Gap-PCR作为临床一线α-地中海贫血携带者筛查技术的应用评价

目的评价检测中国人3种常见的缺失型α-地中海贫血(地贫)基因的gap-PCR作为临床一线α地贫携带者筛查技术的可行性。方法 以双盲试验对随机抽取的382份血样同时采用gap-PCR分子筛查技术和血液学分析法分别检测α-地贫基因型和α-地贫表型,并以 Southern blot分析法作平行对照分析。结果在382份样品中,用gap-PCR法检出3种常见的α－地贫基因-SEA、α37和、-α~(+2)分别为21、7和3例、据此该市人群中α－地贫的基因携带率为8．12%。在这些阳性样品中有7例和3例分别检出自血液学表型正常(7/10)和缺铁性贫血(3/10)样品。这些结果与 Southern blot分析完全一致。血液学表型筛查法仅检出其中的21例(除2例α－地贫表型阳性未定型外),该法的假阴性率为32.3%。因血液学表型筛查漏检了7例静止型和3例轻型α－地贫样品,故此法总的漏检率为2.62%。结论 与血液学筛查法比较,gap－PCR分子筛查技术更具有特异性和可靠性,是临床上进行α－地贫基因携带者(尤其是静止型α－地贫)筛查的可选用的一线技术。     

GAP—PCR技术快速对α—地贫血基因诊断方法的研究

目的：建立跨越断裂点的PCR技术（也称裂口PCR,gap-PCR)为α-地贫血基因诊断提供良好的方法。方法：应用gap-PCR技术对382例病人进行α-地贫血基因诊断,扩增产物带出现1053bpDNA片段时表示为α类珠蛋白基因型（aa/aa),出现743bpDNA片段增带时表示为缺失型HHugm -/--SEA）,若样品为胎儿则为Barts水肿综合症（）－SEA－SEA）,同时出现1053bp和743bp两个DNA片段的扩增带表示为a-地贫杂合子（－－SEA／aa).结果：382例人中,325例为正常基因型（aa/aa),49例为a-地贫杂合子（－－SEA／aa),8例为缺血失型HbH病（a--/SEA),结论：gap-PCR技术应用于a-地中海贫血的血液学筛查具有简便,快速,准确的特点,它可代替Southern blotting成为筛查的常规方法。     

聚合酶链反应技术用于缺失型α—地中海贫血的分子筛查和产前诊断

用血液学方法筛查育龄夫妇８４３２人，检出α－地中海贫血（α－地贫）６４６例，从中随机取出典型阳性样本１００例，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）直接分析法进行基因诊断，结果９６例“标准型”α－地贫和３例血红蛋白（Ｈｂ）Ｈ病的ＤＮＡ样品均可检测到（－－ＳＥＡＩ）突变，另１例α－地贫复合ＨｂＱ样品未检测到该突变。此外，采用本法完成了７个重症α－地贫高风险胎儿的产前诊断。     

2650例育龄期妇女地中海贫血的筛查结果分析

目的：对南宁地区2650例育龄期妇女进行地中海贫血（简称：地贫）的筛查结果分析,了解人群地贫的发生率、携带率及基因类型。方法采用血液学检查和血红蛋白（Hb）电泳对受检人群进行实验室检查,筛查疑似人群,再进一步基因分析确诊。结果初筛出的536例疑为地贫患者（或基因携带者）的血液学检查结果：病例组红细胞、网织红细胞数高于对照组;Hb 低于对照组;平均红细胞体积和平均红细胞 Hb 含量显著低于对照组。 Hb 电泳结果中,检出512例结果异常者,其中α地贫表型阳性68例,β地贫表型阳性438例,确诊为α地贫（68例）和β地贫（438例）共计506例,占总受检人数的19．09％。结果显示本地区常见的α地贫基因型为东南亚缺失型杂合子（‐SEA /αα）、右缺失型杂合子（‐α3．7/αα）、左缺失型杂合子（‐α4．2/αα）、Hb Constant Spring （‐αCS /αα）点突变等,β地贫基因型为 CD41‐42杂合子、CD17杂合子、CD71‐72杂合子、CD28杂合子等。结论广西是地贫高发区,开展育龄期妇女婚前、孕前筛查,指导合理的联姻、妊娠,并通过人群干预来预防常见的人类单基因致死、致残性遗传病,对促进优生优育,提高人口素质有重要意义。     

新生儿脐血Hb Bart‘s水平作为α－地中海贫血携带者早期筛查指标的临床应用评价

目的 将新生儿脐血Hb Bart‘s水平作为α－地中海贫血携带者或患儿早期筛查指标进行临床应用评价。方法 对1548份新生儿脐血标本同时采取琼脂糖碱性血红蛋白电泳和分子筛查技术分别进行Hb Bart‘s定量和α－地中海贫血基因分析。结果 在上述标本中，检出Hb Bart‘s阳性样品192份，阳性率为12．4％。此外，还检出异常Hb 3例，其中1例合并有Hb Bart‘s。在这些阳性样品中，检出2类5种α－地中海贫血基因共89份，其余的1356份阴性样品中尚检出α－地中海贫血基因阳性39份，故该市户籍人群中总的α－地中海贫血基因携带率为8．3％。Hb Bart‘s水平筛查法对正常基因型和α－地中海贫血基因阳性样品的诊断符合率分别为93．2％和69．5％，假阳性率51．9％；而对静止型α－地中海贫血的漏检率高达72．2％。结论 Hb Bart‘s水平筛查法具有简便、快速且经济，并能对各型α－地中海贫血作出临床早期诊断，但对静止型α－地中海贫血则例外。     

多重PCR筛查高发群体缺失型α-地中海贫血基因的研究

目的 探索一种用于高发群体筛查缺失型α－地贫基因的方法。方法 采用在1个反应体系中，加入α1、α2珠蛋白基因和－－^SEA基因的3对引物，以扩增不同的DNA片段的多重PCR法，即可检测是否为东南亚缺失型α地贫1杂合子（－－^SEA/αα）、α地贫2基因纯合子（－α／－α）及缺失型HbH病（－－^SEA/-α)。结果 该法筛查了地贫高发区62名黎族居民和少数民族区中学148名黎族学生的血样，共查出－α／－α25例、－－^SEA／－α6例和－－^SEA/αα6例。经进一步验证其基因型：在25例－α／－α中，－α^3、7／－α^4、216例、－α^3、7／－α^3、73例和－α^4、2／－α^4、26例；在6例－－^SEA/-α中，－－^SEA/-α^3、74例和－α^4、2／－－^SEA 2例。另检测临床初诊“贫血待查”的14例患儿血样，检出非缺失型HbH病（－－^SEA/α^Tα)1例、－－^SEA/-α和－－^SEA/αα各3例。结论 多重PCR法用于高发群体缺失型α－地贫基因的筛查，具有简便、准确、快速、实用的特点。     

河池市孕妇产前地中海贫血筛查及基因诊断

目的研究河池市孕妇携带地中海贫血基因型状况。方法用红细胞平均体积和血红蛋白电泳法对1176例孕妇血样进行地贫筛查,对筛查为可疑α地贫者用gap—PCR法进行基因检测,可疑β地贫者采用反向杂交技术,使用24条探针检测中国人群常见的8个位点,以确诊地贫基因类型。结果从1176例孕妇中确诊检出地贫139例占11．8％,其中α地贫76例,检出率为6．46％,确诊检出β地贫63例,检出率为5．35％。α地贫常见基因型10种,轻型以αα／--^SEA为主,检出率为3．31％,静止型以αα/-α^3.7为主,检出率为2．63％,中间型以-α^3.7／--^SEA为主,检出率为0．25％,其构成比分别为51．3％、40．7％、7．89％;13地贫共检出7种,其中以CD41-42（-TCTT）居多,检出率2．55％,其中最常见有3种基因型,分别是CD41-42（-TCTT）、CD17（A→T）、-28（A→G）,其构成比占突变基因80．8％。结论河池市孕妇中有较高地贫基因携带者。     

四会市α和β地中海贫血的分子流行病学调查

目的调查广东省四会市人群中α和β地中海贫血(地贫)的人群发生率和突变基因构成比。方法采集四会市1 007例新生儿脐带血和1 524例婚检成人的外周静脉血,并进行α和β-地贫的分子流行病学调查。α地贫初筛的诊断标准为:Hb Bart's阳性;β地贫的表型诊断标准为:平均红细胞体积(MCV)<80fl和HbA2≥3.5%。对α和β地贫表型阳性样品进一步进行α和β-珠蛋白基因型的DNA分析,对表型阳性而未查出中国人已知突变基因型的样品进行β-珠蛋白基因DNA序列测定。此外,所有脐带血样品均进行2种静止型α地贫基因(-α3.7和-α4.2)的筛查。结果1 007例脐带血样品中检出110例α地贫基因携带者、3例Hb H病和1例Bart's水肿胎,人群中α地贫基因携带率11.72%(118 / 1 007)。人群中共检出3种缺失型α地贫基因,其构成比依次为53.4%(--SEA)、34.7%(-α3.7)和11.9%(-α4.2)。1 524例成人外周静脉血样品中检出β地贫携带者59例,所有样品均确定了基因型,检出7种突变类型,人群中β地贫基因携带率为3.87%(59 / 1 524)。在59例β地贫携带者中,有11例(占阳性样品的18.64%)为β地贫复合α地贫病例,人群检出率为0.72%(11 / 1 524)。该地区3种最常见的突变-βCD41-42(-CTTT)移码突变,βIVS-2-654(C→T)剪接突变和β-28(A→G)转录突变占突变基     

一种罕见α-地贫基因突变HbH病（--SEA/α*92A>Gα）的家系分析与基因诊断

目的：鉴定中国南方人群中的一种罕见α-地贫基因突变,以及此突变所致HbH病的家系分析和基因诊断。方法采集家系成员外周全血,进行血液学表型分析和地贫基因常规检测,对常规检测基因型与表型不符的标本进一步DNA测序分析。结果该家系中检出罕见α-地贫基因*92A>G突变,确认先证者及先证者姐姐基因型为--SEA/α*92A>Gα的非缺失型HbH病,先证者哥哥基因型为-α3.7/α*92A>Gα的标准型α-地贫、父亲基因型为αα/α*92A>Gα的静止型α-地贫。结论首次鉴定报道了中国南方人群中罕见α-地贫基因*92A>G突变,以及携带此突变的静止型α-地贫、复合此突变非缺失型HbH病的基本表型特征,丰富了中国人群α-地贫基因突变谱,有助于指导α-地贫的人群筛查、临床基因诊断和遗传咨询。     

广东顺德地区β-地中海贫血流行病学调查

目的调查顺德地区婚检人群β-地中海贫血（β-地贫）基因的携带率、基因突变类型及其频率分布。方法血液学筛查β-地贫阳性指征者，应用PCR结合反向斑点杂交法（RDB）进行β-地贫基因分析。结果在1100例婚检对象中，初筛表型阳性样品43例，检出率3．91％。经基因分析，全部携带β-地贫基因，其中以CD41—42，IVS-Ⅱ-654、-28、CD17、βE为最常见的突变位点，上述5种突变类型占所有检出突变位点的95．3％。结论顺德地区β-地中海贫血基因携带率比广东其他地区稍高，在预防干预中应给予重视。     

由Hb H病和重型β地中海贫血引起的一个罕见中间型地中海贫血病例及其产前诊断应用

目的 分析1例中间型地中海贫血(地贫)患者的基因型与表型的关系,探索进行重症β地贫复合血红蛋白H病这类复杂基因型组合方式的产前诊断临床实践.方法 表型检测采用标准的血液学分析技术测量红细胞参数和血红蛋白组分.采用反向点杂交技术诊断β地贫基因突变,采用缺口聚合酶链反应技术检测α地贫缺失突变.通过基于家系调查的表型与基因型分析探讨该病例的发病机制.利用羊水细胞DNA对该家系1例地贫高风险胎儿进行产前基因诊断.结果 先证者诊断为β0/β 地贫(βCD17A＞T/βIVS2-654C＞T)双重杂合子复合血红蛋白H病(--SEA/-α4.2)的偏重的中间型地贫患儿,其父母分别为β地贫杂合子合并轻型α地贫和β地贫杂合子合并静止型α地贫个体.在此基础上,我们对该家庭的地贫高风险胎儿进行了产前基因诊断,结果显示胎儿的基因型为重症β地贫合并静止型α地贫,通过遗传咨询实施了中止妊娠.结论 首次报道罕见中间型地贫案例,为国内外产前诊断提供可借鉴的临床经验.     

78例海南α-地中海贫血患者基因型及血液学表型分析

目的:探讨海南α-地中海贫血患者基因型构成及其血液学表型特点。方法:收集78例门诊及住院α-地中海贫血患者EDTA-K2抗凝全血标本,经PCR扩增后电泳检测α-地中海贫血常见3种缺失型突变,同时全自动血细胞分析仪进行红细胞参数分析、两管法测定红细胞渗透脆性、高效液相色谱法检测血红蛋白亚型含量。结果:静止型α-地贫患者基因型为αα/-α3.7或-α4.2/αα,中间型患者为-α3.7/--SEA或-α4.2/--SEA,而轻型患者以--SEA/αα基因型为主。红细胞参数分析显示小细胞低色素性贫血者在α-地贫患者中占62.82%,静止型、轻型和中间型患者中则各占25.00%、74.42%和81.82%;MCV和(或)MCH降低者在α-地贫患者和静止型、轻型和中间型患者中则分别占87.18%、70.83%、93.02%和100%,远高于MCV合并MCH降低者所占比例,特别对于静止型α-地贫患者更为明显。红细胞渗透脆性降低者在α-地贫患者及静止型、轻型和中间型患者中所占比例分别为80.77%、79.17%、79.09%和90.91%。仅有29.49%α-地贫患者HbA2<2.50%;而静止型、轻型和中间型患者中HbA2<2.50%者分别占29.17%、16.28%和81.82%。结论:海南是地贫高发区,分析其基因型及血液学表型特点对防治α-地贫有重要价值。     

运用单管多重聚合酶链反应检测海南黎族人群中三种缺失型α-珠蛋白生成障碍性贫血基因

目的 建立单管多重聚合酶链反应(mPCR)技术并将其运用于筛查海南黎族人群中3种最常见的缺失型α-珠蛋白生成障碍性贫血基因(α-地中海贫血基因,简称α-地贫基因)。方法 在研究成功检测3种α-地贫基因,即-^SEA、-α^3.7、-α^4.2的3个PCR反应的基础上,建立并优化单管mPCR反应的条件,检测了40例已知基因型的α-地贫患者基因,并筛查、诊断了116份海南黎族人血标本。结果 运用新建立的单管mPCR检测40例α-地贫患者DNA,所得基因型与运用3个分别的PCR技术及Southern印迹杂交技术所得到的结果一致。在116份海南黎族人中,检出-α^3.7和-α^4.2。缺失型基因的携带频率高达38．0％,且-α^4.2稍高于-α^3.7。但在该组标本中没测到-SEA。结论 单管mPCR技术准确率及灵敏度都很高,且简便易行。海南黎族人群-α^3.7和-α^4.2携带频率居国内最高。     

中国流行性感冒流行病学及疾病负担浅析

目的分析汇总近年发表或公开的中国流行性感冒（流感）流行病学数据,浅析流感在中国造成的疾病及经济负担,为完善中国流感防控策略提供科学依据。方法在PubMed、万方数据及中国知网等数据库搜索中国近年发表的流感流行病学相关文章,并在中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会（国家卫生计生委,原卫生部）和世界卫生组织（world health organization,WHO）网站分别搜索流感法定报告和监测数据。对数据进行汇总和描述性分析。结果 2005-2010年国家卫生计生委发布的全国流感报告发病数分别是45 672、57 557、36 434、41 692、198 381和64 502例,死亡数分别是5、4、2、3、13和7例。流行病学调查广东省珠海、肇庆2地合计2006年和2007年估测年发病率分别为4 780/10万和751/10万,广州市2006年估测年发病率为2 382/10万,珠海市2008年和2009年年估测发病率为410/10万和1 920/10万,流行病学调查获得的流感发病率显著高于法定报告数据。流感大流行对人群的影响非常显著,大幅增加流感导致的医疗负担,2006年珠海和肇庆两市流感样疾病发病达246万人次,其经济负担达5亿元,推测广东省2007年流感样疾病造成的直接医疗经济负担估计为10亿元。另外,中国近年流感监测结果显示B型流感两种细胞系在人群中共流行。结论需要进一步开展流感疾病及经济负担相关调查,以正确评估流感流行造成的危害,加强对B型流感的监测与防控。     

β-地中海贫血杂合子携带α-地中海贫血1基因发生率

【目的】研究广东地区人群中β-地中海贫血（β-地贫）杂合子携带α-地中海贫血（α-地贫）1基因的发生率。【方法】采用反向点杂交法检测β-地贫基因。采用跨越缺失区断裂点PCR法检测α-地贫1基因。【结果】在500例β-地贫杂合子DNA标本中,共检出43例合并α-地贫1,检出率为8.6%。【结论】广东地区β-地贫杂合子中合并α-地贫1的发生率为8.6%,在遗传咨询和产前诊断过程中需要引起重视。     

PCR assay for the inversion causing severe Hemophilia A and its application

ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｄｅｖｅｌｏｐａｎｅｗｔｅｃｈｎｉｑｕｅｂａｓｅｄｏｎｌｏｎｇｄｉｓｔａｎｃｅｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ（ＬＤＰＣＲ）ｔｏｒｅｐｌａｃｅＳｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇｍｅｔｈｏｄｔｏｄｅｔｅｃｔＦａｃｔｏｒ...     

系统性红斑狼疮患者血液学异常的特点及其临床意义

目的探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者血液系统异常的特点及其临床意义。方法236例新诊断的SLE住院患者,其中血红蛋白≤100g／L者设为贫血组;根据白细胞计数分为2组,白细胞计数〈3．0×10^9／L者为WBC1组,白细胞计数3．0～3．9×10^9／L为WBC2组;血小板〈100×10^9／L设定为血小板减少组。无血液学异常者设定为对照组。结果贫血的患者123例,占52．1％。造成贫血的原因主要有：慢性病贫血（ACD）,82例,溶血性贫血（HA）,18例,造血功能异常8例,原因未明,15例。外周血有白细胞下降者73例,占30．9％。血小板下降57例,占24．2％。无血液学异常68例,占28．8％。其中溶血性贫血组、WBC1组和血小板减低组狼疮活动指标明显高于对照组。对72例患者做了骨髓细胞形态学检查,49例是正常骨髓象,10例患者骨髓有不同程度的病态造血,2例表现骨髓巨核细胞缺乏,9例表现为骨髓三系造血增生低下,有2例表现出单纯红系造血低下。结论中国SLE患者贫血比例较高的主要原因可能是慢性病贫血患者的比例明显高于国外。SLE患者溶血性贫血比例较低,但却是SLE疾病活动很重要的指征。白细胞计数〈3．0×10^9／L和血小板下降也与SLE活动有关。部分患者骨髓造血异常是引起较严重血液学改变的原因之一。     

缺氧诱导因子和血管内皮生长因子在非遗传性肾透明细胞癌中的表达及意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、HIF-2α、血管内皮生长因子（VEGF）和微血管密度（MVD）在肾透明细胞癌中的表达情况,分析四者的关系及意义.方法应用免疫组化方法分析107例肾透明细胞癌中HIF-1α、HIF-2α、VEGF和MVD的表达情况.结果本组HIF-2α的阳性染色率（80.5%）明显高于HIF-1α（69.2%）（P〈0.01）.HIF-1α和HIF-2α阳性组中VEGF的阳性率（90.5%和89.8%）明显高于它们阴性组的VEGF阳性率（51.5%和26.3%）,P〈0.01.HIF-2α和VEGF的表达与MVD存在正相关关系,（Spearman相关系数分别为0.500和0.513）,P〈0.01.但肿瘤的病理分级和分期与HIF-1α、2α的表达无相关性,P〉0.05.结论 HIF-2α在肾透明细胞癌中的表达比HIF-1α更广泛,两者与VEGF的表达正相关.HIF-2α对VEGF的正向调控和促血管生成作用都明显强于HIF-1α.未发现两者的表达与肿瘤病理分级和分期的相关性.     

珠海市恙虫病流行病学特征分析

目的了解珠海市恙虫病的流行特点,为防控疫情提供依据。方法回顾性分析2003~2012年在珠海市某医院住院的88例恙虫病确诊病例资料,描述其流行病学特征。结果珠海市恙虫病的发生存在明显的季节性,病例分布于4～12月份,5~7月份为发病高峰,病例数占60.22%。近年来发病例数整体呈上升趋势,尤其是2012年病例数增长显著,较2011年增加了50%。发病年龄以40~60岁年龄段最多,占45.46%,职业构成以农（渔）民最多,占35.23%。香洲区是发病例数最多的地区,病例数47例,占53.41%。结论恙虫病流行季节需做好高危人群的健康教育,以预防、控制恙虫病的发生及流行。     

用曲细精管微注射法建立绿色荧光蛋白转基因小鼠

目的 研究曲线精管微注射法建立转基因小鼠的可行性。方法 选取人巨细胞病毒启动子调控的增强型绿色荧光蛋白（pCMV－EGFP）表达载体，应用体视解剖镜和显微注射仪将不同剂量的被脂质体包裹的质料DNA注射到不同年龄的KM小鼠曲细精管内。在注射后40d左右，雄鼠与雌鼠合笼交配；分娩后3周，剪取仔鼠尾，提取基因组DNA，应用PCR、Southern blotting技术进行整合检测。处死2只首建小鼠，荧光显微镜观察组织冰冻切片中EGFP的表达。结果 共注射41只雄性小鼠，存活34只，其中32只具有交配、受精能力，获得仔鼠382只。仔鼠经检测，PCR阳性133只，织冰冻切片中EGFP明显表达。结论 曲细精管微注射法是动物基因转移的一条简便可行的新途径。