进展

近年来随着对肝癌的照射方法和范围的改进,由全肝照射-局部照射-全肝移动放照射-手术定位局部照射和超分割照射等,使肝癌放疗效果明显提高,副作用显著降低。但是单独的放疗在肝癌的治疗中依然存在重要缺陷,联合基因治疗的综合治疗有着良好前景。     

腺病毒介导p53基因转染增加人胃癌细胞的放射敏感性

目的评价腺病毒介导p53基因(Adp53)转染对人胃癌细胞的凋亡效应和放射增敏作用。方法以重组腺病毒介导p53基因感染4种不同p53状况的人胃癌细胞，用免疫组织化学法和Western blot法检测P53蛋白在胃癌细胞中的表达；用细胞集落形成法检测细胞存活率；用TUNEL法检测细胞凋亡。胃癌细胞感染Adp53后照射4Gy，用流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡；胃癌细胞种植肿瘤内注射Adp53后照射6Gy，以肿瘤相对体积增长曲线观察肿瘤抑制情况。结果1：100效靶比(MOI)Adp53产生细胞高转染率，以及p53基因在4种胃癌细胞中均高表达，并产生G2/M期阻滞、凋亡增加和细胞增殖抑制。如果以凋亡评价放射效应，Adp53转染对4Gy照射4种细胞的凋亡率比值为：W细胞3．0，M细胞3．6，neo细胞2．2，823细胞2．5。体内实验结果显示，Adp53对w细胞肿瘤6Gy照射的抑瘤率比值为1．41，而对M细胞肿瘤为1．91。结论腺病毒介导p53基因转染产生细胞凋亡并提高人胃癌细胞的放射敏感性，这种作用不依赖于细胞内在的p53状况。     

重组人p53腺病毒注射液联合顺铂胸腹腔内注射治疗恶性胸腹水疗效观察

目的 观察胸腹腔内注射重组人p53腺病毒注射液联合顺铂治疗恶性胸腹水的疗效.方法 选择住院治疗的42例恶性胸腹水患者,随机分为两组,每组21例.观察组先将胸腹水经穿刺放液尽量引流后,胸腔内灌注重组人p53腺病毒注射液2×10^12 VP,腹腔内灌注重组人p53腺病毒注射液4×10^12 VP,灌注后帮助患者改变体位,24 h后再注入顺铂40 mg/m^2,每周重复1次,4次为一疗程.对照组只应用顺铂.观察患者接受治疗后的临床症状评分、生活质量、卡氏评分及不良反应等的变化,同时记录生存期.结果 观察组疾病控制率（CR＋PR＋SD）为85.7%（18/21）,对照组为57.1%（12/21）（P＜0.05）.观察组生存质量卡氏评分提高率为76.2%（16/21）,对照组为38.1%（8/21）（P＜0.05）.结论 胸腹腔内注射重组人p53腺病毒注射液联合顺铂治疗恶性胸腹水的临床疗效好,具有重要的临床价值,不良反应轻微.     

肝癌介入治疗中应用p53的几个要点

重组人p53腺病毒注射液(recombinant human adenovirus p53,Ad-p53)已被用于与多种局部治疗方法联合治疗肿瘤.本文介绍在肝癌介入治疗过程中联合应用Ad-p53,应该重点研究两者的机制,最大限度地发挥它们抗肿瘤的协同作用.提出瘤内注射是首选的基因给药途径,建议单个肿瘤注射Ad-p53的最低用量,以及注射Ad-p53后进行肝癌介入治疗的最佳时机.介绍以p53为靶点的治疗方法有好几种理论基础,有些方法甚至相互对立,因此在治疗前须先明确要对p53进行激活还是抑制.最后提出应用Ad-p53治疗晚期恶性肿瘤应慎莺选择病例.     

p53腺病毒重组体转染对p53缺失肿瘤细胞辐射敏感性的影响

目的观察p53腺病毒重组体（AdCMV-p53）转染对p53缺失肿瘤细胞辐射敏感性的影响。方法用腺病毒重组体（AdCMV—p53／GFP）转染经0、0．25、0．5、1．0、1．5、2．0Gyγ射线辐射的H1299（nullp53）和PC-3（nullp53）细胞，用流式细胞分析法检测外源性p53表达，用克隆形成法检测肿瘤细胞增殖能力。结果辐射联合AdCMV-p53转染组p53阳性细胞所占比例均明显高于单纯辐射组、单纯AdCMV—p53转染组和辐射联合AdCMV—GFP转染组同种细胞p53阳性率（P〈0．05）；AdCMV—p53转染不仅明显提高肿瘤细胞辐射敏感性，而且与肿瘤细胞组织来源有关。结论p53腺病毒重组体转染对p53基因缺失肿瘤细胞低剂量辐射敏感性的增强作用与肿瘤细胞来源的组织器官和细胞类型有关。     

肝癌基因治疗的现状与未来

肝癌的发生与其他肿瘤一样,是一个多基因参与、多步骤的复杂过程。患者就诊时多数已属晚期,治疗效果差,病死率高。近年来,随着分子生物学的迅速发展以及基因工程技术的进步,使得肿瘤的基因治疗成为继外科手术切除、放化疗、介入治疗后的又一种新的治疗模式。本文就国内外肝癌基因治疗研究中有关基因导入方法及给药途径、基因治疗策略、存在的问题及未来发展方向作一综述。     

重组人p53腺病毒注射液对人淋巴瘤细胞的作用及辐射敏感性的影响

目的 探讨重组人p53腺病毒注射液对人淋巴瘤细胞的抑制作用及其辐射增敏性。方法 利用四氮唑盐(MTT)比色法分析重组人p53腺病毒注射液、放射治疗以及两者联合应用对人淋巴瘤细胞Raji 和Daudi的抑制作用;通过蛋白质的Western印迹分析法(Western blotting)分析淋巴瘤细胞内P53蛋白的表达;应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测淋巴瘤细胞内p53基因的mRNA表达。结果 MTT结果显示重组人p53腺病毒注射液对人淋巴瘤细胞具有一定的抑制作用,但抑制作用不显著,Raji 及Daudi 细胞最大剂量的抑制率分别为27.5%±4.1%和28.1%±1.6%,也未见明显的辐射增敏效应。Western blotting和RT-PCR结果表明,外源性P53蛋白和p53基因的mRNA均有所表达,但未见高效表达和明显的辐射增敏性。结论 重组人p53腺病毒注射液对人淋巴瘤细胞的抑制作用及辐射增敏性不显著。     

p53在肿瘤基因治疗中的应用进展

ｐ５３基因在机体组织细胞的生长发育分化等过程中起重作用。其主要生物学功能是维持细胞基因组的稳定,负调节细胞生长,诱导细胞凋亡。研究发现人类恶性肿瘤中至少有５０％发生了ｐ５３基因改变,因此以ｐ５３基因治疗肿瘤的研究发展非常迅速。最近,有学者引入介入技术经肿瘤供血动脉直接灌注重组ｐ５３,为ｐ５３基因治疗肿瘤开辟了一条新途径。本文就肿瘤中ｐ５３基因突变情况以及ｐ５３用于基因治疗的研究进展予以综述。一、ｐ５３基因及其产物的结构和特性人类ｐ５３基因位于１７号染色体的短臂上（１７ｐ１３．１）,全长１６～２…