ONO-AE-248对诱发中性粒细胞非凋亡性程序化死亡中Bax-α表达的研究

目的:为探讨接受ONO-AE-248刺激后重要的表达蛋白—Bax-α在中性粒细胞(Polymorphonuelearneutrophils,PMN)非凋亡程序化细胞死亡中的表达及意义,以进一步确定这种新型细胞死亡模式提供线索。方法:采用Ficoll法新鲜分离健康志愿者外周静脉血PMN与ONO-AE-248共同培养12 h后,流式观察ONO-AE-248对细胞活性的影响并提取总RNA,并行反转录-PCR检测Bax-αmRNA的表达;Western-blot检测Bax-α蛋白的表达。结果:ONO-AE-248刺激12 h时PMN Bax-αmRNA的表达与空白组比较无明显变化(P>0.05);蛋白印迹法显示,Bax-α蛋白的表达无差异;流式结果显示,ONO-AE-248刺激的中性粒细胞发生快速死亡。结论:Bax-α在ONO-AE-248诱导的非凋亡性程序化死亡中可能发挥着部分相同或相关的作用。     

ASC在ONO-AE-248诱发的中性粒细胞非凋亡性程序化死亡中的作用

目的：探讨接受ONO-AE-248刺激后重要的差异表达蛋白——凋亡相关斑点样蛋白（Apoptosis-associated speck-like protein containing CARD，ASC）的表达及意义。方法：Fieoll法新鲜分离健康志愿者外周静脉血中性粒细胞（Polymorpho-nuclear neutrophils,PMN），与ONO-AE-248共同培养，2小时提取总RNA，并行反转录-PCR检测ASCmRNA的表达；12小时提取总蛋白，双向电泳分离后，采用PDQest2-DE软件分析找出差异表达的蛋白质斑点，并用基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱（MALDI-TOFMS）进行鉴定。结果：ONO-AE-248刺激2小时中性粒细胞ASC mRNA的表达明显下调（P〈0．01）；12小时通过双向电泳和蛋白质质谱分析发现ASC为重要的差异表达蛋白且ONO-AE-248刺激后的表达量明显低于自发性凋亡组。结论：ONO-AE-248引起的ASC表达的下调可能是中性粒细胞凋亡和ONO-AE-248诱导的中性粒细胞非凋亡性程序化细胞死亡的关键性差异点。ONO-AE-248显著下调ASC的表达，可能是ONO-AE-248诱使中性粒细胞发生非凋亡性程序化死亡的根本原因之一。     

ONO-AE-248诱导中性粒细胞非凋亡性程序化死亡线粒体形态结构的变化

目的：探讨线粒体形态结构的变化在ONO-AE-248诱导的中性粒细胞非凋亡性程序化死亡中的作用及意义。方法：Ficoll法分离健康志愿者外周静脉血中性粒细胞，与ONO-AE-248共同培养，透射电子显微镜观察线粒体形态结构的改变；流式细胞术检测线粒体膜势能的变化。结果：ONO-AE-248刺激6小时，中性粒细胞线粒体显著肿胀，嵴断裂，数目增多；ONO-AE-248早期迅速导致中性粒细胞线粒体膜势能的溃散。结论：线粒体变化是ONO-AE-248诱导中性粒细胞非凋亡性程序化死亡区别于凋亡的早期形态学特征事件之一。线粒体可能在ONO-AE-248诱导的中性粒细胞非凋亡性程序化细胞死亡中扮演更为关键性的角色。     

ONO-AE-248诱导的中性粒细胞非凋亡性程序化细胞死亡的形态学变化

目的研究前列腺素E受体亚型3(EP3)激动剂ONO-AE-248诱导的中性粒细胞(PMN)非凋亡性程序化细胞死亡的形态学变化,探讨PMN死亡形式的多样性和复杂性。方法运用透射电镜、荧光显微镜及激光共聚焦扫描显微镜观察PMN在自发性凋亡与ONO-AE-248刺激下亚细胞微结构的变化。结果以5mmol/L的ONO-AE-248刺激PMN12h后,电镜观察绝大多数PMN的多叶核融合为单叶核,核质疏松,核膜分层、起泡甚至破裂,核质溢出,但细胞膜较完整,细胞器无明显改变。以荧光染料DAPI标染活细胞核,ONO-AE-248刺激后,PMN表现为多叶核融合成大而模糊的球形,核染色密度较低;ONO-AE-248刺激的PMN死亡仍有细胞膜磷脂酰丝氨酸(PS)的外翻。ONO-AE-248刺激组与自发性凋亡组PMN在线粒体的形态结构、分布和细胞质内的染色性均有明显差异。结论ONO-AE-248在体外能刺激人PMN发生非凋亡性程序化细胞死亡,这一刺激过程不影响自发性凋亡的PMN细胞膜PS的外翻,并且细胞核和线粒体的改变是其早期最为显著的形态学改变,提示二者可能是ONO-AE-248刺激的靶标和早期的药物反应中心。     

ASC在ONO-AE-248诱导的中性粒细胞非凋亡、非坏死性死亡中的表达

目的:探讨凋亡相关斑点样蛋白(Apoptosis-associated speck-like protein,ASC)在ONO-AE-248所诱发的中性粒细胞非凋亡、非坏死性死亡中的作用及意义.方法:TUNEL法标记凋亡细胞,结合激光共聚焦扫描显微镜观察细胞核形态以及DNA片段化发生的情况;Western blot法检测不同药物刺激组(LPS延迟凋亡组、TNF-α促进凋亡组、ONO-AE-248刺激组以及自发性凋亡组)的ASC蛋白的表达差异性.结果:TUNEL法检测ONO-AE-248培养12小时后的中性粒细胞,未见TUNEL阳性细胞.Western blot结果显示ONO-AE-248刺激后中性粒细胞ASC蛋白的表达一直处于下调状态.结论:ONO-AE-248诱导人中性粒细胞死亡过程中细胞核DNA断裂方式明显不同于自发性凋亡组,核内染色体可能只发生DNA较大片段的断裂,而没有发生小片段化.ONO-AE-248引起的ASC表达的下调可能是这种新型细胞死亡方式区别于自发性凋亡的重要差异点.     

ONO-AE-248对诱发中性粒细胞非凋亡性程序化死亡中A1表达的研究

为探讨接受ONO-AE-248刺激后重要的表达蛋白-A1在中性粒细胞(polymorphonuelear neutrophils,PMN)非凋亡程序化细胞死亡中的的表达及意义,以进一步确定这种新型细胞死亡模式提供线索.采用Ficoll法新鲜分离健康志愿者外周静脉血PMN,与ONO-AE-248共同培养2 h后提取总RN...     

ONO-AE-248诱发中性粒细胞非凋亡性程序化细胞死亡的生化信号转导初探

目的：研究ONO-AE-248诱发中性粒细胞（PMN）非凋亡性程序化细胞死亡过程中，细胞死亡相关的蛋白分子caspase-3、caspase-8、p-38MAPK和PKC的作用，探讨这种细胞死亡的分子机制。方法：运用光镜和DNA电泳对PMN形态学变化和生化特征进行观察和评估；通过Western blot显示PMN中caspase-3、caspase-8活性改变和p-38MAPK磷酸化改变；运用MTS法检测PKC抑制剂对PMN活性的影响。结果：PMN经ONO-AE-248刺激，绝大多数分叶核融合成单叶核（12小时），DNA琼脂糖电泳结果显示缺乏梯状条带（24小时），而且ONO-AE-248对caspase-3、caspase-8活性和p-38MAPK磷酸化水平无明显影响。然而，PKC抑制剂STS和H-7能显著抑制ONO-AE-248对PMN的促死亡效应。结论：ONO-AE-248所诱导的PMN死亡可能是一种非凋亡性的主动性细胞死亡，即非凋亡性程序化细胞死亡。该死亡过程不依赖caspase-3、caspase-8的活化和p-38MAPK的磷酸化，但是PKC可能发挥正向的调控作用。     

凋亡相关基因在ONO-AE-248诱发的中性粒细胞非凋亡性程序化死亡中的表达

近年来许多学者研究发现凋亡并非是程序化细胞死亡的唯一形式,机体还可能存在不同于典型凋亡的其它主动性细胞死亡形式.由ONO-AE-248诱发的中性粒细胞快速死亡可能属于非凋亡性程序化细胞死亡[1,2].     

NF-κB不参与ONO-AE-248诱发的中性粒细胞非凋亡、非坏死性死亡

目的研究核转录因子NF-κB(Nuclear factor kappa B)在ONO-AE-248诱发中性粒细胞非凋亡、非坏死性死亡中的作用,探讨这种细胞死亡的分子机制。方法Ficoll法分离健康志愿者外周静脉血中性粒细胞,与ONO-AE-248共同培养,通过Western blotting检测IκBα的蛋白表达水平,反映NF-κB的活化状态,并应用RT-PCR检测NF-κB调节的基因XIAP、DAD1和FLIP的mRNA表达水平。结果ONO-AE-248不能促进中性粒细胞内IκBα蛋白降解,显示它并不诱导NF-κB活化。而且,ONO-AE-248对NF-κB调节的基因XIAP、DAD1、FLIP的mRNA表达也无明显影响(P>0.05)。结论ONO-AE-248诱发的中性粒细胞非凋亡、非坏死性死亡不依赖NF-κB信号转导通路,其介导中性粒细胞死亡的信号转导可能是不同于凋亡的独特转导途径。     

ONO-AE-248诱发线粒体膜势能降低导致中性粒细胞非凋亡性程序化细胞死亡

目的研究线粒体在ONO—AE-248诱导中性粒细胞非凋亡性程序化细胞死亡中形态结构及功能的变化情况，为进一步确立这一新的死亡形式和找寻其独特的死亡信号转导途径提供实验依据。方法体外新鲜分离人外周血中性粒细胞与ONO—AE-248共同培养，流式细胞术检测其线粒体膜势能的变化；激光共聚焦扫描显微镜观察线粒体形态结构和分布情况。结果ONO—AE-248迅速导致中性粒细胞线粒体膜势能的溃散；ONO—AE-248刺激后中性粒细胞在线粒体形态、结构、分布和胞浆内染色特性等方面均与阴性对照有明显差异。结论线粒体变化是ONO—AE-248诱导中性粒细胞非凋亡性程序化细胞死亡早期形态学上区别于凋亡的显著变化之一。线粒体膜通透性转变以及线粒体膜势能下降可能是ONO—AE-248诱导的非凋亡性程序化细胞死亡的主要原因。     

Modes of Inheritance of Errors of Refraction

Eighteen families in which both parents had refractions within the range of +4·0 D to −4·0 D and axial lengths seen in emmetropia (22·3-26·0 mm) showed coefficients of correlation of the order 0·5 indicative of polygenic inheritance. Such coefficients were seen for axial length (0·407) and for the cornea (0·487), but not for the lens (which is known to be yoked to the axial length). No such coefficients were seen in 19 families in which one of the parents had axial length outside the emmetropic range (nine families with long axes and 10 with short axes).

The pattern of polygenic inheritance for emmetropia (completely correlated optical components) and errors of refraction up to 4·0 D (inadequately correlated components: correlation ametropia) follows that seen in stature and other measurable characters. In contrast the high refractive errors with their abnormal axial lengths (component ametropia) are—like the extremes in stature—pathological anomalies with monofactorial inheritance.

     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

局部注射辛伐他汀对骨质疏松大鼠股骨髁骨小梁的改建效应

背景：局部注射具有成骨作用的辛伐他汀,可显著增加骨质疏松大鼠股骨颈及股骨髁部的骨密度及力学强度,分析局部注射辛伐他汀对股骨髁骨小梁的影响。 目的：进一步研究骨质疏松大鼠股骨内局部注射辛伐他汀对股骨髁骨小梁的影响。为将辛伐他汀应用于临床骨质疏松局部治疗提供实验基础。 方法：18只雌性SD大鼠双侧卵巢切除后3个月,制备大鼠骨质疏松模型。实验大鼠随机数字表法均分为3组,分别在实验大鼠的右侧股骨髓腔内单次注射辛伐他汀溶液5 mg、10 mg,对照组单纯注射空白载体。分别在注射后1个月处死大鼠并取材。Micro-CT扫描并定量分析骨组织形态变化。 结果与结论：给药后1个月,Micro-CT扫描结果显示,辛伐他汀治疗组的骨微结构参数如骨皮质厚度、骨小梁密度及连接率明显优于对照组。说明疏松骨骼单次注射小剂量辛伐他汀可显著促进股骨髁部骨小梁改建,改善骨骼微结构,可为强化局部、防治骨质疏松骨折的新选择进一步提供实验基础。     

Clinical perspectives of xenotransplantation of islets of Langerhans

This paper describes the rationale and different approaches for developing islets of Langerhans xenotransplantation. Implementing this therapeutic strategy in the treatment of human diabetes mellitus requires careful consideration of its potential risks and benefits, taking into account the current status of the treatment of this disease.