荧光PCR技术在粪便幽门螺杆菌ureA基因检测中的应用

目的 评价荧光PCR技术检测粪便幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,HP）urea基因的价值.方法 采用荧光PCR技术检测50例消化内科住院患者的粪便样本,其中23例通过胃黏膜活检组织尿素酶及病理组织染色确诊为HP感染.同时进行HP培养和血清HP尿素酶抗体检测.四格表x2检验比较3种方法的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值.结果 荧光PCR技术检测粪便HP感染的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为1.00、0.96、96%和100%,而HP培养检测的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为0.78、1.00、100%和84%,其中敏感性和阴性预测值与荧光PCR法相比,差异具有统计学意义（X2=5.60和4.44,P值均〈0.05）.血清HP尿素酶抗体检测的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为0.96、0.74、76%和95%,其特异性和阳性预测值与荧光PCR法比较,差异具有统计学意义（X2=5.28和4.08,P值均〈0.05）.结论 粪便HPureA基因检测对诊断HP感染具有较高的临床价值.     

双向电泳结合免疫印迹法分析抗精子抗体相关精子膜抗原

为筛选精子抗体相关的精子膜抗原.本文使用ELISA试验检测不育病人血清的抗精子抗体,选取抗精子抗体阳性血清,通过双向电泳和免疫印迹的方法来筛选抗精子抗体相关精子膜抗原.     

人精子抗原基因表达产物HSG_2Ag的纯化和鉴定

本研究运用离子交换层析法分离纯化人精子抗原基因表达克隆HSG2的溶原蛋白,并用ELISA法鉴定其中的表达产物(HSG_2Ag)。结果显示:(1)经离子交换层析法分离HSG_2溶原蛋白为12个主要蛋白峰;(2)用抗人精子抗体和纯化的人SIT阳性血清经ELISA法识别,在HSG_2溶原蛋白中,第3峰为人精子抗原基因表达克隆HSG_2的表达产物(HSG_2Ag)。结果提示,用上述方法分离和纯化的HSG_2Ag纯化度高,特异性高,适合应用于抗精子抗体检测试剂盒的制备,并为进一步研制精子抗原免疫避孕疫苗提供候选成分。     

肾移植受者血清抗血管内皮细胞特异性抗体的提取和纯化

目的探讨肾移植术后出现排斥反应的受者血清中抗血管内皮细胞特异性抗体的提取和纯化方法。方法首先分离培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)。收集肾移植术后肾功能不良受者的血清样本,应用流式细胞术进行抗血管内皮细胞特异性抗体的筛选;用Luminex抗体检测平台检测血清中抗人类白细胞抗原(HLA)和主要组织相容性复合体Ⅰ类相关链A(MICA)的抗体。在确定血清标本中存在有抗血管内皮细胞特异性抗体后,用HUVEC将其吸附。洗涤细胞后再将吸附的抗体从细胞膜上洗脱下来,再用Protein-A/G磁珠再次纯化和浓缩洗脱液中的抗体Ig G。采用流式细胞术检测洗脱液中抗体活性,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)凝胶和免疫印迹法鉴定纯化的抗血管内皮细胞特异性抗体(Ig G)。结果在386例肾移植受者的血清中,选取血清肌酐(Scr)400μmo I/L、抗HLA抗体阴性、抗MICA抗体阴性和荧光反应强度(MFI)16的5例受者的血清样本,纯化后的抗血管内皮细胞特异性抗体Ig G在SDS-PAGE凝胶显示免疫球蛋白重链(纯度95%)。流式细胞术结果显示纯化的抗体具有重新结合血管内皮细胞表面抗原的特性。结论采用人脐静脉血管内皮细胞吸附肾移植受者血清中抗血管内皮细胞特异性抗体的提纯方法可取得较好效果。     

不育患者血清精子蛋白17抗体的检测及临床意义

目的:检测抗精子抗体(AsAb)阳性不育患者血清中抗精子蛋白17(Sp17)的抗体,探讨该抗体在免疫性不育血清学诊断和免疫避孕方面的潜在应用价值。方法:用重组人Sp17作为抗原,ELISA法检测62例AsAb阳性血清中Sp17抗体阳性率及滴度,分析AsAb中抗Sp17的含量。结果:AsAb阳性血清中Sp17抗体阳性率为56.5%,男女之间差异无显著性。Sp17抗体占AsAb的(10.09±7.45)%,结果具有统计学意义(P<0.05)。结论:Sp17是重要的精子抗原组分,血清中Sp17抗体的检测可作为不育患者辅助诊断指标,同时也提示Sp17可能是一种免疫避孕候选抗原疫苗。     

抗精子抗体相关精子膜抗原的免疫印迹分析

目的 筛选抗精子抗体相关的精子膜抗原。方法 使用ELISA试验检测不育病人血清的抗精子抗体,选取抗精子抗体阳性血清,通过免疫印迹的方法来筛选抗精子抗体相关精子膜抗原。结果 通过ELISA试验共收集到抗精子抗体阳性男子血清标本18份、女子血清标本15份。有8种分子量的精子膜抗原被抗精子抗体阳性血清所识别,其中78KD、60KD、51KD、23KD的精子膜抗原的识别率较高,分别为71.43％、60.71％、14.29％和14.29％。结论 78KD、60KD、51KD、23KD的精子膜抗原与抗精子抗体的生成和免疫不育密切相关。     

人精子有效抗原的分析

本实验运用免疫性不育症患者血清和精浆中抗精子抗体对精子可溶性抗原的有效决定簇进行了SDS-PAGE和Westera Blot法的分析。结果表明:1.经反复冻融所提取的精子可溶性抗原具有较高的特异性。2.男性血清中抗精子抗体的靶抗原种类多于女性。3.精浆中抗精子抗体的靶抗原种类多于血清。4.精子抗原中58KD_a、69KD_a和91KD_a成份为抗精子抗体阳性的男性血清和精浆、女性血清共同识别的靶抗原。5.精子抗原中20KD_a成份可能是刺激男性生殖道淋巴组织产生与免疫不育有关抗体的特异性、功能性抗原。提示由于精子抗原对生殖道刺激产生抗体的方式、途径和部位不同,导致血清和精浆中抗精子抗体的克隆数不同。     

脊髓损伤NogoA疫苗安全性和免疫效应初探

目的 制备纯化脊髓损伤NogoA疫苗,疫苗免疫后分析NogoA疫苗的安全性及免疫效应.方法 使用人工合成的NogoA-13肽,结合钥孔帽贝血蓝蛋白(KLH),增强其免疫原性并纯化.鼠龄3周Wistar雌性大鼠60只随机分为3组,A组:NogoA疫苗免疫组;B组:完全弗氏佐剂+不完全弗氏佐剂组;C组:KLH免疫组;对大鼠进行腹腔免疫,使用ELISA检测抗体的滴度和与抗原抗体反应的结合能力.分析疫苗的安全性即大鼠自身免疫性脑脊髓膜炎(EkE)的发生率.结果 A组大鼠血清中检测到抗NogoA-13肽IgG抗体的存在,倍比稀释后血清光密度(A)值呈现出规则的梯度.B、c组血清未检测到IgG抗体的存在.统计学分析发现A组与B、C两组血清不同倍比稀释浓度的A值存在明显的差异,差异具有统计学意义(P＜0.05).B、C组之间及其与未免疫的阴性对照组血清A值的差异无统计学意义.大鼠EAE发生率为0.结论 NogoA-13多肽疫苗免疫大鼠,可刺激出抗NogoA-13多肽抗体,抗体与抗原肽在体外可发生抗原抗体反应,验证了疫苗的有效性.实验动物未见EAE的表现,此多肽疫苗有较好的安全性.     

毕赤酵母及大肠埃希菌表达的重组乙型肝炎病毒e抗原在乙型肝炎病毒e抗体检测中的比较分析

目的 探讨毕赤酵母及大肠埃希菌表达的重组乙型肝炎病毒e抗原(recombinant hepatitis B e antigen, rHBeAg)在乙型肝炎病毒e抗体(hepatitis B e antibody, HBeAb)免疫检测中的应用.方法 用分子筛纯化两种rHBeAg,进行特异性和免疫反应性鉴定;分别用纯化后毕赤酵母表达的HBeAg(A)、大肠埃希菌表达的HBeAg(B)作为中和试剂,单克隆HBeAb为固相抗体,辣根过氧化物酶标记多克隆HBeAb为探测抗体,用固相-液相竞争抑制法酶联免疫吸附实验检测HBeAb标准品及乙型肝炎病毒PCR阳性和阴性的临床标本.结果 (1)检测中国药品生物制品检定所HBeAb国家参考品结果 :试剂A:阴性符合率(-/-)15/15,阳性符合率(+/+)10/10;灵敏度参考品最低检出量(稀释度)1#= 1∶ 128,2#=1∶ 128,3#=1∶ 256.试剂B:阴性符合率(-/-)15/15;阳性符合率(+/+)9/10;灵敏度参考品最低检出量(稀释度)1#=1∶ 32;2#=1∶ 64;3#=1∶ 64;大肠埃希菌抗原的灵敏度明显低于毕赤酵母抗原;(2)对乙型肝炎病毒PCR阳性及阴性的临床标本进行检测:试剂A和试剂B对PCR阳性组的HBeAb阳性检出率分别为50.4%和51.6%,差异无显著统计学意义(P＞0.05);PCR阴性组的HBeAb阴性检出率,试剂A和试剂B分别为 91.2%和 86.7%,差异有显著统计学意义(P＜0.01).结论 毕赤酵母表达的HBeAg用于HBeAb的检测灵敏度及特异性均优于大肠埃希菌表达产物.     

灰霉菌多克隆抗体的制备与鉴定

建立了一种新的检测灰霉菌的方法.利用灰霉菌培养基中分离得到的菌丝体上清波抗原和孢外多糖抗原,通过免疫Balb/c小鼠后,经离心、沉淀和纯化后得到了灰霉菌抗体.实验结果表明,上清液抗原的的免疫效果要好于孢外多糖抗原的免疫效果.纯化后的抗体的效价大于13 000,最低检测限1 ng/mL.该研究为今后的ELISA法快速检测灰霉菌提供了一些参考依据.     

Helicobacter pylori and Meckel's diverticulum

Helicobacter pylori is invariably associated with peptic ulceration of the upper gastrointestinal tract. This has led to speculation about its pathogenic role in peptic ulceration. The literature and this present study show that H. pylori is not often associated with peptic ulceration in Meckel's diverticulum and hence it is unlikely that it has any significant role in peptic ulceration at this site.     

Helicobacter pylori and gastric carcinoma

Among the suspected bacterial causes of cancer, H. pylori is the agent more consistently linked to malignancy. After its discovery in 1983 and the later confirmation as the leading cause of chronic gastritis, several studies were performed to prove an association between H. pylori infection and gastric carcinoma. The epidemiological data have been so strong that in 1994 the International Association for Research on Cancer stated that "there was sufficient evidence" to classify H. pylori as a group I carcinogen in humans. However, the exact mechanisms underlying the link between H. pylori infection and gastric carcinoma remain still to be elucidated. The natural history of H. pylori infection shows that, although roughly half of the world's human population bears the organism, only a minority of individuals develop clinically important outcomes (e.g. peptic ulcer, lymphoproliferative diseases, atrophic gastritis and gastric carcinoma): host's genetic make-up, duration of infection, diet and differences between H. pylori strains have been proposed as factors potentially able to influence the outcomes in different individuals. The damaging agents by which H. pylori could promote gastric carcinogenesis are produced either by the organism or as a consequence of the host inflammatory response to the infection. Gastric mucosal chronic damage may, therefore, lead to changes in the pattern of epithelial cell kinetic (increase in cell proliferation and induction of apoptosis) in gastric glands which may induce DNA injury with irreversible genetic lesions. Finally, a direct association between H. pylori infection and the induction of gastric carcinoma has been recently demonstrated in an animal model, giving further credence to the role of this organism in gastric carcinogenesis.     

Extragastric manifestations of Helicobacter pylori infection

The role of Helicobacter pylori (HP) in some digestive diseases (gastritis, ulcer, gastric cancer, MALT lymphoma) is well known. It has been suggested relatively recently that infection with HP can be involved in various extra-digestive conditions: respiratory disorders (chronic obstructive pulmonary disease, bronchiectasis, lung cancer, pulmonary tuberculosis, bronchial asthma); vascular disorders (ischaemic heart disease, stroke, primary Raynaud phenomena, primary headache); autoimmune disorders (Sjogren syndrome, Henoch-Schonlein purpura, autoimmune thrombocytopenia, autoimmune thyroiditis, Parkinson's disease, idiopathic chronic urticaria, rosacea, alopecia areata); other disorders (iron deficiency anaemia, growth retardations, liver cirrhosis). Case studies, small patient series and non-randomized trials that have shown a beneficial effect of HP eradication in different conditions are not convincing. According to Mastricht III the only conditions where HP eradication is indicated are immune thrombocytopenic purpura and iron deficiency anaemia.     

胆管癌组织幽门螺杆菌感染与预后负相关

目的 研究胆管癌中幽门螺杆菌( Helicobacter pylori,HP)感染情况及其基因型表达,并分析其临床病理参数与预后间的关系.方法 采用PCR法对80例手术切除的胆管癌标本及30例对照标本进行HP检测,对所有阳性结果用PCR方法进一步检测细胞毒素相关蛋白基因(Cag A)、空泡细胞毒素(VacA)的三个基因亚型sla、m1和m2的表达,结合临床、病理资料对结果进行分析.连续性变量采用t检验,分类变量采用x2检验法或Fisher精确计算法,应用多元Logistic分析模型进行相关危险因素分析.结果 80例胆管癌中HP阳性检出率(71％),显著高于对照组(20％)(x2=23.418,P＜0.05)；57例HP阳性胆管癌中CagA、VacA sla、VacA m1和VacA m2阳性分别为30例、40例、5例和43例；HP的感染与肿瘤的位置相关(x2=27.580,P＜0.05),与肿瘤的分期无关(x2=1.204,P=0.548)；多元Logistic回归分析显示HP感染阳性的患者发生胆管癌的可能性为阴性者的10倍之多( OR=10.531)；Cox比例风险模型分析显示,HP的感染(HR =8.105,P=0.032)、TNM分期(Ⅱ/Ⅲ期HR =9.141,P=0.040,Ⅳ期HR=29.071,P=0.040)、手术根治情况(HR =9.531,P=0.015)均为胆管癌的独立预后因素,寿命表分析显示HP的感染对胆管癌术后生存时间存在影响(u=10.074,P=0.002),HP感染阳性的中位数生存时间较HP阴性者短7.25个月.结论 胆管癌患者中可能存在HP的感染,其感染的主要基因型为VacA sla/m2型；HP的感染与胆管癌的发生有关,对胆管癌预后存在不利影响.