谷氨酸棒杆菌硫酯酶基因NCgl1600的异源表达及酶学性质研究

硫酯酶在脂肪酸合成中具有解除脂酰CoA的抑制及提高脂肪酸产量的作用。因谷氨酸棒杆菌具有脂肪酸合成潜力，故文章以具有脂酰CoA硫酯酶活性的基因NCgl1600作为研究对象，通过异源表达基因NCgl1600获得其表达产物硫酯酶TesB并研究其酶学性质。通过测定底物特异性发现其对C8脂肪酰基CoA底物活性最高，最适温度为30℃，最适pH值为8.0，金属离子Fe²⁺、Cu²⁺、Mn²⁺、Zn²⁺、Mg²⁺和K⁺对其酶活产生抑制作用，米氏常数K_m为56.81 mmol/L。     

膨润土负载锌-钴催化臭氧处理模拟染料废水

为获得高效的臭氧催化剂,以膨润土作为载体,选择Fe³⁺、Cu²⁺、Mn²⁺、Ni²⁺、Co²⁺、Zn²⁺为活性组分,通过溶液混合法制备负载型催化剂,并以酸性大红模拟印染废水探讨负载型催化剂在催化氧化体系中对酸性大红的降解速率及动力学特点,最终筛选得到最优活性组分;根据正交试验设计获得催化剂最佳制备条件,并通过X射线衍射仪和扫描电子显微镜对其进行表征。试验结果表明:最佳双组分催化剂为膨润土负载Zn-Co催化剂;膨润土负载Zn-Co半峰宽小,晶型好;双组分催化剂最佳制备条件为:煅烧温度400 ℃,煅烧时间3 h,组分浓度1.2 mol/L,锌钴的量比1∶1,淀粉质量1.5 g(对应60 g膨润土)。用在此条件下制得的催化剂处理模拟染料废水时,通入臭氧反应10 min,即可去除 99.92%的酸性大红;且催化剂重复利用4次后,其去除率仍达81.44%。     

皂荚叶异牡荆素提取及抗氧化、抗菌性能研究

采用超声波预处理-乙醇回流法提取皂荚叶异牡荆素,在单因素试验基础上通过正交试验确定最优提取条件;测定提取物在不同的pH、温度、光照、金属离子及食品添加剂条件下对DPPH自由基的清除率,分析其抗氧化稳定性;并研究提取物对4种革兰氏细菌的抑制效果。结果表明：异牡荆素最优提取条件是乙醇体积分数100%、料液比1∶30(g/mL)、回流时间80 min、回流温度70℃;碱性、光照和金属离子Zn²⁺、Cu²⁺、Ca²⁺、Al³⁺、Fe³⁺及H₂O₂对异牡荆素抗氧化稳定性影响较大,而金属离子Na⁺、Co²⁺、K⁺、Mg²⁺和温度对其影响较弱;体外抗菌试验证实,相比于其他3种测试菌,皂荚叶异牡荆素对大肠杆菌的抗菌活性最强。     

耐热嗜酸β-甘露聚糖酶TaMan5A在毕赤酵母中高效表达及酶学性质研究

甘露聚糖酶是一类将甘露聚糖降解为短链甘露寡糖及甘露糖的水解酶。为了开发耐酸耐高温的工程酶,从棘孢木霉(Trichodema asperellum)ND-1中克隆甘露聚糖酶基因TaMan5A并在毕赤酵母(Komagataella phaffii)X-33中成功表达。结果显示,该酶的蛋白质分子质量约为67 kDa。最适pH值和温度分别为4.0和65℃,在pH 2.0～6.0具有较强的稳定性,孵育1 h后仍具有80%的活性,且在20～65℃时,残留酶活力均能达到90%以上。1 mmol/L Co²⁺、脲和5 mmol/L SDS、Zn²⁺、Fe²⁺、Mn²⁺、Ni²⁺对TaMan5A的活力都有不同程度的激活作用。由于玉米秸秆富含纤维素与半纤维素,因此进一步确定了TaMan5A水解秸秆的最佳组合条件(玉米秸秆用量0.5 g, TaMan5A用量0.5 g, pH 4.0,水解2 d),并得到玉米秸秆用量和TaMan5A用量对玉米秸秆降解效率影响最大。该研究首次从棘孢木霉ND-1中克隆出...     

阿魏酸糖酯体外抗氧化性质的研究

采用内切木聚糖酶酶解小麦麸皮不溶性膳食纤维制备阿魏酸糖酯。研究表明阿魏酸糖酯具有螯合金属离子、清除H2O2、羟自由基、DPPH 自由基的作用;与人工合成抗氧化剂BHT、VC 相比,阿魏酸糖酯仍然表现出很强的抗氧化性质,而且比游离态阿魏酸的抗氧化性质高。     

棕色彩棉的颜色稳定性

探讨了酸、碱处理对棕色彩棉颜色稳定性的影响，发现碱处理对棕色彩棉颜色稳定性影响较大，酸处理对彩棉颜色稳定性影响较小。采用金属阳离子对棕色彩棉进行固色处理，研究了棕色彩棉经不同金属离子处理后再进行碱处理的颜色变化。结果表明，经Cu²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺和Mn²⁺处理后的棕色彩棉再进行碱处理时，彩棉颜色相对稳定，其中颜色变化程度最小的为经Mn²⁺处理的棕色彩棉，其色差值ΔE为1.7,说明采用金属离子处理可提升彩棉的颜色稳定性。     

金属离子促进樟芝深层发酵无性产孢

樟芝(Antrodia cinnamomea)是一种珍稀药食两用蕈菌，其目前最主要的人工培养方式是基于无性孢子接种的深层发酵。为了提高樟芝深层发酵的产孢量及产孢速度，进而提高其种子制备效率及工业化生产效益，该文首先采用单因素法筛选出能显著促进樟芝无性产孢的金属离子，再采用响应面法优化金属离子组合的最佳添加浓度。结果表明，在培养基中单独添加1.0 mmol/L的Ca²⁺、0.1 mmol/L的Fe²⁺及0.1 mmol/L的Zn²⁺可使樟芝最大产孢量较对照组分别提高87.21%、72.39%及35.05%;同时添加0.149 mmol/L的Fe²⁺、2.01 mmol/L的Ca²⁺及0.135 mmol/L的Zn²⁺可使樟芝深层发酵最大产孢量达8.67×10⁷个/mL,较对照组提高133.62%,同时使樟芝无性孢子产量达到最大值的时间缩短24 h。该研究操作方便、成本低廉、效果显著，具有较好的开发价值及应用前景。     

酪蛋白胶束对原花青素稳定性的影响

以酪蛋白胶束(micellar casein, MC)为基质，原花青素(proanthocyanidin, PCs)为配体，制备PCs-MC复合物，采用紫外-可见光谱、荧光光谱、傅里叶变换红外光谱等手段表征复合物结构，研究不同温度(4、37、50、65℃)、不同金属离子(Fe³⁺、Zn²⁺)、不同H₂O₂含量(0.006%、0.024%,体积分数)和超声处理下MC对PCs稳定性的影响。结果显示，PCs对MC有荧光猝灭作用，二者以疏水作用形成复合物。MC提高了PCs在37、50、65℃处理下的保留率，改善了其在H₂O₂存在下的稳定性。然而，在4℃贮藏时，MC促进了PCs的降解，且当Fe³⁺和Zn²⁺存在时，MC降低了PCs的稳定性。超声处理下，PCs-MC复合物中PCs保留率低于游离PCs。可见，MC有利于提升PCs热稳定性和氧化稳定性，但不利于改善其金属离子稳定性。     

OCC制浆过程中抑制二次淀粉降解的研究

研究了4种金属离子(Cu²⁺、Zn²⁺、Mn²⁺、Li+)对二次淀粉降解的抑制效果及其最佳添加量,并利用杀菌剂与其协同处理,探究OCC制浆过程中二次淀粉降解的抑制问题。结果表明,Cu²⁺具有最佳的抑制效果。当反应时间4 h、Cu²⁺添加量为0.20 mol/t时,原淀粉几乎不降解;当反应时间4 h、Cu²⁺添加量为0.024 mol/t时,酶解淀粉的降解率最低,为15.4%;当杀菌剂与Cu²⁺协同作用时,相比单独添加杀菌剂,原淀粉4 h抑制效果提升58.0%,酶解淀粉4 h抑制效果提升31.2%。     

产高聚合度IMOs右旋糖酐酶菌株Cellulosimicrobium sp. Y1的筛选及酶学性质研究

右旋糖酐酶在制糖、医药、材料制备和生物技术等领域应用广泛。该研究从连云港羊山岛海域海泥样品中筛选分离出一株产右旋糖酐酶的菌株Cellulosimicrobium sp. Y1，对其生长、产酶条件、酶学性质以及酶解产物进行了研究：在pH7.0、温度30℃条件下生长最优。在10 g/L右旋糖酐T20、pH9.0、温度35℃条件下发酵36 h产酶量最高。该酶的最适作用温度和pH值分别为40℃和7.5。金属离子Mg²⁺、Sr²⁺、NH₄⁺及低浓度的Li⁺、Ca²⁺、Mn²⁺可以提高酶的活力，而Ni²⁺、Zn²⁺、K⁺、Na⁺对该酶有不同程度的抑制作用。同时，吐温、乙醇、二甲基亚砜和尿素等有机溶剂对该酶的活力影响较小。右旋糖酐酶的分子质量约为55 ku，可以特异性地水解α-1,6糖苷键，其酶解产物中主要为异麦芽三糖和异麦芽五糖，酶解1 h的产物中，高聚合度的...     

产α-环糊精葡萄糖基转移酶的菌株筛选、鉴定与酶学性质的初步研究

从上海浦东新区新场镇某农场种植田筛选出1株高产α-环糊精葡萄糖基转移酶的菌株,初步研究其酶学性质,以获得有良好热稳定性和pH稳定性的酶。通过形态学特征、生理生化试验鉴定和16S rRNA序列比对分析,确定该菌株为浸麻类芽孢杆菌(Paenibacillus macerans),命名为P.macerans TLLY7。酶学性质测定结果表明,该酶的酶活性为1.35 U/mL,其最适反应温度为50℃、最适反应pH值为6.0,并且在40~45℃、pH 6.0~9.0稳定性良好。Ca²⁺、Mn²⁺和Zn²⁺对酶表现出促进作用,Fe²⁺、Cu²⁺和Co²⁺则对该酶表现出抑制作用。其中Ca²⁺对酶的促进作用最强,酶活性促进率为25%,Cu²⁺对酶的抑制作用最强,酶活性抑制率为33%。K⁺、Mg²⁺对酶活性的影响较小。菌株TLLY7所产α-环糊精葡萄糖基转移酶的酶学性质初步研究表明其具有深入研究的价值和应用的潜力。     

假丝酵母氨基甲酸乙酯水解酶的分子克隆及酶学性质

氨基甲酸乙酯是存在于发酵食品中的一种潜在致癌物.生物酶法可有效降解氨基甲酸乙酯.该研究从假丝酵母CCTCC AY 2017001基因组中克隆了氨基甲酸乙酯水解酶基因cpUH,并实现了其在Escherichia coli中的高效表达.实验结果表明,cpUH基因大小为1656 bp,编码552个氨基酸;重组蛋白大小约为60...     

The peptide hydrolase system of Lactobacillus reuteri.

Peptide hydrolase system of Lactobacillus reuteri CRL 1098, a lactic acid bacteria of sourdough origin, was investigated. This microorganism has a broad range of peptidases consisting of an active aminopeptidase, X-Prolyl-dipeptidylaminopeptidase, dipeptidase and tripeptidase. Aminopeptidase, iminopeptidase and endopeptidase are most likely located in the cytoplasmic fraction showing no detectable association with the cell membrane, while dipeptidase and tripeptidase are mainly associated with the latter fraction. The peptidases are metalloenzymes activated by Co²⁺ and inhibited by Cu²⁺, Hg²⁺, Cd²⁺ and by metal-complexing reagents. The aminopeptidase activity inhibited by EDTA can be restored by Mn²⁺ while that of di- and tripeptidase treated with 1,10-phenantroline can be restored by Zn²⁺ and Co²⁺, respectively.     

Purification and characterization of a dipeptidase from Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus

A metal-dependent dipeptidase has been purified from a cell-free extract of Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus B14 by ammonium sulphate precipitation, anion exchange chromatography, metal chelating affinity chromatography with immobilized Cu²⁺, and repeated FPLC anion exchange chromatography. The molecular mass of the purified enzyme was estimated to be 51 kD by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis as well as by gel filtration, which indicates that it does not consist of subunits. The enzyme was most active at pH 7 and 50°C. Reducing agents, like dithiothreitol and β-mercaptoethanol, increased enzyme activity while metal chelating agents had an inhibitory effect. Enzyme activity, inhibited by EDTA and EGTA, could be partially restored by Co²⁺ and Mn²⁺. The enzyme was most active on dipeptides containing an aminoterminal hydrophobic amino acid such as Leu-Leu and Leu-Gly. Kinetic studies indicated that the dipeptidase had a higher affinity for the first substrate mentioned. The K_m-values for both substrates were about 0·56 and 1·23 mM, with turnover numbers of 870 and 480 s⁻¹, respectively.     

Trypsin-like enzyme from intestine and pyloric caeca of spotted goatfish (Pseudupeneus maculatus)

Trypsin-like enzyme was partially purified from the intestine and pyloric caeca of spotted goatfish (Pseudupeneus maculatus) by a simple three steps procedure: heat treatment, ammonium sulphate precipitation and Sephadex G-75 filtration. The enzymes from the intestine and pyloric caeca were 96- and 57.7-fold purified with yield values of 68.1% and 26.1%, respectively. The pyloric caeca enzyme collected from the Sephadex G-75 filtration showed a single band in SDS–PAGE (24.5 kDa). Both enzymes presented identical optima pH (9.0) and temperature (55 °C). After incubation at 45 °C for 30 min, enzymes obtained from intestine remained fully activity while a loss of activity (10%) of enzyme extracted from pyloric caeca was registered. Michaelis constant was not significantly different for trypsin-like enzyme from pyloric caeca (1.82 ± 0.19 mM) and that from the intestine (1.94 ± 0.45 mM) acting on benzoyl-dl-arginine-p-nitroanilide (BAPNA). Finally, their activities were inhibited by the following ions in decreasing order: Al³⁺ > Zn²⁺ > Hg²⁺ = Cu²⁺ > Cd²⁺. The effects of Ca²⁺, Mg²⁺, Mn²⁺, Ba²⁺, K¹⁺, Li¹⁺ and Co²⁺ showed to be less intensive. The similarities between them provide basis for the proposition of obtaining an attractive protease preparation from the tons of intestine and pyloric caeca, that are usually discarded, from this fish which is an important species exported by North-eastern Brazilian fishery industry.     

尿酸氧化酶高产菌筛选与酶学性质的研究

采用平板透明圈法和摇瓶发酵法筛选尿酸氧化酶高产菌株,并通过菌体形态特征和18S rDNA序列分析进行菌种鉴定。通过产酶发酵试验,优选产酶的最适条件;利用多种技术对尿酸氧化酶进行分离纯化,并通过酶促反应对酶学性质进行研究。结果表明,筛选获得1株尿酸氧化酶高产菌株UR-05,其被鉴定为食腺嘌呤芽生葡萄孢酵母（Blastobotrys adeninivorans）。菌株UR-05所产尿酸氧化酶分子质量约为41.5 kDa,比酶活为215.4 U/mg;该酶的最适温度为30 ℃、最适pH值为8.0;Mg2+和Na+对该酶有激活作用,K+、Ca2+、Mn2+、Zn2+对该酶有抑制作用。菌株UR-05所产尿酸氧化酶在一定条件范围内呈现出较强的活性,具有进一步研究及应用的价值。     

WD02菌株产红色素的稳定性研究

从温度、pH值、光照、氧化剂及还原剂、金属离子等方面研究WD02菌株所产红色素的稳定性.结果表明,该红色素在低于40℃条件下较为稳定;对光照较为稳定;在pHS～7环境下保存率较高,适用于微酸性食品的着色;该红色素对还原剂很稳定性,而对氧化剂非常不稳定;Cu2+、Zn2+、M2+、K+、Na+等金属离子对红色素有增色效应,而Fe3+、Fe2+和Ca2+等金属离子能破坏WD02菌株红色素水溶液稳定性并造成红色素损失.     

重组Taxus chinensis苯丙氨酸变位酶性质表征及R-β-芳香丙氨酸合成

为实现酶法合成高附加值的β-苯丙氨酸,首先化学合成来源于紫衫（Taxus chinensis）的苯丙氨酸变位酶（phenylalanine aminomutase,PAM）基因（Tcpam）,构建大肠杆菌重组质粒Pet-sumo-Tcpam,转入大肠杆菌中进行异源诱导表达,采用镍柱亲和层析制备电泳纯的重组酶TcPAM,用于催化合成R-β-苯丙氨酸。结果表明：重组质粒Pet-sumo-Tcpam成功在大肠杆菌中实现高效表达,获得可溶性的重组TcPAM,经过亲和层析制备出电泳纯的重组TcPAM。质谱和圆二色谱检测分析结果表明,TcPAM能够催化α-苯丙氨酸异构化为R构型的β-苯丙氨酸。TcPAM在最适温度30 ℃、pH 9的条件下,酶活力达到4.11 U/mg,金属离子K＋、Fe2＋和Ca2＋对TcPAM的活性影响较小,而Cu2＋和Zn2＋有强烈抑制性,表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵、十二烷基硫酸钠、Triton X-100和Tween 80对重组酶活力影响较小,相对酶活力保持在90%以上。进一步利用TcPAM催化α-芳香丙氨酸异构合成β-芳香丙氨酸,结果表明：苯环上携带不同基团的α-芳香丙氨酸为底物时,苯环上携带供电子基团比吸电子基团的底物转化率更高,底物的α-氨基容易转移至β位,其中4-MeO-β-苯丙氨酸的产率最高,达到45%,为建立酶法合成R-β-芳香丙氨酸提供了参考。     

抗坏血酸对猴头菇β-葡聚糖表观黏度及结构特征的影响

采用碱提醇沉法制备猴头菇β-葡聚糖(Hericium erinaceus alkali-extracted polysaccharide,HEAEP),系统研究了不同条件(抗坏血酸浓度、金属离子、温度、pH值等)下抗坏血酸对HEAEP表观黏度的影响,并深入分析了抗坏血酸对HEAEP结构特征的影响。研究结果表明:猴头菇β-葡聚糖表观黏度与抗坏血酸浓度存在依赖性,当抗坏血酸质量分数超过0.10000%时,抗坏血酸浓度越高,降解效果越差;金属离子(Cu²⁺、Fe²⁺)的加入会进一步促进抗坏血酸对HEAEP表观黏度的降解作用;而温度的影响相对较小;pH值和作用时间也有一定影响,当pH值为4,作用时间为12 h时,抗坏血酸对HEAEP降解效果最好。此外,抗坏血酸能降低HEAEP分子质量,但对HEAEP糖苷键类型及比例、单糖组成和特征官能团等结构特征影响较小。抗坏血酸降低猴头菇β-葡聚糖表观黏度的效果受到多重因素的影响,其中抗坏血酸浓度、Cu²⁺、Fe²⁺等影响较大,但作用前后的多糖主要结构特征变化相对较小。研究结果旨在为抗坏血酸与β-葡聚糖共存食品的生产提供理论参考。