甜瓜镰刀菌果腐病菌拮抗菌筛选及其拮抗性研究

以新疆喀什地区伽师县盐碱地土壤为材料,通过平板对峙法和琼脂扩散法筛选获得对腐皮镰刀菌(Fusarium solani)BM1具有显著拮抗作用的菌株JS6-1和JS3-4。两菌株发酵上清液对甜瓜果腐病病原菌的抑菌圈直径分别为22.90和21.05 mm,通过形态学观察、生理生化试验和16s rRNA基因序列分析初步鉴定为贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis JS6-1和暹罗芽孢杆菌Bacillus siamensis JS3-4。抑菌谱测定结果表明两株菌对尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum KW1、香梨黑斑病菌链格孢菌Alternatia alternata HB2、香梨腐烂病菌Valsa mali var. pyri FL1等9种植物病原菌均有较强的抑制作用。酶活及产铁载体测定结果表明,两株菌可产生纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶、葡聚糖酶和铁载体等物质。采用酸沉淀法提取两株菌脂肽类物质,并以腐皮镰刀菌Fusarium solani BM1为指示菌进行抑菌试验结果表明,两株菌脂肽类粗提物对病原菌的抑菌圈直径分别为20.55和19.05 mm,对病原菌孢子萌发抑制率分...     

黄柄曲霉ASD 菌株抑菌谱测定及抑菌物质初探

采用对峙培养法对黄柄曲霉（Aspergillus flavipes）ASD 菌株抑菌谱进行了测定，试验结果表明：黄柄曲霉ASD 菌株具有较广的抑菌谱，对辣椒疫病菌（Phytophthora capsici Leonian）、番茄晚疫病菌（Phytophthora infestans）有较好的抑制作用。ASD 菌株发酵液对辣椒疫病菌的抑菌带宽度为7.4 mm，抑菌活性较强。ASD 菌株的发酵液经50% 硫酸铵饱和度沉淀并透析后得到的抑菌物质对辣椒疫病菌的抑菌效果最好，抑菌活性可达80.78%，且抑菌物质为蛋白类物质。     

枯草芽孢杆菌B43对香蕉枯萎病菌抑菌活性及其活性成分分析

为明确拮抗菌枯草芽孢杆菌B43菌株拮抗香蕉枯萎病菌4号小种(Fusarium oxysporumf.sp.cubense race 4)的能力及其抑菌活性物质的性质,采用平板对峙法进行抑菌谱试验;酸沉淀、有机溶剂萃取法提取B43菌株中的抑菌活性物质并测定稳定性;根据脂肽类抗生素合成相关基因序列对B43基因组进行PCR扩增检测,运用LC-MS对粗提物进行成分分析。结果表明,B43菌株对21株植物病原真菌均有较好抑菌活性;酸沉淀法粗提物具有较好的耐热及耐紫外线特性,但不耐强酸强碱;通过特异性引物PCR检测,B43菌株基因组中含有srfAB、ituA、ituB、ituD、fenD、yndJ、sfp、mycB、lpa-14或fenB等脂肽类合成相关基因;LC-MS分析发现粗提物中含有Surfactin、Iturin、Mycosubtilin、Bacillomycin和Fengycin 5类脂肽类抗生素的同系物24种,说明该菌株可能能够产生多种脂肽类抗生素。     

捕食梨火疫病菌黏细菌菌株的筛选及其生防潜力

【目的】发掘梨火疫病生防资源,探究黏细菌在梨火疫病生物防治中的应用潜力。【方法】通过菌苔捕食和对峙共培养从实验室前期分离、保存的黏细菌菌株中筛选高效捕食梨火疫病菌的黏细菌菌株,并通过喷施梨离体花序和盆栽杜梨苗测定其防病效果。【结果】（1）46株供试黏细菌菌株对梨火疫病菌均具有捕食能力,其中菌株WCH05、FB02和WCH03对梨火疫病菌的平板捕食能力较强。（2）黏细菌菌株WCH05预处理（喷施）对预防梨花腐的效果显著,其7 d平均防效为68.35%,与农用链霉素（68.20%）接近,其次是菌株FB02,防效达到63.24%,而菌株WCH03的防效相对较低,为50.36%;黏细菌菌株WCH05、FB02和WCH03预处理（喷施）能够显著降低盆栽杜梨苗嫩枝的枝枯率和病情指数（p<0.05）,7～21 d的平均保护性防效分别为81.53%、76.38%和71.44%,治疗性防效分别为63.84%、51.13%和54.88%。（3）结合形态学特征和多基因序列分析,将WCH05和FB02鉴定为橙色黏球菌（Myxococcus fulvus）,WCH03鉴定为黄色黏球菌（Myxococcus...     

土壤中梨火疫病菌实时荧光定量PCR检测及动态分析

【目的】利用实时荧光定量PCR检测土壤中梨火疫病菌(Erwinia amylovora)浓度，明确梨火疫病菌在土壤中的动态变化规律。【方法】2021年3—11月采集库尔勒市发病香梨园810份土壤样品，应用所建立的实时荧光定量PCR检测体系，测定土壤中的梨火疫病菌浓度，同时对梨园发病率及病情指数进行调查。【结果】土壤中梨火疫病菌浓度值变化趋势与梨园病情指数变化趋势一致，4—5月梨园病情指数快速升高至最高值，随着果树生长期延长，病情指数逐渐降低。土壤中梨火疫病菌浓度值从4月逐渐升高，6月平均浓度值为914 CFU·g-1,7月平均浓度值最高为965 CFU·g-1，随后逐渐降低；6月土壤带菌率为42.2%，浓度值≥103CFU·g^-1的土样13份；7月土壤带菌率为44.4%，浓度值≥10³CFU·g^-1的土样26份；6月、7月土壤中梨火疫病菌浓度显著高于4月、10月、11月，致病风险较高。【结论】6月和7月土壤中梨火疫病菌浓度值最高，主要与4月、5月大量病花病果掉落造成病原菌积累有关。加强花期病害防治和梨园病残体清理可有效降...     

马铃薯早疫病拮抗菌的筛选及其代谢产物的抑菌活性

以马铃薯早疫病病原菌茄链格孢菌(Alternaria solani)为指示菌,通过平板对峙法,筛选出菌株及其发酵滤液对马铃薯早疫病病原菌均具有较强拮抗作用的生防菌株BAF-6;通过形态特征、生理生化特性鉴定以及16S r DNA序列分析,该菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。菌株发酵滤液经60~80℃热处理,抑菌活性均在95%以上;紫外线照射8 h或在p H值为2~10的酸碱环境下,发酵滤液的抑菌活性稳定;经蛋白酶处理后抑菌活性仍达50%以上。     

昆虫病原线虫共生菌对甜菜夜蛾和辣椒炭疽病菌的生物活性测定

利用40株昆虫病原线虫共生菌菌株，以两种辣椒主要病虫害——甜菜夜蛾和辣椒炭疽病菌作为 供试昆虫和真菌，对其杀虫抑菌活性进行测定。结果表明，40株共生菌菌株的发酵液对这两种病虫均有 一定的抑制活性，其中嗜线虫致病杆菌（Xenorhabdus nematophila）A24-1菌株的杀虫抑菌活性最为明 显，处理后120 h对甜菜夜蛾的平均校正死亡率为100.00 %；对辣椒炭疽病菌的抑菌圈直径为40.00 mm。     

萝芙木内生真菌的分离及发酵产物抑菌活性的研究

从萝芙木的果实中分离得到5株内生真菌:LG-A、LG-B、LG-C、LG-D与LG-E,以5株内生真菌为试验材料,采用微量滤纸片法,研究了5株内生真菌发酵乙醇粗提物对苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌与苹果果实链格孢菌的抑菌活性,以期筛选出具有农用抗植物病原真菌的活性菌株。并采用菌丝生长速率法,进一步测定了菌株LG-B与LG-D乙醇粗提物的不同溶剂萃取物的抑菌活性。结果表明:菌株LG-B与LG-D对3种苹果病原真菌均有明显的抑制作用。LG-B与LG-D发酵产物的乙酸乙酯萃取物抑菌活性较好,菌株LG-B对苹果腐烂病菌的EC50仅为16.2mg·L~(-1),LG-D对苹果腐烂病菌与苹果轮纹病菌的EC50分别为21.0mg·L~(-1)和52.8mg·L~(-1)。     

深色有隔内生真菌对枸杞根腐病菌抑菌活性

通过组织分离法从‘宁杞5号’枸杞健康根筛选出深色有隔内生真菌（DSE）菌株，采用两点对峙法、菌丝生长速率法、孢子萌发法和盆栽试验探究其对枸杞根腐病菌（Fusarium oxysporum）的抑菌活性，为枸杞根腐病的生物防治提供潜在的资源菌。结果表明，8株DSE菌株均可定殖于枸杞根部，形成典型的DSE结构，且对枸杞根腐病菌有明显的抑制作用；其中菌株S12(Cladosporium cladosporioides)对病菌菌丝生长的抑制率最高，为81.47%;8株DSE菌株发酵滤液和挥发物质对枸杞根腐病菌的生长均有一定抑制作用，其中菌株S12发酵滤液浓度为10%时对病菌菌丝生长的抑制率最高，达78.43%；菌株M1(Alternaria alternata)发酵滤液浓度为50%时对病菌分生孢子萌发抑制率最高，为91.48%；菌株M1产生的挥发物质对病菌菌丝生长的抑制率最高，达94.10%。盆栽试验中，菌株M1和S12均表现出较好的生防效果，防效分别达89.54%和83.17%，优于50%多菌灵湿性粉剂500倍液处理。本结果表明DSE菌株M1和S12可有效防治枸杞根腐病，具有良好的生防潜力和应...     

拮抗细菌BMY-1菌株对几种水果储藏病原真菌的抑制作用

采用平板对峙培养法测定从土壤中分离获得的拮抗细菌BMY-1菌株对柑桔绿霉病菌（Penicillium digatatum）、柑桔青霉病菌（Penicillium italicum）、苹果炭疽病菌（Glomerella cingulata）、苹果轮纹病菌（Physalospora piricola）、梨扩展青霉病菌（Penicillium expansum）、葡萄白腐病菌（Coniothyrium dlodiella）等6种水果产后病原真菌的抑制作用。结果表明，BMY-1菌株对苹果炭疽病菌（G.cingulata）和梨扩展青霉菌（P．expansum）的生长有较好的作用，抑菌率分别达48．43％和50．37％。采用液体共培养法观察到BMY-1菌株对病原真菌的菌丝有破坏作用，使苹果炭疽病菌菌丝扭曲和断裂，葡萄白腐病菌菌丝膨大畸形。对几种水果同时接种拮抗细菌BMY-1和病原真菌，BMY-1菌株对苹果炭疽病病斑和梨扩青病病斑扩展有较强的抑制作用，并能有效延迟葡萄白腐病发病时间。     

梨火疫病菌在库尔勒香梨枝条中的侵染定殖和扩展特征研究

【目的】示踪梨火疫病菌Erwinia amylovora在库尔勒香梨(Pyrus sinkiangensis Yu)(简称香梨)枝条组织中侵染定殖和扩展特征，为梨火疫病的有效防治提供依据。【方法】以分离获得梨火疫病强致病力菌株E. a001为材料，采用热激法将携带有绿色荧光蛋白基因(green fluorescent protein,GFP)质粒phc60-gfp转化E. a001，获得了能发出强烈绿色荧光的标记菌株E. a001-gfp。利用该标记菌株接种香梨枝条，检测、观察其在香梨枝条组织中的侵染定殖和扩展动态。【结果】针刺接种和喷雾接种E. a001-gfp引起枝条发病的最低浓度分别为106cfu·mL^-1和107cfu·mL^-1。相同浓度的病原菌接种，喷雾接种较针刺接种后发病显症时间延迟2～3 d。梨火疫病菌侵染枝条产生的坏死病斑的扩展速率随病原菌浓度提高而升高；病菌在1年生枝条上的生长扩展速度显著快于在2年生枝条内的扩展速度。梨火疫病菌入侵后主要存在于枝条维管系统中，大量分布于皮层薄壁细胞和韧皮部薄壁细胞间隙，少量存在于木质部导管中...     

枣炭疽病菌拮抗芽孢杆菌的筛选鉴定及其抑菌物质分析

从冬枣果实中分离芽孢杆菌,通过对峙培养法筛选对炭疽病菌有显著拮抗活性的菌株,利用冬枣果实检测拮抗菌对炭疽病的防治效果并对拮抗菌进行种属鉴定,采用抑菌圈法及液相色谱一质谱联用技术分别对拮抗菌合成抑菌物质进行抑菌活性检测和结构鉴定。获得1株对枣炭疽病菌有显著拮抗活性的芽孢杆菌Tj-19,经鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。Tj-19菌体及其发酵上清液对冬枣果实炭疽病的防治效果分别达到74.9%和75.8%,主要抑菌物质为伊枯草菌素A和伊枯草菌素B。     

大蒜粗提物挥发性成分分析及其对辣椒疫病的控制作用

采用室内毒力测定与田间防效试验研究大蒜粗提物对辣椒疫病菌的抑制作用及对病害的控制效果。结果表明，大 蒜不同部位粗提物均对辣椒疫病菌有很好的抑制作用，浓度越高抑制作用越强，特别是鳞茎粗提物，在150.0 mg·mL^-1 浓 度下，对辣椒疫病菌生长抑制率达100.00%。随着培养时间的延长，各粗提物对辣椒疫病菌的抑制作用下降。盆栽试验结果 表明，不同浓度大蒜各部位粗提物对辣椒疫病均有一定的控制效果，大蒜鳞茎粗提物浓度为150.0 mg·mL^-1 时，防效可达 59.38%。GC-MS 测定结果表明，大蒜根、茎叶和鳞茎粗提物中分别有20、19 和23 种挥发性物质，均以有机硫化物为主， 占总挥发性物质的90% 以上，但其组成成分和含量有明显差别。向培养基中加入硫醚类有机硫化物纯品，对辣椒疫病菌的 生长均有明显抑制作用，其中100 mg·L^-1 二烯丙基三硫醚对辣椒疫病菌的抑制效果最好，达60.55%。与大蒜轮作或混栽可 有效降低辣椒疫病的病情指数，防效分别达59.81% 和62.09%。这些结果说明大蒜挥发性物质在辣椒疫病的绿色防控上有很 好的应用前景。     

解淀粉芽孢杆菌HAB-2抑制杧果炭疽菌的活性成分分析

【目的】明确HAB-2菌株的分类地位及其抑菌活性物质稳定性。【方法】根据β-甘露聚糖酶基因(gumG或ydhT)的差异设计特异性引物进行基因克隆分子鉴定以及显微观察相结合手段,明确芽孢杆菌HAB-2分类地位;通过有机溶剂萃取法、硫酸铵饱和沉淀法、酸沉淀法对HAB-2菌株进行抑菌活性物质提取,检测抑菌活性,并对活性成分进行稳定性测定,确定其主要活性成分;通过平板对峙法,光学显微镜下观察活性成分对杧果炭疽病病原菌丝的影响;将HAB-2正丁醇提取物涂抹在接种杧果炭疽菌的杧果上,观察粗提物对杧果炭疽病的表面防效。【结果】HAB-2菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。其中正丁醇提取物活性最好,抑菌圈直径为(22.01±0.3)mm。正丁醇提取物在紫外线照射120 min后,抑菌活性为对照的93.64%;最适pH为5~6;经100℃处理后,正丁醇提取物的抑菌活性仍然为对照组的81.12%。正丁醇提取物可使杧果炭疽病菌菌丝扭曲、膨大、畸形,从而抑制杧果炭疽病菌,保护杧果果实;HAB-2正丁醇提取物处理后的杧果未出现杧果炭疽病病状。【结论】HAB-2菌株正丁醇提取物抑菌活性高,对酸碱和热稳定性良好,具有良好的生物农药开发应用前景。     

草莓灰霉病菌拮抗放线菌的筛选及活性测定

以分离自新疆古尔班通古特沙漠土壤的放线菌为试材,采用琼脂块法和生长速率法,研究了供试放线菌对草莓灰霉病菌的抑菌活性;采用形态学特征、生理生化特性、16SrDNA序列分析等方法对筛选出的高活性拮抗菌株进行种类鉴定。结果表明:从141株放线菌中筛选出1株对草莓灰霉病菌的抑菌圈直径为20.67mm的高活性拮抗菌株XJ93。该菌株无菌发酵滤液对多种植物病原真菌具有明显抑制作用,抑菌率为25.00%~71.67%;80℃处理60min其抑菌率未见明显变化,在pH 5~9范围内其抑菌活性稳定,在可见光和紫外线照射150min内亦保持良好的抑菌活性。拮抗菌株XJ93经鉴定为唐德链霉菌(Streptomyces tendae)。拮抗放线菌XJ93具有广谱抑菌活性,对环境有良好的稳定性,可作为防治果蔬草莓灰霉病的生物农药潜力菌株进行开发应用。     

迷迭香精油对几种植物病原菌的抑菌活性研究

采用生长速率法和抑菌圈法测定了迷迭香精油对甜瓜蔓枯病菌、西瓜炭疽病菌、甜瓜灰霉病菌、甜瓜枯萎病菌、梨树腐烂病菌、柑橘黑腐病菌、油菜菌核病菌、蚕豆轮纹病菌和桃细菌性穿孔病菌的抑菌活性.结果表明:迷迭香精油对8种病原真菌都具有很好的抑菌活性,其EC50分别为843.9914、1 084.2372、483.9457、1 735.5866、1 011.7869、901.2150、356.8803、1 197.3657 μL/L;对桃细菌性穿孔病菌也具有一定的抑菌活性,浓度为100 mL/L时,抑菌圈直径为1.00 cm,最低抑菌浓度为1 000 μL/L.     

防治辣椒疫病的芽孢菌株的筛选及其抑菌效果的测定

从辣椒根际土壤中分离出293个分离物,通过平板对峙培养,筛选出对辣椒疫霉菌有较强拮抗作用的5个芽孢菌株。室内测定其对辣椒疫霉菌的抑菌带宽达8.0-11.3mm。温室控病试验表明,芽孢菌Bn-130对辣椒疫病防治效果最好,达64.7%。无菌滤液试验表明,拮抗菌Bn-130无菌滤液在一定浓度范围内能有效地抑制菌丝生长,减少孢子萌发。     

梨轮纹病菌弱毒株携带产黄青霉病毒水平传染力测定

梨轮纹病是由葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea）引起。前期获得了感染葡萄座腔菌产黄青霉病毒（Botryosphaeria dothidea chrysovirus 1,BdCV1）引起弱毒的梨轮纹病菌菌株LW-C和LW-1，为进一步明确BdCV1介导弱毒菌株是否具有作为候选田间生防资源的潜力，将LW-C和LW-1分别与地理来源不同的梨轮纹病菌（B. dothidea）分离株和危害梨树严重的梨腐烂病菌（Valsa pyri）分离株XJ-28进行对峙培养试验，测定获得携带病毒的衍生菌株生长速率及致病力。研究结果显示轮纹病菌菌株弱毒因子BdCV1均能以一定频率水平传染至不同种类致病菌株中，可引起部分受体菌株生长速率下降，不同程度地抑制其生长。接种梨枝条和果实，原始受体菌株所形成病斑扩展长度约为带毒衍生菌株的2倍至4倍，表明病毒可抑制其受体菌株致病力。以上研究结果揭示了BdCV1可水平传染至不同种类受体菌株中，寄主范围广，具有作为生防因子应用于梨真菌病害中的可行性。     

苹果褐腐病拮抗毛壳菌的筛选及鉴定

【目的】筛选适合于防治苹果褐腐病(Monilinia fructigena)的生防毛壳菌,为苹果采后病害的生物防治提供潜在的菌株材料。【方法】选择4株毛壳菌,采用平板对峙法测量抑菌率和抑菌带宽度;通过生防毛壳菌发酵粗提物检测其抑菌活性强弱;通过离体接种苹果果实比较毛壳菌的控病作用。结合形态学特征和核糖体基因内转录间隔区(r DNA-ITS)序列对抑菌活性强的毛壳菌菌株进行鉴定。【结果】供试的4株毛壳菌中,菌株24-9在平板对峙试验、发酵粗提物抑菌试验和离体接种试验中均表现出稳定而较强的抑菌活性,通过形态学特征和核糖体基因内转录间隔区(rDNA-ITS)序列构建系统发育树,将菌株24-9鉴定为球毛壳菌Chaetomium globosum。【结论】该生防毛壳菌菌株可用于开发苹果采后病害生防制剂,提高植物抗性,丰富我国苹果采后病害的生防菌资源库。     

解淀粉芽胞杆菌防治番茄果实灰霉病及其抑菌物质分析

通过对峙培养法筛选对灰葡萄孢菌有显著拮抗性的产芽胞细菌,利用番茄果实检测拮抗菌及其发酵上清液对灰霉病的防治效果,采用ESI-MS检测拮抗菌发酵上清液粗提取物中主要抑菌物质并利用PCR检测合成抑菌物质的相关基因,通过菌体菌落形态观察、生理生化试验、16S rDNA及gyrB分析对拮抗细菌进行种属鉴定。结果表明,分离筛选的拮抗菌fqhm-13及其发酵上清液对番茄果实灰霉病防治效果分别达到69.0%和78.1%。fqhm-13发酵上清液粗提取物中主要抑菌物质为脂肽抗生素C14 ~ C16的surfactin A和C15 ~ C17的iturin A。fqhm-13基因组中含有脂肽抗生素合成基因ituC、ituD、fenD和srfAB。fqhm-13菌株为解淀粉芽胞杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。该研究为利用芽胞杆菌及其代谢产物防治番茄果实灰霉病奠定了材料基础。